نماذج التفاعل بين الجينات والبيئة لكشف آليات الحساسية في مرض باركنسون

الهدف العام من التجربة التالية هو فهم دور الإنزيمات المتساوية لليبوكيسجيناز في التنكس المخططي الأسود المرتبط بمرض باركنسون. ولتحقيق ذلك، يتم تحضير سم عصبي يُحدث إصابة في المادة السوداء بعناية. بعد ذلك، تُحقن الفئران التي تعاني من نقص في إنزيمات الليبوكسيجيناز بمحلول MPTP يومياً لمدة أربعة أيام متتالية، ثم يتم الفحص بعد سبعة أيام من الحقنة الأخيرة.

تُجمع العينات وتُستخدم للتحليل الكيميائي الحيوي أو التحليل النسيجي المناعي. وتظهر النتائج أن 1215 locks لا تؤثر على سمية MPTP في المخطط الأسود. ومع ذلك، تساهم five locks في حدوث التلف في ظل ظروف السمية.

يمكن لطريقة TS أن تساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال مرض باركنسون. وتطرح تساؤلاً حول تأثير التفاعلات بين الجينات والبيئة على عرضة nistri. وباستخدام نماذج التفاعل بين الجينات والبيئة، تمكنا من تمييز الوظائف الانتقائية لـ ISO واكتساب رؤى حول ثنائية five lipes.

يجب على الموظفين المدربين تدريباً مناسباً ارتداء معدات الوقاية الشخصية الملائمة طوال الإجراء التالي. ابدأ بإجراء جميع الحسابات اللازمة لتحضير محلول الذيفان العصبي. بعد ذلك، قم بتجهيز جميع المعدات والمستلزمات والكواشف المطلوبة.

بالإضافة إلى ذلك، وفر المواد اللازمة للتعامل مع أي انسكابات محتملة. قم بتغطية المنطقة المحيطة بالميزان بقطع امتصاص أو مناشف ورقية. ولتقليل المخاطر الناجمة عن المسحوق المنسكب، احتفظ بالمناديل ومحلول مبيّض بتركيز 10% في مكان قريب كإجراء احترازي.

عندما تكون مستعداً، أخرج القارورة المصدر من موقع التخزين المناسب. ضع ملصقاً على القارورة الزجاجية التي تحتوي على MPTP موضحاً عليه التركيز والتاريخ. باستخدام ميزان تحليلي موجود داخل خزانة استخلاص الأدخنة، زِن 50 milligrams من MPTP في قارورة زجاجية ذات احتواء ثانوي تحتوي على منديل مبلل بمحلول bleach بتركيز 10%.

بعد ذلك، أغلق القارورة المصدر وامسح الجزء الخارجي منها ببطء بمحلول مبيض بتركيز 10%. أضف 13.763 milliliters من المحلول الملحي المعقم إلى القارورة وأغلقها قبل المزج التام داخل خزانة السلامة الحيوية. قم بترشيح وتعقيم محلول MPTP بعناية ونقله إلى قارورة حقن مُعلمة موضوعة داخل حاوية ثانوية تحتوي على منديل مبلل بمحلول مبيض بتركيز 10%.

من أجل تقليل الضغط، قم بفك غطاء القارورة التي تحتوي على محلول MPTP المُرشح قليلاً. نظف أي انسكابات باستخدام منديل مبلل بالمبيض، وتخلص من المواد المستخدمة في حاوية نفايات بيولوجية خطرة مصنفة بشكل مناسب. احتفظ بالقارورة التي تحتوي على محلول MPTP داخل حاوية ثانوية مع منديل مبلل بالمبيض لنقلها إلى غرفة إجراءات الحيوانات.

ضع قارورة مصدر MPTP في الحاوية الثانوية الخاصة بها وأعدها إلى موقع التخزين المناسب. وأخيراً، قم بتطهير الملعقة والميزان التحليلي وسطح غطاء سحب الغازات لمدة 10 دقائق باستخدام محلول مبيض بتركيز 10%.

قبل حقن الحيوانات، قم بتجهيز أقفاص ذات استخدام واحد مزودة بأغطية مثقبة ومصفاة. وُضع علامة MPTP. أدخل بطانات الأقفاص المخصصة للاستخدام الواحد، وكريات الطعام المبللة مسبقاً، والهيدروجيل كمصدر للمياه.

بعد ذلك، يتم وزن جميع الحيوانات وتسجيل حجم محلول MP TP المطلوب لحقنة بجرعة 15 milligram per kilogram. وعند الجاهزية، يجب توخي الحذر الشديد أثناء تثبيت الفأر فوق وسادة امتصاص مخصصة للتخلص منها وحقن محلول MPTP. تكرر هذه العملية يومياً لمدة أربعة أيام، مع وضع الإبرة مباشرة في حاوية مخصصة وموسومة للمواد الحادة ذات الخطورة البيولوجية الخاصة بـ MPTP دون إعادة تغطيتها.

احتفظ بمحلول مبيض بتركيز 10% ومناديل ورقية في مكان قريب. لتنظيف أي قطرات زائدة غير مقصودة، ضع الحيوانات المحقونة بـ MPTP في الأقفاص المخصصة للتخلص منها والتي تم تحضيرها مسبقاً، واحتفظ بها على رفوف مفتوحة. بعد ذلك، ابدأ مرحلة ما بعد حقن MPTP.

استخدم اللافتات التحذيرية على الرف وعلى باب غرفة الإيواء حتى مرور 72 ساعة بعد آخر عملية حقن. قم بتطهير سطح العمل باستخدام المبيض. بعد كل عملية، تخلص من محلول MPTP المتبقي عن طريق إضافة حجم مكافئ من المبيض بتركيز 10%.

وللتخلص من هذه المواد كنفايات سائلة ذات مخاطر بيولوجية، يتم التخلص من جميع معدات الوقاية الشخصية المستخدمة في حاويات التخلص المخصصة، مع الرش بمحلول مبيّض بتركيز 10% قبل التخلص منها إذا لزم الأمر. خلال هذا الإجراء، من المهم فحص الحيوانات بانتظام وتجديد الطعام والماء يومياً. وبعد ثلاثة أيام من الحقنة الأخيرة، يتم التخلص من جميع المواد وإعادة الحيوانات إلى أقفاص الإيواء العادية.

في نقاط زمنية تجريبية محددة مسبقاً، يتم استعادة الحيوانات لحصد الأنسجة ومعالجتها. استُخدمت عينات متجانسة من Stri AAL لقياس مستويات الدوبامين في الفئران من النوع البري والفئران التي تعاني من نقص five locks والمعالجة إما بمحلول ملحي أو بـ MPTP. في المجموعات المعالجة بالمحلول الملحي، كان هناك تأثير للنمط الجيني على مستويات DA، حيث ظهرت مستويات أقل من DA في الفئران المعدلة وراثياً. ومع ذلك، بعد العلاج بـ MPTP، كانت الفئران التي تعاني من نقص five locks محمية ضد استنزاف SAL DA.

أظهرت الفئران التي تعاني من نقص خمسة أقفال (locks knockout) في مجموعة MPTP مستويات مماثلة من DA مقارنة بالفئران التي تعاني من نقص خمسة أقفال في مجموعة المحلول الملحي. وفي المقابل، لم يلعب النمط الجيني للفئران التي تعاني من نقص 1215 locks دوراً في مستويات الدوبامين بغض النظر عن مجموعة العلاج. وكشف التلوين المناعي الفلوري لـ TH و GFAP في المادة السوداء عن وجود عدد أقل من أجسام الخلايا الموجبة لـ TH، والمشار إليها بالنجمة، وزيادة في التفاعل المناعي لـ GFAP في مجموعة MPTP من النوع البري. كما كشف تلوين DAB للخلايا الدبقية الصغيرة عن أجسام خلوية متفرعة وزوائد تفرعية طويلة في الفئران المعالجة بالمحلول الملحي، بينما لوحظت خلايا دبقية صغيرة منشطة ذات أجسام خلوية مستديرة وزوائد قصيرة وسميكة في الفئران المعالجة بـ MPTP. وقد قدمت لطخة المناعة لـ SAL و TH و GFAP أدلة إضافية على الضرر والالتهاب العصبي الناتج عن تحدي MPTP.

تضاءلت هذه التأثيرات في الفئران الخمسة التي تعاني من نقص في locks isy. ونظراً لأن العمل باستخدام MPTP قد يكون خطيراً للغاية، يجب دائماً اتخاذ الاحتياطات اللازمة عند تنفيذ هذا الإجراء، مثل ارتداء معدات الوقاية الشخصية وتوفير 10%bridge في المتناول للتعامل مع أي طوارئ.