تحليل مجسم الفيديو لنقص الأكسجين الرئوي من الشرايين داخل الرئة باستخدام مورين الدقة قطع شرائح الرئة

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحليل تضيق الأوعية الرئوية الناجم عن نقص التأكسج للشرايين الرئوية المتطابقة بأقطار داخلية تتراوح من 20 إلى 100 ميكرون. يتم تحقيق ذلك عن طريق ملء المسالك الهوائية للرئتين أولا بنقطة انصهار منخفضة. الخطوة الثانية هي استخدام هزاز لتقطيع الرئتين المعزولات إلى شرائح بسمك 200 ميكرون.

بعد ذلك ، تتم إزالة الحضن من أقسام الرئة عن طريق الحضانة في 37 درجة مئوية ، وهو وسط دافئ ، وهو فقاعات بغاز نورموكسيك. لذلك تتحرك الأقسام ببطء في السائل. ثم يتم نقل قسم الرئة الفردي إلى تدفق عبر غرفة الصخ الفائق ، متبوعا بتحليل مورفومتري بالفيديو لتفاعل الأوعية الدموية للشريان المقطع.

في النهاية ، يتم تقييم التغييرات في المنطقة اللمعوية للوعاء استجابة للعلاجات المختلفة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل الفحص المجهري داخل الحيوية للأوعية الدقيقة تحت الجنبة ، هي قياس التوتر الوعائي في الشرايين الرئوية القريبة المعزولة هي أنها تسمح بالتحليل الكمي لتفاعل VA للشرايين داخل الرئة بأقطار تتراوح بين 20 و 100 ميكرومتر. سيتم توضيح الإجراء آنا غولدنبرغ واثنين من الفنيين في هذا المختبر.

مباشرة بعد قتل الفأر عن طريق خلع عنق الرحم ، افتح تجويف البطن ، وحرك الحلقات المعوية جانبا واقطع الأوعية البطنية الكبيرة للنزيف. بعد ذلك ، استخدم مقصا ناعما لاختراق الحجاب الحاجز. يؤدي هذا إلى انهيار الرئتين نتيجة دخول الهواء إلى التجويف الجنبي.

استمر في القطع لفصل الحجاب الحاجز عن الفتحة الصدرية السفلية. الآن قطع الضلوع والترقوة بشكل جانبي. لإزالة الجزء البطني من القفص الصدري ، أخرج الغدة الصعترية.

املأ حقنة بمحلول نضح دافئ. بعد ذلك ، قم بقطع ثقب صغير في البطين الأيسر للقلب. اضبط تدفق المخزن المؤقت للتروية وقم ببث الأوعية الدموية الرئوية ببطء عبر البطين الأيمن حتى تظهر الرئتان أبيضان.

بعد ذلك ، قم بإزالة الغدد اللعابية والعضلات الصغيرة والأنسجة الضامة من القصبة الهوائية. افصل القصبة الهوائية عن النسيج الضام المحيط وأدخل قطعة من قطن الخياطة بين المريء والقصبة الهوائية لربطها لاحقا. ثم استخدم مقصا صغيرا لقطع ثقب صغير في الجزء العلوي من القصبة الهوائية بين غضروفين مجاورين في القصبة الهوائية.

بعد ملء حقنة ب 37 درجة مئوية ، agros دافئة ومنخفضة نقطة انصهار ، قم بتوصيلها بقنية بلاستيكية مرنة وادفع المكبس ببطء حتى يتم إزالة الهواء من القنية. أدخل القنية في الفتحة الصغيرة في القصبة الهوائية وثبتها بعناية في مكانها بخياطة القطن. بعد ذلك ، املأ الشعب الهوائية ببطء بالعروق وراقب الرئتين.

في البداية ، تبدأ الرئة اليمنى في التمدد ، تليها الرئة اليسرى. بعد 30 إلى 40 ثانية ، تكتمل عملية التعبئة ويتم نفخ كلتا الرئتين إلى حجم مماثل للحالة في الجسم الحي ، وهو حوالي 1.2 إلى 2.0 ملليلتر. اعتمادا على الجنس والعمر والوزن ، من المهم حقن وردة البيضة بسرعة كافية حتى لا تتصلب أثناء العملية ، ولكن ليس بالسرعة التي تؤدي إلى تلف الرئتين.

بعد ملء الرئتين في وقت واحد ، اسحب القنية البلاستيكية واربط القصبة الهوائية بقطن الخياطة لمنع تسرب القصبة الهوائية. بعد ذلك ، قم بقطع القصبة الهوائية فوق الرباط ولفصل الرئتين والقلب عن الصدر ، انقل الأعضاء إلى أكوام جليدية باردة من الجرس المؤقتة لترسيخ agros ، وهو ما يحدث في غضون بضع دقائق أثناء الانتظار. استخدم الغراء الفائق لربط قطعة من فلين الشمبانيا بحامل عينة الهزاز ليكون بمثابة انحراف للخلف لأنسجة الرئة بعد أن تصلب agros ، افصل فصوص الرئة الفردية.

الغراء الفائق التالي ، فص واحد لحامل العينة. للحصول على المقاطع العرضية للشرايين الصغيرة داخل الأسنر ، خذ الفص القحفي للرئة اليمنى وألصقه بلصقه بسطح النقير إلى الحامل ، باستخدام اهتزاز مجهز بشفرة حلاقة جديدة مقطعة من المحيط ، وقطع فص الرئة إلى شرائح بسمك 200 ميكرون. للحصول على المقاطع العرضية للشرايين الأكبر ، قم بمحاذاة نقير الرئة اليسرى مع فلين الشمبانيا وألصق الفص في هذا الاتجاه بالحامل ، ثم قم بتقطيعه من المحيط لإزالة العروق.

انقل أقسام الأعضاء إلى دورق زجاجي مملوء بحوالي 200 مل من 37 درجة مئوية. ضع MEM الدورق في خزانة تسخين وفقاعة بغاز نورموكسيك بحيث تتحرك أقسام الرئة ببطء في الوسط. بعد حوالي ساعتين ، ستتم إزالة لويحات aros التي تملأ الهواء من أنسجة الرئة وستستقر الأقسام في قاع الدرق.

للتحليل المورفومتري بالفيديو للشرايين داخل الرئة ، قم بنقل قسم واحد من الرئة إلى التدفق من خلال غرفة الصخ الفائق ، والتي يتم تركيبها على المجهر ومليئة ب 1.2 ملليلتر من الغازات النورموكسيكية. ميم. ثبت قسم الرئة في الجزء السفلي من الغرفة بخيوط نايلون متصلة بحلقة بلاتينية. ابدأ في حشو الغرفة بوسط غازات نورموكسيك.

استخدم مجهر تباين الطور بهدف 10 × لمسح قسم الرئة بحثا عن الشرايين المقطعة بأقطار داخلية تتراوح بين 20 و 100 ميكرون. بمجرد تحديد موقع سفينة مرشحة معقولة ، استخدم هدف 20 × لالتقاط صورة لسفينة ما قبل asner أو كما هو موضح هنا ، الهدف 40 × لالتقاط صورة للشريان داخل asner لقياس القطر الداخلي للوعاء. قبل بدء التجربة ، قم بإعداد البرنامج لالتقاط صور للشريان المقطعي كل دقيقة خلال التجربة بأكملها.

بعد تشغيل التصوير الفوتوغرافي ، استمر في نضح الغرفة بوسط معثرة طبيعي لمدة 10 دقائق. ثم يستحم قسم الرئة في U 466 19 لمدة 10 دقائق دون تدفق لتحليل انقباض الشريان باستخدام الأوعية التي تم تقليل مناطقها اللمعية بنسبة 30٪ على الأقل مع U 466 19. اغسل الدواء بوسط معاز نورموكسيك لمدة 10 دقائق.

ثم قم بتوسيع الشريان عن طريق تطبيق الدقة لمدة 10 دقائق دون تدفق منخفض. مرة أخرى ، قم بإزالة الدواء بغسل لمدة 10 دقائق بوسط غاز نورموكسيك بمعدل تدفق ستة ملليلتر في الدقيقة ، متبوعا ب 10 دقائق بتدفق 0.7 مل في الدقيقة. بعد ذلك ، احتضن شريحة الرئة بوسط غازات عالية نقص التأكسج لمدة 40 دقيقة.

قم أيضا بتدفق خليط الغاز الناقص للأكسجين إلى المجال الجوي لغرفة التروية عبر مجموعة إضافية من الأنابيب. قم بإزالة الوسط الناقص للأكسجين بغسل لمدة 20 دقيقة بوسط غاز نورموكسيك وقم بالتبديل من تدفق الغاز الناجم عن نقص الأكسجين إلى تدفق الغاز الطبيعي إلى المجال الجوي للغرفة للتحقق من صلاحية الوعاء. في نهاية التجربة ، ضع U 466 19 في غرفة التروية واحتضن لمدة 20 دقيقة دون تدفق للحث على تضيق الأوعية.

كرر هذه الخطوات مع قسم جديد للرئة لقياس تفاعل الأوعية الدموية في وعاء آخر. ابدأ التحليل عن طريق تحميل صور الشرايين المقطعية إلى برنامج تحليل الصور. ثم استخدم المؤشر لتحديد المنطقة اللمعة للوعاء.

يعد تجفيف اليدين ضروريا لأنه يتجنب القطع الأثرية بسبب ، على سبيل المثال ، خلايا الدم المرتبطة بجدار الأوعية الدموية. استمر في تحليل الصور المقطعية بطريقة مماثلة. يجب تحليل كل صورة عندما يتم تغيير حالة واحدة في التدفق عبر غرفة الحضانة إلى حالة أخرى ، ولكن تحليل كل صورة أخرى يكون كافيا عندما لا تتغير الظروف.

يمكن ملاحظة تضيق الأوعية الرئوية الناقصة للأكسجين في صور تباين الطور هذه لشريان ما قبل ASIN المقطعي ، والذي يمتد على مقربة من الشعب الهوائية المقطعة. يتم التقاط الصور في نقاط زمنية مشار إليها بدوائر في الرسم البياني في بداية القياس في نهاية القياس مع U 466 19 في نهاية التعرض ل RAs بعد 30 أو 40 دقيقة في وسط غازي ناقص التأكسج بعد الغسيل بوسط غازي نورموكسيك ، وبعد التطبيق النهائي ل U 466 19 يتم تسجيل تفاعل vaso كتغيرات نسبية في المنطقة اللمعوية للمقطع العرضي الشريان مع الزمن. يتم تعريف المنطقة في بداية التجربة على أنها 100٪ ويتم إعطاء تضيق الأوعية كقيم بالنسبة للمنطقة الأولية.

في هذه الحالة ، يؤدي التعرض لنقص الأكسجة إلى انخفاض بنسبة 60٪ في المنطقة اللمعية للحصول على عرض أوضح لاستجابة نقص الأكسجة. لم يتم عرض المرحلة الأولى من التجربة التي تم فيها اختبار تفاعل الأوعية الدموية هنا ، ويتم تعيين القيمة التي تم الحصول عليها مباشرة قبل التعرض للأكسجين المنخفض عند 100٪ النوع الآخر من الأوعية التي تم فحصها في هذه الدراسات هو الشرايين داخل ASIN ، والتي تقع في مجمعات الحاجز السنخي. في هذه المجموعة من التجارب ، يتم تحليل تأثير sidal ، وهو فتاحة غير انتقائية لقنوات البوتاسيوم الحساسة للميتوكوندريا A TP على تضيق الأوعية الرئوية الناقصة للأكسجين للشرايين الصغيرة داخل asner لهذا الغرض.

يتم تحضين الشرائح في وسط ناقص الأكسجة. في حالة عدم وجود أو وجود 50 حضانات تحكم عضلية ميكرومولار يتم إجراؤها في وسط معثرة نورموكسيك لعرض أوضح للاستجابة للنورموكسيا أو نقص الأكسجة أو نقص الأكسجة بالإضافة إلى سيدال. يتم تعيين القيم التي تم الحصول عليها مباشرة قبل التعرض لوسط المعجون الطبيعي أو نقص التأكسج على أنها 100٪ لا يظهر الشريان المعرض للصنوبر انخفاضا في المنطقة ، كما يفعل الشريان المحتضن في وسط نقص الأكسجين بدون إضافات.

في الوسط الطبيعي ، لا يمكن اكتشاف أي تغييرات في المنطقة اللمعية. يتم تقديم تسجيلات الشرايين الصغيرة داخل ASIN المعرضة لوسط معد ناقص التأكسج مع أو بدون 50 ميكرومولار سيدال كوسيلة زائد أو ناقص SEM. في هذا الرسم البياني ، يتم عرض البيانات النسبية فيما يتعلق بالقيمة في بداية حضانة نقص الأكسجة.

لا يمكن اكتشاف أي تفاعل vaso. في شرائح الرئة المعرضة لنقص الأكسجين ، لا يتأثر الوسط الذي يحتوي على تضيق الأوعية الصنوبرية الناجم عن U 466 19 بالدواء. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تحضير دقة المرآة ، وقطع شرائح الرئة ، وكيفية استخدامها للقياس الكمي لتفاعل VA للشرايين الصغيرة داخل أسينا بأقطار تتراوح بين 20 و 40 ميكرومتر ، والتي تقع في غازات الحاجز السنخي ، وشرايين ما قبل أثينا الأكبر بأقطار تتراوح بين 40 و 100 ميكرومتر ، التي تمتد بجوار القصبات الهوائية والقصيبات.