Name: Inchworming: رواية موتور الرتابة في BTBR T + Itpr3 فريق العمل / J نموذج الفأر من التوحد (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-05T16:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: تعلم تقييم السلوك الحركي المتكرر في فئران BTBR باستخدام اختبار اللعب المعدل. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة السلوكيات الستيريوتيبية المرتبطة بطيف التوحد.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلفون ممتنون للمساعدة التقنية واللوجستية والخبرات التي تقدمها روز توبياس، Younghee اهن، وديفيد راسكين N.. وقد تم تمويل هذا العمل الموصوفة هنا من قبل مؤسسة مستشفى ألبرتا للطفولة ومعهد ألبرتا للطفولة بحوث مستشفى.

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا مع لجنة رعاية الحيوان الكندية والتي وافقت عليها جامعة كالجاري جنة رعاية الحيوان. 1. إعداد الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الفئران بين عشية وضحاها (12 ساعة) قبل الاختبار. للقيام بذلك، ضع كل من BTBR والفئران B6 (P35-P40) اللازمة للتحليل التجريبي في أقفاص من قبل أنفسهم، قبل يوم الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران المعزولة في التحليل السلوكي الغرفة 30 دقيقة قبل الاختبار بحيث الحيوانات وروض للبيئة الرواية. </li></ol> 2. إعداد معدات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مربع زجاجي 30 × 30 سم مع غطاء قابل للإزالة في غرفة الاختبار. وضع مربع على طاولة ووضع كاميرا الفيديو إلى 45 درجة زاوية من أسفل؛ وهذا الموقع للكاميرا يسمح التصور من طابق كامل من العلبة والماوس. استخدام الأشعة تحت الحمراء الخلفية للمساعدة في تقليل الوهج من جدارمربع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام كاميرا الفيديو التي تمتلك وظيفة التكبير عالية مع قدرات الأشعة تحت الحمراء لتحسين التصوير في بيئة لوكس منخفضة. تركز الكاميرا على العلبة توسيع الصورة بحيث يتم تصور الفئران طوال مربع بأكملها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية طابق كامل من مربع مع الفراش نشارة الخشب (يجب أن يكون حوالي 1 بوصة العميق). </li></ol> 3 الاختبار الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الزوج داخل سلالة من الفئران (BTBR - BTBR أو B6-B6) في اختبار ضميمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحويل الأنوار في غرفة الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدء كاميرا فيديو لتسجيل والخروج من الغرفة. سيمنع هذا المجرب تأثير على سلوك الفئران. تسجيل النشاط لمدة 11 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد اكتمال التسجيل، وإعادة إدخال غرفة الاختبار والعودة الفئران لأقفاص المنزل الأصلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التخلص من الفراش نشارة الخشب، وغسل مربع اختبار كامل مع الايثانول 70٪، ووضع الفراش نشارة الخشب جديدة في الجزء السفلي من الاختبارضميمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الإجراء بأكمله لبقية أزواج داخل وصمة عار وإرجاع الفئران لأقفاص المنزل الأصلية. </li></ol> ملاحظة: للتحقق من موثوقية البيانات inchworming، ويمكن تكرار هذا الإجراء في الأيام اللاحقة مع مختلف BTBR-BTBR وتركيبات الزوج B6-B6. وسوف يضمن هذا السلوك لاحظ لا يعتمد على الشريك محددة في العلبة، ولكن الفرد inchworming. 4. تحليل البيانات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Inchworming يعرف بأنه حركة متزامن الداخل والخارج من الصدارة وهند أقدام الحيوان، مع حد أدنى من واحد شارك في حدوث الداخل والخارج ثم الحركة اللاحقة التي تزيح بشكل فعال في الفراش. مشاهدة يدويا ويسجل كل فيديو مرتين (مرة واحدة لكل الماوس) للتأكد من المدة الإجمالية، والتردد، والكمون إلى اللولبية للقياس في شريط الفيديو 10 دقيقة. وينبغي أن يستند التهديف اليدوي للinchworming مدة وتواتر والكمون على متابعةتعريفات جي: Inchworming المدة: هل يعرف بأنه إجمالي الوقت كل فأر تنفق تشارك في سلوك inchworming. ليسجل هذا الجانب من inchworming، استخدام جهاز توقيت التي يمكن التي وقفها. بدء التوقيت عندما يبدأ الماوس لاللولبية للقياس وإيقاف الموقت عند توقف الماوس inchworming. عندما يبدأ وإذا الماوس لاللولبية للقياس مرة أخرى، وإعادة بدء وإعادة توقف الموقت. تكرار البداية ووقف موقت لمدة فترة الملاحظة 10 دقيقة في كل مرة inchworms الماوس. وهذا يولد درجة مدة inchworming التي هي 0:00 حتي 10:00 دقيقة. Inchworming التردد: هل يعرف بأنه عدد المرات الماوس يشارك في سلوك inchworming في فترة الملاحظة 10 دقيقة. ويتم منح تهمة واحدة في كل مرة يبدأ الماوس وتوقف inchworming. والنتيجة تردد inchworming تكون رقما بين 0 و ∞. الكمون إلى اللولبية للقياس: هل تعرف بأنها الوقت الفي يمر قبل ظهور أول من inchworming. بدء موقت عندما يبدأ الفيديو، وهذا سيكون وقتا 00:00، وإيقاف الموقت عند inchworms الماوس لأول مرة. إذا لا يعرض الماوس سلوك inchworming الكمون إلى اللولبية للقياس ستكون الساعة 10:00 صباحا. عند تحليل الكمون إلى اللولبية للقياس، وسيتم الحصول على درجة 0:01 حتي 10:00 دقيقة. يجب إزالة الفئران التي تفشل في اللولبية للقياس لمدة فترة الاختبار من السكان عينة للتأكد من أن النتائج هي ذات الصلة إلى السكان من الفئران التي تعرض السلوك inchworming. </li> <li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب مجموع تكرار ومدة inchworming لكل الماوس في شريط الفيديو. حساب الوقت اللازم للفأر الأولى في الزوج اللولبية للقياس لالكمون إلى اللولبية للقياس لهذا الزوج محددة من الفئران. وتستند هذه المعايير على العمل المنهجي قبل المتصلة السلوكيات المتكررة في حفر الفئران 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب متوسط ​​المدة، والتردد، ووالكمون لحفر لكل مجموعة التجريبية في التحليل (أي BTBR مقابل B6). استخدام ANOVA أو اختبار t لمقارنة البيانات بين سلالات / المجموعات التجريبية. ملاحظة: عندما يتم الانتهاء من الإجراء على اليوم الثاني، واستخدام تدابير المتكررة ANOVA لضمان عدم وجود آثار محاكمة لاحقة أو آثار الاقتران. </li></ol>

<ol><li>McFarlane, H. G., Kusek, G. K., Yan, M., Phoenix, J. L., Bolivar, V. J., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autism-like+behavioral+phenotypes+in+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain%2C+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Autism-like behavioral phenotypes in BTBR T+tf/J mice.</a> Genes, Brain, and Behavior. 7, 152-163 (2008).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+mouse+behavioral+tasks+relevant+to+autistic-like+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Mental+Retardation+and+Developmental+Disabilities+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Designing mouse behavioral tasks relevant to autistic-like behaviors.</a> Mental Retardation and Developmental Disabilities Research Reviews. 10 (4), 248-258 (2004).</li>
<li>Deacon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digging+and+marble+burying+in+mice%3A+simple+methods+for+in+vivo+identification+of+biological+impacts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Digging and marble burying in mice: simple methods for in vivo identification of biological impacts.</a> Nature Protocols. 1 (1), 122-124 (2006).</li>
<li>Thomas, A., Burant, A., Bui, N., Graham, D., Yuva-Paylor, L. A., Paylor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marble+burying+reflects+a+repetitive+and+perseverative+behavior+more+than+novelty-induced+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Marble burying reflects a repetitive and perseverative behavior more than novelty-induced anxiety.</a> Psychopharmacology. 204, 361-373 (2009).</li>
<li>Dudek, B. C., Adams, N., Boice, R., Abbott, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+influences+on+digging+behaviours+in+mice+%28Mus+musculus%29+in+laboratory+and+seminatural+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Psychology%22%5BJournal%5D)">Genetic influences on digging behaviours in mice (Mus musculus) in laboratory and seminatural settings.</a> Journal of Comparative Psychology. 97 (3), 249-259 (1983).</li>
<li>Webster, D., Williams, M. H., Owens, R., Geiger, V., Dewsbury, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digging+behavior+in+12+taxa+of+muriod+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Learning+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Digging behavior in 12 taxa of muriod rodents.</a> Animal Learning and Behavior. 9 (2), 173-177 (1981).</li>
<li>Pobbe, R. H., Pearson, B. L., Defensor, E., Bolivar, V. J., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+social+behaviours+of+C57BL%2F6J+versus+BTBR+inbred+mouse+strains+in+the+visible+burrow+system%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Expression of social behaviours of C57BL/6J versus BTBR inbred mouse strains in the visible burrow system.</a> Behavioural Brain Research. 214, 443-449 (2010).</li>
<li>Lewis, M. H., Tanimura, Y., Lee, L., Bodfish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+restricted+repetitive+behavior+in+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models of restricted repetitive behavior in autism.</a> Behavioural Brain Research. 176, 66-74 (2007).</li>
<li>Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+phenotyping+assays+for+mouse+models+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%22%5BJournal%5D)">Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism.</a> Nature Reviews. 11, 490-502 (2010).</li>
<li>Deacon, R., Rawlins, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+lesions%2C+species-typical+behaviours+and+anxiety+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Hippocampal lesions, species-typical behaviours and anxiety in mice.</a> Behavioural Brain Research. 156, 241-249 (2005).</li>
<li>Pearson, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+and+cognitive+sterotypies+in+the+BTBR+T%2Btf%2FJ+mouse+model+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain%2C+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Motor and cognitive sterotypies in the BTBR T+tf/J mouse model of autism.</a> Genes, Brain, and Behavior. 10, 228-235 (2011).</li>
<li>Pobbe, R. H., Defensor, E., Pearson, B. L., Bolivar, V. J., Blanchard, D. C., Blanchard, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+and+social+anxiety+in+the+BTBR+T%2B+tf%2FJ+mouse+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">General and social anxiety in the BTBR T+ tf/J mouse strain.</a> Behavioural Brain Research. 216 (1), 446-451 (2011).</li>
</ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Inchworming هو مقياس الرواية من السلوك المتكرر والتي يمكن استخدامها لدراسة العديد من الاضطرابات التي تظهر النمطية مثل ASD. هناك 4 خطوات التي هي ذات أهمية حاسمة لتوليد البيانات inchworming موثوقة من تعديل بروتوكول التفاعل الاجتماعي الأحداث: 1) الفترة الممتدة العزلة ضروري لاختبار inchworming ولا ينبغي إزالتها من بروتوكول أو تقصير. هذا الشرط هو محددة لاختبار inchworming في أزواج وصفها هنا. 2) تحتاج إلى كاميرا فيديو وضعه بشكل مناسب وتركز ذلك أن الفئران يمكن تصور بالكامل في جميع أنحاء ...

على الرغم من أن الفيزيولوجيا المرضية لاضطرابات طيف التوحد (ASD) لا يزال غير واضح، والتشخيص يعتمد على وجود ثلاث فئات عريضة الأعراض: المعاملة بالمثل الاجتماعية غير طبيعية، وضعف في التواصل، وتكرار / السلوكيات النمطية 1. معظم النماذج القوارض غير قادر على إعادة إنتاج نفس الوقت جميع الأعراض الثلاثة في حيوان واحد. وبالتالي، النماذج التي يمكن محاكاة موثوق بعض أو جميع جوانب هذا الاضطراب عقد قيمة كبيرة لوضع استراتيجيات وقائية وعلاجية فعالة. نموذج واحد أن يفعل عرض كافة الجوانب الثلاثة للASD هو الفأر 1،2 BTBR. في تركيبة مع الالفاظ بالموجات فوق الصوتية وفحوصات النهج الاجتماعي، يتم استخدام الأحداث اختبار التفاعل الاجتماعي عادة لتوصيف نماذج الماوس من ASD الأطفال؛ انخفضت هذه الاختبارات قياس والسلوكيات الاجتماعية الشاذة التي تمثل الملامح الأساسية لASD. بالإضافة إلى الأحداث اختبار التفاعل الاجتماعي، وغيرها الكثيروقد استخدمت اختبارات لقياس السلوكيات النمطية في النماذج الحيوانية من ASD. على سبيل المثال، اختبار دفن الرخام، الذي يتناول ميل حيوان لتهجير المواد الفراش باستخدام الخطم والأرجل الأمامية في محاولة لتغطية كائن، ويعتقد لقياس السلوكيات النمطية القهري التي تحدث استجابة للمؤثرات مكره 3،4. وفقا لذلك، تم تنفيذ اختبارات لقياس حفر هذا السلوك المتكررة في النماذج الحيوانية ASD وأنواع مختلفة من القوارض 3،5-7. يتم تعريف السلوكيات حفر عن الإجراءات الموجهة واضحة للأنف أو الكفوف لتهجير المواد الفراش ولقد تم الافتراض ان تكون معلمة حساسة من السلوك الحركي المتكرر 4. هنا، ونحن التقرير نوع الرواية من الحفر، التي سميناها &quot;inchworming،&quot; في سلالة BTBR من الفئران. توصيف هذا السلوك الرواية قد توفر قدرا قوية من السلوك الحركي المتكررة التي يمكن استخدامها للحصول على مزيد فالidation نماذج القوارض مثل ASD، هنتنغتون المرض أو السلوك القهري 8،9. نحدد &quot;inchworming&quot; كحركة متزامن واحد على الأقل من الصدارة وهند-أطرافه تليها إلى الداخل من قبل حركة متزامن إلى الخارج الأمر الذي يؤدي إلى نزوح المواد الفراش. هذا يختلف عن سلوك حفر نموذجي في نواح كثيرة. الأولى، وعادة ما لوحظ سلوك inchworming كما مزيج من الحلقات وليس حدثا معزولا واحد. في المقابل، قد تحدث كما حفر حركة منسقة واحدة إما الخلفيتين أو الكفوف الصدارة 3. بالإضافة إلى ذلك، الحركات inchworming تميل إلى أن تحدث أفقيا عبر الكلمة العلبة بدلا من المواقف الثابتة التي هي سمة من حفر السلوكيات. وأخيرا، فإن السلوك inchworming موضح أدناه غالبا ما يحدث في سلالة من الفئران الفطرية BTBR ولكن نادرا ما يتم تحديدها في سلالة تحكم B6، في حين السلوكيات حفر نموذجية شائعة في سلالات B6 وBTBR من الفئران <sup&gt; 10. إجراءات الاختبار inchworming الواردة في هذه الدراسة تمثل التعديلات على مستوى الأحداث التفاعل الاجتماعي بروتوكول 1. بالنظر إلى أن دفن الرخام، وحفر، واللعب الأحداث وضعت قيمة لقياس السلوك الشاذ في نماذج الماوس من ASD، يكمل السلوك inchworming هذه القياسات المحددة سابقا من السلوكيات النمطية. على وجه الخصوص، يوفر السلوك inchworming مقياسا مفيدا من أجل أقل النمطية السيارات التي يتم تحديدها عادة في ASD 8،11. بالإضافة إلى ذلك، قد يوفر هذا الإجراء inchworming جديدة الباحثين مع أداة قيمة إضافية لتحليل السلوكيات الحركية المتكررة ذات الصلة لاضطرابات النمو مثل ASD.

<table><tbody><tr><td>30 سم × 30 سم صندوق زجاجي مع غطاء</td><td></td><td></td><td>يمكن بناؤه </td></tr><tr><td>كاميرا الأشعة تحت الحمراء </td><td>Survshop (كالجاري ، ألبرتا)</td><td>كاميرا سوني CCD DP955V- 30&# 8217; قبة درع الأشعة تحت الحمراء</td><td>العثور على كاميرا ذات قدرات عالية الدقة والتكبير</td></tr><tr><td>DVR</td><td>Supercircuits (أوستن ، تكساس)</td><td>أسود من فئة Enterprise 4-Channel H.264 Security DVR مع DVD Burner</td><td>سعة بيانات عالية</td></tr><tr><td>نشارة</td><td></td><td></td> الخشب <td>نفس مواد الفراش </td></tr></tbody></table>

inchworming: رواية موتور الرتابة في btbr<em&gt; t<sup&gt; +</sup&gt; itpr3<sup&gt; فريق العمل</sup</em&gt; / j نموذج الفأر من التوحد

Inchworming: A Novel Motor Stereotypy in the BTBR T+ Itpr3tf/J Mouse Model of Autism

اضطراب طيف التوحد (ASD) هو اضطراب النمو العصبي محددة سلوكيا تتميز انخفض التفاعل المتبادل الاجتماعية، والاتصالات غير طبيعية، والسلوكيات المتكررة باهتمام المقيدة. كما يستند التشخيص على المعايير السريرية، ينبغي أن أي نماذج القوارض ذات الصلة المحتملة لهذا الاضطراب غير متجانسة من الناحية المثالية ألخص هذه الصفات السلوكية المتنوعة. وTF T + BTBR Itpr3 / J (BTBR) الفأر هو نموذج حيواني المعمول بها ASD، وعرض السلوكيات المتكررة مثل زيادة الاستمالة، وكذلك عدم المرونة المعرفية. فيما يتعلق بالتفاعل الاجتماعي والفائدة، واستخدمت اللعب اختبار الأحداث في نماذج القوارض متعددة من ASD. هنا، وتبين لنا أنه عندما يتم اختبار الفئران BTBR في الأحداث الضميمة التفاعل الاجتماعي التي تحتوي على الفراش نشارة الخشب، وأنها عرض متزامن الحركة المتكررة الحفر. هذا السلوك الحركي المتكررة، ويشار إلى &quot;inchworming،&quot; كان اسمهبسبب طبيعة الحركات النمطية التي أظهرتها الفئران بينما تتحرك أفقيا عبر الكلمة. يجب استخدام الفئران Inchworming الصدارة والخلفيتين-أطرافهم في التزامن لتهجير الفراش، وأداء الحد الأدنى من واحدة إلى الداخل وإلى الخارج حركة واحدة. على الرغم من أن كلا BTBR وC56BL/6J (B6) الفئران يحمل هذا السلوك، والفئران BTBR يبرهن على وجود أعلى بكثير مدة وتواتر inchworming والكمون انخفض لبدء inchworming عند وضعه في العلبة سريرا. فإننا نستنتج أن يوفر هذا السلوك وصفها حديثا مقياس من الرتابة الحركية المتكررة التي يمكن قياسها بسهولة في النماذج الحيوانية من ASD.

نسخة معدلة من الأحداث اختبار اللعب وصفها هنا يمكن استخدامها لمراقبة وتحليل ووصف سلوك الحفر المتكررة رواية inchworming. Inchworming يتم عرضها إلى حد أكبر بكثير من قبل الفئران BTBR من الضوابط B6. في نموذجي 10 دقيقة الدورة، سوف الفئران BTBR عرض السلوك inchworming متميزة (متزامن الداخل والخارج حركة الكفوف في محاولة لتهجير الفراش نشارة الخشب) لحوالي 5 دقائق، أو نصف فترة المراقبة. وعلاوة على ذلك، فإن الكمون إلى اللولبية للقياس هو أقصر بكثير بالنسبة للفئران BTBR - فإنها تبدأ عادة inchwor...

Inchworming هو تكرار للغاية الحركة حفر متزامن عرض من قبل BTBR T + Itpr 3TF / J (BTBR) عندما وضعت الفئران في قفص الاختبار مع الفراش نشارة الخشب كافية. الإجراء هو تعديل للبروتوكول الأحداث التفاعل الاجتماعي، ويستخدم هنا لتقييم السيارات النمطية المتكررة ذات الصلة لاضطراب طيف التوحد.

Inchworming: رواية موتور الرتابة في BTBR<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; فريق العمل</sup</em&gt; / J نموذج الفأر من التوحد

Autism Spectrum Disorder (ASD) is a behaviorally defined neurodevelopmental disorder characterized by decreased reciprocal social interaction, abnormal ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام اختبار لعب معدل للصغار من أجل رصد سلوك "دودة البوص" (inch worming)، وهو نمط حركي نمطي جديد. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق عزل كل فأر اجتماعياً قبل 12 ساعة من بدء الاختبار مع توفير الغذاء والماء بشكل مستقل. وتتمثل الخطوة الثانية في ضبط كاميرا الفيديو بزاوية 45 درجة بالنسبة لحجرة الاختبار.بعد ذلك، يتم وضع الفئران المعزولة في أزواج داخل الحظيرة حيث يتم تسجيلها بالفيديو لمدة 11 دقيقة في الظلام. وتتمثل الخطوة النهائية في تحليل سلوك "الحركة الدودية" (inch worming) من الفيديو لقياس المدة، والتكرار، وفترة الكمون لبدء هذه الحركة. وفي النهاية، تسمح هذه الطريقة بتحليل الاعتلالات العصبية الحركية ويمكن استخدامها كمؤشر لاختبار التدخلات العلاجية الجديدة.يمكن لهذه الطريقة أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال التوحد، مثل معدلات حدوث النمطيات الحركية وتنظيمها. ويعد العرض المرئي لهذا الإجراء أمراً بالغ الأهمية لتعلم المهمة لأن النمط الظاهري السلوكي يصعب تحديده، كما أن سلوك "حركة الدودة الإنشية" يحدث بطريقة سريعة ومتكررة. قم بتجهيز فئران BTBR و black six للإجراء عن طريق عزلها في أقفاص منفصلة لمدة 12 ساعة طوال الليل.قبل البدء في الاختبار، تظهر فئران BTBR المستخدمة في هذه الدراسة جميع الجوانب الرئيسية لاضطرابات طيف التوحد الموجودة في الفئران، بينما تُستخدم فئران black six كمجموعات ضابطة في يوم التجربة. ضع الفئران المعزولة في غرفة التحليل السلوكي لمدة 30 دقيقة قبل الاختبار حتى تعتاد الحيوانات على البيئة الجديدة. ثم ضع صندوقاً من البليكسي جلاس مقاس 30 في 30 سنتيمتر مع غطاء قابل للإزالة بشكل مائل على الطاولة.في غرفة الاختبار، قم بإضاءة الصندوق من الخلف باستخدام ضوء تحت أحمر لتقليل الوهج. بعد ذلك، ضع كاميرا فيديو تتميز بخاصية تقريب عالية وقدرات تصوير بالأشعة تحت الحمراء بزاوية 45 درجة، بحيث يمكنها تسجيل أرضية الحاوية بالكامل والفأر. قم بضبط تركيز الكاميرا على الحاوية لضمان إمكانية رؤية الفئران في جميع أنحاء الصندوق.بمجرد تجهيز الصندوق والكاميرا، قم بتغطية أرضية الصندوق بالكامل بفرشة من نشارة الخشب بحيث يكون عمقها حوالي بوصة واحدة. ضع فأرين من سلالة BTBR أو الفئران السوداء الستة داخل حاوية الاختبار في آن واحد، وأطفئ الأنوار في غرفة الاختبار. ثم ابدأ بتشغيل كاميرا الفيديو للتسجيل وغادر الغرفة لمنع التدخل في التجربة أو التأثير على سلوك الفئران.قم بتسجيل النشاط لمدة 11 دقيقة. وبمجرد اكتمال التسجيل، عد إلى غرفة الاختبار وأعد الفئران إلى أقفاصها الأصلية. تخلص من فرش نشارة الخشب.اغسل صندوق الاختبار بالكامل باستخدام ethanol بنسبة 70%، ثم ضع فرشة جديدة من نشارة الخشب في قاع حاوية الاختبار بعمق بوصة واحدة تقريباً. كرر الإجراء بالكامل لبقية أزواج السلالات المستهدفة وأعد الفئران إلى أقفاصها الأصلية. عند الانتهاء، وللتحقق من موثوقية بيانات قياس المسافة المقطوعة (inch worming)، كرر الإجراء في الأيام التالية باستخدام مجموعات مختلفة من أزواج السلالات المستهدفة من BTBR و black six.سيضمن ذلك عدم تأثر السلوك الملحوظ بشريك معين داخل الحاوية. قم بمشاهدة كل مقطع فيديو وتقييمه يدويًا مرتين، مرة واحدة لكل فأر لتحديد إجمالي المدة وتكرار وزمن الاستجابة للقيام بحركة دودة الإنش (inch worm) في مقاطع الفيديو.قم بتحليل كل فيديو لمدة 10 دقائق، بدءاً من النقطة الزمنية ثلاث ثوانٍ وحتى 10 دقائق. ثلاث ثوانٍ. عَرِّف حركة الدودة الإنشية (inch worming) بأنها الحركة المتزامنة، للداخل والخارج، لأقدام الحيوان الأربعة والأقدام الخلفية مع حدوث حركة واحدة على الأقل متزامنة للداخل ثم حركة لاحقة للخارج تؤدي فعلياً إلى إزاحة مادة الفرش. قم بتسجيل مدة حركة الدودة الإنشية على أنها إجمالي الوقت الذي يقضيه كل فأر في ممارسة سلوك حركة الدودة الإنشية.لتقييم هذا الجانب من حركة الدودة (inch worming)، استخدم مؤقتاً يمكن تشغيله وإيقافه. ابدأ التوقيت عندما يبدأ الفأر في حركة الدودة، وأوقف المؤقت عندما يتوقف الفأر. إذا بدأ الفأر في حركة الدودة مرة أخرى، أعد تشغيل المؤقت واستمر في تشغيله حتى يتوقف الفأر مجدداً.سيؤدي ذلك إلى إنشاء درجة مدة تدفئة البوصة تتراوح بين صفر و10 دقائق. تُعرَّف وتيرة تدفئة البوصة بأنها عدد المرات التي يمارس فيها الفأر سلوك تدفئة البوصة. وخلال فترة الملاحظة التي تستغرق 10 دقائق، يتم احتساب عدّة واحدة في كل مرة يبدأ فيها الفأر السلوك ثم يتوقف عنه.حركة الدودة الإنشية. يتم تعريف فترة الكمون لبدء حركة الدودة الإنشية بأنها الوقت الذي يمر قبل الظهور الأول لهذه الحركة. ابدأ تشغيل المؤقت عند بدء الفيديو، وأوقفه عندما يقوم الفأر بحركة الدودة الإنشية للمرة الأولى.إذا لم يظهر الفأر سلوك "الزحف الدودي" (inch worming)، يتم تسجيل زمن الاستجابة لبدء هذا السلوك بـ 10 دقائق. بعد ذلك، احسب التردد الإجمالي ومدته لهذا السلوك لكل فأر في الفيديو. ويُستخدم متوسط القيمتين للفأرين كتردد إجمالي ومدّة كلية لهذا الفيديو.بعد ذلك، حدد الوقت المطلوب لأول فأر في الزوج للقيام بسلوك الدودة الشبرية (inch worm) لحساب فترة الكُمون (latency). بالنسبة لهذا الزوج المحدد من الفئران، استبعد الفئران التي لم تظهر سلوك الدودة الشبرية طوال فترة الاختبار من مجتمع العينة، وذلك لضمان أن تكون النتائج ذات صلة بمجتمع من الفئران التي تظهر سلوك الدودة الشبرية. احسب متوسط المدة، والتكرار، وفترة الكُمون للبدء في الحفر لكل مجموعة تجريبية في التحليل، ثم استخدم اختبار Innova أو اختبارات T لمقارنة البيانات بين السلالات في المجموعات التجريبية. بعد اليوم الثاني من الاختبار، استخدم اختبار Innova للقياسات المتكررة للتأكد من عدم وجود تأثيرات ناتجة عن التجارب اللاحقة أو تأثيرات ناتجة عن الاقتران في البيانات المعروضة.فيما يلي متوسط التكرار، والمدة، وفترة الكمون لبدء حركة "الدودة الشبهية" (inchworm) التي أظهرتها أزواج من فئران BTBR وفئران black six. أظهرت سلالة BTBR تكراراً ومدة أطول بشكل ملحوظ لحركة الدودة الشبهية، بالإضافة إلى فترة كمون أقصر بكثير مقارنة بسلالة التحكم black six. وعند تكرار هذه الاختبارات مع أزواج بديلة، لم يتم العثور على فروق ذات دلالة إحصائية، مما يضمن أن التأثيرات لم تكن تعتمد على أزواج محددة من الفئران أو على تكرار الاختبارات. أثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر تسجيل حركة التجمهر (swarming) فقط عندما تكون كحركة متزامنة للداخل والخارج لأطراف الحيوان الأمامية والخلفية، وذلك بعد إتقان هذا الإجراء.يمكن إضافة طرق أخرى، مثل إعطاء الأدوية، إلى النموذج البحثي لبحث أسئلة إضافية مثل الأهداف العلاجية للسلوكيات النمطية.

inchworming-novel-motor-stereotypy-btbr-t-itpr3tfj-mouse-model

Research

JoVE Journal

Behavior

سلوك

يوضح هذا الفيديو استخدام مقايسة الحركة الشعاعية لتقييم الخلل الحركي في C. ايليجانس يعبر عن بروتين TDP-43 البشري من النوع البري أو ALS. يسمح للديدان ذات المستويات المتفاوتة من التعبير TDP-43 من النوع البري أو المتحور بالزحف ، ويتم قياس حركتها بالمسافة الشعاعية المقطوعة من النقطة المركزية على لوحة الفحص. يميز الاختبار بين الإعاقات الحركية الخفيفة والمتوسطة والشديدة بناء على المسافة التي تقطعها سلالات C. ايليجانس.

تقييم الضعف الحركي في نماذج C. ايليجانس باستخدام مقايسة الحركة الشعاعية

يمكن أن يكون للمرض وإصابة الرأس والتعديلات الجينية وعلاج الفئران بالمخدرات آثار عميقة على السلوك. باستخدام مناهج جيدة الوصف والتحقق من صحتها مثل دفن الرخام وتقطيع النستله ، يمكن توثيق السلوكيات الشبيهة بالقهرية بدقة في الفئران كنماذج لاضطراب الوسواس القهري البشري واضطراب طيف التوحد.

دفن الرخام وتقطيع نستليت كاختبارات للسلوكيات المتكررة الشبيهة بالقهر في الفئران

تصف هذه المقالة تقنية تصوير الفيديو ورسم الخرائط الزمانية المكانية عالية الدقة لتحديد التغيرات في التنظيم العصبي لحركة القولون في الفئران البالغة. يمكن اكتشاف التأثيرات الدقيقة على وظيفة الجهاز الهضمي (GI) باستخدام هذا النهج في مستحضرات الأنسجة المعزولة لتعزيز فهمنا لمرض الجهاز الهضمي.

التصوير الفيديو وخرائط الزمانية المكانية لتحليل الجهاز الهضمي على الحركة في الفئران

تستخدم الأصوات بالموجات فوق الصوتية للفأر &lt; p class = 'jove_content'&gt; كوكلاء لنمذجة الأسس الجينية لعجز الاتصال الصوتي في نماذج الفئران للاضطرابات العصبية والنفسية. يصف البروتوكول الحالي ثلاثة سياقات تجريبية تثير بشكل موثوق أصواتا بالموجات فوق الصوتية من الجراء (طوال فترة التطور) والفئران البالغة (التفاعلات من نفس الجنس ، وتفاعلات الإناث بين الذكور والشبق).

تسجيل الفأر بالموجات فوق الصوتية لتقييم الالفاظ التواصل الاجتماعي

السلوكيات المقيدة والمتكررة (RRBs) تعطل حياة الأفراد المصابين.  يصعب نمذجة هذه السلوكيات في القوارض ، مما يجعل البحث الطبي الحيوي الأساسي في العلاجات أو التدخلات المحتملة للوائح الراديو.  نصف هنا استكشاف الأشياء الجديدة على أنه اختبار محتمل ل RRBs ذات الترتيب الأعلى في الفئران.

رواية استكشاف كائن باعتباره الفحص المحتملة لالعالي ترتيب المتكرر السلوك في الفئران

نحن نقدم بروتوكولات لتوليد نماذج تجريبية حادة ومزمنة للتعبير عن التشنج اللاستيكي في الفئران التي تتصرف بحرية. وتستند النماذج على زرع القنية سترياتال و GABAاللاحقة تطبيق خصم. يستخدم النموذج الحاد الحقن العابرة في حين يستخدم النموذج المزمن التسريبات المطولة عبر مضخة صغيرة التناضح المزروعة تحت الجلد.

توليد نماذج تجريبية حادة ومزمنة للتعبير الحركي في الفئران

يصف هذا البروتوكول اثنين من المقايسات الحساسة للتمييز بين خفيفة, معتدلة, وضعف الحركة الشديدة في نماذج C. elegans من التصلب الجانبي الضموري, مع فائدة عامة لسلالات C. elegans , مع تغيير الحركة.

تقييم ضعف المحرك في نماذج C. elegans من التصلب الجانبي الضموري

تقدم هذه المخطوطة مجموعة من الاختبارات السلوكية القابلة للتكرار للتحقق من صحة نموذج فأر متلازمة أنجلمان.

التوصيف السلوكي لنموذج فأر متلازمة أنجلمان

يرتبط اضطراب طيف التوحد (ASD) بضعف السلوك الاجتماعي والتواصلي وظهور السلوك المتكرر. لدراسة العلاقة المتبادلة بين جينات ASD والعجز السلوكي في نموذج ذبابة الفاكهة ، تم وصف خمسة نماذج سلوكية في هذه الورقة لفحص التباعد الاجتماعي ، والعدوان ، والمغازلة ، والاستمالة ، وسلوك التعود.

نماذج للتقييم السلوكي في نموذج ذبابة الفاكهة لاضطراب طيف التوحد

نماذج القوارض هي أدوات قيمة لدراسة السلوكيات الأساسية المتعلقة باضطراب طيف التوحد (ASD). في هذه المقالة ، نوضح اختبارين سلوكيين لنمذجة السمات الأساسية لاضطراب طيف التوحد في الفئران: الاستمالة الذاتية ، التي تقيم السلوك المتكرر ، واختبار التفاعل الاجتماعي المكون من ثلاث غرف ، والذي يوثق الإعاقات الاجتماعية.

استراتيجيات تقييم السلوكيات الشبيهة بالتوحد في الفئران

يصف هذا البروتوكول فحصا سلوكيا لتقييم الهيمنة الاجتماعية في القوارض باستخدام اختبار الأنبوب. تظل الهيمنة الاجتماعية مستقرة بمرور الوقت ، وتظهر العديد من نماذج الاضطرابات التنموية والعصبية تشوهات قوية في الهيمنة الاجتماعية. لذلك ، يعمل اختبار الأنبوب كمقياس مناسب للنتائج للدراسات الميكانيكية أو الفحص العلاجي قبل السريري.

تقييم الهيمنة الاجتماعية في نماذج الفئران باستخدام اختبار الأنبوب

تعلم تقييم السلوك الحركي المتكرر في فئران BTBR باستخدام اختبار اللعب المعدل. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة السلوكيات الستيريوتيبية المرتبطة بطيف التوحد.

Inchworming: رواية موتور الرتابة في BTBR

استكشف المزيد من الفيديوهات