عزل الخلايا الجذعية من دليل الدهنية المشتقة من Lipoaspirates الإنسان

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون عن الدهون التي تم الحصول عليها في شكل شفط شفط الدهون. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة المحلول الجراحي أولا وغسل شفط خلايا الدم الحمراء الملوثة. الخطوة الثانية هي إطلاق الخلايا الجذعية عن طريق الهضم الأنزيمي لشفط الدهون المغسول بالكولاجيناز.

بعد ذلك ، يتم جمع الخلايا التي تم إطلاقها على شكل جزء وعائي لحمي أو SVF عن طريق الطرد المركزي. الخطوة الأخيرة هي إزالة المادة الطافية واللوحة ، خلايا SVF لاختيار واستزراع ASCs الملتصقة. في نهاية المطاف ، الحث في المختبر على ASCs المستنبتة نحو العظام والدهون والغضاريف.

يمكن استخدام الأنساب لتأكيد وجود هذه الخلايا داخل المزرعة بالإضافة إلى تأكيد إمكاناتها المتعددة. بشكل عام ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه الطريقة بسبب الخدمات اللوجستية للعمل مع كميات كبيرة من أسبرين ليبو قبل حصاد الخلايا. تحضير الكولاجيناز المعقم من النوع الأول محلول ووسط تحكم معقم.

اجمع شفط الشفاه في حاوية الشفط. صب شفط الشفاه بعناية في مكبر صوت زجاجي معقم سعة لتر واحد. عندما تنفصل طبقات شفط الشفاه عن طريق الجاذبية ، استنشق طبقة الزيت العلوية إن وجدت.

أيضا ، قم بإزالة الجزء السفلي. تقييم حجم طبقة الأنسجة الدهنية الناتجة. أضف حجما متساويا من XPBS المعقم وحركها باستخدام الماصة المستخدمة في الشفط.

عندما تستقر الطبقتان ، قم بشفط الإنات باستخدام ماصة مصلية سعة 10 ملليلتر. استمر في غسل جزء الأنسجة الدهنية باستخدام PBS حتى يصبح لون الطبقة الدهنية ذهبيا أصفر. شفط الإينات مرة أخيرة ، تاركا جزء الأنسجة الدهنية.

في مكبر الصوت الزجاجي. اسمح لطبقات شفط الشفاه بالاستقرار لمدة خمس دقائق بعد الغسيل الأخير وقبل الشفط النهائي. في وحدة التصفية ، قم بإعداد الكولاجيناز المعقم محلول.

أضف حجما مساويا لحجم الكسر الدهني والفلتر المعقم. ثم صب الجزء الدهني المغسول بعناية في محلول الكولاجيناز وأغلق الزجاجة بإحكام. ثم احتضان خليط الكولاجيناز الدهني في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع تحريك لطيف كل خمس إلى 10 دقائق ، وقم بتقييم طبقة الأنسجة الدهنية للحصول على مظهر أكثر نعومة مع استمرار الهضم وإذا لزم الأمر ، قم بزيادة وقت رد الفعل لإذابة أي قطع صلبة من الدهون.

عقم وحدة الفلتر التي تحتوي على خليط دهني الكولاجيناز المهضوم مع 70٪ إيثانول وضعه مرة أخرى في خزانة السلامة الحيوية. الآن ماصة 25 ملليلتر من الأجزاء التي تحتوي على جزء الأوعية الدموية اللحمية في أنابيب طرد مركزي معقمة سعة 50 ملليلترا. أضف 25 مل من وسائط التحكم إلى كل أنبوب واحتضان درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق لتعطيل الكولاجيناز.

ثم جهاز الطرد المركزي لمدة 10 دقائق عند 1 ، 200 مرة G لجمع جزء الأوعية الدموية اللحمية كحبيبات في خزانة السلامة الحيوية. استنشاق المادة الطافية من كل أنبوب. تأكد من شفط طبقة الزيت العليا وأي خلايا شحمية عائمة بهذا المادة الطافية.

بعد ذلك ، اجمع كريات SVF في أنبوب طرد مركزي واحد باستخدام 30 مل من الوسائط المكيفة وقسمها بالتساوي على أنبوبين جديدين للطرد المركزي سعة 50 مليلتر بعد الطرد المركزي لشفط المواد الطافية من الكريات. إذا كان تحلل كرات الدم الحمراء مطلوبا ، فيمكن إعادة تعليق هاتين الكريتين في 10 ملليلتر من محلول تحلل كرات الدم الحمراء ، واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. بعد الطرد المركزي ، قم بشفط المواد الطافية لإنتاج كريات من جزء الأوعية الدموية اللحمي.

اجمع بين هاتين الكريتين في أنبوب طرد مركزي جديد واحد. باستخدام خمسة إلى 10 ملليلتر من وسائط التحكم ، يمكن تصفية جزيئات الأنسجة الكبيرة باستخدام مرشح شبكي 100 ميكرون يوضع فوق أنبوب طرد مركزي جديد سعة 50 مل. الآن ، قم بنقل الجزء المصفى الذي يحتوي على الخلايا الجذعية الدهنية على أطباق زراعة الأنسجة.

ثم استكمل كل طبق بحجم مناسب من التحكم. الثقافة الإعلامية. تقوم الخلايا لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام دون تغيير الوسائط بسحب المزرعة والوسائط وغسل الخلايا مرة واحدة باستخدام PBS معقم لإزالة أي خلايا دم حمراء ملوثة ، ثم تجديد الوسائط والاستمرار في الثقافة عند استخدام هذا الأنزيمي اليدوي لعزل جزء الأوعية الدموية اللحمية من عينة شفط كبيرة الحجم من الشفاه.

مجموعة SC المزروعة الناتجة متجانسة نسبيا في المظهر وتتكون من الخلايا الليفية مثل الخلايا كأكثر وسائل التحقق شيوعا. يؤدي التحريض في المختبر لسكان A SC باستخدام ظروف مزرعة محددة ، إلى تمايزها إلى سلالات الأديم المتوسط والأديم الظاهر والأديم الباطن. بينما في المختبر ، أدت إمكانات الطبقة الجرثومية الثلاثية إلى استخدام ASCs لمجموعة متنوعة من أنظمة النماذج المتجددة.

التمايز إلى خلايا شحمية المنشأ وخلايا عظمية وخلايا منشأة بشكل عام كافيا لتحديد A SC وتأكيد فعاليتها المتعددة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضا تمييز ASCs إلى خلايا سلالات عضلية هيكلية وناعمة من سلالة الأديم الظاهر أو سلالة الخلايا الكبدية بالأديم الباطن. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل جزء الأوعية الدموية اللحمي من Lipos.

لغرض تورينج ، إنه مكون SC.