Name: العزلة من الأنسجة الدهنية خلايا المناعة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: تعلم عزل خلايا المناعة من الأنسجة الدهنية باستخدام الهضم بالكولاجيناز والطرد المركزي التفاضلي. تُمكّن هذه الطريقة الباحثين من دراسة أدوار هذه الخلايا في الأمراض المناعية الأيضية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

معتمد من قبل المعاهد الوطنية للصحة JSO روث L. كيرشتاين NRSA (F32 DK091040)، معتمد من قبل AK زمالة ما بعد الدكتوراه من جمعية السكري الأمريكية (7-10-MI-05)، ومعتمد من قبل آه جمعية القلب الأمريكية تأسست جائزة الباحث (12EIA8270000). وقد أجريت تجارب التدفق الخلوي في التدفق الخلوي VMC مورد مشترك. يتم اعتماد التدفق الخلوي VMC مورد مشترك من قبل الجهاز الهضمي مركز بحوث أمراض فاندربيلت (DK058404).

1. الكواشف واللوازم قبل الشروع في هذا البروتوكول التجريبي، وإعداد الكواشف التالية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70٪ من الإيثانول </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X PBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1X DPBS (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم) تستكمل مع 0.5٪ BSA </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> FACS العازلة: 1X DPBS (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم)، 2 مم EDTA، و 1٪ FCS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العازلة ACK: 150 ملي NH 4 الكلورين، 10 ملي KHCO 3، و 0.1 ملي نا 2 EDTA في الماء </li></ol> 2. الحصاد وإعداد الأنسجة الدهنية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران وفقا للإجراءات التي وافق عليها IACUC الخاصة بكل مؤسسة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تبلل تماما الفراء مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق على مستوى عملية الخنجري (الجزء السفلي من عظمة القص) وفتح التجويف الصدري لفضح القلب، مع الحرص على عدم قطع أي الأوعية الدموية الرئيسية. </li></ol> ملاحظة: عند هذه النقطة، بل هو أيضا مفيدة لترك الحجاب الحاجز سليمة بقدر<html> ممكن وخفض خدش للخروج من الجانب الأيمن من القفص الصدري للسماح الدم وسائل الإرواء في التدفق من التجويف الصدري. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مقطع الأذين الأيمن للسماح الدم وسائل الإرواء للهروب من نظام الدورة الدموية. </li></ol> ملاحظة: عندما يكون التعامل مع الفئران السمينة، التامور الزائدة AT قد تحتاج إلى إزالة للسماح بالوصول إلى القلب. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم القلب مع ملقط وإدراج بلطف إبرة في البطين الأيسر من خلال قمة. يروي ببطء الماوس مع 15 مل العقيمة PBS. </li></ol> ملاحظة: تخفيض معدل نضح إذا بدأت الرئتين لملء والتوسع. <ol start="6" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح التجويف البريتوني وإزالة منصات الدهون perigonadal باستخدام الحرص على تجنب أي أنسجة الغدد التناسلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع منصات الدهون في وزن قارب على الجليد تحتوي على 2 مل 1X DPBS (بدون المغنيسيوم أو الكالسيوم) تستكمل مع 0.5٪ BSA، واللحم المفروم في الدقيقة القطع الجميلة. </li></ol>الحمار = &quot;jove_content&quot;&gt; ملاحظة: الحد من كمية AT لكل وزن القارب إلى 1.2 غرام. اذا كان المبلغ من AT يتجاوز 1.2 غرام، تقسيمها بالتساوي بين اثنين من وزن القوارب. <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على عينات من على الجليد وإعداد 3 مل كولاجيناز حل هضم في AT عينة تتكون من 1X DPBS تستكمل مع 0.5٪ BSA، 10 مم CaCl 2، و 4 ملغ / مل كولاجيناز، من النوع الثاني. </li></ol> 3. الهضم كولاجيناز <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل AT إلى 50 مل أنابيب مخروطية بواسطة صب جناسة والشطف وزن القارب مع DPBS 1 مل (0.5٪ BSA) و 3 مل كولاجيناز الثاني حل هضم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند جناسة في شاكر التناوب (200 دورة في الدقيقة) عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 10 مل DPBS (0.5٪ BSA) إلى أنابيب مخروطية ومكان على الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسحن جناسة مرات عديدة باستخدام 10 مل ماصة المصلية، وتمرير الايقاف الخلية من خلال 100 ميكرون مرشح في لأنبوب جديد 50 مل المخروطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي تعليق خلية في 500 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 والتطويرعلى سبيل المثال؛ C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب طاف و resuspend SVF الخلية بيليه في 3 مل العازلة ACK إلى ليز تلويث الكريات الحمراء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 12 مل FACS العازلة وتعليق خلية الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب طاف و resuspend SVF بيليه الخلية في نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة. </li></ol> ملاحظة: استخدام حجم الخلية بيليه كدليل لمدى FACS العازلة ل resuspend فيه. إذا كان يغطي الخلية بيليه الجزء السفلي من مل المخروطية أنبوب 50، استخدم 0.5-1 مل FACS العازلة، وإلا، في resuspend 0.25-0.5 مل. <ol start="9" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان العينات على الجليد وإعداد مأخوذة تخفيف 01:10 من كل عينة لفرز الخلايا عن طريق خلط 40 ميكرولتر العازلة FACS، 50 ميكرولتر حل الأزرق التريبان (0.2٪)، و 10 ميكرولتر التعليق الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد خلايا قابلة للحياة على أساس التريبان الأزرق الإقصاء وتمييع تعليق خلية إلى تركيز النهائي من 5-10 × 10 6 خلية / مل. </li></ol> 4. تلطيخ المضادات سطح الخلية <oL&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف مكافحة فأر CD16/CD32 الأجسام المضادة (اف سي بلوك) إلى التركيز النهائي من 0.5-1 μg/10 6 خلايا، واحتضان على الجليد لمدة 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل العينات (≥ 10 6 خلايا) إلى 12 × 75 مم البوليسترين جولة أنابيب أسفل. إعداد أنابيب منفصلة إذا تحليل أجهزة الصراف الآلي وخلايا T، والجمع بين الخلايا الإضافية لإعداد عدد كاف من الأنابيب لاستيعاب التعويضات المطلوبة ومضان تعديل ناقص واحد (FMO) الضوابط. </li></ol> ملاحظة: وكمثال على ذلك، عندما سوف قياس نسبة من أجهزة الصراف الآلي على أساس F4/80 وCD11b، التعويضات التالية والضوابط FMO ابد أن نكون مستعدين: - غير ملوثين (خلايا) - دابي أو يوديد propidium (PI) وصمة عار واحد (الخلايا؛ لا تضيف صبغة جدوى حتى الخطوة 5.1) - F4/80 APC (خلايا أو الخرز التعويض) واحد وصمة عار - CD11b FITC الخلايا أو واحد وصمة عار (حبات التعويض) - FMO 1 (خلايا): الجرذ IgG2a κ نمط إسوي السيطرة APC + CD11b FITC + صبغ الجدوى (المضافة في الخطوة 5.1) - FMO 2 (خلايا): F4/80 APC + الجرذ و IgG2b κ نمط إسوي السيطرة FITC + صبغ الجدوى (المضافة في الخطوة 5.1) <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الأجسام المضادة الأولية fluorophore مترافق و / أو ضوابط نمط إسوي في التركيز المناسب (انظر الجدول من الكواشف والمواد). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حماية العينات من الضوء واحتضان عند 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 مل FACS العازلة وتعليق خلية الطرد المركزي في 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صب طاف و resuspend SVF الخلية بيليه في 2 مل FACS العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي تعليق خلية 500 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية، و resuspend بيليه خلية في صندوق التبرعات الخاص ≥ 400 FACS ميكرولتر العازلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل العينات إلى 12 × 75 مم البوليسترين أنابيب أسفل جولة مجهزة 35 ميكرومتر الخلية مصفاة قمم أنبوب.</li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يحفظ بعيدا عن الضوء، وعينات تخزينها في 4 درجات مئوية حتى تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية. </li></ol> ملاحظة: للحصول على أفضل النتائج ينبغي تحليل الخلايا immeadiately، ومع ذلك، تم إجراء تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية مع هذا البروتوكول بنجاح على الخلايا المسمى المخزنة في نظام مراقبة الأصول الميدانية العازلة لمدة 1-2 ساعة عند 4 درجات مئوية. إذا كان بحاجة إلى الخلايا لتكون ثابتة لزيادة وقت التخزين، ويمكن أن تكون ثابتة الخلايا المسمى مع بارافورمالدهيد 2٪ في 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة قبل التحليل FACS. الشركات الأجسام المضادة تشير إلى أن الخلايا المسمى يمكن تخزينها لمدة تصل إلى أسبوع واحد، ولكن هذا لم يتم اختباره في سياق هذا الإجراء. 5. تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل تحليل نظام مراقبة الأصول الميدانية، إضافة إلى عينات صبغ الجدوى والضوابط المناسبة للسماح لايف / الميت تمييز الخلية. </li></ol> ملاحظة: تتوفر تجاريا العديد من الأصباغ جدوى، ولكن ينصح دابي وPI اعتمادا على الإثارة / الانبعاثات الأستاذديزيل من الأجسام المضادة، مترافق fluorophore المستخدمة. تضاف دابي ويوديد propidium إلى كل عينة في تركيز النهائي من 0.2 ملغ / مل. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام عينة السيطرة السلبية غير ملوثين، ويفضل خلايا معزولة من نفس الأنسجة والعينات التجريبية، لضبط الجانب مبعثر (SSC) ومبعثر إلى الأمام (FSC) بحيث يتسنى للسكان الخلية (ق) من الفائدة هي على نطاق واسع. </li></ol> ملاحظة: بالنسبة لتحليل AT الخلايا صندوق التبرعات الخاص، فمن المستحسن أن SSC يتم عرضها في نطاق السجل مقابل FSC في مقياس خطي. استخدام نطاق وسجل لSSC أهمية خاصة عند تحليل أجهزة الصراف الآلي، والتي غالبا ما تكون كبيرة جدا ومحبب. <ol start="3" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم ضوء بوابة مبعثر الأولي يعتمد على نوع الخلية (الخلايا) التي يجري تحليلها، وضبط أنبوب مضخم (PMT) مكسب بحيث الخلايا غير ملوثين هي في أقصى اليسار من الرسم البياني-معلمة واحدة (تركز على ما يقرب من 10 2) للقنوات المناسبة. &lt;/ لى&gt; </ol> ملاحظة: من المستحسن أن الخلايا الليمفاوية والضامة (أو خلايا الدم النخاعي أخرى) يتم تحليلها بشكل منفصل بسبب وجود خلافات في تألق ذاتي. <ol start="4" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام عناصر التحكم الملون واحد أو الضد التقاط حبات تعويضات لأداء التعويض متعددة الألوان. </li></ol> ملاحظة: من المستحسن استخدام الخرز التعويض، ولكن لا بد من ضمان التوافق من كل الأجسام المضادة. على سبيل المثال، والخرز التعويض قد لا عبر تتفاعل مع الأجسام المضادة أرنب، وفي هذه الحالة يطلب من خلايا منعزلة للحصول على سيطرة وصمة عار واحد المناسبة. <ol start="5" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين غيتس التجريبي القائم على ضوابط FMO معدلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط تدفق عداد الكريات لجمع العدد المناسب من الأحداث على أساس انتشار السكان من الاهتمام وتسجيل البيانات التجريبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصدير ملفات البيانات FCS للتحليل غير متصل. وهناك العديد من البرامج المتاحة لتدفق cytometrتحليل البيانات ذ. نوصي Cytobank، منصة على شبكة الإنترنت التي تسمح investigatores لتخزين وتحليل البيانات وتوليد الأرقام من أي جهاز كمبيوتر مع الوصول إلى الإنترنت 18. بالإضافة إلى ذلك، Cytobank يوفر القدرة على جعل الوصول إليها الجمهور البيانات أو تقييد الوصول إلى المتعاونين. </li></ol>

<ol><li>Rodbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+Isolated+Fat+Cells.+I.+Effects+of+Hormones+on+Glucose+Metabolism+and+Lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Metabolism of Isolated Fat Cells. I. Effects of Hormones on Glucose Metabolism and Lipolysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 239, 375-380 (1964).</li>
<li>Danse, L. H., Verschuren, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fish+oil-induced+yellow+fat+disease+in+rats.+III.+Lipolysis+in+affected+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Pathology%22%5BJournal%5D)">Fish oil-induced yellow fat disease in rats. III. Lipolysis in affected adipose tissue.</a> Veterinary Pathology. 15, 544-548 (1978).</li>
<li>Weisberg, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity+is+associated+with+macrophage+accumulation+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue.</a> The Journal of Clinical Investigation. 112, 1796-1808 (2003).</li>
<li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+inflammation+in+fat+plays+a+crucial+role+in+the+development+of+obesity-related+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Chronic inflammation in fat plays a crucial role in the development of obesity-related insulin resistance.</a> The Journal of Clinical Investigation. 112, 1821-1830 (2003).</li>
<li>Mathis, D., Shoelson, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism%3A+an+emerging+frontier%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism: an emerging frontier.</a> Nature Reviews. Immunology. 11, 81(2011).</li>
<li>Stefanovic-Racic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+promote+macrophage+infiltration+and+comprise+a+substantial+proportion+of+obesity-associated+increases+in+CD11c%2B+cells+in+adipose+tissue+and+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells promote macrophage infiltration and comprise a substantial proportion of obesity-associated increases in CD11c+ cells in adipose tissue and liver.</a> Diabetes. 61, 2330-2339 (2012).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+deficiency+and+pharmacological+stabilization+of+mast+cells+reduce+diet-induced+obesity+and+diabetes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Genetic deficiency and pharmacological stabilization of mast cells reduce diet-induced obesity and diabetes in mice.</a> Nature Medicine. 15, 940-945 (2009).</li>
<li>Feuerer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lean%2C+but+not+obese%2C+fat+is+enriched+for+a+unique+population+of+regulatory+T+cells+that+affect+metabolic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Lean, but not obese, fat is enriched for a unique population of regulatory T cells that affect metabolic parameters.</a> Nature Medicine. 15, 930-939 (2009).</li>
<li>Nishimura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+effector+T+cells+contribute+to+macrophage+recruitment+and+adipose+tissue+inflammation+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD8+ effector T cells contribute to macrophage recruitment and adipose tissue inflammation in obesity.</a> Nature Medicine. 15, 914-920 (2009).</li>
<li>Winer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+obesity-associated+insulin+resistance+through+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Normalization of obesity-associated insulin resistance through immunotherapy.</a> Nature Medicine. 15, 921-929 (2009).</li>
<li>Winer, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+promote+insulin+resistance+through+modulation+of+T+cells+and+production+of+pathogenic+IgG+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies.</a> Nature Medicine. 17, 610-617 (2011).</li>
<li>Wu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+by+lipid+excess+promotes+tissue+inflammation%2C+insulin+resistance%2C+and+hepatic+steatosis+in+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America.+109%22%5BJournal%5D)">Activation of invariant natural killer T cells by lipid excess promotes tissue inflammation, insulin resistance, and hepatic steatosis in obese mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109. , 1143-1152 (2012).</li>
<li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eosinophils+sustain+adipose+alternatively+activated+macrophages+associated+with+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Eosinophils sustain adipose alternatively activated macrophages associated with glucose homeostasis.</a> Science. 332, 243-247 (2011).</li>
<li>Elgazar-Carmon, V., Rudich, A., Hadad, N., Levy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+transiently+infiltrate+intra-abdominal+fat+early+in+the+course+of+high-fat+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Lipid+Research%22%5BJournal%5D)">Neutrophils transiently infiltrate intra-abdominal fat early in the course of high-fat feeding.</a> Journal of Lipid Research. 49, 1894-1903 (2008).</li>
<li>Talukdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils+mediate+insulin+resistance+in+mice+fed+a+high-fat+diet+through+secreted+elastase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neutrophils mediate insulin resistance in mice fed a high-fat diet through secreted elastase.</a> Nature Medicine. 18, 1407-1412 (2012).</li>
<li>Hagman, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+and+quantifying+leukocyte+populations+in+human+adipose+tissue%3A+impact+of+enzymatic+tissue+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterizing and quantifying leukocyte populations in human adipose tissue: impact of enzymatic tissue processing.</a> Journal of Immunological Methods. 386, 50-59 (2012).</li>
<li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+specific+cell+population+by+fluorescence+activated+cell+sorting+%28FACS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS).</a> J. Vis. Exp. (41), e1546(2010).</li>
<li>Kotecha, N., Krutzik, P. O., Irish, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Web-based+analysis+and+publication+of+flow+cytometry+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22%5BJournal%5D)">Web-based analysis and publication of flow cytometry experiments.</a> Current Protocols in Cytometry. Chapter 10, Unit 10(2010).</li>
<li>Cho, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenic+role+of+LYVE-1-positive+macrophages+in+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue.</a> Circulation Research. 100, e47-e57 (2007).</li>
<li>Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+compensation+for+flow+cytometry%3A+visualization+artifacts%2C+limitations%2C+and+caveats%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats.</a> Cytometry. 45, 194-205 (2001).</li>
</ol>

ليس لدينا شيء في الكشف عنها.

وقد أدى الاهتمام المتزايد في دور الجهاز المناعي في العواقب الأيضية من السمنة إلى الاستخدام الواسع النطاق للالتدفق الخلوي لتحديد خصائص الخلايا المناعية من AT. على الرغم من أن بروتوكول الدقيقة تختلف بين المختبرات على أساس الخبرة الخاصة بهم والمعدات المتاحة، وتشمل الخطوات الحاسمة الهضم كولاجيناز، الطرد المركزي التفاضلي، وسطح الخلية وضع العلامات مستضد. الهدف من هذه المادة هو توفير بروتوكول مفصلة ودليل عملي للعزلة AT صندوق التبرعات الخاص للمحققين لديهم خبرة محدودة تعمل مع AT و / أو أدا...

تاريخيا، كان ينظر إلى الأنسجة الدهنية (AT) كجهاز تخزين خاملة من الدهون، والذي يوسع والعقود ردا على توازن الطاقة. ونحن نفهم الآن أن AT يمثل جهازا الغدد الصماء التي تفرز ديناميكية بنشاط عدد من الهرمونات التي تؤثر تأثيرا مباشرا سلوك التغذية والنظامية توازن الجلوكوز. وبالإضافة إلى ذلك، على مدى العقد الماضي كان هناك تقدير متزايد لسكان العديد من الخلايا المناعية المقيمين في AT جزء الأوعية الدموية اللحمية (صندوق التبرعات الخاص)، فضلا عن مساهمتها في AT التوازن. القدرة على فصل AT خلية شحمية وصندوق التبرعات الخاص باستخدام هضم كولاجيناز تليها الطرد المركزي المغاير وقد وصفت لأول مرة في عام 1964 رودبيل 1. غالبا ما يتم استخدام كولاجيناز الثاني للفصل خلية شحمية وصندوق التبرعات الخاص بسبب الصيانة من مستقبلات الانسولين خلية شحمية 1. في وقت مبكر، وتجزيء الأنزيمية من AT كان يعمل في المقام الأول لدراسة الشحمcyte الأيض وعزل preadipocytes. وفي الآونة الأخيرة، وهذا الأسلوب، جنبا إلى جنب مع توافر نطاق واسع من أجهزة قياس التدفق الخلوي وعدد متزايد من المتاحة تجاريا الأجسام المضادة fluorophore مترافق، يسرت توصيف AT الخلايا المناعية. على الرغم من وجود الخلايا المناعية في التهاب AT وقد وصفت سابقا 2، وأوراق المنوية بواسطة يسبيرج وآخرون. وشو وآخرون. نشرت في عام 2003 كانت أول لتوثيق تراكم AT الضامة (الصراف الآلي) في السمنة، والتي تفرز السيتوكينات الالتهابية وترتبط مع المقاومة AT-محددة والنظامية الأنسولين 3،4. خدم هذه الملاحظات كأساس لحقل جديد من التحقيقات التي صيغت مؤخرا، &quot;immunometabolism،&quot; 5 و تم متابعتها من قبل دراسات تورط مختلف السكان الخلايا المناعية، بما في ذلك الخلايا الجذعية 6، 7 الخلايا البدينة، الخلايا T 8 -10، خلايا B 11، خلايا NKT 12، 13 الحمضات، والعدلات 14،15 في تطوير البدانة ترتبط مقاومة الأنسولين. الهدف من هذه المقالة هو أن تقدم وصفا مفصلا لتقنية هضم كولاجيناز تستخدم لعزل خلايا AT صندوق التبرعات الخاص لتوصيف وأجهزة الصراف الآلي وAT خلايا T عن طريق التدفق الخلوي. وقد تم تحسين هذا البروتوكول للماوس AT، ومع ذلك، يمكن أن تستفيد من المشاهدين قراءة مقال ممتاز تقديم تفاصيل مستفيضة حول الاستفادة المثلى من هذه التقنية للإنسان في 16. الجمهور المستهدف من هذه المادة يتضمن محققين من ذوي الخبرة المحدودة والعاملة مع الماوس AT وأداء التدفق الخلوي. وتعرض العديد من الاعتبارات العملية لتحقيق التوازن بين العائد الخلوية وقدرتها على البقاء مع الوقت والموارد، فضلا عن الضوابط المثلى التدفق الخلوي لوصف AT السكان الخلايا المناعية. بالإضافة إلى بروتوكول لدينا، والقراء هي referrإد إلى المادة إن الرب مؤخرا من قبل باسو وآخرون. لمناقشة ممتازة لبعض الجوانب الفنية من التدفق الخلوي لتشمل الضوابط المناسبة والتعويضات 17.

<table><tbody><tr><td>DPBS (بدون Ca أو Mg) 10 × 500 مل</td><td>Life Technologies</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Life Technologies</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A2153-100G</td><td></td></tr><tr><td>كولاجيناز</td><td>Sigma</td><td>C6885-5G</td><td></td></tr><tr><td>محلول يوديد البروبيديوم</td><td>Sigma</td><td>P4864-10 مل</td><td></td></tr><tr><td>كومة مستقرة 20 ميكرولتر</td><td>Rainin</td><td>SS-L10</td><td></td></tr><tr><td>20 نصائح مرشح ميكرولتر</td><td>Rainin</td><td>SRL10F</td><td></td></tr><tr><td>مكدس مستقر 250 أطراف ميكرولتر</td><td>Rainin</td><td>SS-L250</td><td></td></tr><tr><td>1000 أطراف ميكرولتر</td><td>Rainin</td><td>GPS-L1000</td><td></td></tr><tr><td>1000 نصائح مرشح</td><td>ميكرولتر Rainin</td><td>GP-L1000F</td><td></td></tr><tr><td>250 ميكرولتر نصائح مرشح</td><td>Rainin</td><td>SR-L200F</td><td></td></tr><tr><td>FC Block</td><td>BD Biosciences</td><td>553142</td><td></td></tr><tr><td>فيشر 100 مصفاة</td><td>فيشربراند</td><td>22-363-549</td><td></td></tr><tr><td>طبق متوسط الوزن</td><td>فيشربراند</td><td>02-202B</td><td></td></tr><tr><td>رقائق الألومنيوم</td><td>فيشربراند</td><td>1213100</td><td></td></tr><tr><td>مقص فرم</td><td>فيشربراند</td><td>089531B</td><td></td></tr><tr><td>دوامة</td><td>فيشربراند</td><td>2215365</td><td></td></tr><tr><td>50 مل أنابيب مخروطية</td> BD <td>Falcon</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>فلتر علوي أنابيب FACS BD</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>10 مل علبة ماصة 200</td><td>دينار بحريني Falcon</td><td>1367520</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب سفلية مستديرة</td><td>BD Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>5 مل حقنة</td><td>BD Falcon</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>V لوحات سفلية كوستار</td><td></td><td>07-200-107</td><td></td></tr><tr><td>ماصة لمبة النقل</td><td>الحرارية العلمية</td><td>13-711-22</td><td></td></tr><tr><td>شاكر</td><td>ثيرمو سيانتيفيك</td><td>11 676 071</td><td></td></tr><tr><td>حصيرة لاصقة</td><td>حراري علمي</td><td>1368750</td><td></td></tr><tr><td>ثقافة الخلية أجهزة الطرد المركزي</td><td>Sorvall</td><td>75253839</td><td></td></tr><tr><td>محولات</td><td>Sorvall</td><td>75003723</td><td></td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر CD16 / CD32</td><td>BD Biosciences</td><td>تركيز</td><td>553142: 0.5 - 1 مو ؛ g / 106 خلايا</td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر F4 / 80</td><td>eBioscience</td><td>17-4801</td><td>الفلوروفور المترافق: APC التركيز: 0.2 & mu ؛ g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتماثل: 17-4321</td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر CD11b</td><td>eBioscience</td><td>11-0112</td><td>اقتران الفلوروفور: FITC التركيز: 0.5 & mu ؛ g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتشابي: 11/1/4031</td></tr><tr><td>الهامستر الأرمني المضاد للفأر CD11c</td><td>eBioscience</td><td>12-0114</td><td>الفلوروفور المترافق: PE التركيز: 0.8 & mu ؛ g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتساوي: Dec-88</td></tr><tr><td>Goat المضادة للفأر MGL1 / 2</td><td>R & D أنظمة</td><td>FAB4297P</td><td>الفلوروفور المترافقة: PE التركيز: 0.1 & mu; g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتماثل: IC108P</td></tr><tr><td>الماعز المضادة للفأر CD206</td><td>R & D أنظمة</td><td>FAB2535P</td><td>الفلوروفور المترافقة: PE التركيز: 0.1 & mu; g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتشابوي: IC108P</td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر CCR2</td><td>R & D أنظمة</td><td>FAB5538P</td><td>الفلوروفور المترافقة: PE التركيز: 0.1 & mu; g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتماثل: IC013P</td></tr><tr><td>الهامستر الأرمني المضاد للفأر TCR & # 946 ؛</td><td>BD Biosciences</td><td>553174</td><td>الفلوروفور المترافق: APC التركيز: 0.2 & mu ؛ g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتشابه: 553956</td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر CD8a</td><td>BD Biosciences</td><td>552877</td><td>الفلوروفور المترافقة: PE-Cy7 التركيز: 0.8 & mu ؛ g / 106 خلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتشابي: 552784</td></tr><tr><td>الفئران المضادة للفأر CD4</td><td>BD Biosciences</td><td>557956</td><td>Fluorophore المترافقة: Alexa Fluor 700 التركيز: 0.2 & mu ؛ g / 106 الخلايا رقم كتالوج التحكم في النمط المتماثل: 557963</td></tr><tr><td colspan = "4" >الجدول 1. قائمة المواد والكواشف.</td></tr></tbody></table>

العزلة من الأنسجة الدهنية خلايا المناعة

Isolation of Adipose Tissue Immune Cells

وقد أدى اكتشاف تسلل زيادة البلاعم في الأنسجة الدهنية (AT) من القوارض والبشر يعانون من السمنة المفرطة إلى تكثيف الاهتمام مساهمة الخلايا المناعية لمقاومة الانسولين وجهازية. العزلة والكمي لمختلف السكان الخلايا المناعية في العجاف والسمنة AT الآن تقنية تستخدم عادة في المختبرات immunometabolism، ويجب توخي الحذر الشديد حتى الآن سواء في انسجة الخلايا الوعائية والعزلة في تحليل التدفق الخلوي بحيث البيانات التي تم الحصول عليها هو موثوق بها والتأويل . في هذا الفيديو نحن لشرح كيفية اللحم المفروم، هضم، وعزل الخلايا المناعية التخصيب انسجة جزء الأوعية الدموية. وفي وقت لاحق، وتبين لنا كيفية الضامة تسمية الأجسام المضادة والخلايا الليمفاوية T وكيفية البوابة بشكل صحيح عليها في تجارب التدفق الخلوي. يتم توفير تدفق ممثل المؤامرات الخلوي من الدهون التي تغذيها الهزيل وارتفاع الدهون في الفئران السمينة التي تغذيها منخفضة. وثمة عنصر حاسم من هذا التحليل هو استخدام الأجسام المضادة التي تفعللا يتألق في القنوات حيث في الضامة هي autofluorescent بشكل طبيعي، فضلا عن استخدام ضوابط التعويض المناسب.

وقد استخدم الهضم كولاجيناز من AT تليها الطرد المركزي المغاير لعزل صندوق التبرعات الخاص من منصات الدهون بربخي من الفئران C57BL/6J ذكر تغذية قليلة الدهون (10٪ سعر حراري من الدهون)، أو ارتفاع الدهون (60٪ سعر حراري من الدهون) النظام الغذائي (LFD وHFD ، على التوالي) لمدة 16 أسبوعا. ثم تم تسمية الخلايا من صندوق التبرعات الخاص مع الأجسام المضادة الأولية fluorophore مترافق لقياس نسبة من أجهزة الصراف الآلي قابلة للحياة (الشكل 1)، وعلى خلايا T (الشكل 2) عن ...

الأنسجة الدهنية (AT) هو موقع على مكثفة تنشيط الخلايا المناعية والتفاعل. تقريبا جميع خلايا الجهاز المناعي موجودة في AT ويتم تغيير النسب من خلال السمنة. العزلة المناسبة، القياس الكمي، وتوصيف AT السكان الخلايا المناعية تعتبر بالغة الأهمية لفهم دورها في مرض immunometabolic.

The discovery of increased macrophage infiltration in  the adipose tissue (AT) of obese rodents and humans has led to an  intensification of interest in ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل الخلايا المناعية للأنسجة الدهنية. يتم تحقيق ذلك عن طريق إزالة ضمادات دهن البشرة أولا. في الخطوة الثانية ، يتم هضم الأنسجة الدهنية بالكولاجيناز.بعد ذلك ، يتم عزل جزء الأوعية الدموية اللحمية للأنسجة الدهنية عن طريق الطرد المركزي التفاضلي. في الخطوة الأخيرة ، يتم تصنيف الخلايا المناعية للأنسجة الدهنية بأربعة أجسام مضادة أولية مترافقة. في النهاية ، يمكن قياس نسبة الضامة القابلة للحياة والخلايا التائية الموجودة في الأنسجة الدهنية عن طريق قياس التدفق الخلوي.مرحبا ، أنا أليسا هاستي. سنوضح لك اليوم كيفية عزل الخلايا المناعية وقياسها من الأنسجة الدهنية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التمثيل الغذائي المناعي ، مثل كيفية تغير مجموعات الخلايا المناعية في الأنسجة الدهنية بعد التلاعب الجيني الدوائي أو الغذائي.سيظهر الإجراء اليوم أريان كينيدي وجيب ، أو زملاء ما بعد الدكتوراه في مختبري. بعد ترطيب فرو القتل رحيم تماما بنسبة 70٪ من الإيثانول ، قم بعمل شق على مستوى عملية الخنجري وافتح التجويف الصدري لكشف القلب مع الحرص على عدم قطع أي أوعية دموية رئيسية. بعد ذلك ، قم بقص الأذين الأيمن للسماح للدم والبيرفو ثمانية بالخروج من الدورة الدموية.ثم استخدم زوجا من الملقط لإمساك القلب وإدخال إبرة برفق عبر القمة في البطين الأيسر. الآن قم ببث الماوس ببطء مع 15 مل من PBS المعقمة. ثم افتح التجويف البريتوني وقم بإزالة ضمادات دهون الغدد التناسلية مع توخي الحذر لتجنب أي نسيج غدد تناسلي.ضع ضمادات الدهون في قارب مصل اللبن على ثلج يحتوي على ملليلترين من المغنيسيوم وخالي من الكالسيوم DPBS مكمل بنسبة 0.5٪ BSA ، ثم فرم الأنسجة الدهنية إلى قطع دقيقة. هذا ما يجب أن تبدو عليه الدهون عند الانتهاء من الفرم. الآن صب الأنسجة الدهنية المفرومة متجانسة في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر.اشطف webo بملليلتر واحد من DPBS المكمل ب BSA واسكب الغسيل في الأنبوب المخروطي. بعد ذلك ، اشطف قارب WHE بثلاثة ملليلتر من محلول الكولاجيناز واسكب الغسيل في الأنبوب. احتضان المتجانس في شاكر دوراني لمدة 20 دقيقة عند 200 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية.ثم أضف 10 ملليلتر من BSA المكملة DPBS إلى التجانس باستخدام ماصة مصلية سعة 10 ملليلتر. بعد ذلك ، كرر المتجانس المهضوم عدة مرات وضع الأنبوب على الجليد. مرر تعليق الخلية من خلال مرشح 100 ميكرومتر إلى أنبوب مخروطي جديد سعة 50 مل.بعد تدوير الخلايا ، قم بصب الخلايا الحمراء ثم قمل كريات الدم الحمراء الملوثة داخل حبيبات خلية كسر الأوعية الدموية اللحمة. مع ثلاثة ملليلتر من المخزن المؤقت CK. أضف المخزن المؤقت للفاكس بسرعة لتحييد المخزن المؤقت A CK.بعد الغسيل وإعادة التكوير ، تقوم الخلايا بإعادة تعليق الحبيبات في مخزن الفاكس. ثم عد الخلايا القابلة للحياة عن طريق استبعاد ثلاثي اللون الأزرق وقم بتخفيف تعليق الخلية إلى تركيز نهائي من خمسة إلى 10 مرات 10 إلى ست خلايا لكل مليلتر. ابدأ التلوين عن طريق احتضان الخلايا بجسم مضاد مضاد مضاد مضاد للقرص المضغوط 16 ، CD 32 FC إلى تركيز نهائي من 0.5 إلى ميكروغرام واحد لكل 10 للخلايا الست لمدة 10 دقائق على الجليد.ثم قسم الخلايا إلى أكبر من أو يساوي 10 إلى الحصص الستة وانقل الحصص إلى أنابيب سفلية مستديرة من البوليسترين مقاس 12 × 75 ملم. اجمع أي خلايا إضافية في عدد كاف من الأنابيب لاستيعاب التعويض المطلوب والتألق المعدل مطروحا منه عنصر تحكم واحد. ثم أضف الفلورو الأربعة الأجسام المضادة الأولية المترافقة وضوابط النمط المتماثل إلى الأنابيب المناسبة بالتركيزات المناسبة.بعد احتضان العينات في الظلام عند أربع درجات مئوية لمدة 30 دقيقة ، اغسل العينات مرتين في ملليلترين من عازلة الفاكس Resus تعليق الكريات في أكبر من أو يساوي 400 ميكرولتر من عازلة الفاكس بعد الغسيل الثاني ، ثم انقل العينات إلى أنابيب جديدة من البوليسترين مستديرة القاع مقاس 12 × 75 ملم مزودة بأسطح أنابيب مصفاة خلية 35 ميكرومتر. قبل التحليل مباشرة ، أضف قالب قابلية للحياة لتمييز الخلايا الميتة الحية إلى العينات المناسبة. ثم استخدم عنصر تحكم سلبي غير ملطخ لضبط التشتت الجانبي على مقياس لوغاريتمي والمبعثر الأمامي على مقياس خطي.بعد ذلك ، ارسم بوابة مبعثرة للضوء بناء على نوع الخلية التي يتم تحليلها واضبط كسب أنبوب المضاعف الضوئي بحيث تكون الخلايا غير الملوثة في أقصى يسار الرسم البياني لمعلمة واحدة تتمحور تقريبا على ميل العلامة للقنوات المناسبة. باستخدام حبات تعويض التقاط الأجسام المضادة ، قم بإجراء التعويض متعدد الألوان ثم اضبط البوابات التجريبية بناء على التألق المعدل المعد مسبقا ناقص عنصر تحكم واحد. أخيرا ، اجمع العدد المناسب من الأحداث بناء على انتشار السكان المهتمين وسجل البيانات التجريبية.في هذه السلسلة الأولى من مخططات الكثافة ، تم تلطيخ خلايا الكسر الوعائي اللحمي المعزولة من الأنسجة الدهنية للبشرة في البول ل F four 80 و CD 11 B لتحديد ضامة الأنسجة الدهنية. توضح هذه اللوحات الثلاث الأولى استراتيجية البوابات الأولية ، بما في ذلك التمييز المزدوج المبعثر الخفيف وبوابات الجدوى. في هاتين اللوحتين التاليتين ، يمكن ملاحظة التألق المعدل التمثيلي مطروحا منه عنصر تحكم واحد يستخدم لضبط البوابات التجريبية.في هذا المثال ، تم استبدال الأجسام المضادة F الأربعة 80 و CD 11 B بضوابط النمط الإسموي المناسبة لحساب التألق الذاتي والارتباط غير المحدد. ثم تم رسم البوابات الرباعية لتحديد ضامة الأنسجة الدهنية الإيجابية F 4 80 CD 11 B القابلة للحياة. يمكن بعد ذلك مقارنة نسبة F four 80 إيجابية CD 11 B ضامة الأنسجة الدهنية الإيجابية المعزولة من الفئران التي تتغذى على الدهون منخفضة الدسم وعالية الدهون كما هو موضح في مخططات الكثافة التمثيلية هذه.في هذه السلسلة التالية من الألواح ، اقتصرت بوابة تشتت الضوء الأولية على مجموعة الخلايا الليمفاوية من أجل تجنب تضمين أي خلايا نخاعية ذاتية الفلورية. في هذين الزوجين الأخيرين من اللوحات ، يتم عرض البوابات التمثيلية للخلايا التائية للأنسجة الدهنية الإيجابية الأربعة و CD ثمانية إيجابية. تم أولا بوابات الخلايا الليمفاوية للأنسجة الدهنية القابلة للحياة ل TCR R beta tcr.ثم تم بوابات الخلايا التائية للأنسجة الدهنية الإيجابية R بيتا للتعبير عن القرص المضغوط الرابع والقرص المضغوط الثامن. يمكن بعد ذلك مقارنة نسبة الخلايا التائية الإيجابية TCR والخلايا التائية الإيجابية المضغوطة الأربعة والخلايا التائية الموجبة المضغوطة الثماني المعزولة من الأنسجة الدهنية للفئران التي تتغذى على الدهون العالية وقليلة الدهون. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل الخلايا المناعية للأنسجة الدهنية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

علم المناعة والعدوى

يوضح هذا الفيديو تقنية لعزل واستزراع الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون المشتقة من القمة العصبية (ADSCs) المصنفة بالفلورسنت من الأنسجة الدهنية حول قوس الفئران. بعد العزل ، يتم اكتشاف NCADSCs وفرزها باستخدام فرز الخلايا المنشط بالفلورة ، ثم يتم زراعتها لاحقا على طبق ، مما يعزز تكاثر الخلايا.

عزل الخلايا الجذعية المشتقة من الدهون من الأنسجة الدهنية الفئران حول الأبهر

في عام 2001، وصف الباحثون في جامعة كاليفورنيا عزل السكان من الخلايا الجذعية البالغة، ووصف الخلايا الجذعية المشتقة الدهنية أو ASCS، من الأنسجة الدهنية. توضح هذه المقالة عزلة ASCS من lipoaspirates باستخدام دليل، بروتوكول الهضم الأنزيمية باستخدام كولاجيناز.

عزل الخلايا الجذعية من دليل الدهنية المشتقة من Lipoaspirates الإنسان

نظرا لاتصال جذري والسلبية بين السمنة وأمراض المصاحبة الأخرى، يلعب البحوث حول دور الدهنية في المرض وهناك ما يبرر الصحة العامة. نقدم بروتوكول لعزل واستئصال مستودعات الدهنية مما يسمح لدراسة الدهنية باستخدام في الموقع وطرق المختبر.

الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

نقدم التقنيات المطلوبة لعزل الجزء الوعائي اللحمي (SVF) من مستودعات الأنسجة الدهنية الأربية (تحت الجلد) وحول الغدد التناسلية (الحشوية) لتقييم تعبيرها الجيني ونشاطها الكولاجيني. تتضمن هذه الطريقة إثراء الخلايا الجذعيةالمشتقة من الدهون العالية Sca1 (ASCs) باستخدام فصل الخلايا المغناطيسية المناعية.

الفصل Immunomagnetic من Sca1 الدهون مستودع محددة<sup&gt; عالية</sup&gt; الدهنية المشتقة من الخلايا الجذعية (مخولا لصيانة طائرات)

يصف هذا المنشور بروتوكولًا لعزل النوى عن الخلايا الشحمية الناضجة ، والتنقية عن طريق الفرز المُفعّل بالفلور ، و نسخ مستوى الخلية الواحدة.

عزل النوى الأنسجة الدهنية لتطبيقات الجينوم وحيد الخلية

يصف هذا البروتوكول النهج التقني لعزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الدهنية والالتهابية الليفية من مستودعات الأنسجة الدهنية البيضاء داخل البطن (WAT) عن طريق فرز الخلايا المنشطة بالفلورة أو فصل الخرزة المغناطيسية المناعية.

عزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الأديبوجينية والليفية الالتهابية من مستودعات الفئران الدهنية داخل البطن

نحن نقدم طريقة بسيطة لعزل الخلايا الدهنية الصالحة للحياة للغاية من منصات الدهون الظهارية الماوس باستخدام فرز الخلايا المنشطة الفلوريس.

إعداد الخلايا الدهنية بروجينيتور من ماوس Epididymal الأنسجة الدهنية

يوفر هذا البروتوكول طريقة فعالة لهضم الكولاجين لعزل الخلايا الشحمية القابلة للحياة وخلايا جزء الأوعية الدموية اللحمية من الدهون الحشوية البشرية في عملية واحدة ، بما في ذلك منهجية الحصول على الحمض النووي الريبي عالي الجودة من الخلايا الشحمية والتنميط الظاهري لبلاعم SVF من خلال تلطيخ علامات متعددة مرتبطة بالغشاء لتحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي.

عزل الخلايا الشحمية القابلة للحياة وجزء الأوعية الدموية اللحمية من الأنسجة الدهنية الحشوية البشرية المناسبة لتحليل الحمض النووي الريبي والتنميط الظاهري للبلاعم

يصف هذا البروتوكول العزل شبه الآلي للجزء الوعائي اللحمي (SVF) من الأنسجة الدهنية للفئران للحصول على الخلايا الدهنية وتحقيق تمايز الخلايا الشحمية في المختبر. استخدام مفكك الأنسجة لهضم كولاجيناز يقلل من التباين التجريبي ويزيد من التكاثر.

عزل شبه آلي للجزء الوعائي اللحمي من الأنسجة الدهنية البيضاء باستخدام مفكك الأنسجة

هنا، نقدم طريقة معيارية لعزل الخلايا الجذعية والخلايا الدهنية المشتقة من الدهون بكفاءة، تتميز بانخفاض &gt;90٪ في وقت المعالجة، وحيوية عالية للخلايا، وتوافق واسع.

العزل الفعال للخلايا الجذعية المشتقة من الدهون والخلايا الدهنية من نسيج الدهون الخنازيري

تعلم عزل خلايا المناعة من الأنسجة الدهنية باستخدام الهضم بالكولاجيناز والطرد المركزي التفاضلي. تُمكّن هذه الطريقة الباحثين من دراسة أدوار هذه الخلايا في الأمراض المناعية الأيضية.

العزلة من الأنسجة الدهنية خلايا المناعة

استكشف المزيد من الفيديوهات