تشكيل الظهارة البروستاتا الذي يصيب الانسان عن طريق إعادة التركيب الأنسجة من القوارض البولي التناسلي اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية والخلايا الجذعية البشرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل القوارض البولية التناسلية أو اللحمة المتوسطة الجيبية أو UGSM من أجنة القوارض وزرع مخاليط الأنسجة في الكبسولة الكلوية التي يمكن أن تشكل ظهارة البروستاتا البشرية. يتم تحقيق ذلك عن طريق عزل الجيوب البولية التناسلية أولا عن أجنة الفئران أو الفئران. بعد ذلك ، يتم فصل اللحمة المتوسطة الجيبية البولية التناسلية عن الظهارة.

ثم يتم دمج معلقات الخلية المفردة من اللحمة المتوسطة الجيوب الأنفية البولية التناسلية مع الخلايا الجذعية متعددة القدرات. أخيرا ، يتم زرع خليط الخلية تحت الكبسولة الكلوية للفأر المضيف. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر ظهارة البروستاتا البشرية التي تشكلت على كلية الفأر من خلال التحقق من صحة تعبير PSA الخاص بالإنسان.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لوظيفة البروستاتا وبدء المرض ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أنظمة أخرى مثل الطعم الغريب لأورام البروستاتا البشرية وتحريض خطوط الخلايا السرطانية الأسبوعية لتشكيل الأورام. بعد القتل الرحيم للفأر أو الفأر الحامل في الوقت المناسب وعزل الأجنة ، افصلها عن الكيس الأمنيوسي ، وقطع الحبل السري وانقلها إلى أنبوب سعة 50 مليلتر يحتوي على قطع مثلجة. وازن محلول الملح واحتفظ به على الثلج.

ضع جنينا في طبق بتري 100 ملم واستخدم المقص لتقسيمه إلى نصفين على مستوى البلعة. قم بإزالة المعدة والأمعاء الدقيقة ثم حدد موقع المبايض في الجنين الأنثوي ، والتي توجد في أعمدة التدليل في الكلى أو الخصية في الذكر الموجود على مستوى المثانة. تحت نطاق التشريح.

استخدم مقص البندقية لقطع جدار البطن لكشف المثانة والجدار الخلفي للبطن. تحرير الجهاز التناسلي العلوي من المرفقات وتحرير الحبل السري. قطع عظم العانة وباستخدام ملقط دومون ناعم.

بصراحة ، افصله عن الجدار الأمامي للجيوب البولية التناسلية. افصل الجدار الخلفي للجيوب البولية التناسلية عن المستقيم وقطع الجيوب البولية التناسلية مع المثانة في الطرف السفلي. ثم افصل المثانة عن الجيوب الأنفية البولية التناسلية.

قم بتخزين الجيوب البولية التناسلية وكتلة الجسم في HBSS المثلج. نقل الجيوب البولية التناسلية إلى أنبوب سعة 50 مليلتر يحتوي على 1٪ تريبسين في HBSS بدون الكالسيوم والمغنيسيوم واحتضانه عند أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد الحضانة ، قم بإزالة التربسين وأضف 10٪ FBS و DM A MF 12 وسط لتحييد عملية الهضم.

بعد ذلك ، استخدم إبرة أو ملقط طرف رفيع لإثارة الأكمام الوسيطة اللزجة بعناية من الأنبوب الظهاري. يقلل الحفاظ على الأنبوب الظهاري سليما من فرص تلوث الخلايا الظهارية في اللحمة المتوسطة. يمكن أن يؤدي ذلك إلى تكوين الغدد القوارض جنبا إلى جنب مع ظهارة الغدة البشرية المشتقة من الخلايا الجذعية.

انقل UGSM إلى أنبوب جديد سعة 50 مليلتر يحتوي على وسط DMM F 12 يحتوي على 10٪ FBS 1٪ من بكتيريا القلم و 1٪ من الأحماض الأمينية غير الأساسية وذرس نانوي واحد. R 1 8 81 احتضان الأنبوب عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2 بين عشية وضحاها. في اليوم التالي ، قم بالطرد المركزي للأنسجة عند 200 جم ، وتخلص من المادة الطافية واستخدم PBS لغسل الحبيبات.

بعد إزالة PBS ، قم بإعادة تعليق الأنسجة في 0.2٪ كولاجيناز في D-M-A-M-F 12 واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع هزاز لطيف لمدة ساعة واحدة ، قم بدوامة أنسجة الهضم بقوة ثلاث مرات حتى تصبح خليطا متجانسا أحادي الخلية وتحييد الكولاجيناز عن طريق إضافة وسط D-M-A-M-F 12 مع 10٪ FBS 1٪ بكتيريا قلم ، 1٪ أحماض أمينية غير أساسية ونانومولار واحد R 1 8 81. اغسل الخلايا ثلاث مرات عن طريق تكويرها عند 200 جم وتعليقها في HBSS. أخيرا ، قم بتعليق الخلايا الوسيطة في DMM F 12 واستخدم مقياس الخلوي الدموي لحسابها لإجراء عملية الزرع.

بعد تحضير منطقة جراحية معقمة وتخدير فأر عاري رياضي ذكر بحقن IP من الكيتامين زيلازين ، وفقا للبروتوكول النصي ، قم بإجراء قرصة إصبع القدم للتأكد من مستوى التخدير قم بإعداد الفأر جراحيا عن طريق حلق موقع الجراحة إذا لزم الأمر ، وتنظيفه بثلاث مناديل متناوبة من الكحول بنسبة 70٪ متبوعة بمحلول البيتادين. بعد وضع مرهم العين ، قم بعمل شق طولي بطول سنتيمتر واحد على الظهر واستمر في قطع جدار البطن بشق طولي 0.5 سم. اعصر الكلية برفق خارج البطن واستخدم قطرات من المحلول الملحي المعقم للحفاظ على رطوبتها.

بعد ذلك ، باستخدام إبرة حقنة قياس 27 ، قم بثقب الكبسولة الكلوية برفق لإنشاء موقع حقن لخليط الخلايا. ثم املأ إبرة حقنة قياس 28 ب 10 ميكرولتر من خليط الخلايا وأدخلها ببطء في موقع البزل ، وتخترق حمة الكلى. للوصول إلى منطقة أسفل الكبسولة الكلوية.

حقن 10 ميكرولتر من الخليط الخلوي لتشكيل بلعة على الكلى أسفل الكبسولة الكلوية وسحب الإبرة. أعد الكلية إلى تجويف البطن وقم بتأمين الطبقة العضلية للبريتوني بأربع خيوط نايلون. أغلق الجلد إما بالخيوط أو الدبابيس واستخدم محلول ملحي معقم لتنظيف أي دم من الجلد.

تظهر هنا صورة بالموجات فوق الصوتية لطعم غريب متزايد بعد ثمانية أسابيع من الزرع. تمثل المنطقة المحاطة بدائرة الطعم الغريب على سطح الكلى. توضح هذه الصور نمو الطعم الغريب على سطح الكلى.

بعد 12 أسبوعا ، الخلايا الجذعية الجذعية البشرية المزروعة في غياب الجيوب الأنفية البولية التناسلية ، ستشكل اللحمة المتوسطة ورما مسخيا كبيرا ، في حين أن اللحمة المتوسطة للجيوب البولية التناسلية المزروعة بمفردها ستفشل في تكوين أي بنية يمكن تمييزها. يظهر في المنتصف. لوحات هذا الشكل عبارة عن تلطيخ كيميائي مناعي تمثيلي لظهارة البروستاتا البشرية المشتقة من الخلايا الجذعية مقابل أنسجة البروستاتا البشرية البالغة.

كما هو موضح هنا على اليسار ، تحتوي الغدد على طبقة ظهارية لمعية إيجابية AR. هذا أيضا إيجابي PSA ، طبقة الخلايا الظهارية القاعدية P 63 إيجابية والكروموجرانين النادر. خلايا الغدد الصماء العصبية ، الغدد ليست سرطانية كما هو موضح من تلطيخ A-M-A-C-R السلبي عند إخصاء المضيف.

تعد الخلايا اللمعية الإيجابية AR PSA موجودة مما يدل على الاعتماد المميز على الأندروجين. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر توخي الحذر الشديد في فصل اللحمة المتوسطة الجيبية البولية التناسلية عن الظهارة. نظرا لأن ظهارة الجيوب الأنفية البولية التناسلية الملوثة ستشكل غددا ويحتمل أن تربك نتائجك.