Name: زرع الوجه في القيطم المورق الأجنة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: تعلم تقنية زرع نسيج الوجه في أجنة القيطم المورق لدراسة تطور الوجه والجمجمة. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات التشوهات الوجهية والتفاعلات الإشارية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نشكر راديك Sindelka لمساعدته، وكاس Bresilla لمساعدة مع تربية الضفادع وإعداد الجنين. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة عن طريق R01DE021109 منحة لورا HLS Jacox بتمويل من زمالة الدراسات العليا هيرشيل سميث في جامعة هارفارد، ومنحة الزمالة F30-01 F30DE022989 الفردية من خلال NIDCR.

<ol><li>Gorlin, R. J., Cohen, M., Levin, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGorlin%2C+RJ+%22Syndromes+of+the+head+and+neck%22">Syndromes of the head and neck</a>. , Oxford University Press. UK. (1990).</li>
<li>Trainor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Craniofacial+birth+defects%3A+The+role+of+neural+crest+cells+in+the+etiology+and+pathogenesis+of+Treacher+Collins+syndrome+and+the+potential+for+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med.+Gen.+A%22%5BJournal%5D)">Craniofacial birth defects: The role of neural crest cells in the etiology and pathogenesis of Treacher Collins syndrome and the potential for prevention.</a> Am. J. Med. Gen. A. 152, 2984-2994 (2010).</li>
<li>Dickinson, A. J., Sive, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+primary+mouth+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Development of the primary mouth in Xenopus laevis.</a> Dev. Bio. 295, 700-713 (2006).</li>
<li>Dickinson, A. J., Sive, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positioning+the+extreme+anterior+in+Xenopus%3A+cement+gland%2C+primary+mouth+and+anterior+pituitary%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Positioning the extreme anterior in Xenopus: cement gland, primary mouth and anterior pituitary.</a> Sem. Cell Dev. Bio. 18, 525-533 (2007).</li>
<li>Dickinson, A. J., Sive, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Wnt+antagonists+Frzb-1+and+Crescent+locally+regulate+basement+membrane+dissolution+in+the+developing+primary+mouth%5BTitle%5D)+AND+%22Dev%22%5BJournal%5D)">The Wnt antagonists Frzb-1 and Crescent locally regulate basement membrane dissolution in the developing primary mouth.</a> Dev. 136, 1071-1081 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGilbert%2C+SF+%22Developmental+Biology%22">Developmental Biology</a>. , Sinauer Associates, Inc. Sunderland, MA. (2010).</li>
<li>Borchers, A., Epperlein, H. H., Wedlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+assay+system+to+study+migratory+behavior+of+cranial+neural+crest+cells+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">An assay system to study migratory behavior of cranial neural crest cells in Xenopus.</a> Dev. Genes Evol. 210, 217-222 (2000).</li>
<li>Grunz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homoiogenetic+neural+inducing+activity+of+the+presumptive+neural+plate+of+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Homoiogenetic neural inducing activity of the presumptive neural plate of Xenopus laevis.</a> Dev. Growth Differ. 32, 583-589 (1990).</li>
<li>Servetnick, M., Grainger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+neural+and+lens+competence+in+Xenopus+ectoderm%3A+evidence+for+an+autonomous+developmental+timer%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Changes in neural and lens competence in Xenopus ectoderm: evidence for an autonomous developmental timer.</a> Dev. Bio. 112, 177-188 (1991).</li>
<li>Servetnick, M., Grainger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeogenetic+neural+induction+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Homeogenetic neural induction in Xenopus.</a> Dev. Bio. 147, 73-82 (1991).</li>
<li>Couly, G., Coltey, P., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+triple+origin+of+skull+in+higher+vertebrates%3A+a+study+in+quail-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Dev%22%5BJournal%5D)">The triple origin of skull in higher vertebrates: a study in quail-chick chimeras.</a> Dev. 117, 409-429 (1993).</li>
<li>Couly, G. F., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+early+neural+primordium+in+quail-chick+chimeras+%3A+I%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+relationships+between+placodes%2C+facial+ectoderm%22%5BJournal%5D)">Mapping of the early neural primordium in quail-chick chimeras : I.</a> Developmental relationships between placodes, facial ectoderm. 110, 422-439 (1985).</li>
<li>Couly, G. F., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+the+early+neural+primordium+in+quail-chick+chimeras+II.+The+prosencephalic+neural+plate+and+neural+folds%3A+Implications+for+the+genesis+of+cephalic+human+congenital+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Mapping of the early neural primordium in quail-chick chimeras II. The prosencephalic neural plate and neural folds: Implications for the genesis of cephalic human congenital abnormalities.</a> Dev. Bio. 120, 198-214 (1987).</li>
<li>Lievre, A. L., Le Douarin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+early+development+of+cranial+sensory+ganglia+and+the+potentialities+of+their+component+cells+studied+in+quail-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">The early development of cranial sensory ganglia and the potentialities of their component cells studied in quail-chick chimeras.</a> Dev. Bio. 94, 291-310 (1982).</li>
<li>Kennedy, A., Dickinson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Median+facial+clefts+in+Xenopus+laevis%3A+roles+of+retinoic+acid+signaling+and+homeobox+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Bio%22%5BJournal%5D)">Median facial clefts in Xenopus laevis: roles of retinoic acid signaling and homeobox genes.</a> Dev. Bio. 365, 229-240 (2012).</li>
<li>Trainor, P., Tam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cranial+paraxial+mesoderm+and+neural+crest+of+the+mouse+embryo-+codistribution+in+the+craniofacial+mesenchyme+but+distinct+segregation+in+the+branchial+arches%5BTitle%5D)+AND+%22Dev%22%5BJournal%5D)">Cranial paraxial mesoderm and neural crest of the mouse embryo- codistribution in the craniofacial mesenchyme but distinct segregation in the branchial arches.</a> Dev. 121, 2569-2582 (1995).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSive%2C+HL+%22Early+Development+of+Xenopus+laevis%22">Early Development of Xenopus laevis</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. (2000).</li>
<li>Tandon, P., Showell, C., Christine, K., Conlon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morpholino+injection+in+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Morpholino injection in Xenopus.</a> Methods Mol. Biol. 843, 29-46 (2012).</li>
<li>Nieuwkoop, P. D., Faber, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNieuwkoop%2C+PD+%22Normal+Table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29%22">Normal Table of Xenopus laevis (Daudin)</a>. , Garland Publishing. New York. (1994).</li>
</ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

خطوات حاسمة والقيود: إن EAD وجه إجراء عملية زرع حان الوقت والعمل المكثف. ذلك يتطلب ممارسة واليدين ثابتة، والبراعة إلى الكمال. يعتمد بروتوكول زرع وجه على قدرة الباحث لإزالة الأنسجة بكفاءة والزرع. إذا كان واحد يأخذ وقتا طويلا لإدراج زرع في وجه المضيف، ووجه المضيف بدء التعاقد وشفاء. ملقط يمكن استخدامها لتوسيع المنطقة بدقة الوجه. ومع ذلك، إذا حدث جرح كبير الانكماش، وزرع لن تلتئم بالاضافة الى ما قد تحتاج إلى تخفيض في حجم لتناسب حفرة المضيف الوجه. حجم وشكل زرع يجب أن تتطابق تقريب...

لفهم الآليات الكامنة وراء العيوب القحفي الولادة 1-2، والأنسجة الهامة والمساهمات إشارة أثناء تطوير القحفي يجب تحديدها. في الضفدع القيطم المورق، جزء من الوجه، بما في ذلك الفم وشكل الخياشيم من &quot;المتطرفة الأمامي المجال&quot; (EAD)، حيث الأديم الظاهر الأديم الباطن ويتم جنبا إلى جنب مباشرة 3-4. يعمل EAD أيضا كمركز إشارات للتأثير على الأنسجة المحيطة بها، بما في ذلك قمة العصبية في الجمجمة، الذي يشكل الفكين والوجه المناطق الأخرى 5. لتحديد الجينات التي تساهم في وظيفة هيئة البيئة، وقد تم تطوير تقنية &quot;زرع وجه&quot;، حيث يتم زرع أنسجة من متبرع إلى الجنين المضيف، بعد إزالة منطقة المضيف المقابلة. بعد زرع، مما أدى تنمية الوجه وتقييمها. وبالتالي، يتم تحليل آثار فقدان وظيفة (LOF) أو مكسب من وظيفة (GOF) لجين معين في هيئة البيئة محليا، حيث بقية حوتتألف هيئة البيئة والجسم من النوع البري الأنسجة. زرع متبادلة لا يمكن أن يؤديها، حيث يتم زرع نوع البرية الأنسجة في الأجنة مع LOF العالمية أو صندوق القناص في جينات معينة. وقد تم زرع يكثر استخدامها في القيطم والدراسات فرخ 6. على سبيل المثال، تناول زرع القيطم الحث متماثل التوالد العصبية، عدسة والكفاءة العصبية، والعصبية الهجرة قمة 7-10. السمان-فرخ تطعيم خيالية وقد حللت تطوير لوحة الأمامية العصبية، التلال العصبية الأمامي، قمة العصبية، وعظام الجمجمة 11-14. هذا هو الأسلوب زرع أول لدراسة التنمية القحفي في القيطم. وقد أثبتت هذه التقنية دورا رواية لمثبطات WNT Frzb1 والهلال في تنظيم تشكيل الغشاء القاعدي في الفم الظني 5. القيطم المورق هو نموذج مثالي لدراسة التطور القحفي كما أجنة كبيرة، وتطوير خارجيا، والثانية الوجه مرئيا بسهولة، مما يسمح المجهرية والتصوير التنمية. تظهر الآليات الكامنة وراء تطوير الوجه حفظها، مشيرا إلى أن النتائج قدمت في الضفدع توفير نظرة ثاقبة التنمية البشرية 4،15-16.

<table><tbody><tr><td>ماصة باستور</td><td>VWR</td><td>14672-400</td><td>زجاج جير &nbsp;</td></tr><tr><td>الحجم 5 3/4 في</td> ماصة نقل متدرجة <td>من القطن</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>16001-180</td><td>يمكن التخلص منها &nbsp ؛</td></tr><tr><td># 5/45 ملقط</td><td>أدوات العلوم الدقيقة بواسطة Dupont Medical</td><td>11251-35</td><td>بزاوية 45 درجة ؛</td></tr><tr><td>ملقط النمط</td><td>القياسي أدوات العلوم</td><td>الدقيقة 11000-20</td><td>مستقيم ؛ طرف مسنن ؛ أنابيب شعرية من الفولاذ المقاوم للصدأ</td></tr><tr><td>(للإبر) FHC</td><td></td> <td>30-30-1</td><td>Borosil 1.0 مم OD × 0.5 مم ID /</td></tr><tr><td>غطاء الألياف زلة &nbsp ؛</td><td>VWR</td><td>48393 252</td><td>24 × 60 مم &nbsp; زجاج الغطاء الصغير</td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F9378</td><td></td></tr><tr><td>مجتذب الإبرة&nbsp;</td>مجتذب الإبرة <td>Sutter Instrument</td><td>Co: discontinued Filament: FB300B</td><td>مجتذب الإبرة الأكثر تشابها والمتاح حاليا هو P-97. بالنسبة للخيوط ، استخدم خيوط صندوق Sutter مربعة مقاس 3.00 مم بعرض 3.0 مم.</td></tr><tr><td>نموذج P-80</td><td>مشتعل / براون مجذوب</td><td></td><td></td></tr> مجهر <tr><td></td><td>مجسم Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>إضاءة مجهر مجسم من Fostec</td><td>Fostec</td><td></td><td>استخدم صندوقا خفيفا مع 2 ذراعين من الألياف البصرية. &nbsp;</td></tr><tr><td>حامل دبوس مطلي بالنيكل</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>26018-17</td><td>قطر فتح الفك: 0-1 مم</td></tr><tr><td>حامل دبوس مطلي بالنيكل موريا</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>26016-12</td> قطر <td>فتحة الفك: 0-1 مم</td></tr><tr><td>إبر التنغستن</td><td>أدوات العلوم الدقيقة</td><td>10130-05</td><td>0.125 مم قطر قضيب</td></tr><tr><td>فان أكين بلاستالينا</td><td>بليك</td> <td># 33268-2981</td><td></td></tr><tr><td>نمذجة الطين - أبيض أو أحمر أو أصفر</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mMessage mMashine SP6 أو T7 Kit</td><td>Ambion</td><td>AM1340</td><td></td></tr></tbody></table>

زرع الوجه في<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأجنة

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

تحدث العيوب الخلقية القحفي في 1 من كل 700 ولادة حية، ولكن نادرا ما يعرف المسببات بسبب الفهم المحدود للتنمية القحفي. لتحديد حيث مسارات الإشارات والأنسجة التصرف خلال الزخرفة من الوجه النامية، وقد تم تطوير تقنية &quot;زرع وجه&quot; في الأجنة الضفدع القيطم المورق. تتم إزالة المنطقة من أنسجة الوجه الظني (في &quot;المتطرفة الأمامي المجال&quot; (EAD)) من جنين المانحة في مرحلة tailbud، وزرعها إلى الجنين المضيف من نفس المرحلة، والتي تمت إزالة المنطقة يعادلها. وهذا يمكن أن تستخدم لتوليد وجه خيالية حيث الأنسجة المضيفة أو المانحة له الخسارة أو الربح من وظيفة في الجينات، و / أو يتضمن تسمية النسب. بعد الشفاء، ويتم رصد نتائج التنمية، ويشير إلى أدوار مسار الإشارات داخل الجهة المانحة أو الأنسجة المحيطة المضيف. القيطم يمثل نموذجا قيما للتنمية وجهه، ومنطقة الوجه كبيرة وبسهولة وccessible لالمجهرية. يمكن أن يعاير العديد من الأجنة، على مدى فترة زمنية قصيرة منذ حدوث التنمية بسرعة. النتائج في الضفدع ذات الصلة بالتنمية البشرية، منذ ظهور عمليات الحفظ القحفي بين القيطم والثدييات.

ينبغي إدراج الأنسجة المزروعة بالكامل في رأس المضيف بعد زرع كما هو مبين في الشكل 3A، ولها جسر زجاجي يوضع بشكل مناسب على وجه الجنين، كما هو مبين في الشكل 2BC. يجب أن يكون الحجم الأنسجة المانحة المزروعة بشكل صحيح لافتتاح المضيف، لزرع لتكون ناجحة. يجب الأنسجة EAD لا تبرز من الرأس، بأي شكل من الأشكال، كما رأينا في أرقام 3B و 3C. بالإضافة إلى ذلك، لا ينبغي أن استدارة زرع وجه النسبية لموقعها في الجسم المانحة، كما هو مبين...

تقنية لزرع &quot;المتطرفة الأمامي المجال&quot; بين أنسجة الوجه القيطم المورق وقد تم تطوير الأجنة. يمكن نقل الأنسجة من احد خلفية التعبير الجيني إلى أخرى، والسماح للدراسة المتطلبات المحلية للتنمية والقحفي للانزعاج التفاعلات بين مناطق الوجه.

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو نقل أنسجة النطاق الأمامي الأقصى أو EAD الوجهية بين أجنة Xenopus laevis. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة أنسجة EAD من الأجنة المانحة والمستقبلة ذات الخلفيات الجينية المختلفة. بعد ذلك، يتم إدخال قطعة EAD المستأصلة من الأجنة المانحة في وجوه الأجنة المستقبلة.في الخطوة النهائية، يتم الاحتفاظ بالأجنة المنقولة لمدة تتراوح من 60 إلى 70 ساعة بعد الإخصاب للمراقبة. وفي نهاية المطاف، يمكن استخدام المجهر الضوئي والمجهر الفلوري لمراقبة التغيرات في التطور القحفي الوجهي للحيوانات المنقولة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال التطور القحفي الوجهي لتحسين فهمنا للتشوهات القحفية الوجهية، مثل الإشارات الجديدة المطلوبة لتطور الفم التي تنشأ من النطاق الأمامي الأقصى. قبل العملية، يتم تحميل الأنابيب الشعرية في جهاز سحب الإبر، ثم يتم سحب من أربع إلى ست إبر مع كسر كل إبرة، بحيث يتم إزالة الجزء الزجاجي المرن الشبيه بالشعرة والذي يتراوح طوله بين اثنين إلى ثلاثة مليمترات من طرف الإبرة تماماً.يجب أن تكون الطرف صلبة نسبيًا، ولكن ضيقة بما يكفي لاستخدامها كأداة قطع. بعد ذلك، أشعل موقد بنزن وضع طرف ماصة زجاجية (pasture pipette) في الجزء الأزرق من اللهب، ثم قم بتدوير الماصة بحيث ينصهر الطرف وينغلق الثقب تمامًا ليتشكل طرف مستدير مغلق. ولصنع الجسور الزجاجية، استخدم ملاقط ذات نمط قياسي طويل لكسر قطع من زجاج غطاء الشريحة بحجم 3 mm في 3 mm بعناية.بعد ذلك، أمسك قطعة غطاء الشريحة باستخدام الملاقط وضع الزجاج في اللهب حتى تلين الحواف الأربع وتنحني للأسفل لتشكل قبة زجاجية صغيرة. بعد ذلك، قم بتبطين طبق بتري بلاستيكي بقطر 60 millimeter باستخدام صلصال تشكيل أحمر أو أبيض أو أصفر. ثم املأ الطبق بـ 3%phi.قم بتحضير محلول 0.5 XMBS. ثم استخدم أداة تنقير الأنابيب المعقمة باللهب لعمل من 40 إلى 60 منخفضاً ضحلاً بعمق يتراوح بين 2 إلى 3 مليمتر، بحيث يكون العمق مساوياً لحجم جسم جنين في المرحلة 20، وذلك في الطين قبل 48 ساعة من بدء التجربة. احصل على البويضات من إناث الضفادع وقم بتخصيبها في المختبر (in vitro).بعد ذلك، وبعد حقن الأجنة بغشاء مقيد (capped membrane) وmRNA الخاص بـ GFP بالإضافة إلى أي رسائل أخرى، تُحفظ الأجنة في درجة حرارة 15 degrees Celsius لمدة 48 ساعة حتى تصل إلى المرحلة 19 إلى 20. وفي يوم تجربة الزرع، يُستخدم مجهر فلوري لاختيار الأجنة المحقونة التي تظهر تألقاً ساطعاً ومنتظماً. وبعد مسح سطح التشغيل والمجهر الستيريوسكوبي والأدوات بـ 70%ethanol، تُستخدم ملقط dumont رقم 5 45 لإزالة الغشاء الحيوي (Vitale membrane) لكل جنين مختار تحت المجهر الستيريوسكوبي.بعد ذلك، استخدم ماصة نقل بلاستيكية مدرجة مقطوعة الطرف لنقل أجنة المضيف إلى طبق العمليات. كن حذراً لتجنب ملامسة الأجنة للسطح الفاصل بين الهواء والماء. أدخل الأجنة بحيث يكون الجانب الخلفي للأسفل في تجاويف الصلصال، واستخدم الملاقط لإغلاق الصلصال برفق حول قاعدة كل جنين، مع ترك الرأس بارزاً من التجويف. لإزالة المانح من الجهة الأمامية أولاً، أدخل إحدى الإبر المسحوبة في رأس الجنين إلى يسار الغدة الإسمنتية بعمق كافٍ بحيث تخترق من خارج الجنين عبر الرأس وصولاً إلى المعي الأمامي.حرك الإبرة من الجانب الأيسر إلى الجانب الأيمن للرأس عبر كامل عرض الغدة الأسمنتية لإجراء قطع نظيف. بعد ذلك، ضع الإبرة عند بداية القطع عند الحدود اليسرى للغدة الأسمنتية وحرك الإبرة للأعلى حتى تصل إلى أسفل العين اليسرى لعمل قطع رأسي من الحدود اليسرى للغدة الأسمنتية إلى أسفل العين اليسرى. بعد ذلك، ضع الإبرة عند الحدود اليمنى للغدة الأسمنتية وحرك الإبرة للأعلى حتى تصل إلى أسفل العين اليمنى لعمل قطع رأسي من الحدود اليمنى للغدة الأسمنتية إلى أسفل العين اليمنى.بعد ذلك، لاستئصال النسيج بالكامل، حرك الإبرة من أسفل العين اليسرى إلى أسفل العين اليمنى، مما يؤدي إلى إحداث قطع أفقي يحرر النسيج. والآن، ادفع النسيج المستأصل برفق نحو طرف الإبرة وارفعها عبر المحلول المنظم إلى جزء الطبق الذي يحتوي على أجنة المضيف. استأصل النسيج من جنين المضيف كما تم توضيحه للتو، مع التخلص من المضيف، وEAD explan، وإدخال explan المانح في الفجوة الناتجة لدى المضيف.بمجرد وضع النسيج المانح في الموضع الصحيح وإدخاله بالكامل بعناية، ضع أحد الجسور الزجاجية المُحضرة مسبقاً فوق وجه الجنين لتثبيت الطعم في مكانه، مع إدخال طرفي الجسر في الصلصال لضمان استقراره. بعد العملية، تُترك الأجنة دون تحريك في درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح بين ساعتين إلى ثلاث ساعات. ومن ثم، بمجرد التئام الطعوم، قم بإزالة الجسور الزجاجية من الأجنة والصلصال من حول قاعدة الأجنة بعناية.بعد ذلك، استخدم ماصة نقل بلاستيكية مدرجة لسحب الأجنة برفق من تجاويفها. انقل الأجنة إلى طبق بتري مُصنف بشكل مناسب، مملوء إلى النصف بمحلول 0.1 XMBS نظيف ومُدعم بـ Gentamycin، واترك الأجنة تنمو في درجة حرارة تتراوح بين 15 إلى 18 درجة Celsius لعدة أيام حتى تصل إلى المرحلة 40. مع تغيير محلول MBS يومياً، افحص النسيج المزروع بواسطة الفلورية للتأكد من أن الجزء المستأصل لا يزال ملتحماً في مكانه.يجب إدخال الأنسجة المزروعة بالكامل في رأس المضيف بعد عملية الزرع، كما تم توضيحه للتو، ويجب أن تكون ذات حجم مناسب لفتحة المضيف لضمان نجاح عملية الزرع. يجب ألا تبرز أنسجة EAD من الرأس بأي شكل من الأشكال، كما يمكن ملاحظته في هاتين الصورتين للعينة المستأصلة والموضوعة بشكل غير صحيح. بالإضافة إلى ذلك، يجب عدم تدوير زراعة الوجه بالنسبة لموضعها في جسم المتبرع كما هو موضح هنا.بعد عدة ساعات، يجب أن يلتئم النسيج المزروع والوجه المحيط به، وبحلول اليوم التالي، يجب أن يظهر الجنين كما في المثال الموضح في هذه الصور؛ حيث يمكن استخدام المجهر الفلوري للتأكيد على أن النسيج المزروع ظل في مكانه أثناء عملية الالتئام. وفي المرحلة 42، سيساهم النسيج الضابط المزروع في تكوين الفم وسيظل يتألق باللون الأخضر. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة جيدة بكيفية نقل نسيج EAD من جنين إلى آخر.تسهيل استخدام هذه الطريقة لتحديد أي طبقة جرثومية أو منطقة من قرص الجنين المبكر (EAD) هي الأكثر أهمية في تطور الوجه.

facial-transplants-in-xenopus-laevis-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

الزرد زرع الخلايا يمكن الجمع بين علم الوراثة وعلم الأجنة لتوليد نسيج الوهم محددة. هذا الفيديو يوضح المعيدة نظموا زرع الخلية التي سمحت مختبرنا للتحقيق في دور السكان astroglial والعظة توجيهات محددة خلال تشكيل الصوار في الدماغ المقدم.

الأنسجة الجنينية الوهم المستهدفة : اسماك الزرد المعيدة زرع الخلايا

يتم زرع الجينات الحيوانية القبعات overexpressing منتج (ق) إلى الجهة...

تحديد الأنسجة باستخدام زرع رسملة الحيوان (ACT) في الفحص القيطم المورق</em

هذا البروتوكول الفيديو يوضح طريقة لتوليد المعدلة...

إنتاج المعدلة وراثيا القيطم المورق عن طريق تقييد أنزيم التكامل وساطة وزرع النووية

غضاريف تطوير القحفي على اتصال وثيق مع أنسجة أخرى ، ويصعب التلاعب في الحيوانات الحية. نحن نستخدم electroporation لتقديم الأدوات الجزيئية أثناء نمو الهيكل العظمي القحفي مع تجاوز آثار الجنينية المبكرة. وسوف تسمح لنا هذه المقاربة لاختبار كفاءة المرشح...

Electroporation من اللحمة المتوسطة الجمجمة

يصف هذا البروتوكول كيفية تشريح premigratory قمة العصبية القحفية (NC) من القيطم neurulas المورق. هذه إإكسبلنتس يمكن مطلي على فبرونيكتين وتربيتها في المختبر، أو المطعمة مرة أخرى إلى الأجنة المضيفة. هذه التقنية تسمح بدراسة آليات NC ظهارة إلى اللحمة المتوسطة التي تمر بمرحلة انتقالية، والهجرة، والتمايز.

تشريح<em&gt; القيطم المورق</em&gt; العصبية كريست ل<em&gt; في المختبر</em&gt; يزدرع الثقافة أو<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; زرع

وقد تم تطوير طريقة لقياس حجم فموي وجهي وشكل الضفدع الأجنة المورق. في هذا البروتوكول، ويتم الجمع بين قياسات حجم التقليدية مع morphometrics الهندسية للسماح لتحليلات أكثر تطورا التنمية الوجهية والعيوب.

الكمي من الظواهر في الوجهية القيطم

في أجنة Xenopus ، تكون الخلايا من سقف الأريمية متعددة القدرات ويمكن برمجتها لتوليد أنسجة مختلفة. هنا ، نصف بروتوكولات استخدام مصانع سقف الأريمة البرمائية كنظام فحص للتحقيق في الميزات الرئيسية في الجسم الحي وفي المختبر للتطور العصبي المبكر.

الخلايا الجذعية مثل<em&gt; القيطم</em&gt; الجنينية إإكسبلنتس إلى الدراسة في وقت مبكر العصبية التنموية الميزات<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

الجينات الأساسية للبقاء على قيد الحياة تشكل عقبات تقنية لإنشاء خطوط المسخ. قفزات واسعة تلتف الفتك بالجمع بين الجينوم التحرير مع زرع الخلايا البدائية خلق الحيوانات البرية من نوع تحمل طفرات الخط. قفزات واسعة ويسمح أيضا بكفاءة توليد طفرات فارغة متماثل في الجيل1 و. ويتجلى هنا، خطوة الزرع.

زرع الخلايا البدائية كريسبر/Cas9-تعتمد قفزات واسعة في النمو

يهدف هذا البروتوكول إلى توضيح كيفية حقن خليط الحمض النووي/DOTAP بالميكروين في عيون الأجنة القديمة من Xenopus laevis في يوم من الأيام، وكيفية تصوير وإعادة بناء البروتين الفلورسنت الأخضر الفردي (GFP) الذي يعبر عن الأربور اللافسونية البصرية في العقول المتوسطة التكتال سليمة ، والذين يعيشون Xenopus الضفادع.

الحقن المجهري للحمض النووي في براعم العيون في أجنة Xenopus laevis والتصوير من GFP التعبير عن الأشجار Axonal البصرية في سليمة، وحيا Xenopus Tadpoles

توضح هذه المقالة تقنية زرع الأنسجة التي تم تصميمها لاختبار خصائص الإشارات والأنماط للدماغ الأمامي القاعدي أثناء النمو القحفي الوجهي.

إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

تعد التلاعبات الجنينية مثل استئصال الخلايا وزرعها أدوات مهمة لدراسة التطور المبكر. يصف هذا البروتوكول جهاز زرع بسيط وفعال لإجراء هذه التلاعبات في أجنة حمار وحشي.

جهاز زرع بسيط وفعال لأجنة حمار وحشي

تعلم تقنية زرع نسيج الوجه في أجنة القيطم المورق لدراسة تطور الوجه والجمجمة. تساعد هذه الطريقة الباحثين على فهم آليات التشوهات الوجهية والتفاعلات الإشارية.

زرع الوجه في

استكشف المزيد من الفيديوهات