إعداد والتعطيل من العوامل الممرضة جرعة مزدوجة منتجات صفائح الدم معطف بافي باستخدام نظام الدم INTERCEPT

في هذا الفيديو، سيتم تحضير تركيز صفائح دموية بجرعة مزدوجة من تجمع سبع طبقات بافي كوت (Buffy coats)، ثم معالجته باستخدام intercept. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إنتاج تركيز صفائح دموية بجرعة مزدوجة معطل مسببات الأمراض. أولاً، سنقدم نظرة عامة تخطيطية يتبعها عرض عملي.

يتم إجراء الطرد المركزي لأول سبع وحدات من الدم الكامل المتبرع به وفصلها للحصول على سبع وحدات من الطبقة المرققة (buffy coat) التي تستوفي الأهداف المحددة للحجم والهيماتوكريت. ثم يتم توصيل الطبقات المرققة وتجميعها وإخضاعها للطرد المركزي. بعد ذلك، يتم فصل معلق الصفائح الدموية عن خلايا الدم الحمراء المتبقية لإنتاج مركز صفائح دموية بجرعة مزدوجة لتعطيل الممرضات وكريات الدم البيضاء.

تتم معالجة مركز الصفائح الدموية بجرعة مزدوجة باستخدام نظام Intercept، الذي يعمل على ربط الأحماض النووية تشابكياً. وفي النهاية، ينتج عن هذا الإجراء جرعتان علاجيتان من الصفائح الدموية بجودة مقبولة مخبرياً على مدار سبعة أيام من التخزين، وذلك بناءً على تقييم pH والجلوكوز واللاكتات وPO₂ وPCO₂ وshallot doru. وسيقوم فني من مركز الدم لدينا باستعراض الإجراء، بينما سنقوم نحن بوصف متطلبات المعالجة.

أولاً، تأكد من أن مركز الصفائح الدموية بجرعة مزدوجة يستوفي مواصفات معالجة Intercept التي تتراوح من 300 إلى 420 ملليلتر، وبحجم جرعة صفائح يتراوح من 2.5 إلى 7 × 10¹¹، وأقل من 4 × 10⁶ من كرات الدم الحمراء لكل ملليلتر. ابدأ هذا الإجراء بسبع وحدات من الدم الكامل التي تم جمعها في مجموعات جمع علوية سفلية سعة 450 ملليلتر.

ضع وحدات الدم في أكواب جهاز الطرد المركزي وأجرِ عملية تدوير سريع بقوة 4,880 RCF لمدة 11 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع ضبط المكبح على الإعداد B five وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. بعد عملية التدوير، سينفصل الدم إلى ثلاث طبقات: كريات الدم الحمراء، والطبقة البيضاء (buffy coat)، والبلازما. قم بتفريغ البلازما في الكيس التابع العلوي وكريات الدم الحمراء في الكيس التابع السفلي، مع ترك الطبقة البيضاء التي يبلغ حجمها حوالي 48 milliliters وبنسبة 37%hematocrit في حاوية الجمع.

ضع الطبقات البيضاء (Buffy coats) على جهاز هز الصفائح الدموية في درجة حرارة الغرفة طوال الليل مع التوصيل المعقم لسبع طبقات بيضاء و300 milliliters من محلول SSP بالإضافة إلى محلول مضاف للصفائح الدموية. في تكوين متسلسل بحيث يكون المحلول المضاف في الأعلى، قم بتثبيت المشبك على الخط الواصل بين المحلول المضاف وأول طبقة بيضاء كما هو موضح هنا. افتح نقاط اللحام بين وحدات الطبقة البيضاء واسمح لها بالتصريف في حاوية الطبقة البيضاء الأخيرة.

بعد ذلك، افتح المشبك واللحام الموجود بين المحلول المضاف والطبقة الرغوية الأولى، واسمح بمرور حوالي ثلث المحلول المضاف (حوالي 100 milliliters) لغسل كل حاوية من حاويات الطبقة الرغوية بالتتابع قبل إغلاق المشبك، وكرر عملية الغسل مرتين إضافيتين باستخدام حوالي 100 milliliters من المحلول المضاف في كل مرة. افصل حاوية تجميع الطبقة الرغوية عن الحاويات الفارغة. يجب أن يكون حجم تجميع الطبقة الرغوية، بما في ذلك المحلول المضاف، حوالي 600 milliliters.

ضع طبقات البافي المجمعة (pooled Buffy coats) على جهاز هزاز لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، قم بتوصيل حاوية تخزين الصفائح الدموية المزودة بمرشح مدمج لتقليل الكريات البيضاء (leco reduction filter) بالكيس الذي يحتوي على تجمع طبقات البافي. ضع طبقات البافي المجمعة وحاوية تخزين الصفائح الدموية في جهاز طرد مركزي وقم بتدويرهما عند 462 RCF لمدة تسع دقائق و20 ثانية.

بعد عملية الطرد المركزي، يتم تمرير معلق الصفائح الدموية عبر مرشح لوكا المختزل (Luca reduction filter) إلى وعاء تخزين الصفائح الدموية. والنتيجة هي تركيز صفائح دموية بجرعة مزدوجة يحتوي على ما يقرب من 7 × 10¹¹ صفيحة دموية في 420 milliliters، والتي يمكن أن تخضع لتعطيل الممرضات باستخدام نظام Intercept لتعطيل الممرضات. يتم معالجة تركيز الصفائح الدموية بجرعة مزدوجة باستخدام مجموعة معالجة Intercept، والتي تتكون من وعاء antoin ووعاء إضاءة ووعائي تخزين مزدوجين.

قم بتوصيل وعاء معلق الصفائح الدموية بوعاء الـ Amin في مجموعة معالجة الاعتراض. بعد ذلك، قم بتعليق الصفائح الدموية. اكسر الكانيولا السفلية في وعاء الـ amin للسماح للمحلول بالتدفق إلى وعاء الإضاءة.

بعد ذلك، قم بكسر الكانيولا العلوية في حاوية Amin للسماح للصفائح الدموية بالتدفق عبر حاوية Amin إلى حاوية الإضاءة. اخلط مزيج الصفائح الدموية وam tosin بلطف. اضغط خفيفاً على حاوية الإضاءة لإخراج الهواء منها.

أحكم إغلاق الأنابيب بين وعاء الإضاءة ووعاء amato بحيث لا يبرز من وعاء الإضاءة أكثر من أربعة سنتيمترات من الأنابيب. قم بإزالة الأوعية الفارغة والتخلص منها. ضع مجموعة المعالجة في جهاز الإضاءة، بحيث يكون وعاء الإضاءة في المقصورة الكبيرة على اليسار والمنظم في المقصورة الأصغر على الجانب الأيمن.

امسح معرف التبرع. ورمز المنتج والمعالجة. ثم ضع رقم التشغيلة في جهاز الإضاءة.

أغلق الغطاء المعدني والدرج. اضغط على زر البدء لبدء الإضاءة. يوفر جهاز الإضاءة جرعة محكومة من أشعة UVA لخليط أمين الصفائح الدموية الموجود في حاوية الإضاءة.

يرتبط الأمين بين أزواج القواعد الحمضية النووية لمسببات الأمراض التي قد تكون موجودة في وحدة الصفائح الدموية. وعند التعريض للضوء، تتشكل روابط متقاطعة دائمة تربط الـ DNA أو الـ RNA معاً، بحيث لا تعد مسببات الأمراض قادرة على التكاثر والتسبب في المرض لدى متلقي المنتج الدموي. بعد التعريض للضوء، قم بإزالة مجموعة المعالجة.

بعد ذلك، أخرج الحاويات من المنظم، ثم قم بتعليق الصفائح الدموية ومجموعة المعالجة. اكسر الكانيولا عند مخرج حاوية الإضاءة واسمح للصفائح الدموية بالتدفق إلى حاوية CAD. توجد داخل حاوية CAD رقاقة تحتوي على خرزات بوليسترين مسامية كبيرة مثبتة تعمل على تقليل مستويات الأمين المتبقية في المنتج الدموي.

مع الحرص على عدم ثني رقاقة CAD. قم بتصريف الهواء من حاوية CAD إلى حاوية الإضاءة. قم بسد الأنابيب بالقرب من منفذ الإدخال في حاوية CAD.

قم بإزالة حاوية الإضاءة الفارغة والتخلص منها. ضع حاوية CAD مع حاويات التخزين الملحقة بها على جهاز تحريك الصفائح الدموية لمدة تتراوح من ست ساعات إلى 16 ساعة. سيؤدي ذلك إلى خفض تركيز الـ amlin المتبقي إلى تركيز أقل من أو يساوي 2 µM.

بعد المعالجة بجهاز CAD، قم بإزالة وحدات الصفائح الدموية من جهاز الرج، وعلق الصفائح، ثم اكسر الكانيولا عند مخرج حاوية CAD واترك الصفائح تتدفق إلى حاويتي التخزين. بعد ذلك، قم بتفريغ الهواء من حاويتي التخزين. أغلق الأنابيب فوق وصلة Y وقم بإزالة حاوية CAD.

والنتيجة هي الحصول على مركزين من الصفائح الدموية المثبطة الممرضات لتقييم وظيفة الصفائح الدموية في المختبر. تم تحديد جرعة الصفائح الدموية، وpH، وPO₂، وPC O₂، وإنتاج اللاكتات، واستهلاك الجلوكوز في العينة. وتم تحديد هذه القياسات لمركزات الصفائح الدموية حتى اليوم السابع من التخزين.

يوضح هذا الشكل متوسط جرعة الصفائح الدموية الأولية لمركز الصفائح الدموية مزدوج الجرعة قبل معالجة التقاطع، ومتوسط جرعة الصفائح الدموية في كل منتج من المنتجات المجزأة المعالجة حتى اليوم السابع من التخزين. وكما يتضح هنا، بلغ فقدان الصفائح الدموية أثناء التخزين حوالي 9%، وهذا الانخفاض لا يختلف عن الفقد المتوقع للصفائح الدموية أثناء تخزين الصفائح الدموية التقليدية. ووفقاً للمتطلبات الأوروبية، يجب أن يظل pH الصفائح الدموية فوق 6.4 حتى نهاية مدة الصلاحية.

أثناء المعالجة، ينخفض الرقم الهيدروجيني (pH) لمركزات الصفائح الدموية قليلاً بناءً على حجم تركيز الصفائح الدموية ونفاذية الغاز في حاوية تخزين الصفائح. يوضح هذا الشكل الرقم الهيدروجيني (pH) لمنتجات الصفائح الدموية المقسمة على مدار سبعة أيام من التخزين، حيث يظل الرقم الهيدروجيني (pH) مستقراً ومحفوظاً بشكل جيد ضمن متطلبات المعالجة. يجب أن يستمر التمثيل الغذائي الهوائي في الصفائح الدموية المخزنة، وهو مؤشر على قدرة الصفائح الدموية على العمل داخل الجسم الحي بعد نقلها إلى المريض.

يشير استهلاك الصفائح الدموية لـ O2 وإنتاج CO2 إلى استمرار عملية التنفس بواسطة الصفائح الدموية الموجودة في حاوية PL 24 10 خلال سبعة أيام من التخزين. وبالمثل، يجب أن يستمر التمثيل الغذائي اللاهوائي في الصفائح الدموية المخزنة. وبناءً على ذلك، يعد استهلاك الجلوكوز وإنتاج اللاكتات أيضاً من المؤشرات على قدرة الصفائح الدموية على أداء وظيفتها بعد نقل الدم.

يوضح هذان الشكلان مستويات اللاكتات والجلوكوز على مدار سبعة أيام من التخزين. ويتسق استهلاك الصفائح الدموية للجلوكوز وإنتاجها للاكتات مع بعضهما البعض. وخلال أيام التخزين السبعة، سجلت خمس وحدات مستويات جلوكوز أقل من 1.11 millimoles per liter، وهو الحد الأدنى لمقايسة الجلوكوز.

أدت عملية تحضير طبقة الخلايا البيضاء (Buffy coat) والتحقق من صحة التجميع إلى إنتاج مركزات صفائح دموية تستوفي معايير الإدخال لعلاج Intercept، وتحديداً من حيث الحجم، وعدد الصفائح الدموية، ونسبة البلازما، والتلوث بكريات الدم الحمراء. كما استوفت الوحدات النهائية معايير التحقق على مدار سبعة أيام من التخزين، بما في ذلك جرعة الصفائح الدموية والـ pH. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بطريقة تحضير طبقة الخلايا البيضاء التقليدية، التي تنتج مركز صفائح بجرعة واحدة، في أنها تزيد من عائد المكونات من تجميعات الدم، وتقلل النفقات التشغيلية باستخدام تقنية الجرعة المزدوجة، وتعزز سلامة المرضى عن طريق تثبيط مسببات الأمراض المنقولة عبر نقل الدم.