Name: الظنبوب عانى من قطع العصب - نموذج موحد لإزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات الهيكلية في الفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-03T19:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: تعلم نموذج قطع العصب الظنبوبي لدراسة ضمور العضلات الهيكلية في الفئران. يوفر هذا النموذج طريقة موثوقة ذات مضاعفات قليلة لمراقبة التغيرات في كتلة العضلات بعد إزالة التعصيب.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من عصبي عضلي شراكة الأبحاث CIHR (JNM - 90959؛ إلى JAEB).

قبل استخدام هذا النموذج، يجب أن المحققين قد حصل على موافقة لبروتوكول الجراحية من استخدام الحيوانات مؤسستهم التي تحكم الجسم. تمت الموافقة على نموذج من الأخلاق مجلس البحوث، ومؤسسة علوم الصحة هاملتون، جامعة ماكماستر (سياسة الاستخدام المقبول # 10-04-24) ويتم تنفيذها وفقا صارمة مع توصيات المجلس الكندي للرعاية الحيوان. 1. إعداد الماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن الماوس. لحث التخدير مع 5٪ isoflurane وأو 2٪ هالوثان. يجب على الدوائر الكهربية المستعملة ضمان نظافتها كافية من مخدر لحماية الجراح. بعد 2-3 دقائق تنفس الحيوان سيتباطأ. ضمان منعكس طرفة غائب وقرصة المسافات بين الأصابع في مخلب لتأكيد التخدير الجراحي (أي لم يكن هناك استجابة من الفأر). تطبيق مواد التشحيم العيون للعين، لمنع جفاف القرنية أثناء الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفخذ الجانبية والارداف من الوركيالى الشق الركبة وتطهير مع proviodine. سوف الحلاقة حفاظ على موقع من الشعر شق مجانية لضمان التصور الكافي للالجراحي الميداني وتقليل التدخل في تشريح الأعصاب وعانى من قطع. الشق الوركي، الذي هو أعلى والخلفي لعظم الفخذ، يمكن تحديدها عن طريق الجس. </li></ol> 2. إجراء المنطوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليل isoflurane والاستنشاق إلى 2٪ (هالوثان 1٪) ثم ضع الماوس على جانبها (الجانب المعدة للجراحة التي تواجه متابعة)، تحت مجهر التشغيل أو تشريح. وبدلا من ذلك يمكن إجراء الجراحة مع Loupes لالجراحية منذ التكبير 3.5X مرضية لشخص بالغ (20-25 ز) الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتداء قفازات معقمة. تحديد الشق الوركي من قبل الجس. باستخدام مشرط، شق الجلد من الفخذ الجانبي من الشق الوركي إلى الركبة (حوالي 1 سم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنتشر بلطف على الجلد. التعرف على العضلة ذات الرأسين الفخذية، والذي هو عضلة مسطحة سطحية من الفخذ الجانبيةفورا تحت الجلد. باستخدام مقص غرامة، وتقسيم العضلة ذات الرأسين الفخذية على طول الألياف العضلية وعقد مفتوح مع ضام الربيع لفضح العصب الوركي وفروعه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعرف على العصب الوركي العميق على الفور إلى الفخذية ذات الرأسين. ويمكن التعرف عليه من قبل مميزة لونه أبيض لامع، وحوالي 0.8 ملم في القطر. يتم تشغيله من الشق الوركي إلى الركبة، المتفرعة في الأعصاب الظنبوب، الشظوي والربلي على مستوى المبأبضية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل بلطف الظنبوب من فروع العصب الشظوي والربلي مع ملقط متناهية الصغر والربيع مقص microdissecting. العصب الظنبوب هو أكبر فرع وعادة ما تكون مركزية. فمن المهم عدم سحق العصب بينما تفصل بين الفروع. عقد العصب فقط على طبقة adventicial الخارجي مع ملقط متناهية الصغر، والحفاظ على الركود العصب (لا يدرس)، وسوف تجنب سحق العصبية وإصابة الجر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكاملة ودائمة denervatiعلى، قطع العصب قصبي مع microdissecting مقص وبشكل أقصى قدر ممكن، وتجنب بعناية السفن المأبضية. بدلا من ذلك، لإزالة التعصيب مؤقتة مع عودة التعصيب كاملة المتوقعة في 2-4 أسابيع، يمكن ببساطة أن سحق العصب قصبي مع ملقط متناهية الصغر لمدة 15 ثانية بدلا من مقطوع. (الأعصاب الطرفية تنمو بعد الاصابة وسوف reinnervate العضلات المستهدفة.) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب إزالة التعصيب كاملة، خياطة نهاية العصب قصبي مقطوع إلى السطح الأمامي للعضلة ذات الرأسين الفخذية مع 10-0 نايلون وإعادة الاقتراب من الفخذية ذات الرأسين مع 5-0 VICRYL لمنع الشاذة إعادة تعصيب من الساق و عضلات النعلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الجلد مع تشغيل 5-0 خياطة VICRYL. </li></ol> 3. أضف الرعاية الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف مخدر الاستنشاق ولكن الحفاظ على تدفق الأكسجين. إدارة buprinorphine (أو بديل) مسكن تحت الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الماوس إلى قفص نظيفة مع عدم وجودالفراش في حين الاستيقاظ من التخدير. الحفاظ على بطانية الاحترار داخل القفص وتحت الملاحظة المباشرة حتى التجول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل ومنزل في قفص أسفل لينة (لا أسلاك) مع الفراش لينة وافرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد أطرافهم المنطوق اليومي لحالة من الجروح والقدم لتطوير القرحة كعب استلقاء أو أدلة على مضغ. يمكن أن تدار مشاكل بسيطة مع المضادات الحيوية الموضعية أو المطهرات مثل proviodine. مؤشرات نقطة النهاية التي تتطلب القتل الرحيم الحيوانية هي فقدان الوزن، ودليل على سوء الرعاية الذاتية (الفراء تكدرت)، والتقوس في الجلوس. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي التضحية الحيوانات مع انفتاح الجرح أو القرح الرئيسية التي لا تلتئم في 1-2 أسابيع مع المضادات الحيوية الموضعية أو تظهر لديهم الألم. </li></ol> 4. الساق مزالة العصب والعضلات النعلية الحصاد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نقطة زمنية ما بعد الجراحة المطلوب، تزن الماوس والتضحية مع CO 2 جرعة زائدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحلق الجانب الإنسي من كل منالمنطوق والساقين التحكم المقابل ونظيفة مع الكحول. ضع الماوس تحت مجهر التشغيل أو تشريح، أو استخدم بدلا من Loupes لعرض الجراحية لالتكبير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على الطرف المنطوق، شق الجلد العجل وسطي مع مشرط من الكاحل إلى الركبة ومحيطي حول الكاحل. سحب بلطف الجلد مع ملقط قبالة العضلات وقريب نحو الفخذ. هذا يفضح كل عضلات الساق. تحديد عضلة الساق، والذي هو عضلة الساق الذي يمتد من الركبة إلى الكاحل على الجانب الخلفي من الساق وتقع مباشرة تحت الجلد. تحديد الإدراج البعيدة للعضلة ذات الرأسين الفخذية، الأقرب إلى عضلة الساق على الجانب الإنسي من الركبة. في الإدراج لها القاصي يظهر الفخذية ذات الرأسين رقيقة وغشائي ويعتلي الجزء الأكثر القريبة من الساق. باستخدام مقص حادة وتشريح نهاية، فصل بلطف الإدراج القاصي من الفخذية ذات الرأسين من الغازالعضلات trocnemius. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الإدراج لها القاصي في العقبي، وعضلة الساق التناقص التدريجي في وتر أخيل. التعرف على وتر أخيل، والتي تظهر أبيض وتري. عقد في وتر أخيل مع ملقط، مع الحرص على عدم عقد أو سحق عضلة الساق، وتقسيم وتر أخيل من الإدراج عقبي باستخدام مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ما زالت تحتجز في وتر، ورفع بلطف عضلة الساق (أحمر باهت) قبالة النعلية عميق (أعمق الحمراء)، من الإدراج القاصي نحو أصله عند الركبة (والنعلية يمكن أن تحصد بشكل منفصل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح الساق قبالة المحطة بقسمة أصل الساق من chondyles عظم الفخذ الإنسي والجانبية باستخدام مقص. الجر لطيف جدا على العضلات يسهل هذه العملية. يجب الحرص على عدم سحق العضلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف النعلية يكون الآن مرئية بوضوح، على الفور تحت موقع من الساق. رفع النعلية من الإدراج على وتر أخيل ل، أوigin على العجل الخلفي. إذا تم رفع النعلية عن غير قصد مع الساق، فصل برفق من العينة المقطوع. على الساق (الضوء الأحمر) والنعلية (الأحمر الداكن) يظل يسهل التعرف عليها في العينة التي تحصد بسبب وجود خلافات ونها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وزن العضلات بشكل منفصل على نطاق والدقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم عضلات عموديا، ونصف لتجميد المفاجئة في النيتروجين السائل (لبروتين اللاحقة و / أو استخراج الحمض النووي الريبي)، والنصف الآخر للعلم الأنسجة (أي تقييم المظهرية، immunohistology) تحديد إما في 10٪ من الفورمالين، أو تثبيت المجمدة في نظير البنتان تبرد مع النيتروجين السائل ، كما تريد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر من الخطوة 4.3 أعلاه على السيطرة، التي تديرها الأمم المتحدة، جنبا إلى حصاد الساق وعضلات التحكم النعلية. </li></ol>

<ol><li>Fu, S. Y., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contributing+factors+to+poor+functional+recovery+after+delayed+nerve+repair%3A+prolonged+denervation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation.</a> J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).</li>
<li>Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+duration+of+muscle+denervation+on+functional+recovery+in+the+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">The effect of duration of muscle denervation on functional recovery in the rat model.</a> Muscle Nerve. 20, 858-866 (1997).</li>
<li>Bain, J. R., Veltri, K. L., Chamberlain, D., Fahnestock, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+functional+recovery+of+denervated+skeletal+muscle+after+temporary+sensory+nerve+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Improved functional recovery of denervated skeletal muscle after temporary sensory nerve innervation.</a> Neuroscience. , 103-503 (2001).</li>
<li>Batt, J., Bain, J., Goncalves, J., Michalski, B., Plant, P., Fahnestock, M., Woodgett, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+gene+expression+profiling+of+short+and+long+term+denervated+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Differential gene expression profiling of short and long term denervated muscle.</a> FASEB J. 20, 115-117 (2006).</li>
<li>Sher, J., Cardasis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+fiber+types+in+the+adult+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle fiber types in the adult mouse.</a> Acta Neurol. Scand. 54, 45-56 (1976).</li>
<li>Agbulut, O., Noirez, P., Beaumont, F., Butler-Browne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+heavy+chain+isoforms+in+postnatal+muscle+development+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Myosin heavy chain isoforms in postnatal muscle development of mice.</a> Biol. Cell. 95, 399-406 (2003).</li>
<li>Nagpal, P., Plant, P. J., Correa, J., Bain, A., Takeda, M., Kawabe, H., Rotin, D., Bain, J. R., Batt, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+ligase+nedd4-1+participates+in+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin ligase nedd4-1 participates in denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice.</a> PLoS ONE. 7, e46427(2012).</li>
<li>Plant, P. J., Bain, J. R., Correa, J. E., Woo, M., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+caspase-3+protects+against+denervation-induced+skeletal+muscle+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Absence of caspase-3 protects against denervation-induced skeletal muscle atrophy.</a> J. Appl. Physiol. 107, 224-234 (2009).</li>
<li>Varejao, A. S., Meek, M. F., Ferreira, A. J., Patricio, J. A., Cabrita, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+evaluation+of+peripheral+nerve+regeneration+in+the+rat%3A+walking+track+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional evaluation of peripheral nerve regeneration in the rat: walking track analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 108, 1-9 (2001).</li>
<li>Willand, M. P., Holmes, M., Bain, J., Fahnestock, M., de Bruin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+muscle+stimulation+after+immediate+nerve+repair+reduces+muscle+atrophy+without+affecting+reinnervation%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Electrical muscle stimulation after immediate nerve repair reduces muscle atrophy without affecting reinnervation.</a> Muscle Nerve. 48, 219-225 (2013).</li>
<li>Sterne, G. D., Coulton, G. R., Brown, R. A., Green, C. J., Terenghi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophin-3-enhanced+nerve+regeneration+selectively+improves+recovery+of+muscle+fibers+expressing+myosin+heavy+chains+2b%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neurotrophin-3-enhanced nerve regeneration selectively improves recovery of muscle fibers expressing myosin heavy chains 2b.</a> J. Cell Biol. 139, 709-715 (1997).</li>
<li>Plant, P. J., North, M. L., Ward, A., Ward, M., Khanna, N., Correa, J., Scott, J. A., Batt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypertrophic+airway+smooth+muscle+mass+correlates+with+increased+airway+responsiveness+in+a+murine+model+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Hypertrophic airway smooth muscle mass correlates with increased airway responsiveness in a murine model of asthma.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 46, 532-540 (2012).</li>
<li>Bain, J. R., Mackinnon, S. E., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+evaluation+of+complete+sciatic%2C+peroneal%2C+and+posterior+tibial+nerve+lesions+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Plast.+Reconstr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Functional evaluation of complete sciatic, peroneal, and posterior tibial nerve lesions in the rat.</a> Plast. Reconstr. Surg. 83, 129-138 (1989).</li>
<li>Hare, G. M., Evans, P. J., Mackinnon, S. E., Best, T. J., Midha, R., Szalai, J. P., Hunter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Walking+track+analysis%3A+utilization+of+individual+footprint+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Plast.+Surg%22%5BJournal%5D)">Walking track analysis: utilization of individual footprint parameters.</a> Ann. Plast. Surg. 30, 147-153 (1993).</li>
<li>McLean, J., Batt, J., Doering, L. C., Rotin, D., Bain, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+rate+of+nerve+regeneration+and+directional+errors+after+sciatic+nerve+injury+in+receptor+protein+tyrosine+phosphatase+sigma+knock-out+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced rate of nerve regeneration and directional errors after sciatic nerve injury in receptor protein tyrosine phosphatase sigma knock-out mice.</a> J. Neurosci. 22, 5481-5491 (2002).</li>
<li>Richner, M., Bjerrum, O. J., Nykjaer, A., Vaegter, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spared+nerve+injury+%28SNI%29+model+of+induced+mechanical+allodynia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The spared nerve injury (SNI) model of induced mechanical allodynia in mice.</a> J. Vis. Exp. (54), e3092(2011).</li>
<li>Rogoz, K., Lagerstrom, M. C., Dufour, S., Kullander, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VGLUT2-dependent+glutamatergic+transmission+in+primary+afferents+is+required+for+intact+nociception+in+both+acute+and+persistent+pain+modalities%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">VGLUT2-dependent glutamatergic transmission in primary afferents is required for intact nociception in both acute and persistent pain modalities.</a> Pain. 153, 1525-1536 (2012).</li>
<li>Thornell, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sarcopenic+obesity%3A+satellite+cells+in+the+aging+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Clin.+Nutr.+Metab.+Care%22%5BJournal%5D)">Sarcopenic obesity: satellite cells in the aging muscle.</a> Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. 14, 22-27 (2011).</li>
</ol>

يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

العصب قصبي نموذج عانى من قطع من إزالة التعصيب التي يسببها الهيكل العظمي ضمور العضلات هو نموذج استخداما والتحقق من صحتها جيدا في الفئران. تكيفنا هذا النموذج للاستخدام في الفئران، والذي يسمح للمحقق للاستفادة من وجود الفئران المعدلة وراثيا ودراسة عملية ضمور العضلات في الجسم الحي في غياب البروتينات حاسما في تنظيم كتلة العضلات 7،8. يمكن للعضلات الساق والنعلية، سواء مزالة العصب في هذا النموذج، يكون بسهولة وبسرعة مع الحد الأدنى من التعامل مع تشريح، وبالتالي توفير ممتا...

الهيكل العظمي إزالة التعصيب العضلات، ويرجع ذلك إلى إصابات الأعصاب الطرفية أو المرض أو التدخل الدوائي، والنتائج في خسارة فورية من العضلات وظيفة مقلص الطوعية. العضلات يبدأ بصورة متزامنة إلى ضمور وهذا هو عكسها إذا ضمور في الوقت المناسب، عودة التعصيب ذات النوعية الجيدة يحدث 1،2. في غياب عودة التعصيب، ليف عضلي ضمور تقدم، والتغيرات البيولوجية لا رجعة فيه في العضلات يحدث مع تليف العضلات وفاة ليف عضلي. نحن هنا لشرح نموذج الظنبوب العصب عانى من قطع، وهذا نموذج من إزالة التعصيب التي يسببها الهيكل العظمي ضمور العضلات والتليف، في الفئران. هذا النموذج تمكن العلماء من دراسة الآليات البيولوجية الفسيولوجية الخلوية والجزيئية التي تكمن وراء ضمور العضلات في الجسم الحي في عضلات الساق والنعلية. بينما تاريخيا تستخدم في الغالب في الفئران، وتطبيق أحدث من هذا النموذج لخروج المغلوب وخطوط الماوس المعدلة وراثيا على وجه التحديد، يسمح المحققون إلى تقييم دور بهمبروتين معين (ق) من الفائدة في الاستقراء وتطوير وصيانة، أو بدلا من حل، وضمور العضلات والتليف في الجسم الحي. العصب قصبي هو الأعصاب الطرفية الحركية الحسية مختلطة في hindlimb القوارض، وهي واحدة من فروع محطة الثلاثة للعصب الوركي. عانى من قطع في العصب قصبي denervates في الساق، النعلية والعضلات الأخمصية (وثلاثة صغيرة عضلات المثنية العميقة من القدم بما في ذلك الظنبوبي الخلفي، المثنية الطويلة للأصابع وإبهام اليد المثنية hallicus)، وهو نموذج موحد بشكل جيد والتحقق من صحتها في الفئران 3،4 . عضلات الساق والنعلية يمكن تشريح بسهولة في نقاط زمنية المسلسل إضافة عانى من قطع العصب قصبي، الثابتة وتجهيزها لتقييم الأنسجة في العضلات والألياف العضلية morphometrics، أو فلاش تجميد لاستخراج الحمض النووي الريبي العضلات والبروتين لغرض الدراسة، على سبيل المثال، الشبكات الخلوية مما يشير ضمور العضلات تنظيم. اللوحة الرئيسية GAالعضلات strocnemius هو نوع الألياف المختلطة العضلات (النوع الأول والنوع الثاني، على الرغم من أن معظمها من النوع الثاني)، وتتكون العضلة النعلية من نسبة كبيرة من الألياف أنا نوع، وبالتالي توفير حد سواء بسرعة وبطيئة نشل العضلات لتقييم 5،6. العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو مناسبة لدراسة عملية إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات في كل من المدى القصير (أيام) (7) والمدى الطويل (أسابيع إلى أشهر) 4،8. وعلى النقيض من نموذج عانى من قطع العصب الوركي (نموذج الثاني من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات التي تستخدم عادة في القوارض)، عانى من قطع العصب قصبي يدفع أقل الاعتلال في الحيوان، مما يجعلها نموذجا أكثر جاذبية. عانى من قطع في العصب الوركي denervates جميع عضلات الساق (تحت الركبة) والقدم، وإضعاف قدرة الحيوان للتجول 2، في حين عانى من قطع في العصب قصبي يترك فروع العصب الشظوي والربلي من العصب الوركي سليمة، وبالتالي الحفاظالعضلات المستهدفة والمناطق الحسية. الماوس غير قادر على العطف الأخمصي أو عكس القدم، ولكن قادرة على التجول بسهولة والوزن يتحمل بالتساوي على كل من أطرافه الخلفية، مما يقلل بشكل كبير من معدلات المراضة للنموذج. وقد أجريت دراسات تحليل مشية تقييم أنماط المشي في الفئران بعد اصابات العصب الوركي والظنبوب وإثبات أن البصمة وتحمل الوزن هو الحفاظ بشكل أفضل مع إصابة الظنبوب 9،10. وبالإضافة إلى ذلك، في العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق، يمكن تعبئتها العصب الشظوي في نقطة وقت لاحق ونقل كمصدر للتأخر عودة التعصيب، إذا كان تصميم الدراسة يتطلب 3. في المقابل، تأخر عودة التعصيب في العصب الوركي نموذج عانى من قطع يتطلب استخدام الكسب غير المشروع العصبية إلى العجز العصب الوركي، جدا زيادة كبيرة في صعوبة فنية من طراز والحد من استخدامه إلى الجراحين المهرة. في حين أن العصب قصبي نموذج عانى من قطع Requires إلمام المشغل مع تقنية المنطوق العقيمة في جراحة الحيوان، على حد سواء العصب قصبي وعضلات الساق فإنه يعصب يمكن الوصول إليها بسهولة ومحددة للتلاعب، بحيث الأفراد الذين ليسوا الجراحين، أو من ذوي الخبرة العالية مع جراحة الحيوان، ويمكن السيطرة بسهولة هذا النموذج .

<table><tbody><tr><td colspan = "4" ><قوي>الكواشف والمواد < / قوي</td></tr><tr><td>>10-0 خياطة نايلون</td><td>Ethicon</td><td>2850G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 خياطة فيكريل</td><td>Ethicon</td><td>J553G</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4" ><قوي> معدات< قوي></td></tr> <tr><td>مقص تشريح ناعم</td><td>أدوات جراحية دقيقة</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>ملقط فائق الدقة</td><td>جراحي ناعم أدوات</td><td>11370-40</td><td></td></tr><tr><td>حامل إبرة صغيرة غير قابل للقفل (سائق)</td> <td>أدوات جراحية دقيقة</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>ضام الربيع</td><td>أدوات جراحية دقيقة</td><td>17000-02</td><td></td></tr></tbody></table>

الظنبوب عانى من قطع العصب - نموذج موحد لإزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات الهيكلية في الفئران

Tibial Nerve Transection - A Standardized Model for Denervation-induced Skeletal Muscle Atrophy in Mice

العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو جيد التحمل، التحقق من صحة، وقابلة للتكرار نموذج من إزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات والهيكل العظمي في القوارض. على الرغم من أن وضعت أصلا وتستخدم على نطاق واسع في الفئران ويرجع ذلك إلى حجم أكبر لها، العصب قصبي في الفئران كبيرة بما يكفي أنه يمكن التلاعب بها بسهولة مع أي سحق أو عانى من قطع، وترك فروع العصب الشظوي والربلي من العصب الوركي سليمة وبالتالي الحفاظ على العضلات المستهدفة. وهكذا، وهذا النموذج يوفر مزايا إحداث أقل معدلات المراضة وعائقا من التمشي من العصب الوركي نموذج عانى من قطع وأيضا يسمح للمحققين لدراسة الآليات البيولوجية الفسيولوجية الخلوية والجزيئية التي تنظم عملية ضمور العضلات في الفئران المعدلة وراثيا. العصب قصبي تمد الساق، النعلية والعضلات الأخمصية، لذلك عانى من قطع في تصاريح دراسة العضلات والهيكل العظمي يتألف من مزالة العصب سريع نشل ألياف نوع الثاني و / أو بطيئة نشل نوع Iالألياف. هنا علينا أن نظهر العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق في الماوس C57Black6. نحن تقييم ضمور في عضلة الساق، كما في عضلة ممثل، في 1 و 2 و 4 أسابيع بعد إزالة التعصيب عن طريق قياس أوزان العضلات ونوع الألياف محددة منطقة مستعرضة على البارافين جزءا لا يتجزأ من أقسام نسيجية immunostained للميوسين السريع نشل.

<html> عانى من قطع العصب قصبي denervates في الساق، النعلية والعضلات الأخمصية من العجل. نحن هنا تقييم تطور ضمور في عضلة الساق، كما في عضلة ممثل. وكان حصاد عضلة الساق 2-3 أشهر من العمر C57Black 6 الفئران (جاكسون المختبرات) مزالة العصب لمدة 1 أو 2 أو 4 أسابيع. الأوزان العضلات تقلل تدريجيا (الشكل 1)، وكذلك منطقة مستعرضة من نوع II بسرعة نشل ألياف العضلات (الشكل 2)، مع مرور الوقت. على الساق هو نوع الألياف المختلطة العضلات (النوع الأول والنوع الثاني)، ولك...

العصب نموذج عانى من قطع عظام الساق هو جيد التحمل، التحقق من صحة، وقابلة للتكرار نموذج من ضمور العضلات والهيكل العظمي. يوصف بروتوكول الجراحية نموذج وتظاهر في C57Black6 الفئران.

The tibial nerve transection model is a well-tolerated, validated, and reproducible model of denervation-induced skeletal muscle atrophy in rodents. ...

الهدف العام من هذا الفيديو هو توضيح نموذج قطع العصب الظنبوبي لإحداث ضمور العضلات الهيكلية في الفئران. ويتم تحقيق ذلك من خلال عزل العصب الوركي وفروعه الثلاثة: الأعصاب الظنبوبية، والشظوية العميقة، والشظوية السطحية. وبمجرد عزله، يتم قطع العصب الظنبوبي.بعد عملية إزالة التعصيب، يتم إغلاق الجرح ومراقبة حالة الحيوان عن كثب. وفي النهاية، يتم الحصول على عينات تظهر انخفاضاً تدريجياً في الكتلة العضلية بعد إزالة التعصيب. يُعد نموذج قطع العصب الظنبوبي لإحداث ضمور العضلات الهيكلية الناتج عن إزالة التعصيب نموذجاً شائع الاستخدام ومثبتاً بدقة في الجرذان، وهو يتسبب في معدلات مراضة أقل بكثير من تلك المرتبطة بقطع العصب الوركي.لقد قمنا بتكييف هذا النموذج للاستخدام في الفئران، وهو ما سنوضحه هنا. يتيح ذلك للباحث الاستفادة من وجود الفئران المعدلة وراثياً ودراسة عملية ضمور العضلات في ظل غياب البروتينات الأساسية لتنظيم كتلة العضلات الهيكلية، مع إحداث حد أدنى من الاعتلال لدى الحيوان. أولاً، قم بتسجيل وزن الفأر بعد التأكد من كفاية التخدير عن طريق قرص إصبع القدم، ثم حدد الثلمة الوركية عن طريق الجس وقم بحلاقة الفخذ الجانبي والأرداف من تلك النقطة وصولاً إلى الركبة.بعد ذلك، قم بتنظيف المنطقة بتطبيقات متكررة من الكحول واليود الاحترافي. ضع الفأر على جانبه تحت مجهر جراحي أو مجهر تشريحي مع ارتداء قفازات معقمة. حدد موقع الثلمة الوركية عن طريق الجس.قم بعمل شق في جلد الفخذ الجانبي من الثلمة الوركية وصولاً إلى الركبة. باعد بين طرفي الجلد بلطف. حدد العضلة ذات الرأسين الفخذية، وهي العضلة السطحية المسطحة في الجانب الوحشي من الفخذ والموجودة مباشرة تحت الجلد، وذلك باستخدام مقص دقيق.يتم شق العضلة ذات الرأسين الفخذية على طول الألياف العضلية وإدخال مباعد نابضي. وللكشف عن العصب الوركي وتفرعاته، يتم تحديد العصب الوركي الموجود مباشرة أسفل العضلة ذات الرأسين الفخذية، حيث يمكن تمييزه بلونه الأبيض اللامع المميز وقطره الذي يبلغ حوالي 0.8 millimeters.يمتد العصب من الثلمة الوركية وصولاً إلى الركبة، حيث يتفرع إلى الأعصاب الظنبوبية والشظوية والـ sal عند مستوى الحفرة المأبضية. افصل العصب الظنبوبي برفق عن فرعي العصب الشظوي والـ sal باستخدام ملقط فائق الدقة ومقص تشريح دقيق نابضي. ويعد العصب الظنبوبي أكبر هذه الفروع وعادة ما يكون في المركز.يعد التعامل برفق مع العصب الوركي وفروعه أمراً أساسياً لنجاح هذا الإجراء. يجب الحرص على عدم تلف أو تمدد فروع العصب العجزي والعصب العجاني. ففي حال تلف هذه الفروع أو تمددها، سيؤدي ذلك إلى فقدان التعصيب عن الأعضاء المستهدفة أيضاً.سيؤدي الإمساك بالعصب من الطبقة الخارجية للغمد (adventitial layer) فقط باستخدام الملاقط فائقة الدقة مع إبقاء العصب مرتخياً إلى تجنب سحق العصب وإصابة الشد من أجل إلغاء التعصيب المؤقت. ولتحقيق إلغاء تعصيب كامل ودائم مع توقع استعادة الوظيفة بالكامل في غضون أسبوعين إلى أربعة أسابيع، يتم سحق العصب الظنبوبي (tibial nerve) باستخدام الملاقط فائقة الدقة لمدة 15 ثانية. ثم يُقطع العصب الظنبوبي باستخدام مقص التشريح المجهري في أبعد نقطة ممكنة جهة الطرف (distally)، مع توخي الحذر لتجنب الأوعية المأبضية (popliteal vessels) إذا كان المطلوب هو إلغاء التعصيب الكامل.قم بخياطة نهاية العصب الظنبوبي المقطوع بالسطح الأمامي للعضلة ذات الرأسين الفخذية باستخدام خيط نايلون 10 T، ثم أعد تقريب العضلة ذات الرأسين الفخذية باستخدام خيط Vicryl خمسة T لمنع إعادة التعصيب الشاذة للعضلتين التوأمية والنعلية. وبمجرد اكتمال عملية قطع التعصيب، أغلق الجلد بغرزة Vicryl مستمرة قياس خمسة aught. وعندما تصبح جاهزاً، أوقف التخدير الاستنشاقي مع الحفاظ على تدفق الأكسجين.بعد إعطاء المسكن بشكل فردي، يوضع الفأر في قفص نظيف ودافئ بدون فرش. يُبقى الفأر تحت الملاحظة المباشرة حتى يستعيد قدرته على الحركة. وعند تعافيه تماماً، يُنقل الفأر إلى قفص نظيف ذو قاع صلب مع توفير كمية كافية من الفرش الناعم.افحص الطرف الذي خضع للعملية والقدم يومياً للتأكد من عدم تطور قرح الفراش في الكعب أو ظهور علامات على القضم؛ حيث يمكن علاج المشكلات البسيطة باستخدام المضادات الحيوية الموضعية أو المطهرات، مثل اليود. وتتمثل مؤشرات نقطة النهاية التي تتطلب القتل الرحيم للحيوان في فقدان الوزن، وظهور أدلة على ضعف العناية الذاتية، واتخاذ وضعية الانحناء. بالإضافة إلى ذلك، يجب التضحية بالحيوانات التي تعاني من تمزق الجروح أو القرح التي لا تلتئم خلال أسبوع إلى أسبوعين من العناية بالجروح.بالإضافة إلى ذلك، يتم جمع الأنسجة المطلوبة للتحليل في المرحلة التالية للجراحة، خاصة لأي حيوانات تعاني من ألم مفرط. بعد القتل الرحيم، يتم حلق الجانب الإنسي لكل من الساقين التي خضعت للجراحة وساق التحكم المقابلة وتنظيفهما بالكحول. وباستخدام مجهر تشريحي، يتم إجراء شق في جلد ربلة الساق الإنسية بمشرط من الكاحل إلى الركبة وبشكل دائري حول الكاحل في الطرف الذي أجريت فيه الجراحة. بعد ذلك، يتم سحب الجلد بلطف بعيداً عن العضلة وباتجاه الفخذ.لكشف جميع عضلات الساق، حدد العضلة gastro، وهي عضلة ربلة الساق التي تمتد من الركبة إلى الكاحل في الجانب الخلفي من الساق. بعد ذلك، حدد موقع الاندغام القاصي لعضلة biceps femoris القريب من العضلة gastro في الجانب الإنسي للركبة. تظهر عضلة biceps femoris عند اندغامها القاصي رقيقة وغشائية وتغطي الجزء الأكثر قرباً من العضلة gastro باستخدام المقص والتشريح بالطرف غير الحاد.افصل بلطف نقطة الاندغام القاصية للعضلة ذات الرأسين الفخذية عن العضلة التوأمية. بالإضافة إلى نقطة اندغامها القاصية في عظم العقب، تضيق العضلة التوأمية لتتحول إلى وتر أخيل. حدد وتر أخيل الذي يظهر باللون الأبيض وبمظهر ليفي.أمسك وتر أخيل باستخدام الملقط. مع الحرص على عدم الإمساك بالعضلة gastrocnemius أو سحقها، قم بفصل وتر أخيل عن منطقة اندغامه في عظمة العقب. باستخدام المقص ومع الاستمرار في الإمساك بالوتر، ارفع العضلة gastrocnemius ذات اللون الأحمر الشاحب برفق عن العضلة soleus الأكثر احمراراً من منطقة الاندغام القاصية باتجاه منشئها عند الركبة، مع استخدام شد لطيف جداً.لتسهيل العملية، قم بتشريح العضلة gastro بعيداً عن الساق عن طريق فصل منشأ العضلة gastro عن اللقمتين الإنسية والوحشية لعظمة الفخذ باستخدام المقص. توخَّ الحذر لتجنب سحق العضلة.ستظهر الآن العضلة النعلية (soleus) بوضوح مباشرة تحت العضلة التوأمية (gastros). ارفع العضلة النعلية من نقطة اندغامها في وتر أخيل وصولاً إلى منشئها في الجزء الخلفي من ربلة الساق. وبمجرد إزالتها، يتم وزن العضلات بشكل منفصل باستخدام ميزان دقيق.بعد ذلك، يتم تقسيم العضلات رأسيًا إلى نصفين؛ نصف للتجميد السريع في النيتروجين السائل، والنصف الآخر للدراسات النسيجية. وأخيرًا، تكرر هذه الإجراءات على الجانب الضابط غير المصاب لاستئصال عضلات الساق (gastro) والعضلات النعلية (soleus) الضابطة. تم استئصال عضلات الساق من الأطراف الخلفية منزوعة التعصيب والأطراف المقابلة الضابطة بعد أسبوع أو أسبوعين أو أربعة أسابيع، وعُبّر عن النتائج في شكل نسبة.أدى بتر العصب إلى فقدان تدريجي في الكتلة العضلية بمرور الوقت. تم قياس مساحة المقطع العرضي للألياف العضلية بعد الصبغ المناعي كما هو موضح هنا. تصبغ الألياف من النوع الثاني سريعة الانقباض باللون البني، بينما تصبغ الألياف من النوع الأول بطيئة الانقباض باللون الأبيض.أظهرت ألياف الارتجاف انخفاضاً تدريجياً في مساحة المقطع العرضي في العضلة منزوعة التعصيب. على مدار أربعة أسابيع. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون قادراً على إجراء عملية قطع العصب الظنبوبي في الفئران. يوفر هذا نموذجاً قابلاً للتكرار وقوياً ومثبتاً بشكل جيد لضمور العضلات الهيكلية الناجم عن نزع التعصيب.

tibial-nerve-transection-standardized-model-for-denervation-induced

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

وصفت إصابة العصب يدخر نموذج حيواني هنا كنموذج الماوس من آلام الأعصاب الطرفية التالية إزالة التعصيب جزئي للعصب الوركي بواسطة lesioning للقصبي ومشتركة فروع العصب الشظوي ، وترك ما تبقى العصب الربلي سليمة. وكميا التعديل السلوكي الناتج عن allodynia الميكانيكية بواسطة خيوط فراي فون.

وإصابة العصب تنج (SNI) موديل Allodynia الميكانيكية المستحثة في الفئران

المصدر: Brakkee، E. M.،  et al.  الجراحة والاختبارات السلوكية في نموذج تبديل ورم العصب الظنبوبي في الفئران. J. Vis. Exp.  (2023). يوضح هذا الفيديو إجراء لتوليد نموذج تبديل ورم العصب الظنبوبي للفئران (TNT). بعد تعريض العصب الظنبوبي في الساق الخلفية لفأر مخدر ، قم بعبور العصب. بعد ذلك ، قم بإنشاء نفق تحت الجلد ، وقم بتمرير العصب المقطوع عبر النفق ، وخياطته في مكانه. في حالة عدم وجود هدف لإعادة التعصيب ، تشكل النتوءات المحورية غير المنظمة من العصب المقطوع ورما عصبيا ، مما يؤدي إلى ألم الأعصاب عن...

توليد نموذج الفئران لتبديل ورم العصب الظنبوبي

نقدم بروتوكولا جراحيا يوضح بالتفصيل كيفية إجراء قطع أو سحق الملح على العصب الوجهي في الفأر. يمكن استخدام بضع إبطال العصب الوجهي لدراسة الاستجابة الفسيولوجية لإصابة الأعصاب واختبار التقنيات العلاجية.

الوجه Axotomy العصب في الفئران: نموذج لدراسة الاستجابة العصبون الحركي للإصابة

تقييم الانتعاش الحركي لا يزال قياس النتيجة المرجعية في الدراسات العصبية الطرفية التجريبية. قياس القوة التايتاني متساوي القياس من العضلة الأمامية الساق في الفئران هو أداة لا تقدر بثمن لتقييم النتائج الوظيفية بعد إعادة بناء عيوب العصب الوركي. وترد تفاصيل الأساليب والفروق الدقيقة في هذه المقالة.

الحد الأقصى لقياس القوة التاثنية متساوي القياس من العضلة الأمامية تيبيليس في الجرذ

تحديد كمي للقوة القصوى لتكثيف الركبة أمر حتمي لفهم التكيفات الوظيفية للشيخوخة والمرض والإصابة وإعادة التأهيل. نقدم طريقة جديدة لقياس مرارا وتكرارا في الجسم الحي تمديد الركبة متساوي القياس ذروة عزم الدوران التاثني.

في قياس الجسم الحي لوظيفة العضلات إكستنور الركبة في الفئران

الجراحة المعدلة هي طريقة مبسطة لنموذج إصابة الأعصاب التي تم تجنيبها الفئران أو الفئران والتي تتطلب ربطا واحدا فقط وقطعا واحدا لإصابة كل من الأعصاب الشظوية والجدارية الشائعة.

نموذج جراحة إصابة الأعصاب المعدلة لألم الأعصاب في الفئران

يصف هذا البروتوكول نموذج تبديل ورم العصب الظنبوبي ، والذي يستلزم آفة في العصب الظنبوبي مع تبديل لاحق لنهاية العصب القريب نحو وضع ما قبل الظنبوب أو الجانب تحت الجلد. يتم قياس الاختبار السلوكي لألم الورم العصبي وفرط التألم الأخمصي باستخدام خيوط فون فراي الأحادية.

الجراحة والاختبارات السلوكية في نموذج تبديل الورم العصبي الظنبوبي في الفئران

يوضح هذا البروتوكول كيفية إجراء بتر تحت الركبة في الفئران وإجراء إعادة تعصيب عضلي مستهدف (iTMR) فورا لدراسة استراتيجيات علاج ومنع الألم المرتبط بالبتر ولفهم آليات الألم المرتبطة بالبتر بشكل أفضل.

نموذج بتر الطرف الخلفي تحت الركبة للجرذ وإعادة تعصيب عضلية مستهدفة فورية

يقدم هذا البروتوكول نموذجا للفئران قابلا للتكرار باستخدام الأعصاب الحسية لتقليد ألم ورم العصب البشري وتقييم العلاجات الجراحية ، مما يوفر أداة قيمة لأبحاث ورم العصب الانتقالي.

نموذج جراحي جديد للقوارض لدراسة خيارات علاج آلام الورم العصبي باستخدام إعادة تعصيب العضلات المستهدفة من خلال العصب الصافن

ميو الميكانيكية وتحليل الهيكل العظمي والعضلات المعزولة

تعلم نموذج قطع العصب الظنبوبي لدراسة ضمور العضلات الهيكلية في الفئران. يوفر هذا النموذج طريقة موثوقة ذات مضاعفات قليلة لمراقبة التغيرات في كتلة العضلات بعد إزالة التعصيب.

الظنبوب عانى من قطع العصب - نموذج موحد لإزالة التعصيب الناجم عن ضمور العضلات الهيكلية في الفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات