استخدام في الجسم الحي التصوير لرصد تطور التجريبية ماوس عدوى الفيروس المضخم للخلايا في حديثي الولادة

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء التصوير في الجسم الحي لحديثي الولادة للفأر للتحقيق في انتشار الفيروس المضخم للخلايا المضيء. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير التخفيف المناسب للفيروس أولا من محلول المخزون. بعد ذلك يتم حقن حديثي الولادة ب MCMV المضيء في التجويف البريتوني.

في النقاط الزمنية بعد الحقن. يتم تخدير الجراء وحقنها باستخدام لوسيفر قبل التصوير في الجسم الحي. في النهاية ، يتم استخدام التصوير في الجسم الحي لإظهار وتحديد تكاثر الفيروس وانتشاره في التجويف البريتوني والجهاز العصبي المركزي.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل الترشيح الفيروسي في الأعضاء بعد القتل الرحيم للحيوانات المصابة ، هي استهلاك وقت أقل وموارد أقل. سيوضح الإجراء Mr.Il ماكان ، فني من مختبري. يتم استخدام سلالة MCMV التي تعبر عن لوسيفيراز تم الحصول عليها من مختبر أولريش كوفسكي في الدراسة التالية.

لتضخيم السلالة ، أضف الفيروس إلى الخلايا المستنبتة في وسط خال من المصل عند 37 درجة مئوية. بعد ساعة واحدة ، قم بإزالة المادة الطافية واستبدله ب DMEM المكمل بمصل ربلة الساق الجنينية بنسبة 10٪. بعد خمسة أيام ، يتم حصاد المزرعة وتخزين الحصص عند 80 درجة مئوية تحت الصفر.

حتى مزيد من الاستخدام. بعد معايرة المعلق الفيروسي عن طريق فحص اللويحات، قم بتخفيف العينة إلى 50 pfu في 50 ميكرولتر من DMEM واتركها على الثلج حتى يتم إجراء الحقن جاهزا للاستخدام في حديثي الولادة الذين تتراوح أعمارهم بين أربع و20 ساعة. قبل التعامل مع الجراء ، قم بمعالجة القمامة والبراز بأيدي مرتدية القفازات.

لتجنب إدخال الروائح الغريبة التي يمكن أن تضغط على الأم لإجراء حقن تدريبي ، املأ حقنة الأنسولين ب 1٪ من الميثيلين الأزرق المخفف في DPBS. عندما تكون جاهزا ، أمسك حديث الولادة من الجلد الظهري كما هو موضح هنا مع الجانب البطني لأعلى. أدخل الإبرة تحت الساق الأربعة وادفعها برفق تحت الجلد في التجويف البريتوني.

بمجرد أن يصبح طرف الإبرة في الموضع الصحيح ، قم بحقن الميثيل باللون الأزرق. بعد ذلك ، اسحب الإبرة ببطء وامسح أي دم من موقع الحقن. إعادة حديث الولادة إلى القفص المنزلي بعد الحقن بعد الحقن الناجح ، كرر هذا الإجراء مع المعلق الفيروسي المعد مسبقا.

يتم التقاط الصور بعد سبعة أيام من الحقن ، مع التعامل مع حديثي الولادة بحذر كما هو موضح سابقا. حقن كل منها بمزيج من التخدير ولوسيفر أثناء الانتظار من 12 إلى 15 دقيقة لكي يصل LUCIFERIAN إلى أقصى انبعاثات له ، تأكد من تسخين المنصة الموجودة في غرفة الاستحواذ الخاصة بجهاز التصوير للحفاظ على درجة حرارة الجسم الصحيحة. بعد تخدير الجراء ووضع علامات عليها لتحديد هويتها ، تكون جاهزة لوضعها في نظام التصوير.

أولا ، قم بإجراء اكتساب الضوء المنبعث من الجسم كله. نظرا لأن الفيروس قد تكاثر في العديد من الأعضاء المستهدفة ، يجب أن تكون مدة التعرض قصيرة. هنا ، يتم إجراء الاستحواذ لمدة 10 إلى 20 ثانية.

من المفيد الحصول على صور منخفضة الدقة للعديد من في جولة واحدة من الاستحواذ ، ثم تقريب المنصة من أجل التركيز على جزء واحد من معين أو عضو معزول بعد التشريح. للحصول على إشارة ضوئية من الرأس فقط ، قم بتغطية بقية الجسم بورق سميك داكن يخفي الفوتونات ، وقم بإجراء الاستحواذ لمدة خمس إلى 10 دقائق ، وكرر ذلك للجانب المقابل من. في ظل نفس الظروف.

بعد التصوير ، أعد الجراء إلى قفص ساخن للحفاظ على درجة حرارة أجسامهم أثناء التخدير. تم التقاط هذه الصور في اليوم 7 و 9 و 11 و 14 بعد الإصابة ، ويبدو أن العيار الفيروسي الكلي في ينخفض بمرور الوقت. في هذا المثال ، يتم تغطية الجسم ، تاركا الرأس مكشوفا.

يكشف هذا عن بقعة سرية على مستوى الأذن اليسرى تزداد شدتها بين اليوم السابع و 14 ، مما يشير إلى أنه يمكن ملاحظة انتشار MCMV إلى الدماغ ديناميكيا في الجسم الحي. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل الكيمياء المناعية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية حول الموقع الدقيق للفيروس في الدماغ.