دليل طريقة فعالة لإعداد Deboning سليمة ماوس النسيج الأنفي مع منظمة التشريحية المحفوظة

مرحباً، أنا ديفيد دنتون من مختبر الدكتور وونج لين في جامعة ميريلاند بالتيمور كاونتي (UMBC). نعرض في هذا الفيديو تقنية فعالة لتحضير أنسجة الأنف لدى الفئران مع الحفاظ على التنظيم التشريحي. تتيح هذه التقنية الحصول على عينة واحدة تحتوي على كامل أنسجة الأنف تقريباً، بما في ذلك الأنسجة التنفسية والشمية، والأنسجة الطلائية وتحت الطلائية.

نعرض في هذا الفيديو خطوات إزالة مختلف عظام الوجه المحيطة بأنسجة الأنف، وهو ما يحافظ حتى على أكثر الأنسجة دقة، مثل نهايات الظهارة الشمية الرئيسية. وتتميز طريقتنا بمزايا كبيرة مقارنة بطرق إزالة الكالسيوم لأنها تتجنب المعالجة الكيميائية القاسية، كما يمكن إتمام عملية إزالة العظام في غضون 20 إلى 30 دقيقة. ومن المزايا الأخرى لهذه التقنية أنها غير مقيدة بعمر الفأر، ويمكن تنفيذها باستخدام أنسجة مثبتة أو طازجة.

تجعل هذه المزايا تقنيتنا مثالية للدراسات المورفولوجية والكيميائية النسيجية المناعية والفسيولوجية. نعرض هنا مخططاً توضيحياً للجانب الظهري لعظام الجمجمة والأنف. سنركز في هذا الفيديو على تشريح عظام الأنف.

هذا مخطط توضيحي للجانب البطني لعظام الجمجمة والأنف. هذا عرض ظهري تظهر فيه جمجمة وأنف غير مشرحين في الأعلى، وأنف مشرح في الأسفل. تظهر الآن النهايات الخاصة بالظهارة الشمية الرئيسية.

نعرض هنا عظام الأنف بدءاً من الجانب الظهري. هذا هو الجزء الظهري من الصفيحة الوجنية، يليه القوس الوجنية. هذه هي العظمة الأنفية، ويليها الصفيحة المصفوية الموجودة في موقعها.

يقع العقدة غرونبيرغ (gruenberg ganglion) في موقع أمامي بعيد. ومن المنظور الجانبي، نعرض جزءًا من العظم الغربالي الذي يغطي القرينة الخاصة بالظهارة الشمية للإنسان، والعقدة غرونبيرغ، والفك العلوي، والقواطع الأمامية. وبالانتقال إلى المنظور البطني، نعرض الأضراس، والقواطع الأمامية، والعظم الحنكي، والعظم الحنكي الرخو.

ابدأ بإزالة العظمة المنقورية (vulner bone) من خلال فحص الجانب البطني للأنف. ولإزالة العظمة المنقورية، استخدم ملقطاً لكسر العظمة على طول امتدادها، ثم قم بإزالة قطع العظام عن طريق إزاحتها بعيداً عن الأنسجة الأساسية لتجنب إتلاف العضو الأنفي في RO. ولإنجاز هذه المهمة، استخدم ملاقط لكسر الجزء البطني من القواطع الأمامية.

استخدم حركة تثبيت وقم بكسر القواطع الأمامية باتجاه موقع عظم ulmer. بمجرد كسر القواطع الأمامية، قم بإزالة شظايا العظم المتبقية المرتبطة بالأنسجة باستخدام الملاقط. لتخلخل الفك العلوي، ابدأ من الجانب البطني وقم بكسر الفك العلوي في المنطقة البطنية المجاورة للقوس الوجني.

اقلب الأنف نحو الجانب الظهري واكسر الفك العلوي أمام القوس الوجنية مباشرةً. ولتخفيف تماسك الفك العلوي من أجل إزالة الجانب الأيمن من العظم الأنفي، قم بإزالة ما تبقى من غطاء العظم الجبهي عند الجانب الأيمن من العظم الأنفي. ستستخدم ملقط رون (Rongeurs) لهذه المهمة.

من الضروري توخي الحذر عند استخدام ملاقط Ron لتجنب إتلاف الصفيحة الغربالية الرقيقة، لأن تلف الصفيحة الغربالية قد يؤدي إلى انقسام الأنف إلى نصفين. ارفع العظم المكسور وأزله. بعد ذلك، ارفع الجزء الظهري من الصفيحة الوجنية بعيداً عن الأنسجة الكامنة تحتها.

افصل العظم الأنفي على طول الخط الناصف. باستخدام ملقط أو ممحاة، أمسك هذه العظمة بالملقط وحركها برفق من جانب إلى آخر مع الرفع للأعلى. يجب تنفيذ هذا الإجراء بدقة وحذر لأنه من السهل إتلاف الأنسجة الكامنة أثناء إزالة العظم. وبمجرد إزالة العظم، يمكنك رؤية الأنسجة الكامنة بشكل منفصل، كما هو موضح في هذه الصورة الثابتة.

لإزالة العظم، قم ببساطة بقصه باستخدام الملقط أو المقص. الآن، انتقل إلى إزالة الفك العلوي الأمامي. إذا لم يتم إزالته بالفعل في هذه المرحلة، فسيكون الفك العلوي الأمامي مفككًا، لذا قم بإزالته عن طريق قطع أي اتصالات متبقية بالأنسجة.

من منظور ظهري، قم بإزالة العظم الجبهي الملاصق للجانب الأيسر من العظم الأنفي. استخدم الملقط لكسر العظم الجبهي. يمكنك استخدام الملقط أو الجفت لإزالة تلك القطعة من العظم الجبهي.

يمكنك أيضاً تحرير الفك العلوي في هذه المرحلة، رغم أن ذلك ليس ضرورياً. ولإزالة الجانب الأيسر من العظم الأنفي، استخدم الملقط وافصل العظم الأنفي برفق عن العديد من العظام المحيطة به. ثم أمسك هذا العظم بالملقط وحركه بشكل عام من جانب إلى آخر مع رفعه للأعلى لفصل العظم الأنفي عن الأنسجة الكامنة تحته.

بينما ينفصل النسيج الأساسي عن العظم، يمكنك أحياناً استخدام منظور جانبي لرؤية النسيج المتصل بالعظم. استخدم الملقط لفصل النسيج المتصل بالعظم برفق، ومن ثم قم بإزالة العظم باستخدام المقص أو الملقط. بعد إزالة عظم الأنف، قم بإزالة الفك العلوي الأمامي في الجانب الأيسر من الأنف باستخدام نفس التقنية المتبعة لإزالة الفك العلوي الأمامي في الجانب الأيمن من الأنف.

الخطوة التالية هي إزالة الصفيحة الوجنية من الجانب الأيسر للأنف. قد يظل هناك بعض الالتصاق للصفيحة الوجنية والأنسجة التي تقع تحتها، وفي هذه الحالة، يمكنك استخدام الملقط المشرشر للاشتباك بلطف وتخفيف الجزء الظهري من الصفيحة الوجنية. انظر إلى الجانب البطني للأنف.

لتحديد الأضراس والعظم الحنكي، يمكن إزالة إما الأضراس أو العظم الحنكي. أولاً، هذا عرض للجانب الوحشي للأنف، ويظهر هذا العرض إزالة الأضراس من الجانب الأيمن للأنف. باستخدام urs مع إزالة الجانب الأيمن من الفك العلوي، يتم إزالة العظم الحنكي.

بعد ذلك، قم بكسر ما تبقى من الفك العلوي والأضراس، وأزل أي شظايا عظمية كبيرة من العظم الحنكي أو الفك العلوي. اكسر وأزل أي قطع متبقية من العظم الغربالي التي تبرز باتجاه الظهارة الأنفية. ضع الملقط الدقيق أسفل العظم وارفع العظم لفصله عن الأنسجة الكامنة تحته.

بدلاً من ذلك، استخدم أداة Rogers كما هو موضح هنا لكسر العظم، ثم استخدم الملقط الدقيق لفصل العظم عن الأنسجة الكامنة تحته. هذا هو مظهر القرنية الأنفية في الظهارة الشمية للإنسان. بعد إزالة العظم المنخري، سيتم إزالة هذا العظم.

بعد ذلك، يقع العظم في الجهتين الإنسية والوسطى بالنسبة للعظم الأنفي، وسيتم إزالة هذا العظم باستخدام الملاقط. يجب توخي الحذر خلال هذه الخطوة لتجنب إتلاف الصفيحة المصفاوية. وبمجرد كسر العظم، استخدم الملقط لإزالته.

يأتي بعد ذلك عرض للأنف. بمجرد إزالة هذه العظمة، تتبقى منطقة أخيرة يجب فحصها وهي المنطقة المحيطة بالعضو الأنفي V. وذلك لوجود عظمة تفصل بين الأنابيب المزدوجة للعضو الأنفي V، والتي أقوم بإزالتها الآن في هذا التشريح.

هذا هو المنظر الظهري لأنف تم تشريحه باستخدام تقنيتنا. بعد ذلك، قمنا بتدوير الأنف لإظهار جوانبه المختلفة. هذا هو المنظر الظهري، يليه المنظر الجانبي للجانب الأيسر من الأنف، ثم المنظر البطني.

نعرض الآن بالتفصيل سمات أنف تم تشريحه بالكامل باستخدام تقنيتنا، بدءاً من الجانب الظهري للأنف. الجزء الأول الذي نعرضه هو القرينات الخاصة بالظهارة التنفسية الرئيسية. توجد فقاعات هوائية في الأنسجة الواقعة تحت العظام الأنفية، ويتم إزالة هذه الفقاعات الهوائية عن طريق سحب العينة بالتفريغ من وجهة النظر الجانبية.

نعرض هنا القرينة الأنفية السليمة لظهارة الشم لدى الإنسان. يُلاحظ وجود فقاعات هوائية داخل القرينات الأنفية. تقع الأنسجة الغدية أمام القرينة الأنفية، وتظهر الظهارة التنفسية من وجهة النظر الجانبية هذه.

من المنظر البطني، يظهر العضو الأنفي الحساس. توضح هذه الصورة توسعاً في تقنية التشريح الخاصة بنا، حيث يتم إزالة البصلات الشمية في الدماغ والأنف في عينة واحدة. ولتجهيز النسيج للتقطيع، خذ أولاً قالباً بلاستيكياً واملأه بوسط درجة حرارة القطع المثالية (optimum cutting temperature media).

ضع النسيج المراد دراسته في القالب المملوء، ثم ضع القالب داخل دائرة من الشحم السيليكوني على طبق بلاستيكي؛ حيث سيتم وضع دورق فوق دائرة الشحم السيليكوني لإنشاء سداد محكم لعملية التفريغ. يستخدم مختبرنا نظام تفريغ يتم إنشاؤه عن طريق تدفق المياه. وبمجرد إنشاء التفريغ من خلال التدفق، يتم سحب فقاعات الماء خارج النسيج.

يتم إيقاف تفريغ الهواء عن طريق إغلاق مصدر المياه وتحرير الأنابيب. بعد ذلك، استخرج القالب البلاستيكي. أقوم هنا بنقل النسيج إلى الوضعية المطلوبة قبل تجميده.

يستخدم مختبرنا الثلج الجاف لتجميد الأنسجة. وهذه النتائج تمثل عملية تقطيع للأنف باستخدام تقنية التشريح الخاصة بنا والصبغ باللون الأحمر المتعادل. هذا مقطع أفقي يوضح القرينات في الظهارة المؤثرة لدى الإنسان، والأنسجة الغدية، والظهارة التنفسية.

المقطع الثاني هو مقطع إكليلي يظهر نمط الطيات الملتوية للقرنيات في الظهارة الشمية الرئيسية. في هذا الفيديو، نعرض تقنية لإزالة العظام من الأنف يدويًا والحصول على عينة مثالية للدراسات المورفولوجية أو الكيميائية النسيجية المناعية أو الفسيولوجية.