Methods to Identify the NMR Resonances of the <sup>13</sup>C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

Kevin J. Roberson; Pamlea N. Brady; Michelle M. Sweeney; Megan A. Macnaughtan

doi:10.3791/50875

طرق تحديد رنين الرنين المغناطيسي النووي ل 13C-dimethyl N-terminal amine على البروتينات...

JoVE Journal
Chemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Chemistry

Methods to Identify the NMR Resonances of the ¹³C-Dimethyl N-terminal Amine on Reductively Methylated Proteins

طرق تحديد رنين الرنين المغناطيسي النووي ل 13C-dimethyl N-terminal amine على البروتينات الميثيلية المختزلة

Full Text

6,649 Views

13:59 min

December 12, 2013

DOI: 10.3791/50875-v

Kevin J. Roberson¹, Pamlea N. Brady¹, Michelle M. Sweeney¹, Megan A. Macnaughtan¹

¹Department of Chemistry,Louisiana State University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

< p class = "jove_content" > يتم وصف طريقتين لتعيين إشارات الرنين المغناطيسي النووي α و ε-dimethylamine ليسين N-terminal N ¹³ميثيلا مختزلا. تستخدم إحدى الطرق الانتقائية الناجمة عن الأس الهيدروجيني لتفاعل المثيلة الاختزالي ، والأخرى تستخدم أمينوببتيداز لإزالة اللايسين الطرفي N بشكل انتقائي.

الهدف العام من هذا الإجراء هو تعيين كربون ألفا وإبسيلون. 13 رنين ثنائي ميثيل أمين الرنين المغناطيسي النووي لليسين الطرفي النهائي ، بقايا الليزوزيم. يتم تحقيق ذلك عن طريق ميثيل الليزوزيم المختزل أولا عند درجة الحموضة المنخفضة والمرتفعة ، مع كمية هندسية فرعية من الكربون 13 فورمالديهايد.

الخطوة الثانية هي ميثيل عينات الأس الهيدروجيني المنخفضة والعالية بشكل مختزل مع وفرة طبيعية زائدة للفورمالديهايد لإكمال الميثيلة. الخطوة الأخيرة هي تبادل العينات الميثيلية المختزلة في المخزن المؤقت D two O لتحليل الرنين المغناطيسي النووي. في الطريقة الثانية ، يتم تحقيق الهدف عن طريق تحلل الببتيداز الأميني لعينة الليزوزيم.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos