Name: زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-28T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: تعلم تقنية زرع الشريان الأورطي البطني في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية بعد الزراعة. تتيح هذه الطريقة تحليلاً مورفومترياً دقيقاً بفضل حجم الأوعية الموحد.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الموارد الأساسية للمركز NIH اوبراين P30 (DK 079337).

1. إعداد سابق للجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإجراءات الجراحية، مهما فعلت بعناية، نتيجة الإجهاد في كبيرة. للحد من آثار الإجهاد مثل وتعظيم الاحتياطيات، ينبغي الحفاظ الحيوانات في الحظيرة للا يقل عن 72 ساعة قبل الاستخدام 10،11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب الأدوات الجراحية والشاش، ومسحات تكون معقمة. ليس من الضروري استخدام قفازات معقمة فقط توفير نصائح من خياطة أو أدوات اتصال مجال المنطوق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لالإرقاء، لا بد من أن الضغوط لقط هي الحد الأدنى الضروري. والأضرار التي لحقت السفينة بسبب الضغط المفرط أو المعاملة الخشنة يسبب تخثر الدم، مما أدى إلى شلل القائمة الخلفية، نقص تروية الأمعاء، والوفاة في غضون 24 ساعة. لقد وجدنا أن استخدام المشابك مع ضغط لا يزيد عن 2 سم / جم 2 يحل المشكلة. لاحظت هذه المشابك في الجدول 1. يشار إلى الضغوط المشبك في مواصفات المشابك التي قدمتها أجهزة قياس عالية الجودة الجراحيةالشركات المصنعة ر. لقد وجدنا أن المشابك غير مكلفة أو المشابك المتاح عالميا ممارسة الكثير من الضغط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> موقع الأوعية الجانبية فضلا عن المواقع النسبية للالشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي (IVC) هي سلالة التابعة. سوف تجد أيضا اختلافات صغيرة بين الفئران الفردية، وخاصة في الموقع للسفن ضمانات. </li></ol> 2. عملية المانحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يمكن أن تكون الفئران تخدير مع (1،5-2،5٪ الحث والصيانة 1.0٪ في الهواء) أو مع isoflurane بنتوباربيتال (55-65 مغ / كغ). بنتوباربيتال يفرض مهلة زمنية (تصل إلى 1.5 ساعة)، ولكنها توفر للجراح مع خيار تدوير لأفضل حيوان الوصول، إذا رغبت في ذلك. ويمكن تمديد الوقت إلى تخدير لتصل إلى 2 ساعة عن طريق وضع 2-3 قطرات من مخدر عند الحاجة إلى الأمعاء أو الكبد أثناء العملية الجراحية. ويمكن أيضا الكيتامين / زيلازين (100 وزن الجسم ملغ / كغ للالكيتامين و 7 مغ / كغ للزيلازين، IP) يتم استخدامها من قبل المدربين تدريبا جيدا الجراحين الذين كاليفورنيان إنهاء إجراءات في حدود 1 إلى 1.5 ساعة، لكنه لا يملك أضيق نطاق جرعة آمنة. في الولايات المتحدة، أصبح استخدام بنتوباربيتال أكثر تعقيدا في السنوات الأخيرة بسبب نقص الامدادات. لا بد من أن يتم رصد عمق التخدير لتكون على يقين أنه يكفي. منعكس إصبع القدم قرصة هو أفضل مؤشر على عمق كاف ولكن ينبغي للمرء أن يلاحظ أيضا معدل التنفس والحركات الأخرى أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تحريض التخدير، واستخدام مزيل الشعر هلام أو ماكينة حلاقة لإزالة الشعر من على البطن البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الحيوان على لوحة التشغيل باستخدام الشريط المختبر لأنه عقد في موقف الانتشار eagled. لوحة التشغيل لامع يسمح باستخدام وسادة التدفئة تحته لتقديم الدعم درجات الحرارة أثناء الجراحة. نحن التحكم يدويا في درجة حرارة سادة التدفئة، والتي هي وحدة الصف المستهلك للاستخدام في المنزل. يتم الحفاظ على درجة الحرارة بين 35-38 درجة. لوحة التشغيل لامع هو أيضا من السهل لتعقيم بين الإجراءات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">تطهير المنطقة باستخدام مطهر مثل الكلورهيكسيدين، يعقبه غسل ​​الايثانول. كرر هذا الإجراء ثلاث مرات، لضمان التطهير كافية. وهذا أيضا إزالة أي قطع قطعة المتبقية من الشعر، إذا كان موجودا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقص باستخدام إجراء شق خلال جدار الجسم لفضح أحشاء البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مسحة القطن، دفع الأحشاء جانبية لفضح الأوعية الدموية الكبرى في البطن. يتم وضع الأحشاء على قطعة من الشاش المبللة التي يتم المالحة الدافئة مع أن يبقيه رطبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام تشريح حادة، بعناية فائقة تشريح الشريان الأورطي البطني بعيدا عن الأنسجة المحيطة بها. كن حذرا جدا في تشريح السفينة بعيدا عن الوريد الأجوف السفلي. وسوف يكون هناك واحد أو أكثر من فروع، مثل الشريان القطني، التي يجب أن ترفع بعناية وأكتوي. ينبغي لقسم من الشريان الأورطي تشريح يكون أقل من الأوعية الكلوية وفوق التشعب من الشريان الأورطي في الشرايين الفخذية. يمكن هذا القسم بمثابة المواد المانحة للما يصل إلىق اثنين من المستلمين، اعتمادا على كيفية العديد من السفن المتفرعة الوجود، وحجم الحيوان المانحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وربط الخيط أسفل الشرايين الكلوية وآخر فقط فوق التشعب. مقص باستخدام تقسيم الشريان الأورطي، وشطف تماما الكسب غير المشروع مع المالحة تحتوي على 200 U / مل الهيبارين. بعناية فائقة عقد واحدة من نهاية السفينة وبالتنقيط في محلول ملحي بحيث يتم تشغيله من خلال السفينة عن طريق الجاذبية. لا تدع فقاعات الهواء من خلال تشغيل السفينة. التعامل مع نهايات السفينة أقل قدر ممكن وإلا يمكن أن تتلف مما يؤدي إلى تخثر البطانية في وقت لاحق. إزالته من الميدان على الفور ووضع في وعاء من الثلج الباردة المالحة. السماح للحيوان المانحة ليستنزف. </li></ol> 3. المتلقي عملية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الحيوان على النحو الوارد أعلاه وتطبيق هلام مزيل الشعر أو استخدام ماكينة حلاقة لإزالة الشعر على البطن. قبيل شق نحن إدارة جرعة من البوبرينورفين تحت الجلد عند 0.1 ملغ / كغ لتأسيس وعي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Mount الحيوان في حقل التشغيل باستخدام الشريط المختبر. يجب أن يتم تنظيمها على خشبة المسرح الحيوان التشغيل الدافئة التي سوف تساعد على الحفاظ على درجة حرارة الجسم خلال العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق جنتاميسين مرهم العيون للعيون لمنعهم من الجفاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطهير البطن، يليها غسل الايثانول. كرر هذا الإجراء ثلاث مرات، لضمان التطهير كافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التحقق من كفاية تخدير مرة أخرى قبل الانتقال إلى الخطوة التالية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق خط الوسط من خلال الجلد وجدار الجسم على مرحلتين، والحرص على عدم تؤثر على الأنسجة تحت. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضافة الى وجود رش لعقد شق البطن المفتوحة. تشير الجمعية المسمار في نهاية هند للحفاظ على الجزء الأكبر من المشبك للخروج من الطريق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الرطب مربع من شاش معقم مع المالحة ووضعه على الأمعاء. بإصبعك بلطف على الشاش، اضافة الى وجود مسحة القطن تحت الأمعاء وتعكس بلطف الأمعاء لأكثر من لياليIDE لذلك هم يجلسون على قمة الشاش. تأخذ قطعة أخرى من الشاش، وضعه على الأمعاء والرطب مع المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أي نوع من الأنسجة الدهنية التي تغطي الشريان الأورطي والوريد الأجوف السفلي (IVC). أن يكون لطيف. وIVC هش للغاية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط لتشريح بلطف الشريان الأورطي infrarenal من IVC. تطهير منطقة واسعة بما يكفي لتوفير غرفة لمدة المشابك مع السفينة كافية بينهما بحيث، عندما ينقسم، سيكون هناك ما يكفي لسفينة التي يمكن خياطة الكسب غير المشروع. عندما تشريح، والبحث عن فروع السفينة. إذا لزم الأمر كوى لهم cauterizer درجة حرارة منخفضة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج المشبك الأوعية الدموية أقل بقليل من الشريان الكلوي وبعضها البعض فقط فوق التشعب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الشريان الأورطي. سوف ينتهي من الشريان الأورطي تتراجع عادة، وترك مسافة حوالي 5 ملم. تحقق من وجود الإرقاء. إذا المشابك تعمل بشكل صحيح، يجب فقط كمية صغيرة من الدم الفرار بعد خفض الانتاج. إذا استمر النزيف، والتحقق من المشابك لتكون شيئا غير متأكد من التداخلجي معهم. لاحظ أن تتم إزالة أي من الشريان الأورطي. فمن مجرد تقسيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف نهايات قطع مع المالحة heparinized (200 U / مل) ثم قم بإزالة الحل مع مسحة اضافية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تك الكسب غير المشروع في مكانه باستخدام ثلاثة خيوط متقطعة في كل نهاية. خياطة فقط جانب واحد من مفاغرة في كل نهاية، ومن ثم تملأ بقية مع خياطة الغرز المستمر تشغيل أو أكثر متقطع. سبعة إلى ثمانية خيوط متقطعة كافية. إذا كنت تستخدم خياطة تشغيل، تأكد أن تظل جدران الأوعية استرخاء والتي لا تسبب تضيق في مفاغرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية المشبك في نهاية الجمجمة والبحث عن التسريبات في خطوط الدرز. وهناك كمية صغيرة من التسرب وتوفير OK يتوقف داخل دقيقة تقريبا. إذا كان هناك أكثر من ذلك، فمن الممكن استخدام غرزة واحدة لوقف النزيف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط بلطف على الشريان الأورطي فوق موقع مفاغرة مع قضيب من القطن المبللة، ثم قم بإزالة المشبك الثاني. اضغط بلطف والافراج عن بضع مرات وتأكد من أن الشريان الأبهر يظهر البراءة. سيتم perfused الكسب غير المشروع فورا ونبض يجب أن تكون مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الشاش تغطي الأمعاء ونقلها إلى مكانها. تجنب التواء في الأمعاء والحفاظ على التوجه الطبيعي التشريحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق طبقة العضلات باستخدام Vicryl 5-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد باستخدام 5-0 أو البرولين 6-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج الماوس تحت الجلد مع carprophen في 5 ملغ / كغ لزيادة وعي قبل إنهاء التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعطاء المالحة الماوس مل تحت الجلد 0،5-0،8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في قفص ساخنة لاسترداد. رصد بعناية أثناء الاسترداد للتأكد من أنه يتعافى بشكل طبيعي. 2-3 ساعة بعد الجراحة، وينبغي أن الماوس بشكل طبيعي نسبيا. في 12 ساعة بعد العملية، وعلاج الحيوان مع البوبرينورفين تحت الجلد عند مستوى 2 مغ / كغ للوعي. إذا، في أي وقت، ومنحنية الحيوان، مما يجعل الضوضاء أو العرض مجموعة محدودة من الحركة، والتحقيق في المشكلة. إذالا يمكن أن تنشأ قضية محددة وثابتة، يجب أن يتم التخلص من الحيوانات في البروتوكولات المؤسسية. في 24 ساعة يجب أن الحيوان تلقي جرعة أخرى من تحت الجلد في carprophen 5 ملغ / كغ. هند شلل ساقه يشير إلى فشل أو خثرة مفاغرة ل. في هذه الحالة، يجب أن يتم التخلص من الحيوانات. </li></ol>

<ol><li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li>
<li>Dambrin, C., Calise, D., Pieraggi, M. T., Thiers, J. C., Thomsen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+mice%3A+a+new+model+of+allograft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in mice: a new model of allograft arteriosclerosis.</a> J. Heart Lung Transpl. 18, 946-951 (1999).</li>
<li>Calise, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+aortic+transplantation+in+rodents+by+the+sleeve+technique%3A+a+model+system+for+the+study+of+graft+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Proc%22%5BJournal%5D)">Orthotopic aortic transplantation in rodents by the sleeve technique: a model system for the study of graft vascular disease.</a> Transpl. Proc. 33, 2369-2370 (2001).</li>
<li>Thomsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+aortic+graft+mouse+model+to+study+the+immunopathology+of+chronic+vascular+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Proc%22%5BJournal%5D)">An orthotopic aortic graft mouse model to study the immunopathology of chronic vascular rejection.</a> Transpl. Proc. 34, 2833-2835 (2002).</li>
<li>Benza, R. L., George, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aortic+graft+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Aortic graft transplantation in mice.</a> J. Heart Lung Transpl. 21, 1319-1321 (2002).</li>
<li>Chereshnev, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+heterotopic+aortic+arch+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+surgical+research%22%5BJournal%5D)">Mouse model of heterotopic aortic arch transplantation.</a> The Journal of surgical research. 111, 171-176 (2003).</li>
<li>Cho, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+heterotopic+aortic+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Korean+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for heterotopic aortic transplantation in mice.</a> J. Korean Med. Sci. 22, 12-15 (2007).</li>
<li>Zhong, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+transplantation+in+mice%3A+current+status+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Organ transplantation in mice: current status and future prospects.</a> Microsurgery. 19, 52-55 (1999).</li>
<li>George, J. F., Pinderski, L. J., Litovsky, S., Kirklin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+mice+and+men%3A+mouse+models+and+the+molecular+mechanisms+of+post-transplant+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Heart+Lung+Transpl%22%5BJournal%5D)">Of mice and men: mouse models and the molecular mechanisms of post-transplant coronary artery disease.</a> J. Heart Lung Transpl. 24, 2003-2014 (2005).</li>
<li>Gorska, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+in+laboratory+animal+research+for+experimental+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Monit%22%5BJournal%5D)">Principles in laboratory animal research for experimental purposes.</a> Med Sci Monit. 6, 171-180 (2000).</li>
<li>Landi, M. S., Kreider, J. W., Lang, C. M., Bullock, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+shipping+on+the+immune+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Vet.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of shipping on the immune function in mice.</a> Am. J. Vet. Res. 43, 1654-1657 (1982).</li>
<li>Sun, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+surgical+technique+for+the+establishment+of+a+murine+model+of+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Improved surgical technique for the establishment of a murine model of aortic transplantation.</a> Microsurgery. 18, 368-371 (1998).</li>
<li>Chen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+rescues+heme+oxygenase-1-deficient+mice+from+arterial+thrombosis+in+allogeneic+aortic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide rescues heme oxygenase-1-deficient mice from arterial thrombosis in allogeneic aortic transplantation.</a> Am. J. Pathol. 175, 422-429 (2009).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.+Transpl%5BTitle%5D)+AND+%22Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice. Transpl.</a> Proc. 5, 733-735 (1973).</li>
<li>Chang, E. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+anastomosis+using+controlled+phase+transitions+in+poloxamer+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Vascular anastomosis using controlled phase transitions in poloxamer gels.</a> Nature medicine. 17, 1147-1152 (2011).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

نماذج الماوس من زرع الأبهر توفير عدد من المزايا بشكل جيد للغاية لأن تعريف الفئران immunogenetically 9،12،13، ويمكن التلاعب بها بسهولة أنها لتغيير التعبير عنها من جينات معينة، إذا رغبت في ذلك. كما ذكر في المقدمة، جراحة الأوعية الدموية في الماوس هو أكثر صعوبة من معظم النماذج بسبب حجم السفن. حتى الشرايين الكبيرة، مثل الشريان الأورطي وعادة ما تكون أكثر لا يتجاوز 100-200 ميكرون في القطر الداخلي، لذا التلاعب هذه السفن يتطلب قدرا كبيرا من المهارة والبراعة 8،14. أكثر...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> بند </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> المشابك الأوعية الدموية </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 00396-01 (الحجم B-1) </td></tr><tr><td> الملقط دومون </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> 11293-00 </td></tr><tr><td> وخز بإبرة 10-0 خيط مجهري </td><td> AROSurgical </td><td> TK-107038 </td></tr><tr><td> مقص مستقيم </td><td> Roboz الجراحية شركة الصك </td><td> RS-5620 </td></tr><tr><td> انخفاض درجة حرارة cauterizer </td><td> القندس-Visitec الدولية </td><td> 8441000 </td></tr><tr><td> مبعاد الذاتي الاحتفاظ </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> 14240 </td></tr></tbody></table>

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

ويعتقد عموما الإجراءات التي تنطوي على الأوعية الدموية في anastomoses الماوس لتكون صعبة وتعتمد إلى حد كبير على مهارة الجراح الفردية. هذا صحيح إلى حد كبير، ولكن هناك عددا من المبادئ الهامة التي يمكن أن تقلل من صعوبة هذه الإجراءات وتعزيز التكاثر. زرع مثلي الأبهر هو إجراء الممتازة التي لتعلم هذه المبادئ لأنها تنطوي على اثنين فقط من نهاية إلى نهاية anastomoses، ولكنها تتطلب تقنية جيدة خياطة والتعامل مع السفن لنجاح ثابت. يبدأ هذا الإجراء مع شراء بطول الشريان الأورطي البطني من حيوان المانحة، تليها شعبة من الشريان الأورطي الأصلي في المتلقي. ثم يتم وضع الشريان الأورطي شراؤها بين طرفي المقسمة الشريان الأورطي المستفيدة وخياطة في مكانها باستخدام نهاية إلى نهاية anastomoses. لتحقيق هذا الهدف يتطلب بنجاح على درجة عالية من التركيز، والأدوات الجيدة، مطرد من ناحية، وتقدير مدى سهولةيمكن أن تتلف الأوعية الدموية على فأرة الحاسوب، مما أدى إلى تجلط الدم. تعلم هذه المبادئ أهمية هو ما يشغل معظم وقته للمبتدئين عندما تعلم المجهرية في القوارض الصغيرة. طوال هذا البروتوكول، نشير إلى هذه النقاط المهمة. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة أمراض الأوعية الدموية في مجموعة متنوعة من النظم التجريبية المختلفة 1-8. في سياق المعروضة هنا، وغالبا ما تستخدم لدراسة ما بعد زرع أمراض الأوعية الدموية، مشتركة على المدى الطويل مضاعفات زرع الأعضاء الصلبة التي تضخم باطنة يحدث داخل طعم خيفي. والميزة الرئيسية لهذا النموذج هو أنه يسهل التحليلات الكمية والمظهرية السفينة المزروعة تقع متجاورة إلى السفينة الذاتية، والتي يمكن أن تكون بمثابة عنصر تحكم إضافية 9. غالبا ما يتم استخدام هذه التقنية هو موضح هنا للالفئران وزنها 18-25 جرام. تراكمت لدينا خبرة أكثر من مستخدما في ذلك C57BL/6J، BALB / CJ، وسلالات C3H/HeJ.

الشكل 1 يبين الكسب غير المشروع الأبهر. الأسهم البيضاء دلالة على خطوط الدرز. وسوف تظهر براءة الكسب غير المشروع النبض مرئية. الشكل 2 يشير إلى التجربة النموذجية التي وأعقب بقاء المتلقي لمدة 56 يوما. تتألف مجموعة واحدة من الفئران المتلقية البرية من نوع (C57BL / 6 × FVB) مع زرع BALB / ج الشريان الأورطي. المجموعة الأخرى، المعين &quot;KO&quot; يتكون من المتلقين (C57BL / 6 × FVB) نقص في التعبير عن الهيم أوكسيجيناز-1، والذي ينتج من تجلط الدم خلال 24 ساعة ا...

وصفنا تقنية التي زرعها قسم من الشريان الأورطي البطني من الماوس orthotopically إلى أسفل الشرايين الكلوية في مستلم خيفي أو مسانج. هذه التقنية يمكن أن تكون مفيدة في الدراسات التي يعتبر زرع الشرايين كبيرة من حجم موحد المفيد.

تُعتبر الإجراءات الوعائية التي تتضمن عمليات توصيل وعائي في الفئران صعبة بشكل عام، ويُعتقد أنها تعتمد بشكل كبير على مهارة الجراح.

يهدف هذا الإجراء إلى نقل الشريان الأورطي البطني لفأر مانح إلى فأر مستقبل خيفي. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق الحصول على الشريان الأورطي من المانح، ثم إنشاء موقع الطعم في الحيوان المستقبل.يتم بعد ذلك تشريح الشريان الأورطي الأصلي للحيوان المستقبل وتقسيمه. وتتمثل الخطوة النهائية في استخدام مفاغرتين وعائيتين من طرف إلى طرف لزرع الشريان الأورطي المتبرع به. وفي نهاية المطاف، يمكن استخدام هذا الإجراء لدراسة تطور الأمراض الوعائية ما بعد الزرع في تركيبات السلالات الخيفية.تكمن ميزة هذه الطريقة مقارنةً، على سبيل المثال، بزراعة القلب غير المتجانسة، في سهولة إجراء التحليل المورفومتري لأن الأوعية تكون ذات حجم موحد. بالإضافة إلى ذلك، لا يكون الوعاء محاطاً بنسيج برانشيمي، والذي قد يكون محاطاً بارتشاحات خلوية وأمور أخرى من شأنها أن تعقد تحليل البيانات الناتجة. ويمكن أن يكون استخدام هذه التقنية مفيداً بشكل خاص في توضيح الآليات المتضمنة في أمراض الأوعية الدموية ما بعد الزراعة، والتي تمثل مشكلة مستعصية في عمليات الزراعة السريرية البشرية.لتقليل آثار الإجهاد ورفع مخزونات الطاقة إلى الحد الأقصى، يجب إبقاء الحيوانات في الحظيرة لمدة 72 ساعة على الأقل قبل الجراحة. وفي يوم الجراحة، يتم وضع لوحة عمليات معدنية فوق وسادة تدفئة مضبوطة على درجة حرارة تتراوح بين 35 و38 درجة Celsius. بعد التخدير، يتم إزالة الشعر من المنطقة البطنية السفلية للحيوان.استخدم شريطًا لاصقًا مخبريًا لتثبيت الحيوان في وضعية فرد الأطراف على طاولة العمليات، ثم قم بتطهير كامل المنطقة المحلوقة من الحيوان ثلاث مرات باستخدام مطهر يليه الإيثانول باستخدام مقص معقم. بعد ذلك، قم بإجراء شق عبر جدار الجسم لكشف الأحشاء البطنية. ثم استخدم مسحة قطنية معقمة لدفع الأحشاء إلى الجانب فوق قطعة من الشاش المعقم المبلل بمحلول ملحي دافئ، وذلك لكشف الأوعية الدموية الكبيرة في البطن.الآن، وبمنتهى الحذر، قم بتشريح الشريان الأورطي البطني تشريحاً غير حاد لفصله عن الأنسجة المحيطة، بما في ذلك الوريد الأجوف السفلي، ثم ارفع الشريان القطني بعناية وقم بكيّه. يجب أن يكون جزء الأورطي المخصص للتشريح تحت الأوعية الكلوية وفوق تفرع الأورطي إلى الشرايين الفخذية. بعد تحديد المنطقة، ضع غرزة ربط أسفل الشرايين الكلوية مباشرة وغرزة أخرى فوق التفرع مباشرة.بعد ذلك، استخدم المقص لقطع الشريان الأبهر، ثم أمسك أحد طرفي الوعاء بحذر شديد وقطّر محلول ملحي مهبّن بحيث يتدفق عبر الوعاء بفعل الجاذبية. ثم تعامل مع أطراف الوعاء بأقل قدر ممكن من اللمس. قم بإزالة الطعم وضعه فوراً في وعاء يحتوي على محلول ملحي بارد جداً (مثلج).بعد إعطاء التخدير والمسكنات للحيوان المستقبل، قم بحلاقة أسفل البطن كما هو موضح تماماً. ضع مرهم جنتاميسين للعيون لمنع جفافها، ثم قم بتطهير البطن كما تم عرضه لضمان التطهير الكافي. الآن، قم بإجراء شق في خط المنتصف عبر الجلد وجدار الجسم على مراحل.بعد ذلك، أدخل مباعداً لإبقاء الشق البطني مفتوحاً، مع توجيه مجموعة البراغي نحو الطرف الخلفي للحيوان لإبعاد الجزء الأكبر من المشبك عن طريق العمل. ثم ضع شاشاً معقماً ومبللاً بمحلول ملحي فوق الأمعاء. بعد ذلك، ثبت الشاش بلطف في مكانه باستخدام الإصبع.أدخل مسحة قطنية معقمة أسفل الأمعاء، وقم بإزاحتها برفق بحيث تستقر الأمعاء فوق الشاش. ضع قطعة أخرى من الشاش المعقم فوق الأمعاء وبللها بمحلول ملحي. بعد إزالة أي أنسجة دهنية تغطي الشريان الأبهر البطني (ATA) والوريد الأجوف السفلي برفق، استخدم الملقط لتشريح الأبهر تحت الكلوي بعناية عن الوريد الأجوف السفلي.قم الآن بتنظيف مساحة كافية لتوفير مكان لمشبكين، ومع وجود أوعية دموية كافية بحيث تتوفر كمية كافية من الوعاء لخياطة الطعم بعد التقسيم. لاحظ أنه يمكن استخدام الخيط الجراحي الأسود لتقدير وزنك على طول الوعاء. عند التشريح، ابحث عن تفرعات الأوعية، وقم بكي هذه التفرعات باستخدام جهاز كي ذو درجة حرارة منخفضة حسب الضرورة.بعد ذلك، قم بوضع مشبك وعائي واحد أسفل الشريان الكلوي مباشرةً، ومشبك وعائي آخر فوق التفرع مباشرةً. ثم اقطع الأبهر. في هذه الحالة، يتم إجراء القطع في نقطة أقرب إلى التفرع لأنه تم كي وعاء فرعي بالقرب من منتصف المسافة بين المشبكين، مما يجعل ذلك الموقع غير مناسب لعملية التوصيل؛ وعادةً ما تتراجع نهايتا الأبهر، مما يترك مسافة تبلغ حوالي 5 mm.تحقق من الإرقاء. إذا كانت المشابك تعمل بشكل صحيح، فيجب ألا يتسرب سوى كمية صغيرة من الدم بعد القطع. بعد ذلك، اشطف النهايات المقطوعة من الأبهر بمحلول ملحي مهرقن، ثم امسح المحلول الزائد.الآن، قم بتثبيت الطعم في مكانه باستخدام ثلاث غرز متقطعة عند كل طرف. بعد ذلك، قم بخياطة جانب واحد من المفاغرة عند كل طرف وأكمل الباقي بسبع إلى ثماني غرز متقطعة. في حال تفضيل استخدام غرزة مستمرة، يجب الحرص على أن تظل جدران الوعاء الدموي مرتخية ولضمان عدم حدوث تضيق عند المفاغرة.قم الآن بإزالة الملقط الموجود عند الطرف القحفي للأبهر بعناية، وابحث عن أي تسربات عند خطوط الخياطة. بعد ذلك، اضغط برفق على الأبهر فوق موقع التوصيل باستخدام مسحة قطنية مبللة وقم بإزالة الملقط الثاني. اضغط بخفة على الأبهر ثم حرره عدة مرات للتأكد من أن الوعاء مفتوح. سيتم تروية الطعم على الفور، ويجب أن يكون النبض مرئيًا.الآن، قم بإزالة الشاش الذي يغطي الأمعاء وأعدها إلى مكانها، مع الحفاظ على اتجاهها التشريحي الطبيعي وتجنب التواءها. استخدم خيط جراحي Vicryl عيار 5-0 لإغلاق الطبقة العضلية، ثم أغلق الجلد باستخدام خيط Proline عيار 5-0 أو 6-0. قم بمعالجة الفأر عن طريق الحقن تحت الجلد بعقار carprofen لتعزيز تسكين الألم قبل إنهاء التخدير، ثم أعطِ الفأر من 0.5 إلى 0.8 milliliters من المحلول الملحي عبر نفس المسار.أخيرًا، ضع الفأر في قفص مدفأ للتعافي وراقب الحيوان بعناية. بعد 12 و24 ساعة من العملية، يتم إعطاء buprenorphine وcarprofen للحيوان عن طريق الحقن تحت الجلد على التوالي. يوضح الشكل الأول طعمًا للأبهر.لاحظ خطوط الخياطة كما تشير الأسهم البيضاء هنا. يظهر هنا تجربة نموذجية تم فيها تتبع بقاء المتلقين على قيد الحياة لمدة 56 يوماً. تكونت المجموعة الضابطة من فئران متلقية من النوع البري C 57 BL six by FVB تم زرع شرايين أورطية من سلالة bowel C فيها.تألفت المجموعة التجريبية من مستقبلين من سلالة C 57 BL six by FVB، تعاني من نقص في تعبير إنزيم heme oxygenase one. ويؤدي هذا التعطيل الجيني إلى حدوث تخثر في الطعوم في غضون 24 ساعة. ومن الملاحظ أن ذلك أدى إلى وفاة جميع المستقبلين.يوضح هذا الشكل الأخير قياسات الصدى للوريد الأجوف السفلي، والوريد الأجوف، والشريان الأورطي البطني في حيوان طبيعي وفي حيوان متلقٍ لعملية زرع. لاحظ أن الطعم مفتوح ويشبه في مظهره الشريان الأورطي غير المزروع. وكما رأيت، فإن الأنسجة رقيقة وصغيرة جداً، لذا يجب أن تضع في اعتبارك أن هذا الإجراء هو بالتأكيد مهارة يتم اكتسابها، وبالتالي سيتطلب الأمر قدراً جيداً من التدريب قبل أن يتم تنفيذ الإجراء بنجاح وبشكل روتيني بمجرد إتقانه.يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ساعة واحدة إذا نُفذت بشكل صحيح.

orthotopic-aortic-transplantation-mice-for-study-vascular

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

هذا الفيديو يوضح زرع الشريان الأبهر مثلي النموذج بوصفه نموذجا بسيطا لدراسة تطور اعتلال وعائي زرع (TVP) في الفئران.

زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

يوضح هذا الفيديو طريقة لإنشاء نموذج تداخل الأبهر للفأر لدراسة رفض الأوعية الدموية الناجم عن الخيوط المناعي. بعد وضع فأر متبرع مخدر في وضع الاستلقاء ، يتم عزل الشريان الأورطي البطني تحت الكلوي (IAA) بعناية عن الهياكل المحيطة. يتم ربط الأوعية المتفرعة ، ويتم تثبيت طرفي IAA لمنع تدفق الدم قبل الاستئصال. بعد ذلك ، يتم زرع IAA المتبرع في فأر متلقي خيفي ، ويتم استعادة تدفق الدم من خلال مفاغرة التحقيق في رفض الأوعية الدموية الناجم عن الخيف.

نموذج تداخل الأبهر للفأر لدراسة رفض الأوعية الدموية الناجم عن الخيوط المناعية

نحن تصف بروتوكولات لدينا arteriosclerois الكسب غير المشروع الماوس (GA) نماذج التي تنطوي على مداخلة من شريحة سفينة الماوس إلى المتلقي من نفس السلالة الفطرية. بواسطة backcrossing بتغيرات جينية إضافية إلى الجهة المانحة السفينة، يمكن للنموذج تقييم تأثير جينات معينة على GA.

نماذج الماوس لتصلب الشرايين الكسب غير المشروع

نصف بروتوكول لتطعيم تداخل الأبهر في الفئران. الهدف من البروتوكول هو توفير نموذج يمكن من خلاله دراسة العمليات المرضية والاستراتيجيات العلاجية ذات الصلة بالتفاعلات المناعية الخيفية في الشرايين والتغيرات الشريانية الناتجة التي تساهم في فشل زراعة الأعضاء.

نموذج الفأر من منيع للمستضد الخيفي الناجم عن رفض الأوعية الدموية وزراعة تصلب الشرايين

لدراسة الجمع بين الأعضاء الصلبة وزرع الأوعية الدموية المركبة ، نصف نموذجا جديدا لجدار الصدر غير المتجانس في كتلة ، والغدة الصعترية ، وزرع القلب في الفئران باستخدام تقنية الكفة العنقية غير الخياطة.

A المجهرية نموذج رواية لمنتبذ، جناح كتلة جدار الصدر، الغدة الصعترية، وزرع القلب في الفئران

هذا النموذج رواية للهند مثلي زرع الأطراف الاصطناعية في الماوس، وتطبيق تقنية صفعة غير خياطة لمفاغرة فائقة الاوعية الدموية الدقيقة، ويوفر أداة قوية لفي الجسم الحي الأبحاث المناعية الآلية المتعلقة زرع الطعم الخيفي مركب أوعية دموية (VCA).

مثلي هند الاطراف زرع في ماوس

نحن نقدم نموذجا زرع الابهري أورثوتوبيك باستخدام تقنية الأكمام في الفئران. وهي طريقة ملامسة سريعة جداً، التي يمكن استخدامها في الدراسات المتعلقة بأمراض الأوعية الدموية.

باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية

هنا ، نقدم بروتوكولا لزرع الابهر غير المتجانس في الفئران باستخدام تقنيه الكفة غير الخياطة في نموذج murine عنق الرحم. ويمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الامراض الاساسيه لاعتلال الاوعيه الدموية المزمنة الطعوم (CAV) ويمكن ان تساعد في تقييم العوامل العلاجية الجديدة من أجل منع تشكيلها.

نموذج زرع الشريان الاورطي لعنق الرحم من murine باستخدام تقنيه الكفة المعدلة غير الخياطة

يتم عرض تقنية جديدة لإعادة بناء دائرة الدم في نموذج زرع قلب فأر البطن غير النظيري.

إعادة بناء دائرة الدم في نموذج زرع قلب فأر البطن

تمثل نماذج زراعة قلب الفئران أدوات بحثية قيمة لدراسة مناعة الزرع. يفصل البروتوكول الحالي زراعة قلب عنق الرحم غير المتجانسة للفأر والتي تتضمن وضع أصفاد على الشريان السباتي المشترك للمتلقي وجذع الشريان الرئوي للمتبرع للسماح بتدفق الدم الصفحي.

زرع قلب عنق الرحم غير المتجانس للفأر باستخدام الأصفاد الوعائية

يقدم هذا البروتوكول تقنية مبسطة للتجميل بالخياطة من طرف إلى جانب لزراعة قلب عنق الرحم في الفوار، مما يوفر نموذجا قويا وقابلا للتكرار لدراسة مناعة الزرع.

زراعة قلب الفأر غير المتجانس في عنق الرحم باستخدام تقنية التشريح من طرف إلى جانب لدراسة مناعة الزراعة

تعلم تقنية زرع الشريان الأورطي البطني في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية بعد الزراعة. تتيح هذه الطريقة تحليلاً مورفومترياً دقيقاً بفضل حجم الأوعية الموحد.

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

استكشف المزيد من الفيديوهات