طريقة سريعة وفعالة لتقييم الإمراض في أوستيلاغو مايديس على خطوط الذرة والتيوسينت

الهدف العام من هذا الإجراء هو التلقيح من خلال حقن الإبرة ، وثقافة تعليق خلايا USTA Lago maus ، وإجراء فحص تفاعل مقاومة للمرض لخطوط متاهة tete و teosinte المتاهة. يتم تحقيق ذلك عن طريق اختيار خطوط النبات أولا للتلقيح والفحص. بعد ذلك ، تزرع بذور تجارب التلقيح التجريبية وتجارب التلقيح بالإبرة.

بعد 10 أيام ، يتم حقن معلق الخلية المصنوع من U في جذع كل نبات. أخيرا ، تتم مقارنة تفاعلات المقاومة لمحطات التجارب والتحكم في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر تلقيحا ناجحا بحقن الإبرة من خلال تصور النمط الظاهري للنبات الذي تم تلقيحه معك. مايس.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها توصل العامل الممرض مباشرة بين الأوراق. هذا يلغي مشكلة تغلغل مسببات الأمراض. للبدء في اختيار خطوط النبات للتلقيح والغربلة كما هو موضح هنا ، تم استخدام خطين متاهة وخمسة خطوط تيوسينت و 40 متاهة من خطوط التقاطع Teosinte مع مقاومة غير مميزة ل U Mais لهذه الدراسة لتجارب التلقيح التجريبية والتحكم في حقن الإبرة.

ازرع أربع بذور من كل خط نبات في مسطحات صغيرة عن طريق دفع البذور حوالي نصف بوصة في التربة بإصبع وتغطيتها برفق بالتربة. ثم ضع النباتات في غرفة نمو وسقي البذور حتى تنقع ، مع التأكد من بقائها تحت التربة بعد الري. قم بزراعة النباتات في بيئات ليلا ونهارا تبلغ 28 و 20 درجة مئوية ، و 14 و 10 ساعات من دورات الضوء والظلام على التوالي.

وحوالي 500 ميكرومولار لكل متر مربع في الثانية من الإشعاع النشط ضوئيا في الجزء العلوي من المظلة. حافظ على الرطوبة النسبية أثناء النهار والليل عند حوالي 70٪ و 90٪ على التوالي ، واحتفظ بجميع النباتات في نفس غرفة النمو للحفاظ على بيئة نمو متطابقة عبر التجربة. بعد ثمانية أيام من زراعة البذور ، استخدم حلقة معقمة لرسم الهوية من مخزون الجلسرين المجمد على أجار سكر العنب للبطاطس أو احتضان ألواح المساعد الشخصي الرقمي عند 30 درجة مئوية لمدة يومين ومراقبتها بانتظام للتأكد من أنها تنمو جيدا تحت غطاء التدفق الرقائقي.

استخدم عود أسنان معقم لتحديد مستعمرة واحدة لكل سلالة ووضعها في ثلاثة أنابيب ملليلتر من مرق PD. احتضان المزارع عند 30 درجة مئوية و 200 دورة في الدقيقة لمدة يومين ، وتحقق بشكل دوري من النمو. بعد ذلك ، قم بقياس OD 600 من الثقافات للتأكد من أنها نمت إلى OD 1.0.

باستخدام الماء ، قم بإحضار الثقافات إلى تركيز نهائي يبلغ 1 مليون خلية لكل مليلتر في حجم نهائي يبلغ 30 ملليلترا. يؤدي هذا التركيز من تعليق الخلايا المسببة للأمراض باستمرار إلى إصابة جيدة بالنباتات. ثم قبل التلقيح ، امزج كميات متساوية من الاثنين اللذين صنعتهما كسلالات.

قبل ملء حقنة سعة ثلاثة ملليلتر بتعليق الخلية ، املأ حقنة التحكم بالماء لحقنها بأقل قدر من الضرر للنبات. تربط الأنسجة نقطة الصفر 457 ملم × 1.3 سم إبرة تحت الجلد بنهاية كل حقنة. قم بإزالة النباتات من غرفة النمو وحقنها بزاوية 90 درجة فوق خط التربة مباشرة.

أدخل إبرة U maus بحذر في جذع نبات تجريبي حتى تصبح في منتصف الساق. حقن ما يقرب من 100 ميكرولتر من تعليق الخلية. سوف يدفع عبر الجذع ويكون مرئيا أثناء تحركه في دوامة النبات.

استمر في حقن نباتات تجريبية إضافية حتى تفرغ المحاقن. ثم املأها بالماء لتنظيف الإبرة من أي أنسجة نباتية وأعد ملء المحقنة حتى يتم حقن جميع النباتات. استخدم حقنة الماء لحقن محطات التحكم بطريقة مماثلة.

عند اكتمال الحقن. ضع النباتات مرة أخرى في غرفة النمو بشكل يومي. سقي التربة فقط ، وتحقق من تطور مسببات الأمراض وتفاعلات مقاومة النبات.

باستخدام تصنيف تفاعل مقاومة من واحد إلى خمسة ، قم بقياس تفاعلات المقاومة وتسجيلها وتسجيلها لكل نبات بعد 7 و 10 و 14 و 21 يوما من التلقيح أو DPI. تزداد القيم العددية على مقياس التصنيف مع زيادة شدة المرض. على سبيل المثال ، يشير تفاعل المقاومة A1C إلى تفاعل مقاومة واحد أو اثنان من المقاومة.

تفاعل المقاومة بثلاثة أو أربعة أو خمسة إلى القابلية للإصابة. قارن تفاعلات المقاومة لمحطات التجارب والتحكم واختر النباتات التجريبية ذات تصنيف تفاعل المقاومة A1C واحد أو اثنين. تعتبر هذه النباتات مقاومة للماتيس.

في هذه التجربة ، كانت غالبية النباتات الملقحة بالدبال عرضة للعدوى. أظهرت النباتات تطورا حادا للمرض يتضح من خلال تكوين المرارة الجذعية والقاعدية مع جراثيم تيليو السوداء. ماتت العديد من النباتات بعد التلقيح بسبب شدة المرض.

في المقابل ، كانت محطات التحكم نظيفة جدا ولم تظهر تطور مسببات الأمراض في أي جزء من النبات ، مما يشير إلى أن تطور مسببات الأمراض في النباتات التجريبية كان بسبب تلقيح حقن الإبرة باستخدام U Mais تم تحديد ثلاثة خطوط عدوان متقاطع من Mais Teosinte كانت مقاومة ل U Mais ، وتم التحقق من التلقيح الناجح عن طريق التصلب البسيط ، سماوي في الإنتاج ، أو تكوين مرارة الأوراق الطفيفة. يمكن القيام بهذه التقنية بطريقة عالية الكفاءة مع قابلية التكرار. هذا يساعد في تلقيح وتنميط عدد كبير من النباتات.