الحث الدوائية من الميلانين البشرة والحماية من حروق الشمس في نموذج انساني ماوس

الهدف العام من التجربة التالية هو قياس حساسية الأشعة فوق البنفسجية من خلال تحديد الحد الأدنى من جرعة الحمامي في الفئران ذات البشرة الفاتحة المعالجة مسبقا بأربعة جلد. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير الجلد الظهري للفئران أولا ليتم تشعيعه عن طريق القص والاستئصال. يتم تطبيق العلاجات الموضعية التالية من فورسكولين على الجلد الظهري.

ثم تتعرض الفئران لجرعات مختلفة من الأشعة فوق البنفسجية لتحديد آثار أربعة وسطاء من البطيخ على الالتهاب الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية. تم الحصول على النتائج التي تظهر أن تطبيق فورلين موضعيا يزيد بقوة من تصبغ الجلد وأن ذات التحسين الدوائي مقاومة للأشعة فوق البنفسجية على النحو الذي تحدده MED. هذه دليل على دراسات المفاهيم التي تظهر أنه من الممكن إحداث تان دوائيا في فرد غير قادر على الدباغة بسبب عيب في جين الخلايا الصباغية المهم جدا يسمى مستقبلات الميلانوكورتين أو MC واحد R في البشر هناك فقدان وظيفة mc one R يرتبط بحساسية الأشعة فوق البنفسجية ، ميول حروق الشمس ، وعدم القدرة على التسمير وفي وقت لاحق من الحياة يصل إلى أربعة أضعاف خطر الإصابة بالورم الميلانيني.

اخترنا أربعة سكالين كدواء لهذه الدراسات لأنه قادر على تجاوز مسار إشارات مستقبلات الميلانوكورتين المعيب وخداع الخلايا الصباغية للاعتقاد بأن لديهم مسار إشارات جيد mc one R ، وبالتالي يصنعون الكثير من الميلانين ، الذي يترسب في الجلد ويحمي من الأشعة فوق البنفسجية. على الرغم من أننا نعلم أن هذه الطريقة توفر نظرة ثاقبة للبشرة يمكن أن تكون كئيبة. قد يكون مهما أيضا للوقاية من السرطان.

نظرا لأننا نعلم أن الأشعة فوق البنفسجية هي المادة المسرطنة الرئيسية للغالبية العظمى من سرطانات الجلد ، وتعزيز تنفيذ الجلد يحمي من إصابة الأشعة فوق البنفسجية ، يقوم واحد أربعة بإجراء الحقن داخل الصفاق. تأكد من الشفط بعد وضع الإبرة وقبل حقن المحتويات للتأكد من أن الإبرة لم تخترق الأوعية الدموية والأمعاء أو المثانة البولية يجب إعطاء حقن IP على الجانب الأيمن لتجنب الموسم. بعد تحضير مستخلص الفورلين وتخدير الفأر لفترة وجيزة بواسطة الفلور.

الاستنشاق ، وفقا لبروتوكول النص ، قم بإعطاء تخدير إضافي للحيوان عن طريق حقن IP من الكيتامين والزيلازين. قم بإجراء قرصة إصبع القدم للتحقق من التخدير. استخدم مقصات كهربائية مزودة برأس تحضيري جراحي 0.25 ملم لقص الفراء الظهري.

استخدم كريم مزيل الشعر لإزالة القش. ثم لتجنب حرق الجلد أو إتلافه بأي شكل آخر ، استخدم على الفور ضمادات شاش مبللة بالماء لمسح الجلد الظهري برفق حتى تتم إزالة الكريم بالكامل. استخدم مناشف ورقية ناعمة لتجفيف قبل وضعه في قفص نظيف على وسادة تدفئة للتعافي.

بشكل عام, يجب تخدير الفئران لفترة وجيزة لتسهيل الإدارة الموضعية للفورسكولين أو حلول التحكم باستخدام استنشاق isof الفلور تحت غطاء الدخان. ابدأ بمنشفة ورقية مشبعة بالفلور في وعاء زجاجي شفاف مشبع بالفلور. بعد إرفاق شكل نايلون مرشح نفاذية للهواء قام بتخدير الماوس عن طريق وضعه فوق الفلتر لفترة كافية لقمع الحركات العضلية الإرادية مع المخدر على وسادة مقعد ماصة نظيفة.

بعد إجراء قرصة إصبع القدم ، انقل 400 ميكرولتر من مستخلص الفورلين الخام على الجزء الخلفي من عن طريق تقطيره على الجلد. ثم استخدم جانب الطرف لتشويه المستخلص على كامل سطح الجلد الظهري المكشوف. أعد الفأر إلى قفصه وراقبه بعناية حتى يتعافى من التخدير لمنع عدم الصبغة.

تأثيرات الدورة A MP من تجارب حساسية الأشعة فوق البنفسجية المربكة. توقف عن جميع العلاجات الموضعية قبل يومين من التعرض للأشعة فوق البنفسجية لإجراء قياس الألوان العاكس. بعد التخدير لفترة وجيزة الفأر مع isمن استنشاق الفلور.

قم بمعايرة مقياس الألوان عن طريق وضع الرأس المحمول على السطح الأبيض القياسي المرفق مع الجهاز. ضع رأس القياس المحمول متدفقا مع الجلد الظهري للحيوان ، مع التأكد من ضغط الفتحة المستديرة التي يبلغ طولها سنتيمترا مربعا بالكامل على الجلد. خذ ثلاثة قياسات منفصلة على الأقل في مناطق مختلفة من الجلد الظهري.

احسب متوسط درجة L ، زائد أو ناقص الانحراف المعياري لكل ولكل مجموعة علاج. لتحديد الحد الأدنى من الجرعة الحمامية أو MED ، سيتعرض كل لمجموعة متنوعة من جرعات الأشعة فوق البنفسجية. ابدأ بإعداد قطعة من شريط انسداد الأشعة فوق البنفسجية باستخدام ثقب ثقب شديد التحمل مع فتحة دائرية بطول سنتيمتر مربع واحد لإحداث ثقوب في الشريط فوق كل ثقب.

في الشريط. ضع قطعة صغيرة من الشريط اللاصق يمكن إزالتها ولكن يمكن إزالتها. للتعرض للأشعة فوق البنفسجية ، ضع الشريط على السطح الظهري للفأر المخدر.

إذا كانت عيون مفتوحة ، ضع دموعا اصطناعية لمنع الإصابة من الجفاف والتعرض للأشعة فوق البنفسجية. قم بتشغيل مصدر الأشعة فوق البنفسجية الذي يتكون من مصباحين للأشعة فوق البنفسجية بذروة خرج تبلغ 313 نانومتر ومدى يتراوح من 280 إلى 370 نانومتر. اسمح للحمل بالتوازن مع خرج ثابت للأشعة فوق البنفسجية قبل استخدام مقياس ضوئي للأشعة فوق البنفسجية مع مستشعر UVB للتحقق من الإخراج بناء على معدل انتقال الأشعة فوق البنفسجية كما تم قياسه بواسطة مقياس الأشعة فوق البنفسجية ، احسب وقت التعرض للأشعة فوق البنفسجية لكل جرعة مطلوبة.

على سبيل المثال ، يبلغ إخراج الأشعة فوق البنفسجية 2.4 مللي واط لكل سنتيمتر مربع. لذلك ، لإدارة خمسة كيلوجول لكل متر مربع ، يجب أن يتعرض الجلد ل 208 ثانية من الأشعة فوق البنفسجية كما هو محسوب هنا. بعد ذلك ، ضع السطح البطني للحيوان المخدر لأسفل لضمان التعرض المتساوي للأشعة فوق البنفسجية لإدارة الجرعة المختارة من الإشعاع بالتتابع.

قم بإزالة القطع الصغيرة من الشريط الذي يغطي الثقوب في الوقت المناسب. على سبيل المثال ، إذا كانت 40 كيلوجول لكل متر مربع هي الجرعة الأكبر ، فسيكون الماوس تحت المصباح لمدة 27 دقيقة و 47 ثانية ، وسيتم الكشف عن ثقب هذه الجرعة من البداية. ومع ذلك ، بالنسبة لحالة الخمسة كيلوجول لكل متر مربع ، ستتم إزالة الشريط مع 208 ثانية من التعرض.

الوقت المتبقي بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، قم بإزالة الشريط بعناية وضع في مكان دافئ وهادئ للتعافي من التخدير قبل إعادتها إلى أقفاصها. تتوافق الجرعة الحمامية الدنيا أو قيمة MED مع الحد الأدنى من الجرعة من الأشعة فوق البنفسجية التي تسبب الالتهاب كما هو محدد بواسطة الحمامي و / أو وذمة دائرة الجلد المكشوفة بأكملها. راقب الماوس لمدة 24 إلى 48 ساعة للبحث عن مناطق سرية من الحمامي أو الوذمة في المناطق المعرضة للأشعة فوق البنفسجية.

في بعض الأحيان ، تربك اللحية الخفيفة الأولى المتبقية تفسير اختبار MED عن طريق إخفاء حمامي الجلد الأساسية أو الوذمة ، مما يجعل ترطيب الجلد بنسبة 70٪ من الإيثانول الجلد أكثر قابلية للتفسير. قم بتوثيق أي نتائج جلدية فوتوغرافية ثم أعد الفئران إلى منشأة. في هذه التجارب ، تم إنشاء C 56 ستة فئران سوداء على خلفيات أنوديك أو أنوديك تتضمن الجينات المعدلة لعامل الخلايا الجذعية K 14 ، مما يسمح للفئران بالاحتفاظ بالخلايا الصباغية في البشرة ونتيجة لذلك ، ترسيب الميلانين.

في البشرة الموضحة هنا ، عولجت مجموعات من الفئران الطويلة للبشرة الفاتحة لمدة خمسة أيام موضعيا بجرعتين يوميا من أي مركبة أو 40٪ من مستخلص جذر القولون الخام. تم تحديد تأثيرات العلاجات الموضعية على تصبغ البشرة عن طريق الفحص البصري واللون العاكس. الصور. ارتبط تطبيق مستخلص الجذر بتغميق البشرة القوي في الخلفية المعدلة وراثيا K 14 SCF ، ولكن ليس في غير المعدلة وراثيا المتطابقة وراثيا ، مما يشير إلى أن الخلايا الصباغية بين البشرة يجب أن تكون موجودة من أجل ترسيب الميلانين المستحث دوائيا.

في البشرة ، على الرغم من أن مستخلص الجذر ملون بعمق بسبب وجود مواد كيميائية نباتية نباتية إلى جانب أربعة جالين ، إلا أن سواد الجلد لا يمكن أن يكون فقط بسبب تأثير الموت من الدواء. كما تفشل غير المعدلة وراثيا في إثبات سواد الجلد مع استخراج الجذر كما هو موضح هنا عند تطبيقه موضعيا مرتين يوميا, ولوحظت آثار الميلانين فورسكولين في أقل من يومين. على الرغم من أن التغميق الأقصى كان واضحا بعد عدة أيام أخرى ، إلا أنه يظهر في هذا الشكل من خلال تلطيخ الخط والميلانين لأقسام الجلد الظهري.

درجة ميلان تعتمد على الجرعة التي عولجت بأربعة جلد مرة واحدة يوميا لمدة 15 يوما أو مرتين يوميا لمدة خمسة أيام تعاني من كميات مماثلة من سواد الجلد. بالإضافة إلى ذلك ، لم تكن هناك آثار سامة واضحة من أربعة تعرض للجلد في أي من مجموعتي العلاج. وهكذا ، خلصنا إلى أن العلاج المعجل لمدة خمسة أيام عزز أمان الجلد الظهري بنفس فعالية العلاج القياسي مرة واحدة في اليوم.

يوضح هذا الرقم أنه كما تم قياسه بواسطة اختبار MED ، أدى فورلين إلى حماية عميقة من الأشعة فوق البنفسجية ، في حين أن متوسط MED لفئران تمديد K 14 SCF التي عولجت مرتين يوميا لمدة خمسة أيام مع السيارة كان 5.0 زائد أو ناقص 0.0 كيلوجول لكل متر مربع كان متوسط MED للأفواج التي عولجت بأربعة جالين موضعية أكبر من 30.0 زائد أو ناقص 0.0 كيلوجول لكل متر مربع. في الواقع ، كانت جرعة 30.0 كيلوجول لكل متر مربع غير كافية لتوليد الحمامي. في هذه التجربة باستخدام جرعات Glen القياسية ، كان متوسط MED لفئران تمديد K 14 SCF المعالجة 50.0 زائد أو ناقص 7.1 كيلوجول لكل متر مربع.

الأهم من ذلك ، أن المعالجة المسبقة ل fours Kline لم تؤثر على MED للحيوانات غير القادرة على البطيخ إما بسبب نقص الخلايا الصباغية للبشرة بوساطة K 14 SCF ، أو بسبب نقص التيروزيناز. نظرا لأن تطبيقات أربعة كلاين قد توقفت قبل يومين من التعرض للأشعة فوق البنفسجية ولم تستمر بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية ، فقد نستنتج أن تأثيرات CAMP غير الصباغية لم تلعب دورا في نتائج MED. بدلا من ذلك ، تشير البيانات إلى أن البشرة كانت الآلية التي يسببها الفورين في الحماية من الأشعة فوق البنفسجية في هذا النموذج.

بمجرد إتقان هذه التقنية ، تسمح بتقييم سهل وقابل للتكرار لاستجابة تصبغ الجلد والحساسية فوق البنفسجية. في النموذج الحيواني ، يستغرق تطبيق forland دقائق فقط في اليوم ، والجزء الأكبر من الوقت التجريبي هو حقا مع الأشعة فوق البنفسجية واختبار MED. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن الجلد يواجه تدريجيا العودة إلى بشرته الفاتحة الأساسية.

يشبه تحريض الميلانين إلى حد بعيد استجابة الميلانين من حيث أن الجلد سيبقى داكنا طالما تم تحفيزه ، ولكن بعد ذلك يشق هذا السمرة طريقه للخروج من الجلد خلال الأسابيع العديدة القادمة عند إزالة المنبه.