تحديد النوعية من الأحماض الكربوكسيلية، الأحماض Boronic، والأمينات طريق Fluorophores صليبي

الهدف العام من هذا الإجراء هو استخدام أربعة نباتات جزيئية صغيرة تعتمد على ما يسمى بالهندسة الصليبية لتحليل التحليلات وتمييزها نوعيا من عدة فئات مركبة. يتم تحقيق ذلك من خلال تحضير حلول هذه المستشعرات الصليبية أولا في العديد من المذيبات المختلفة ، وبالتالي الاستفادة من انبعاثها المعتمد على المذيبات بشكل كبير. تتمثل الخطوة الثانية في تعريض هذه المحاليل للمواد التحليلية ذات الأهمية ، بما في ذلك الأحماض الكربوكسيلية أو الأحماض العقدية أو الأمينات العضوية ، والتي يمكن إضافتها إما كمواد صلبة أو في محلول.

بعد ذلك ، يتم تشعيع محاليل تحليل المستشعرات المدمجة تحت ضوء فوق بنفسجي 365 نانومتر ، مما يتسبب في انبعاث الضوء في المنطقة المرئية. يتم تصوير ألوان الانبعاث هذه باستخدام إعداد التصوير الرقمي القياسي. الخطوة الأخيرة هي إنشاء لوحات ألوان الانبعاث ، والتي تستخدم للكشف عن الاختلافات النوعية في انبعاث حلول التحليلات المختلفة.

في النهاية ، ستكون طريقة التألق هذه مفيدة للتعرف السريع على التحليلات الشائعة في الصناعات الدوائية والغذائية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل الكروماتوغرافيا هي أنها يمكن أن تحلل بشكل مباشر التحليلات شديدة القطبية دون الحاجة إلى قرار مشتق. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال مراقبة الجودة الروتينية حيث يمكن استخدامها لتحديد ما إذا كانت التركيبة المحددة جيدا أصلية أو تم اختراقها بسرعة.

العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا بالغ الأهمية لأن الطريقة نفسها تستخدم الكشف البصري وبسبب تطبيقها النهائي ستشمل مشغلين غير متخصصين. سيتم توضيح الإجراء من Abel من مختبر Buns في هايدلبرغ و Rio Color Lire من مختبري في جامعة هيوستن. يقوم كلا طلاب الدراسات العليا أولا بإعداد محاليل مخزون جديدة من الصليبيين من واحد إلى ثلاثة بتركيز 50 ملليغرام لكل 10 ملليلتر ، ثنائي كلورو ميثان ، ويوضع جانبا.

قم بوزن 500 ملليغرام من تحليل حمض الكربوكسيل في ستة قوارير DR سعة 16 مليلتر وأضف 16 ملليلترا من أسيتات إيثيل ثنائي كلورو الميثان أو أسيتونيتريل nn أو كحول ثنائي ميثيل فورماميد أو إيزوبروبيل أو الميثانول. بعد ذلك ، أضف 20 ميكرولترا من محلول المخزون الصليبي إلى كل قارورة وقم بهز القارورة إذا كانت غير متجانسة ، واسمح للمحلول المقابل بالاستقرار. ضع القوارير غير المغطى على لوح زجاجي أسفل مصباح الأشعة فوق البنفسجية مع مسافة بين عدسة الكاميرا وقوارير العينة 60 سم.

قم بتشغيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية وأطفئ ضوء الغرفة. التقط صورا متغيرة أوقات التعريض الضوئي من 0.25 إلى 15 ثانية لكل حل لإنتاج صور تعكس لون المغفرة. بعد ذلك ، قم بإعداد 1.0 في 10 إلى المحلول المولي الرابع السالب للصليب أربعة في دي كلورو ميثان واتركه جانبا.

بعد ذلك ، قم بإعداد خمسة حلول فردية لكل تحليل حمض الأونيك عن طريق إذابة 50 ملليغرام من المادة التحليلية في ثلاثة ملليلتر لكل من الأسيتونيتريل. 1 ، 2 ، 4 ، ثلاثي كلورو بنزين ثنائي كلورو الميثان ، سيكلو هاين ، وكلور بنزين. انقل 1.8 مل من كل محاليل من المحاليل التحليلية إلى خمسة أكواط كوارتز منفصلة مقاس 10 × 10 ملم.

ثم أضف 20 ميكرولترا من المحلول الصليبي المعد مسبقا في كل من الكوفيتات الخمسة وحرك المحاللين للتجانس. إذا لوحظ أي هطول للأمطار ، اترك الحل المقابل يستقر. ضع جميع الأطباء البيطريين الخمسة في Q على طبق زجاجي وقم بإشعاعهم من الأعلى.

باستخدام مصباح الأشعة فوق البنفسجية المحمول باليد 365 نانومتر ، تأكد من أن الغرفة مظلمة والتقط على الفور صورة رقمية لألوان انبعاث المحاليل بمسافة بين عدسة الكاميرا والكوفيتات 45 سم وسرعة مصراع تبلغ 0.5 ثانية. بعد ذلك ، قم بإعداد ما لا يقل عن 80 ملليلترا لكل منها 1.0 في 10 إلى المحاليل السالب ستة مولية من الصليبي أربعة في الأسيتونيتريل 1 2 4 ، ثلاثي كلورو البنزين ، سيكلوهكسان ثنائي كلورو الميثان والكلوروفورم يذيب 152.6 ملليغرام من اثنين من ستة حمض الكلوروفيل القديم في 40 ملليلتر من كل من المحاليل الصليبية. قم بإذابة 97.6 ملليغرام من حمض فينيل أونيك بشكل منفصل في 40 مل من كل من المحاليل الصليبية.

ثم قم بإذابة 40 ملليغرام من تحليل الأمين المطلوب إلى ملليلترين من كل محلول صليبي حمض الأونيك. لكل تحليل أمين ، قم بإعداد خمسة محاليل مع اثنين من حمض الأونيك ثنائي الكلوروفيل وخمسة محاليل بحمض فينيل أونيك كإضافات. انقل حصصات المحاليل ال 10 المحضرة إلى 10 كوفيت كوارتز منفصلة.

ضع المجموعتين الخمسة على صفيحة زجاجية تشع على ارتفاع 365 نانومتر بواسطة الأشعة فوق البنفسجية المحمولة وقم بالتصوير على الفور باستخدام الإعدادات الموضحة سابقا باستخدام برنامج معالجة الصور. قم بقص مقطع مربع تمثيلي من الصور الرقمية لألوان الانبعاث لكل قارورة مصورة. ثم قم بتنظيم هذه القواطع في لوحات مشابهة لتلك الموضحة هنا.

إذا كان التقدير الكمي للاختلافات في لون الانبعاث مطلوبا ، فقم باستخراج قيم حمراء خضراء زرقاء من الألواح ثم معالجتها إحصائيا للحصول على انحرافات معيارية نسبية لألوان الانبعاث لأحد المواد التحليلية بالنسبة إلى أخرى. استخدم المعادلة التالية. أخيرا ، استخدم المعادلة لتحديد تحليلات حمض الكربوكسيل غير المعروفة ولتحديد الانحراف بين المادة التحليلية المجهولة لجميع مواد مجموعة بيانات المعايرة باستخدام الفلور الصليبي من واحد إلى ثلاثة في ستة مذيبات مختلفة ، وجد أن استجابات الفلورسنت تعتمد على التركيز والهوية الهيكلية لحمض الكربوكسيل المصور.

فيما يلي لون الانبعاث المسجل رقميا لجميع تركيبات حمض الكربوكسيل المذيبات الأربعة للنباتات. تعرض هذه المصفوفة 18 لونا مميزا للانبعاث لكل مادة تحليلية ، والتي يمكن استخدامها لتوصيف وتحليل فريد باستخدام قيم اللون الأحمر والأخضر والأزرق للون. يمكن تمييز جميع التحليلات بالنسبة للأحماض الكربوكسيلية ، من واحد إلى 10 وتحديدها كما هو موضح في مخطط الارتباط التلقائي هنا باستخدام إجراء مماثل تماما.

تمييز الأحماض العقدية من B من واحد إلى B تسعة بسهولة عن بعضها البعض باستخدام الشكل الصليبي الرابع كما يتضح من لوحة ألوان الانبعاث والرسم البياني للارتباط الموضح هنا. يتم تحقيق تحليل الأمينات باستخدام مجمعين متشكلين في الموقع من أربعة صليبيين مع فائض كبير من إضافات حمض الأونيك ، وحمض الأونيك ثنائي الكلوروفيل وحمض فينيل أونيك. يمكن لهذه المجمعات التي تختلف ألوان انبعاثها عن تلك الموجودة في الشكل الصليبي النقي أن تستجيب لتحليلات الأمين بطريقتين.

تعني أكثر أساسية من البيورين تحل محل الشكل الصليبي الرابع من مجمعاتها مع إضافات حمض الأونيك ، وبالتالي تجديد ألوان الانبعاث من أربعة صليبية نقية غير معقدة. من ناحية أخرى ، يبدو أن الأنواع الأقل أساسية ترتبط بمركب حمض الأونيك الصليبي دون تدميره ، وينتج عن هذا الحدث تعديل انبعاث مضان المجمعات. لذلك ، تتميز منهجية الاستشعار غير المباشرة بتأثير التسوية حيث لم يعد من الممكن تمييز التحليلات فوق عتبة معينة عن بعضها البعض بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحليل الأحماض الكربوكسيلية وأحماض الباروني والوسائل باستخدام إعداد بسيط يستخدم قوة الإنفلونزا الصليبية في مجموعة من عدة مذيبات مختلفة. لا تنس أن العمل مع المذيبات العضوية ومصابيح الأشعة فوق البنفسجية يمكن أن يكون خطيرا ويجب دائما اتخاذ الاحتياطات مثل استخدام الغرف والنظارات الواقية جيدة التهوية من خلال تنفيذ هذا الإجراء.