ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

الكتاب أود أن أشكر الدكتور كانديس هسيه للحصول على اقتراحات والمساعدة مع تقنيات التصوير والدكتور وو دوريس لخبرة في التشريح فرخ الأذن الداخلية خلال مرحلة التطور الجنيني المبكر. وأيد هذا العمل من قبل NSF-IOS 0642346، NIH-T32 DC010775، NIH-T32 GM008620، NIH-R01 DC010796، وDOE GAANN P200A120165.

1. إعداد أدوات تشريح التالية والكواشف <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF؛ 130 مم كلوريد الصوديوم، 3 مم بوكل، 1.2 ملي KH 2 PO 4 و 20 ملي NaHCO 3 و 3 HEPES مم، 10 مم الجلوكوز، 2 مم CaCl 2، 1،3 ملي MgSO 4) غرست باستمرار مع 95٪ O 2/5٪ CO 2 في درجة حرارة الغرفة. للتسريب، وملء إلى 3/2 ألف 500 مل جرة Nalgene واسعة الفم مع وجود ثقب حفر في الغطاء. وسوف تعلق دبابات من أنابيب الزجاج إلى عوامات الجذعية، والتي تخترق ACSF من خلال ثقب في الغطاء جرة. ضبط ضغط للحصول على تيار مستمر من الفقاعات التي تصل إلى حوالي 1/3 من السائل ولكنها ليست قوية بما يكفي للتسبب الرش على الحافة. يغرق 5 قوارير الزجاج مل (إلى 6) في جرة Nalgene لفصل العينات الفردية عن بعضها البعض والغاز من الاضطراب التدفق. وينبغي المؤكسج ACSF مدة لا تقل عن 20 دقيقة قبل أي حضانة الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> طبق صغير تشريح سيليكون (35 × 10 مممم بيتري Sylgard المغلفة باستخدام Elastomere كيت) مع دبابيس تشريح 2 وضعها في البوليسترين سداسية صغيرة (47 مم أسفل) تزن القارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اثنين غرامة ملقط غيض، واحدة منحني ملقط غيض، دورق 50 مل، وحاوية للنفايات الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سحبت الزجاج micropipette (1.2 OD / 0.9 ID) إلى حوالي 20-50 كسر ميكرومتر فتح في الطرف ومليئة رودامين ديكستران أمين (RDA، MW = 3،000، إينفيتروجن) في محلول 6.25٪ مع 0.4٪ تريتون X-100 في برنامج تلفزيوني . بواسطة أنابيب إرفاق غرامة لpicospritzer واستقرار لمياداة مجهرية. </li></ul> 2. الدقيقة لكشف تشريح الحليمة قاعدي في E8 4،5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع ملقط المنحني، وقطع E8 الجنين أقل بقليل من الدماغ، ووضع الرأس مباشرة على طبق تشريح سيليكون المغلفة داخل تزن القارب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إمالة الرأس باستخدام دبابيس تشريح، ضع الرأس بهدف بطني حتى الأذن على جانب الفائدة مرئيا قليلا، قليلا وظهريا مشيرا 10-30 درجة بعيدا عن مnter (الشكل 2A). تأمين على الفور الرأس مع الدبابيس. إذا هو المطلوب الثنائية تتبع، رئيس مركز في 0 درجة، أو مرأى ومسمع بطني بحيث يمكن الوصول إليها كلا الجانبين. وبالمثل، لحقن في الجانب الأيسر من الرأس في تأمين -10 إلى -30 درجة من وسط الجانب الأيسر حتى يمكن الوصول إليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الدورق 50 مل، 30 مل من نقل الاوكسيجين في ACSF الطبق، غمر تماما الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم بلطف وقشر أسفل الفك السفلي باستخدام ملقط غرامة تلميح، ثم إزالة الجفن السفلي على جانب الفائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنسجة الوعائية المغطي، بما في ذلك أي الحنك المتبقية والمريء. وينبغي لهذه الأنسجة الرخوة قشر بعيدا الكشف عن سطح أملس تطوير القحف الغضروفي مع الشرايين الفقري مميزة في سطحه. من هذه النقطة، يجب السمة الشامل otoconial بيضاء تكون مرئية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية الجلد حول الصماخ الخارجي، غضروف مفصل الفك، وإلى الأذن الوسطى مع ترك فيالمجموع الأذن سليمة. استخدام ملقط لخفض بلطف بعيدا هذه الهياكل الغضروفية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الشرايين الفقري وتجمع الدم باستخدام اقتراح لطيف واسعة مع ملقط غرامة نصائح. يمكن مشاهدة الدم والتخثر يحجب قد سد افتتاح ماصة الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القناة القوقعي مع ظهارة حسية المجاورة (القاعدي حليمة) والعقدة تكمن الصوتية مباشرة تحت القحف الغضروفي 6 و يمكن تصور باعتبارها الإسقاط الإصبع تشبه ممدود تمتد من الأذن الداخلية بطنيا، مع الطرف البعيد في أقصى (قمة) بالقرب من الأمامية خط الوسط 5. قد يكون هناك تجمع صغيرة من الدم (الحمراء) من تشريح و / أو تكلس الحصيات السمعية (أبيض) في ذروة القناة قوقعة الأذن (الشكل 2B) التي يمكن أن تساعد في التصور. يعتقد رقعة الحسية في ذروة هو البقعة lagenar، لتكون وظيفة الدهليزي 7،8. </li></ol> 3. انتقائية وصفها من ألياف CN السمعي VIII <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; ضع ماصة الحقن بالقرب من سطح الجنين في المنطقة قوقعة حليمة القناة والقاعدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض ببطء micropipette إلى ثقب الجمجمة لأول مرة. هذه المنطقة هي الجمجمة أرق من المناطق المحيطة بها، ويتطلب أقل قوة لاختراق. يجب أن تكون الآن micropipette داخل قناة القوقعية. اختياري: يمكن إجراء حقن صغيرة من صبغة تتبع هنا للمساعدة في وضع الرؤية وحليمة القاعدي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون تغيير موضع micropipette، مواصلة خفض المخالفات فقط حتى الحدود العميق للقناة القوقعية (الشكل 1). إجراء الحقن هنا وتكرار في مناطق متعددة على طول الحليمة القاعدي (أرقام 2C، 2D)، باستثناء الطرف الأكثر القريبة حيث يقع الحوقلة الدهليزي. مع تعيين picospritzer بين 10-30 رطل، يتم إجراء الحقن عدة. حجم السائل صبغ حقن يختلف، ويعتمد على مدى لوضع العلامات المطلوبة. ينبغي لكل الحقن يؤدي إلى LA-صبغة الفلورسنتbeled بقعة تقريبا من 200 - 400 ميكرون قطر (الشكل 2D). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبمجرد أن حقن اكتمال استخدام ملقط لعينة المسح الشامل فوق جذع الدماغ واستخدام ماصة نقل لوضع جزء الذيلية في جرة صغيرة داخل حاوية من ACSF باستمرار يجري perfused مع 95٪ O 2/5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل الجنين، والسماح 20-30 دقيقة لنقل الصبغة، اعتمادا على مسافة تتبع المركزية المطلوب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأنسجة والاستعداد لباجتزاء النسيجية. في المثال الموضح هنا، يتم غمر الأنسجة في بارافورمالدهيد 4٪ (1X PBS في) بين عشية وضحاها، والسكروز٪ 30 (1X PBS في) بين عشية وضحاها. </li></ol> 4. Counterstaining وتحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counterstaining مفيد للمساعدة في توجيه المراقب لموقع التشريحية وكذلك تحديد مناطق معينة من الفائدة. وملون مباين فعالة في هذا الإعداد هو immunolabeling خيط عصبي (الشكلان 1، 3B، 3E)، الذي L بقوةabels محاور عصبية ويسمح لترسيم مساحات محور عصبي في الجهاز العصبي المركزي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يتم تنفيذ تحليل في جميع أنحاء المنطقة المسمى، إذ أن التوقعات يمكن أن تمتد عدة مئات من ميكرون أو أكثر على طول محور rostrocaudal. بعض الأمثلة على التحليلات الأساسية هي: استهداف معدلات الخطأ والتوقيت و / أو تغييرات في أنماط الاختلاف في الإسقاط. محاور عصبية RDA التي تحمل علامات يمكن رؤيتها في النظام العصبي الطرفي والمركزي مع ارتفاع القرار (أرقام 3A، 3D). </li></ol>

<ol><li>Groves, A. K., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shaping+sound+in+space%3A+the+regulation+of+inner+ear+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Shaping sound in space: the regulation of inner ear patterning.</a> Development. 139, 245-257 (2012).</li>
<li>Pflieger, J. F., Cabana, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vestibular+primary+afferents+and+the+vestibulospinal+projections+in+the+developing+and+adult+opossum%2C+Monodelphis+domestica%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+Embryology%22%5BJournal%5D)">The vestibular primary afferents and the vestibulospinal projections in the developing and adult opossum, Monodelphis domestica.</a> Anatomy and Embryology. 194, 75-88 (1996).</li>
<li>Molea, D., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timing+and+topography+of+nucleus+magnocellularis+innervation+by+the+cochlear+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Timing and topography of nucleus magnocellularis innervation by the cochlear ganglion.</a> The Journal of Comparative Neurology. 466, 577-591 (2003).</li>
<li>Bissonnette, J. P., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+atlas+of+the+gross+anatomy+of+the+developing+inner+ear+of+the+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Standard atlas of the gross anatomy of the developing inner ear of the chicken.</a> The Journal of Comparative Neurology. 368, 620-630 (1996).</li>
<li>Brigande, J. V., Kiernan, A. E., Gao, X., Iten, L. E., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+genetics+of+pattern+formation+in+the+inner+ear%3A+do+compartment+boundaries+play+a+role%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Molecular genetics of pattern formation in the inner ear: do compartment boundaries play a role.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 11700-11706 (1073).</li>
<li>Bellairs, R., Osmond, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBellairs%2C+R+%22The+atlas+of+chick+development%22">The atlas of chick development</a>. , 2nd Edn, Elsevier. (2005).</li>
<li>Manley, G. A., Haeseler, C., Brix, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+patterns+and+spontaneous+activity+of+afferent+fibres+to+the+lagenar+macula+and+apical+basilar+papilla+of+the+chick%27s+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Innervation patterns and spontaneous activity of afferent fibres to the lagenar macula and apical basilar papilla of the chick's cochlea.</a> Hearing Research. 56, 211-226 (1991).</li>
<li>Code, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efferent+neurons+to+the+macular+lagena+in+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Efferent neurons to the macular lagena in the embryonic chick.</a> Hearing Research. 82, 26-30 (1995).</li>
<li>Maklad, A., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+vestibular+afferent+projections+into+the+hindbrain+and+their+central+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Development of vestibular afferent projections into the hindbrain and their central targets.</a> Brain Research Bulletin. 60, 497-510 (2003).</li>
<li>Rubel, E. W., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+system+development%3A+primary+auditory+neurons+and+their+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Auditory system development: primary auditory neurons and their targets.</a> Annual Review of Neuroscience. 25, 51-101 (2002).</li>
<li>Satoh, T., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+analysis+of+inner+ear+cells+using+genomic+tags+for+clonal+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Lineage analysis of inner ear cells using genomic tags for clonal identification.</a> Methods Mol. Biol. 493, 47-63 (2009).</li>
<li>Bok, J., Chang, W., Wu, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterning+and+morphogenesis+of+the+vertebrate+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Patterning and morphogenesis of the vertebrate inner ear.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51, 521-533 (2007).</li>
<li>Appler, J. M., Goodrich, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connecting+the+ear+to+the+brain%3A+Molecular+mechanisms+of+auditory+circuit+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Connecting the ear to the brain: Molecular mechanisms of auditory circuit assembly.</a> Progress in Neurobiology. 93, 488-508 (2011).</li>
<li>Bulankina, A. V., Moser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+circuit+development+in+the+mammalian+cochlea%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Neural circuit development in the mammalian cochlea.</a> Physiology (Bethesda). 27, 100-112 (2012).</li>
<li>Fekete, D. M., Campero, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axon+guidance+in+the+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Axon guidance in the inner ear.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51, 549-556 (2007).</li>
<li>Momose-Sato, Y., Glover, J. C., Sato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+functional+synaptic+connections+in+the+auditory+system+visualized+with+optical+recording%3A+afferent-evoked+activity+is+present+from+early+stages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Development of functional synaptic connections in the auditory system visualized with optical recording: afferent-evoked activity is present from early stages.</a> Journal of Neurophysiology. 96, 1949-1962 (2006).</li>
<li>Marrs, G. S., Spirou, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+assembly+of+auditory+circuits%3A+spiral+ganglion+and+brainstem%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Embryonic assembly of auditory circuits: spiral ganglion and brainstem.</a> The Journal of Physiology. 590, 2391-2408 (2012).</li>
<li>Milo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+analysis+of+the+function+of+the+transcription+factor+gata3+during+development+of+the+mammalian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic analysis of the function of the transcription factor gata3 during development of the mammalian inner ear.</a> PloS One. 4, e7144(2009).</li>
<li>Fritzsch, B., Eberl, D. F., Beisel, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+bHLH+genes+in+ear+development+and+evolution%3A+revisiting+a+10-year-old+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences+%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">The role of bHLH genes in ear development and evolution: revisiting a 10-year-old hypothesis.</a> Cellular and Molecular Life Sciences : CMLS. 67, 3089-3099 (2010).</li>
<li>Jahan, I., Kersigo, J., Pan, N., Fritzsch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurod1+regulates+survival+and+formation+of+connections+in+mouse+ear+and+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Neurod1 regulates survival and formation of connections in mouse ear and brain.</a> Cell and Tissue Research. 341, 95-110 (2010).</li>
<li>Huang, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brn3a+is+a+transcriptional+regulator+of+soma+size%2C+target+field+innervation+and+axon+pathfinding+of+inner+ear+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Brn3a is a transcriptional regulator of soma size, target field innervation and axon pathfinding of inner ear sensory neurons.</a> Development. 128, 2421-2432 (2001).</li>
<li>Jones, J. M., Warchol, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Gata3+transcription+factor+in+the+acoustic+ganglion+of+the+developing+avian+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Expression of the Gata3 transcription factor in the acoustic ganglion of the developing avian inner ear.</a> The Journal of Comparative Neurology. 516, 507-518 (2009).</li>
<li>Lu, C. C., Appler, J. M., Houseman, E. A., Goodrich, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+profiling+of+spiral+ganglion+neurons+reveals+insights+into+auditory+circuit+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Developmental profiling of spiral ganglion neurons reveals insights into auditory circuit assembly.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 31, 10903-10918 (2011).</li>
</ol>

والإعلان عن أي تضارب في المصالح.

واقتصرت دراسات التنمية في وقت مبكر من العصب VIIIth ويرجع ذلك جزئيا لصعوبة في تحديد محاور عصبية الجنينية الناجمة عن العقد متميزة متعددة. واستكشفت عدة دراسات الإشارات الجزيئية والخلايا السمعية توجيه الحسية الدهليزي ومصائر خلية العقدة خلال التنمية في وقت مبكر، ولكن 5،11،12 عمليات تنظيم تعصيب المركزي لم يتم تحديدها بعد. تقارير الصوتية التوقعات خلية العقدة عادة تصف العمليات الطرفية الحسية لظهارة 13-15، في حين لا يعرف الكثير عن العمليات المركزية لإسقاط نوى الأولية....

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> البوليسترين زن صحن </td><td> فيشر العلمية </td><td> 02-202-101 </td><td></td></tr><tr><td> طبق بتري، 35 X 10 مم </td><td> فيشر العلمية </td><td> 50820644 </td><td> استخدام السيليكون لجعل الطبق تشريح </td></tr><tr><td> Sylgard كيت سيليكون إلاستومر </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> SYLG184 </td><td> معطف بيتري لجعل الطبق تشريح </td></tr><tr><td> تشريح دبابيس </td><td> مختلف </td><td></td><td> يحمل الجنين في أثناء تشريح </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> بوكل </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </TD&gt; </tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> CaCl 2 </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> مختلف </td><td></td><td> جزء من وصفة ACSF </td></tr><tr><td> حاوية لACSF. تشير شفافة واسعة الفم Nalgene جرة، 500 مل (16 أوقية) مع غطاء. </td><td> CPLabSafety </td><td> QP-PLC-03717 </td><td> حفر ثقب في افتتاح قمة غطاء للزجاج bubling الجذعية لاختراق السائل </td></tr><tr><td> الزجاج فارغة أو 5 مل قارورة قارورة شفافة قابلة للمقارنة </td><td> أمريكا الدوائية الشركاء، وشركة </td><td> 6332300105 </td><tد&gt; استخدم خلال الحضانة للحفاظ على عينات ACSF منفصلة عن بعضها البعض وعن تيار محتدما </td></tr><tr><td> خزان كربوجين (95٪ O 2/5٪ CO 2) متصلة بواسطة أنابيب إلى عوامات </td><td> مختلف </td><td></td><td> بواسطة أنابيب لإرفاق عوامات الجذعية الزجاج للتسريب في ACSF </td></tr><tr><td> الزجاج الجذعية الفوار </td><td> مختلف </td><td></td><td> للبث في كربوجين ACSF </td></tr><tr><td> منحني ملقط غيض </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> 501008 </td><td> لإزالة الجنين من بويضة رئيس </td></tr><tr><td> اثنين غرامة ملقط غيض </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> 501985 </td><td> لتشريح الصغيرة </td></tr><tr><td> 50 مل بيكر </td><td> مختلف </td><td></td><td></td></tr><tr><td> رودامين دكستران أمين (RDA) </td><td> إينفيتروجن </td><td> مختلف </td><td> الفلورسنت محور عصبي التتبع </td></tr><tr><td> تريتون X-100 </td><td> Biomedicals ICN </td><td></td><td></td></tr><tr><td> التخزين المؤقت المالحة الفوسفات، (1X PBS) </td><td> مختلف </td><td></td><td> معيار مختبر كاشف </td></tr><tr><td> رقيقة الجدار الزجاجي الأوعية الشعرية، 1.2 OD، .9 ID 4 &quot;(100 مم) طول </td><td> أدوات الدقة العالم </td><td> TW120F-4 </td><td> تحميل مع RDA. كل شعري يجعل micropipettes الزجاج اثنين </td></tr><tr><td> إبرة / الماصة مجتذب </td><td> ديفيد KOPF الصكوك </td><td> نموذج 720 </td><td> الإعدادات المستخدمة: الحرارة 16.4، 2.2 الملف اللولبي </td></tr><tr><td> Picospritzer </td><td> باركر الأجهزة </td><td> مختلف </td><td> بواسطة أنابيب إرفاق غرامة لmicropipette الزجاج </td></tr><tr><td> مياداة مجهرية </td><td> Narishige </td><td> مختلف </td><td></td></tr><tr><td> المجهر تشريح مع مضان </td><td> مختلف </td><td></td><td></td&gt; </tr><tr><td> 4٪ لامتصاص العرق </td><td> مختلف </td><td></td><td> معيار مختبر كاشف </td></tr><tr><td> المضادة للأجسام المضادة خيط عصبي، اختياري </td><td> ميليبور </td><td> AB1991 </td><td> اتبع بروتوكول النسيجية موصى بها من قبل الشركة المصنعة </td></tr><tr><td> ناظم البرد والمواد المرتبطة بها لتقطيع </td><td> لايكا </td><td> مختلف </td><td></td></tr><tr><td> Epifluorescent المجهر للتصوير </td><td> زايس، ومختلف </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

انتقائية للبحث عن المفقودين من ألياف العصب السمعي في الطيور الدهليزي القوقعي الجنينية

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

فرخ الجنينية هو نموذج يستخدم على نطاق واسع لدراسة الطرفية والمركزية التوقعات خلية العقدة. في الجهاز السمعي، ووضع العلامات الانتقائي للمحاور عصبية السمعية داخل العصب القحفي VIIIth تعزيز دراسة السمعية المركزية التنمية الدائرة. هذا النهج من الأمور الصعبة نظرا الحواس متعددة من الأذن الداخلية والعصب المساهمة في VIIIth 1. وعلاوة على ذلك، علامات التي تميز بشكل موثوق السمعية مقابل مجموعة من المحاور العصبية الدهليزي داخل العصب VIIIth الطيور لا يزال يتعين تحديدها. لا يمكن السمعية والدهليزية مسارات يمكن تمييزها وظيفيا في الأجنة في وقت مبكر، كما الحسية استجابات ليست موجودة قبل تشكيل الدوائر. وقد تتبعت إسقاط مركزيا بالخلايا العصبية VIIIth في بعض الدراسات، ولكن رافق السمعية محور عصبي وضع العلامات من قبل المكونات الأخرى من وضع العلامات العصبية VIIIth 2،3. هنا، نحن تصف طريقة لتتبع تقدمي من العقدة الصوتية لابي انتقائيمحاور عصبية ل السمعية داخل العصب VIIIth النامية. الأولى، بعد تشريح جزء من المنطقة الأمامية من الرأس الجنين الفرخ يوم 8-منغمسين في الاوكسيجين السائل النخاعي الاصطناعي، تم تحديد قناة القوقعية من المعالم التشريحية. المقبل، يتم وضع غرامة micropipette الزجاج سحبت لحقن كمية صغيرة من الأمينات رودامين ديكستران في المنطقة العميقة لاصق والمجاورة حيث توجد خلايا العقدة الصوتية. في غضون ثلاثين دقيقة بعد الحقن، وتتبع محاور عصبية السمعي في الدماغ المؤخر مركزيا ويمكن أن تكون في وقت لاحق بعد إعداد تصور نسيجية. هذا الأسلوب يوفر أداة مفيدة للدراسات الإنمائية من الطرفية إلى وسط السمعية تشكيل الدائرة.

مكونات العصب VIIIth وتشريح الأعصاب نفسها معقدة ومعقدة (أرقام 1، 3). عن طريق تتبع انتقائي الألياف الناشئة عن خلايا العقدة الصوتية، يمكن شرائح العصب VIIIth وكذلك afferents السمعية الأولية في الدماغ تتبع نظيفة وتمييزها عن نظيراتها الدهليزي (أرقام 2، 3). وبالمثل، يمكن أن تستخدم هذه التقنية لدراسة التوقعات الطرفية للخلايا العقدة الصوتية (الشكل 3G)، أو تعديلها لدراسة التوقعات الناشئة عن أجهزة الدهليزي الفردية. لأن تتبع نظيفة محاور عصبية...

نحن هنا وصف تقنية تسليخ مجهري تليها حقن صبغة الفلورسنت في العقدة الصوتية للأجنة الكتكوت المبكر للانتقائية تتبع من ألياف المحور العصبي السمعي في الدماغ المؤخر والعصب.

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

الهدف من هذا الإجراء هو تتبع الألياف السمعية بشكل انتقائي من الجهاز العصبي المحيطي إلى الجهاز العصبي المركزي في الجنين. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إجراء مقطع بجرعة مجهرية للكشف عن القحف الغضروفي البطني وتحديد القناة القوقعية الطيرية. والخطوة الثانية هي إجراء حقن مجهري في خلايا العقدة الصوتية الكامنة ومحاورها العصبية.بعد ذلك، يتم تحضين العينة في سائل دماغي شوكي اصطناعي مؤكسج لمدة 20 دقيقة للسماح بانتقال DIA. وأخيراً، يتيح التحضير النسيجي وتقطيع الأنسجة الرؤية المجهرية للإسقاطات المركزية للعقدة الصوتية. وتتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية في أنها تسمح بالتتبع الانتقائي للعصب الثامن.تسمح الألياف السمعية ذات الدقة العالية بالنقل السريع للصبغة في الأنسجة الحية، وتتيح إجراء التجارب في مرحلة نمائية مبكرة. ويمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال أبحاث السمع؛ على سبيل المثال، ما هي الجزيئات التي توجه المحاور العصبية نحو أهدافها المركزية؟أو كيف تستجيب الدوائر العصبية للإصابة أو التعرض للمواد السامة للأذن؟ أولاً، أضف سائل دماغي شوكي اصطناعي إلى وعاء Nalgene واسع الفوهة سعة 500 milliliter حتى يمتلئ الوعاء بمقدار الثلثين. أعد تركيب الغطاء، الذي يحتوي على ثقب محفور فيه، على الوعاء.ضع فقاعة ساق متصلة بخزان يحتوي على 95% oxygen و 5% carbon dioxide عبر الفتحة الموجودة في الغطاء وبداخل A CSF. قم بتشغيل الغاز واضبط الضغط للحصول على تدفق مستمر من الفقاعات التي تصل إلى حوالي ثلث السائل، ولكن دون أن تكون قوية بما يكفي للتسبب في تطاير السائل فوق الحافة. اغمر ما يصل إلى ست قوارير زجاجية سعة 5 mL في الجرة لفصل العينات الفردية عن بعضها البعض.ومن اضطراب تدفق الغاز. اترك السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (A CSF) ليتأكسج لمدة 20 دقيقة على الأقل، وبينما يتأكسج الـ A CSF، اسحب الماصات الزجاجية الدقيقة واملأ الماصة الدقيقة بمحلول مناعي من رودين ديكستر (rodine Dexter) بتركيز 6.25% في محلول PBS يحتوي على 0.4% من Triton XX. قم بتوصيل الماصة الدقيقة بجهاز التحكم الدقيق واكسر الطرف باستخدام ملقط دقيق لتشكيل فتحة تتراوح بين 20 و50 ميكرون. استخدم أنابيب دقيقة لتوصيل جهاز التحكم الدقيق المستقر بالمرش المرئي (pico spritzer).اضبط جهاز الرش الدقيق (pico spritzer) على ضغط يتراوح بين 10 إلى 30 PSI للبدء في استكمال بقية عملية الإعداد. تأكد من وجود طبق تشريح صغير من السيليكون مع وضع دبوسي تشريح في ترتيب سداسي صغير. جهز ملقطين دقيقين.ملقط ذو طرف منحني واحد، وكأس سعة 50 ملليلتر، وحاوية للتخلص من الأنسجة في منطقة التشريح. بعد إزالة جنين الدجاج من البيضة، ضع الرأس على طبق التشريح المغطى بالسيليكون. في قارب التشفير، ضع الرأس في وضعية عرض بطنية بحيث تكون الأذن في الجانب المستهدف، وهو الجانب الأيمن في هذه الحالة، مرئية.بمجرد وضع النسيج في الموضع الصحيح، يتم تثبيته باستخدام دبابيس التشريح، مع تجنب منطقة الدماغ الخلفي. استخدم كوب مدرج سعة 50 milliliter لنقل 30 milliliters من A CSF المؤكسج إلى الطبق، بحيث يتم غمر النسيج بالكامل. بعد ذلك، استخدم ملقطاً دقيق الطرف للإمساك بالفك السفلي وسحبه لأسفل برفق.بعد ذلك، قم بإزالة الجفن السفلي في الجانب المراد دراسته. ثم قم بإزالة الأنسجة الوعائية والرخوة التي تغطي المنطقة، بما في ذلك أي بقايا من الحنك والبلعوم. وبمجرد إزالة هذه الأنسجة، يجب أن يظهر السطح الأملس للجزء البطني من القحف والشرايين الفقرية المميزة.قم بتشريح الجلد المحيط بالـ mitos الخارجية وغضروف مفصل الفك والأذن الوسطى بعناية، مع ترك الأذن الداخلية سليمة. استخدم الملقط لقطع الهياكل الغضروفية للفك والأذن الوسطى برفق. الآن، استخدم حركة مسح لطيفة بأطراف الملقط الدقيق لإزالة الشرايين الفقرية والدم المتجمع.يعد هذا الأمر مهماً لأن الدم يمكن أن يحجب الرؤية وقد يؤدي التجلط إلى سد فتحة ماصة الحقن. وفي هذه المرحلة، يجب أن تكون الكتلة البيضاء المميزة مرئية. يشير السهم في هذا الشكل إلى القناة القوقعية مع الظهارة الحسية المجاورة والعقدة السمعية.تقع هذه المنطقة مباشرة أسفل الغضروف القحفي، وكما يظهر هنا، يمكن رؤيتها كبروز مستطيل يشبه الإصبع يمتد من الأذن الداخلية بطنياً مع وجود القمة بالقرب من الخط المتوسط الأمامي لتحديد الألياف السمعية. أولاً، ضع ماصة الحقن بالقرب من سطح الجنين في منطقة القناة القوقعية ومنطقة البaula papular، ثم اخفض الماصة الدقيقة ببطء لثقب القحف أولاً. وتعد هذه المنطقة من القحف أرق من المناطق المحيطة بها، لذا فهي تتطلب قوة أقل لاختراقها.يجب أن تكون الماصة الدقيقة الآن داخل القناة القوقعية. وإذا لزم الأمر، يمكن حقن كمية صغيرة من صبغة التتبع هنا للمساعدة في رؤية الغشاء القاعدي والأعمدة دون إعادة وضع الماصة الدقيقة؛ استمر في الخفض حتى تخترق الماصة للتو الحافة العميقة للقناة القوقعية.توضح هذه الصورة الموضع المثالي للماصة في المنطقة المناسبة من العقدة الصوتية. قم بإجراء الحقن في هذه النقطة، ثم كرر العملية في مناطق متعددة على طول الحليمة القاعدية. يعتمد ذلك على مدى الوسم المطلوب، مع استبعاد الطرف الأكثر قرباً حيث تقع الساق الدهليزية.عند ضبط جهاز الرش الدقيق (pico spritzer) بين 10 إلى 30 PSI، يجب أن تؤدي كل عملية حقن إلى ظهور بقعة مصنفة بـ DIA الفلوري يبلغ قطرها حوالي 200 إلى 400 ميكرون كما هو موضح هنا. بمجرد اكتمال الحقن، استخدم الملقط لقطع العينة فوق جذع الدماغ كما هو موضح هنا، واستخدم ماصة نقل لوضع جزء الحبل الشوكي في أحد البرطمانات الصغيرة الموجودة داخل حاوية السائل الدماغي النخاعي (CSF) المروى.لكل جنين، اترك ما بين 20 إلى 30 دقيقة لنقل الصبغة اعتماداً على مسافة التتبع المركزي المطلوبة. وبمجرد انقضاء وقت الحضن، قم بإزالة النسيج وتجهيزه للتقطيع النسيجي. وفي هذه المرحلة، يتم غمر النسيج في 4%paraldehyde في one XPBS طوال الليل، يليه عملية تجفيف طوال الليل في 30%sucrose في one XPBS.بعد موازنة النسيج طوال الليل في محلول 30%sucrose، يتم تقطيعه في المستوى الإكليلي باستخدام المقطاع بالتجميد. وبعد التقطيع، يمكن لعملية الوسم المناعي باستخدام الأجسام المضادة المناسبة أن توجّه الفاحص إلى الموقع التشريحي بالإضافة إلى تحديد مناطق اهتمام معينة. تظهر هذه الصورة المنظر الإكليلي لجذع الدماغ في E six مع بقاء العقد السمعية الثنائية سليمة.توضح الماصة الحمراء التخطيطية في الشكل S الاستهداف الدقيق لخلايا العقدة الصوتية من نقطة دخول ظهرية جانبية. وقد تم وسم المقاطع مناعياً باستخدام مضاد الخيوط العصبية لإبراز الإسقاطات المحورية. تقع الأعضاء الدهليزية في الجهة المنقارية بالنسبة للمقطع الموضح.تم تمييز العصب الدهليزي القوقعي، وكذلك العقدة السمعية والعقدة الدهليزية. الجانب الظهري للأعلى، ومقياس الرسم يساوي 300 microns. فيما يلي صور ممثلة بقوة تكبير منخفضة وعالية لتتبع الألياف السمعية الانتقائية في جنين من عمر E8 بمقاطع عرضية تبلغ 25 micron.تظهر المقاطع الإكليلية التي تم جمعها من نفس الجنين مستويات مختلفة كما هو موضح هنا. يمكن تتبع المحاور العصبية الموصومة بـ RDA من موقع الحقن المشار إليه برأس السهم، مروراً بالعصب القحفي المشار إليه بالسهم، وصولاً إلى أهداف النوى السمعية الأولية المشار إليها برأس السهم المزدوج، ويمثل شريط المقياس 300 microns. يبرز الوسم المناعي باستخدام جسم مضاد للـ neurofilament جميع الإسقاطات المحورية، وتوجد الألياف التي تتبعها صبغة RDA من الصورة السابقة ضمن مسار الإسقاط السمعي.يشير AP و VP إلى المكونات السمعية والدهليزية على التوالي، والموجودة في المنطقة الطرفية بالنسبة لنقطة دخول العصب. وتوضح الصورة الملونة المدمجة كيفية ملاءمة المحاور العصبية المحددة بواسطة RDA مع التشريح المحلي. وتُظهر صورة بقوة تكبير عالية لنفس الجنين في موضع حبلي أكثر دقة الدقة العالية للألياف عند نقطة دخول العصب المشار إليها بسهم، وعبر المسار المركزي المشار إليه برأس سهم مزدوج.يسمح صبغ الخيوط العصبية (Neurofilament) لجميع المحاور بتحديد P-N-S-C-N-S بالإضافة إلى الإسقاطات السمعية مقابل الدهليزية المفترضة. مرة أخرى، تشير AP و VP إلى المكونات السمعية والدهليزية على التوالي، والموجودة في الجهة الطرفية بالنسبة لنقطة دخول العصب، بينما تشير AC و VC إلى الإسقاطات السمعية والدهليزية على التوالي، والموجودة في الجهة المركزية بالنسبة لنقطة دخول العصب. ومجدداً، يظهر تراكب القنوات المنفصلة كدمج لوني.يكشف الفحص النسيجي للعقدة السمعية عن موقع خلايا العقدة السمعية المصبوغة من عملية التتبع السابقة وإسقاطاتها الطرفية المشار إليها بعلامة النجمة، حيث تتبع المسار رجعياً بشكل كبير وصولاً إلى الحليمة القاعدية. هنا يشير AG إلى العقدة السمعية، وbp إلى الحليمة القاعدية، وlm إلى الغشاء البقعي. يمثل شريط المقياس 100 microns.وأخيراً، يوضح هذا الرسم التوضيحي مسار تتبع بطول 700 ميكرون متوقعاً عند وسم العصب الثامن النوعي السمعي في المرحلة E8. موقع الحقن المشار إليه بالدائرة الحمراء يقع خلف نقطة دخول العصب، وتنتقل الإسقاطات المركزية نحو الجهة الرأسية والجهة الظهرية. وبمجرد الوصول إلى الدماغ الخلفي هنا، يكون شريط المقياس مساوياً لـ 300 ميكرون.أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، قم بتكييف عمليات الحقن بما يتناسب بشكل أفضل مع معايير التحليل الخاصة بك. وتذكر أن هناك بعض التباين في العدد الدقيق ومواقع المحاور العصبية المقتفاة بين العينات.

selective-tracing-auditory-fibers-avian-embryonic-vestibulocochlear

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

&lt; p class = "jove_content" &gt;يوضح هذا الفيديو عملية تحضير شرائح الدماغ على شكل إسفين في بيئة معملية. باستخدام الاهتزاز ، يتم صنع شريحة على شكل إسفين من دماغ الفأر بسماكة متفاوتة. تحتوي هذه الشريحة على جذر العصب السمعي الموجود في الطرف السميك ، بينما توجد الخلايا العصبية المرتبطة بالسمع في الطرف الرقيق.

تحضير شرائح الدماغ الإسفيني لتصور الخلايا العصبية السمعية

معقد تحليل الدهليزي وظيفة خلايا الشعر عن طريق موقعهم في أعماق أصعب جزء من الجمجمة، والعظم الصدغي الصخري. وقد استخدمت معظم الدراسات خلية الشعر وظيفي حاد خلايا الشعر معزولة. هنا نحن تصف إعداد شبه سليمة من ظهارة الدهليزي الماوس للدراسات المجهر الكهربية واثنين من الفوتون.

استعدادا شبه سليمة المعزولة من الفأر الدهليزي الظهارة الحسية للالكهربية وعالية الدقة الميكروسكوب ثنائي الفوتون

نقدم طريقة تصف عزل واستزراع استنخاذ القوقعة الصناعية من الأذن الداخلية للفأر الجنينية.  نوضح أيضا طريقة لنقل الجينات إلى مستخلصات القوقعة الصناعية عبر التثقيب الكهربائي ذو الموجة المربعة. تمكن ثقافة الزرع في المختبر إلى جانب تقنية نقل الجينات الباحثين من دراسة تأثيرات تغيير التعبير الجيني أثناء التطوير.

ثقافة الجنينية الماوس القوقعة إإكسبلنتس وجين نقل من قبل Electroporation لل

يتوسط العضو السمعي السمع. نقدم هنا طريقة معدلة في التكوين الكهربائي الدقيق في البيضا المحسنة لدراسة تكاثر الخلايا السلفية السمعية والتمايز في العضو السمعي النامي للدجاج.

نقل الجينات إلى داخل الجهاز الدجاج السمعية التي كتبها<em&gt; في البيضة</em&gt; الصغرى Electroporation لل

الخلايا العصبية السمعية الدماغية من الطيور والثدييات هي متخصصة في الترميز العصبي السريع، عملية أساسية لوظائف السمع العادية. تنشأ هذه الخلايا العصبية من السلائف متميزة من الدماغ المؤخر الجنيني. نقدم تقنيات الاستفادة إليكتروبوراتيون للتعبير عن الجينات في الدماغ المؤخر من أجنة الدجاج لدراسة وظيفة الجينات خلال التنمية السمعية.

في أوفو إليكتروبوراتيون في الدماغ الدماغ السمعي

ويصف هذا البروتوكول أساليب لتسجيل استجابة جذع الدماغ السمعية من الجراء الفئران بعد الولادة. دراسة تطور وظيفي لخلايا الشعر الخارجي، يرد وصف للإجراءات التجريبية لتصحيح كامل الخلية المشبك تسجيل في عزل خلايا الشعر الخارجي خطوة بخطوة.

استجابة جذع الدماغ السمعية والخارجي الشعر خلية تسجيل المشبك تصحيح كامل الخلية في الفئران بعد الولادة

نقدم هنا بروتوكولا للحصول على شرائح جذع الدماغ السمعية غير الإكليلية من جنين الدجاج للتحقيق في خصائص التوتر ومسارات النمو داخل شريحة جذع دماغ واحدة. وتشمل هذه الشرائح أقساما سهمية وأفقية وأفقية/عرضية تشمل مناطق تونوبية أكبر داخل مستوى شريحة فردي مقارنة بالمقاطع الإكليلية التقليدية.

تقطيع جذع دماغ الدجاج السمعي الجنيني لتقييم التدرجات التونية والدوائر الدقيقة

لقد استخدمنا تقنيات الاستجابة السمعية القياسية لجذع الدماغ (ABR) وطبقناها على الدجاج المفرخ ، وهو نموذج طائر مبكر للوظيفة السمعية. يحدد البروتوكول إعداد الحيوانات وتقنيات الحصول على ABR بالتفصيل ، مع خطوات يمكن أن تترجم إلى نماذج أخرى للطيور أو القوارض.

تقييم استجابة جذع الدماغ السمعي في فراخ الدجاج

الفرخ هو كائن نموذجي فعال من حيث التكلفة ويمكن الوصول إليه ومتاح على نطاق واسع لمجموعة متنوعة من الدراسات. هنا ، يتم تفصيل سلسلة من البروتوكولات لفهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء تطور الأذن الداخلية للطيور وتجديدها.

في طرق Ovo و Ex Ovo لدراسة تطور الأذن الداخلية للطيور

باستخدام التثقيب الكهربائي للبويضات ، ابتكرنا طريقة لنقل الأذن الداخلية السمعية ونواة القوقعة بشكل انتقائي في أجنة الدجاج لتحقيق ضربة قاضية خاصة بمجموعة الخلايا لبروتين التخلف العقلي X الهش خلال فترات منفصلة من تجميع الدائرة.

تشريح وظيفة الخلية المستقلة لبروتين التخلف العقلي X الهش في دائرة سمعية بواسطة التثقيب الكهربائي في Ovo

السطور الوعائية أمر حيوي لتوليد إمكانات القوقعة الداخلية. هنا ، نقدم تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ لتسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة.

تشريح الأوعية الدموية للفأر البالغ من أجل تسلسل النواة المفردة أو تلطيخ المناعة

اكتشف تقنية التتبع الانتقائي للألياف السمعية في الجهاز العصبي للأجنة باستخدام حقن الأصباغ الفلورية في العقدة السمعية لأجنة الدجاج. هذه الطريقة تُحسّن تصوير الإسقاطات المركزية وتساعد الباحثين على دراسة تطور الجهاز السمعي بدقة عالية.

انتقائية للبحث عن المفقودين من ألياف العصب السمعي في الطيور الدهليزي القوقعي الجنينية

استكشف المزيد من الفيديوهات