زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

يهدف هذا الإجراء إلى نقل الشريان الأورطي البطني لفأر مانح إلى فأر مستقبل خيفي. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق الحصول على الشريان الأورطي من المانح، ثم إنشاء موقع الطعم في الحيوان المستقبل.

يتم بعد ذلك تشريح الشريان الأورطي الأصلي للحيوان المستقبل وتقسيمه. وتتمثل الخطوة النهائية في استخدام مفاغرتين وعائيتين من طرف إلى طرف لزرع الشريان الأورطي المتبرع به. وفي نهاية المطاف، يمكن استخدام هذا الإجراء لدراسة تطور الأمراض الوعائية ما بعد الزرع في تركيبات السلالات الخيفية.

تكمن ميزة هذه الطريقة مقارنةً، على سبيل المثال، بزراعة القلب غير المتجانسة، في سهولة إجراء التحليل المورفومتري لأن الأوعية تكون ذات حجم موحد. بالإضافة إلى ذلك، لا يكون الوعاء محاطاً بنسيج برانشيمي، والذي قد يكون محاطاً بارتشاحات خلوية وأمور أخرى من شأنها أن تعقد تحليل البيانات الناتجة. ويمكن أن يكون استخدام هذه التقنية مفيداً بشكل خاص في توضيح الآليات المتضمنة في أمراض الأوعية الدموية ما بعد الزراعة، والتي تمثل مشكلة مستعصية في عمليات الزراعة السريرية البشرية.

لتقليل آثار الإجهاد ورفع مخزونات الطاقة إلى الحد الأقصى، يجب إبقاء الحيوانات في الحظيرة لمدة 72 ساعة على الأقل قبل الجراحة. وفي يوم الجراحة، يتم وضع لوحة عمليات معدنية فوق وسادة تدفئة مضبوطة على درجة حرارة تتراوح بين 35 و38 درجة Celsius. بعد التخدير، يتم إزالة الشعر من المنطقة البطنية السفلية للحيوان.

استخدم شريطًا لاصقًا مخبريًا لتثبيت الحيوان في وضعية فرد الأطراف على طاولة العمليات، ثم قم بتطهير كامل المنطقة المحلوقة من الحيوان ثلاث مرات باستخدام مطهر يليه الإيثانول باستخدام مقص معقم. بعد ذلك، قم بإجراء شق عبر جدار الجسم لكشف الأحشاء البطنية. ثم استخدم مسحة قطنية معقمة لدفع الأحشاء إلى الجانب فوق قطعة من الشاش المعقم المبلل بمحلول ملحي دافئ، وذلك لكشف الأوعية الدموية الكبيرة في البطن.

الآن، وبمنتهى الحذر، قم بتشريح الشريان الأورطي البطني تشريحاً غير حاد لفصله عن الأنسجة المحيطة، بما في ذلك الوريد الأجوف السفلي، ثم ارفع الشريان القطني بعناية وقم بكيّه. يجب أن يكون جزء الأورطي المخصص للتشريح تحت الأوعية الكلوية وفوق تفرع الأورطي إلى الشرايين الفخذية. بعد تحديد المنطقة، ضع غرزة ربط أسفل الشرايين الكلوية مباشرة وغرزة أخرى فوق التفرع مباشرة.

بعد ذلك، استخدم المقص لقطع الشريان الأبهر، ثم أمسك أحد طرفي الوعاء بحذر شديد وقطّر محلول ملحي مهبّن بحيث يتدفق عبر الوعاء بفعل الجاذبية. ثم تعامل مع أطراف الوعاء بأقل قدر ممكن من اللمس. قم بإزالة الطعم وضعه فوراً في وعاء يحتوي على محلول ملحي بارد جداً (مثلج).

بعد إعطاء التخدير والمسكنات للحيوان المستقبل، قم بحلاقة أسفل البطن كما هو موضح تماماً. ضع مرهم جنتاميسين للعيون لمنع جفافها، ثم قم بتطهير البطن كما تم عرضه لضمان التطهير الكافي. الآن، قم بإجراء شق في خط المنتصف عبر الجلد وجدار الجسم على مراحل.

بعد ذلك، أدخل مباعداً لإبقاء الشق البطني مفتوحاً، مع توجيه مجموعة البراغي نحو الطرف الخلفي للحيوان لإبعاد الجزء الأكبر من المشبك عن طريق العمل. ثم ضع شاشاً معقماً ومبللاً بمحلول ملحي فوق الأمعاء. بعد ذلك، ثبت الشاش بلطف في مكانه باستخدام الإصبع.

أدخل مسحة قطنية معقمة أسفل الأمعاء، وقم بإزاحتها برفق بحيث تستقر الأمعاء فوق الشاش. ضع قطعة أخرى من الشاش المعقم فوق الأمعاء وبللها بمحلول ملحي. بعد إزالة أي أنسجة دهنية تغطي الشريان الأبهر البطني (ATA) والوريد الأجوف السفلي برفق، استخدم الملقط لتشريح الأبهر تحت الكلوي بعناية عن الوريد الأجوف السفلي.

قم الآن بتنظيف مساحة كافية لتوفير مكان لمشبكين، ومع وجود أوعية دموية كافية بحيث تتوفر كمية كافية من الوعاء لخياطة الطعم بعد التقسيم. لاحظ أنه يمكن استخدام الخيط الجراحي الأسود لتقدير وزنك على طول الوعاء. عند التشريح، ابحث عن تفرعات الأوعية، وقم بكي هذه التفرعات باستخدام جهاز كي ذو درجة حرارة منخفضة حسب الضرورة.

بعد ذلك، قم بوضع مشبك وعائي واحد أسفل الشريان الكلوي مباشرةً، ومشبك وعائي آخر فوق التفرع مباشرةً. ثم اقطع الأبهر. في هذه الحالة، يتم إجراء القطع في نقطة أقرب إلى التفرع لأنه تم كي وعاء فرعي بالقرب من منتصف المسافة بين المشبكين، مما يجعل ذلك الموقع غير مناسب لعملية التوصيل؛ وعادةً ما تتراجع نهايتا الأبهر، مما يترك مسافة تبلغ حوالي 5 mm.

تحقق من الإرقاء. إذا كانت المشابك تعمل بشكل صحيح، فيجب ألا يتسرب سوى كمية صغيرة من الدم بعد القطع. بعد ذلك، اشطف النهايات المقطوعة من الأبهر بمحلول ملحي مهرقن، ثم امسح المحلول الزائد.

الآن، قم بتثبيت الطعم في مكانه باستخدام ثلاث غرز متقطعة عند كل طرف. بعد ذلك، قم بخياطة جانب واحد من المفاغرة عند كل طرف وأكمل الباقي بسبع إلى ثماني غرز متقطعة. في حال تفضيل استخدام غرزة مستمرة، يجب الحرص على أن تظل جدران الوعاء الدموي مرتخية ولضمان عدم حدوث تضيق عند المفاغرة.

قم الآن بإزالة الملقط الموجود عند الطرف القحفي للأبهر بعناية، وابحث عن أي تسربات عند خطوط الخياطة. بعد ذلك، اضغط برفق على الأبهر فوق موقع التوصيل باستخدام مسحة قطنية مبللة وقم بإزالة الملقط الثاني. اضغط بخفة على الأبهر ثم حرره عدة مرات للتأكد من أن الوعاء مفتوح. سيتم تروية الطعم على الفور، ويجب أن يكون النبض مرئيًا.

الآن، قم بإزالة الشاش الذي يغطي الأمعاء وأعدها إلى مكانها، مع الحفاظ على اتجاهها التشريحي الطبيعي وتجنب التواءها. استخدم خيط جراحي Vicryl عيار 5-0 لإغلاق الطبقة العضلية، ثم أغلق الجلد باستخدام خيط Proline عيار 5-0 أو 6-0. قم بمعالجة الفأر عن طريق الحقن تحت الجلد بعقار carprofen لتعزيز تسكين الألم قبل إنهاء التخدير، ثم أعطِ الفأر من 0.5 إلى 0.8 milliliters من المحلول الملحي عبر نفس المسار.

أخيرًا، ضع الفأر في قفص مدفأ للتعافي وراقب الحيوان بعناية. بعد 12 و24 ساعة من العملية، يتم إعطاء buprenorphine وcarprofen للحيوان عن طريق الحقن تحت الجلد على التوالي. يوضح الشكل الأول طعمًا للأبهر.

لاحظ خطوط الخياطة كما تشير الأسهم البيضاء هنا. يظهر هنا تجربة نموذجية تم فيها تتبع بقاء المتلقين على قيد الحياة لمدة 56 يوماً. تكونت المجموعة الضابطة من فئران متلقية من النوع البري C 57 BL six by FVB تم زرع شرايين أورطية من سلالة bowel C فيها.

تألفت المجموعة التجريبية من مستقبلين من سلالة C 57 BL six by FVB، تعاني من نقص في تعبير إنزيم heme oxygenase one. ويؤدي هذا التعطيل الجيني إلى حدوث تخثر في الطعوم في غضون 24 ساعة. ومن الملاحظ أن ذلك أدى إلى وفاة جميع المستقبلين.

يوضح هذا الشكل الأخير قياسات الصدى للوريد الأجوف السفلي، والوريد الأجوف، والشريان الأورطي البطني في حيوان طبيعي وفي حيوان متلقٍ لعملية زرع. لاحظ أن الطعم مفتوح ويشبه في مظهره الشريان الأورطي غير المزروع. وكما رأيت، فإن الأنسجة رقيقة وصغيرة جداً، لذا يجب أن تضع في اعتبارك أن هذا الإجراء هو بالتأكيد مهارة يتم اكتسابها، وبالتالي سيتطلب الأمر قدراً جيداً من التدريب قبل أن يتم تنفيذ الإجراء بنجاح وبشكل روتيني بمجرد إتقانه.

يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ساعة واحدة إذا نُفذت بشكل صحيح.