أساليب لدراسة آليات عمل المضادة للذهان من أدوية في

الهدف العام من هذا الإجراء هو فحص تأثيرات الأدوية المضادة للذهان على تطور ضخ البلعوم لألجان البحر. يتم تحقيق ذلك عن طريق زيادة عدد الديدان الخيطية البالغة أولا وتوليد مجموعة متزامنة من. الخطوة التالية هي نقل البويضات المتزامنة أو البالغين إلى لوحات فحص مخدرات.

الخطوة الأخيرة هي مراقبة وتسجيل آثار الأدوية على الديدان. في النهاية ، يمكن أن تظهر النتائج أن الأدوية المضادة للذهان تؤخر النمو وتمنع ضخ البلعوم في المعرضة للأدوية. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لآليات عمل الأدوية المضادة للذهان ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا لدراسة الجزيئات الصغيرة الأخرى وحتى الجزيئات الكبيرة مثل الدهون التي تحتوي على دواء جاهز بتركيز عمل معروف.

ابدأ بتحميل صفيحة 12 بئر مع ملليلترين من NGM ، متوسطة لكل بئر. ضع الطبق جانبا ليتجمد في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اختر مستعمرة من بكتيريا OP 50 وانقلها إلى زجاجة 50 ملليلتر من ثقافة LB.

البكتيريا بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية مع اهتزاز في 220 دورة في الدقيقة في اليوم التالي في كل بئر من اللوحة المعدة. عند 20 ميكرولترا من الثقافة البكتيرية ، اضبط اللوحة على الحضانة طوال الليل عند 37 درجة مئوية في اليوم التالي. قم بتحميل كل جالس جيدا ب 80 ميكرولتر من الدواء ذي الأهمية بتركيز العمل.

في هذه الحالة ، الدواء هو C Clozapine. تأكد من دوامة المحلول قبل أخذ الحصص العليا. قم بتدوير المحلول لتوزيعه بالتساوي في البئر واتركه يمتص في درجة حرارة الغرفة مع إغلاق غطاء اللوحة.

ثم تابع الفحص أو قم بتخزين اللوحة عند 20 درجة مئوية طوال الليل وابدأ الفحص في اليوم التالي. ابدأ بجمع البيض من النمط الجيني محل الاهتمام. ابدأ بمجموعة من الديدان مع العديد من البالغين الوراثيين.

اغسل الديدان في صفيحة 3.5 سم باستخدام المخزن المؤقت M تسعة. ثم قم بتدويرها في أنبوب سعة 15 مليلتر بسرعة 2000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة. قم بإزالة المادة الطافية عن طريق الشفط واستبدلها بخمسة ملليلتر من المبيض.

ثم قم بتعطيل البالغين برفق عن طريق قلب الأنبوب وانتظر حتى تبدأ في الذوبان باستمرار. راقب الديدان الذائبة تحت النطاق. عندما يذوب حوالي نصف الديدان.

بعد حوالي خمس دقائق ، قم بتدوير الأنبوب لجمع البيض ، وشفط المادة الطافية ، واستبدله بسرعة بمخزن مؤقت M تسعة. ثم قم بتدوير الأنبوب لأسفل مرة أخرى كما كان من قبل وقم بإزالة كل ما عدا حوالي 100 ميكرولتر من M 9 طافية. لتعليق البيض ، قم بدوامة الأنبوب.

ثم انقل ميكرولترين من التعليق إلى لوحة NGM واحسب عدد البيض المنقول. ثم قم بتحميل الصفيحة المعالجة بالمخدرات ب 30 إلى 35 بيضة لكل بئر واحتضان الطبق عند 20 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، سجل عدد البيض المفرغ.

في حالة وجود أكثر من 25 دودة في أي منها ، قم بإزالة الديدان الزائدة جيدا. أعد الديدان الموجودة على الطبق إلى الحاضنة للمراقبة اللاحقة على فترات 24 ساعة كل يوم ، وقم بتسجيل مرحلة نمو الديدان في الآبار بناء على حجم الديدان وشكل الفرج. عادة ما تظهر تأثيرات قوية في اليومين الثالث والرابع.

يجب أن تستمر التجربة حوالي أسبوع. بالنسبة لهذا البروتوكول ، أعدت لوحات اختبار المخدرات كما هو موضح سابقا في اليوم السابق ، وبدء الفحص. اختر 50 لترا من ذات المراحل الأربع لكل نمط وراثي في التجربة.

انقلها إلى ألواح NGM واحتضن الألواح لمدة 24 ساعة عند 20 درجة مئوية. في اليوم التالي ، كل 15 إلى 20 دقيقة ، قم بتحميل بئر اختبار مع 10 بعد تعرض مجموعة للدواء لمدة نصف ساعة. ابدأ في مراقبة ضخ البلعوم تحت مجهر التشريح.

أولا ، ابحث عن دودة ، ثم عد مضخاتها البلعومية لمدة 20 ثانية. بمجرد التسجيل ، التقط الدودة من اللوحة. سجل جميع الديدان في البئر بنفس الطريقة.

النتائج المتوقعة لإجراء التأخير التجريبي. يجب أن يظهر اختبار الفتك مع عناصر التحكم في النوع البري أنه على عكس معدل النمو النموذجي في مرحلة القبر والبلوغ ، فإن المعرضة ل C clozapine لا تزال في مراحل اليرقات الصغيرة أو ميتة تختبر طفرات على تركيزات مختلفة من الكلوزابين كشفت عن طفرات مثبطة مثل كتم الصوت واحد والطفرات المحسنة مثل MU two. عالميا ، كانت فتاكة كتم الصوت أقل من النوع البري ، وكانت فتاكة MU two أعلى كما هو متوقع مقارنة بالتحكم في الباقية على قيد الحياة ، في حين أن اثنين من الناجين الصامتين يتأخران أكثر.

كشفت الفحص الإضافي أن التعرض للكلوزابين قلل من معدلات ضخ البلعوم بطريقة تعتمد على التركيز. ومع ذلك ، فإن المعدل المنخفض للكتم الأول كان أقل من النوع البري ، في حين أن المعدل المنخفض لكتم الصوت كان أكبر من النوع البري. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إجراء فحص الأدوية المضادة للذهان على نطاق صغير.

يمكن أيضا توسيع نطاق الرسالة لإجراء فحص جيني واسع النطاق.