الديدان الطفيلية جمع وتحديد الهوية من الحياة البرية

الهدف العام من هذا الإجراء هو جمع وحفظ وتحديد أنواع الديدان الخيطية (helminths) من الحياة البرية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إجراء عملية تشريح لحيوان بري، ثم يتم جمع الديدان الخيطية من أعضاء مختلفة، وبعد ذلك تُحفظ الديدان الخيطية باستخدام مجموعة متنوعة من التقنيات من أجل تحديد أنواعها لاحقاً.

أخيرًا، يتم تصفية الخوذات وصبغها وتثبيتها، ثم يتم تحديد الأنواع. وفي نهاية المطاف، يمكن الحصول على نتائج تظهر تراكيب محددة للخوذة من خلال تقنيات التصفية و/أو الصبغ، والتي يمكن أن تساعد بشكل كبير في تحديد الأنواع. علماً بأن هذه الطريقة يمكن تطبيقها لتحديد الخوذات من الثدييات والطيور والزواحف والبرمائيات.

ويمكن تطبيق هذه الطريقة أيضاً على كائنات أخرى مثل الأسماك. وللبدء، ضع الحيوان على سطح مستوٍ واستخدم عدسة مكبرة لفحص جميع الفتحات الخارجية، بما في ذلك الأذنين، والتجويف الفموي، والعينين، للبحث عن وجود النيماتودا، والديدان الشوكية (CSEs)، والديدان الخيطية، والديدان المثقوبة. استخدم شفرة حادة أو سكيناً وملقط تشريح.

قم بإجراء شق فوق التجويف البطني مع الحرص على عدم تمزيق أي من الأعضاء. بعد ذلك، وباستخدام قاطعات العظام أو منشار يدوي صغير إذا لزم الأمر، افتح التجويف الصدري. افحص كلا التجويفين للبحث عن الفاشيا (fal)، والديدان المستديرة، والمثقوبات الكبيرة.

بعد ذلك، اربط خيطاً بالقرب من بداية المريء وخيطاً آخر عند نهاية الأمعاء الغليظة لغرض الفحص. وباستخدام مجهر ستيريو، افصل القلب والأوعية الدموية الرئيسية، والقصبة الهوائية والرئتين في أطباق بتري منفصلة. استأصل الكبد، والمرارة، والقناة البنكرياسية، والطحال، والكليتين، والمثانة البولية، وافحصها تحت مجهر ستيريو.

ثم قم بإزالة الجهاز الهضمي كاملاً وضع كل قسم منه في طبق زجاجي. بعد إزالة الأعضاء، استخدم خرطومًا أو زجاجة رش مملوءة بمحلول ملحي بتركيز 0.9% لغسل تجويف الجسم، مع السماح للسائل بالتصفية عبر منخل شبكي بفتحات حجمها 106 ميكرومتر. اغسل محتويات المنخل عكسيًا في طبق بتري وافحص المحتويات تحت مجهر ستيريو للبحث عن ديدان Fal أو المثقوبات الدموية، وباستخدام مقص، افتح كل قسم من أقسام القناة الهضمية.

قم بكشط الغشاء المخاطي وفحصه بعناية للبحث عن وجود طفيليات كبيرة. غالبًا ما تكون psci of encanto cephas مغمورة بعمق في جدار الأمعاء؛ لذا، استخدم الملقط و/أو مقصات صغيرة، عند الضرورة، لفصلها بعناية عن الأنسجة.

ضع كل قسم مفتوح تحت مياه جارية واغسل المحتويات في منخل بمسام 106 ميكرومتر. بعد ذلك، افتح القلب والأوعية الدموية الرئيسية، والقصبة الهوائية، والمثانة البولية والمرارة، وافحص المحتويات. وبنفس الطريقة، استخدم شفرة حادة وملقطاً لتقطيع وتفريق الأعضاء الصلبة مثل الكبد والرئتين والكلى والطحال والبنكرياس، ثم اغسل المحتويات وافحصها. سجل أنواع الطفيليات.

قم بتحديد عدد كل نوع والأعضاء التي وُجدت فيها. قم بتمييز القوارير أو الجرار بوضع قطعة صغيرة من بطاقة فهرسة سادة بداخلها، مُكتوب عليها بالقلم الرصاص، وذلك لحفظ الخوذات من أجل الدراسات الجينية اللاحقة. أولاً، ضعها مباشرة في الإيثانول.

بعد تثبيت العينة لمدة تتراوح من يوم واحد إلى عدة أيام، انقلها إلى قارورة زجاجية سعة 5 مل مليئة بـ 70%ethanol للتخزين طويل الأمد. وللحفاظ على Trematodes، ضع العينات الحية على شريحة مجهر زجاجية في قطرة من المحلول الملحي، ثم ضع غطاءً زجاجياً، ومرر الشريحة فوق اللهب دون أن يصل المحلول الملحي إلى درجة الغليان. بعد ذلك، أسقط الشريحة في طبق بتري يحتوي على الكحول، أو حمض الخليك (formin acetic acid)، أو FA، واترك الغطاء الزجاجي ليطفو وينفصل.

يتم تثبيت المثقوبات الميتة في محلول FA أو فورمالين منظم بتركيز 10% لمدة 48 ساعة قبل نقلها إلى وعاء مملوء بالإيثانول بتركيز 70% للتخزين طويل الأمد. ولتثبيت هذه العينات، يتم إرخاء الحيوانات الحية في طبق بتري عن طريق سكب ماء قريب من درجة الغليان فوقها، ثم تُنقل إلى وعاء مملوء بالإيثانول بتركيز 70% للتخزين طويل الأمد. كما يتم إرخاء رؤوس encanto الحية بوضعها في طبق بتري يحتوي على ماء صنبور في الثلاجة لمدة تتراوح من ساعة واحدة إلى عدة ساعات حتى يتم سحب خرطومها بالكامل.

انقلها إلى وعاء مملوء بـ 70% ethanol أو FA للتخزين طويل الأمد. يتم قتل النيماتودا الصغيرة أو الهشة باستخدام 70% ethanol الساخن، ثم تُحفظ في وعاء مملوء بـ 70% ethanol مع 5% glycerin لقتل النيماتودا متوسطة إلى كبيرة الحجم.

ضعها في حمض أسيتيك جليدي بارد، وبعد 15 دقيقة، انقلها إلى وعاء مملوء بـ 70%ethanol و5%glycerin. قم بتحضير صبغة هيماتين هاريس عن طريق إذابة الهيماتين والكحول، وبإذابة كبريتات ألومنيوم الأمونيوم في ماء ساخن جداً. اخلط كلا المحلولين واتركهما حتى الغليان.

بعد ذلك، أضف يودات الصوديوم واترك المحلول يغلي لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق. عند تبريد المحلول، استخدم ورق ترشيح 5 41 لترشيح المحلول من أجل صبغ Trematodes estos ثم قم بصب Cephas. ضع العينات في Harris Hematin أو semicon Carmine طوال الليل لتثبيت العينات. ضعها في إيثانول حمضي بتركيز 70% حتى تصبح الأعضاء مرئية.

لوقف عملية إزالة الصبغة، انقُل العينات إلى إيثانول أساسي بتركيز 70% لمدة 30 دقيقة على الأقل. قم بتجفيف العينات باستخدام سلسلة من الإيثانول، واستخدم الزيلين أو ساليسيلات الميثيل لتصفيتها من أجل تثبيت العينات على شريحة مجهرية، ثم أضف قطرة من Canada Balsam وغطاءً شريحيًا. اتركها لتجف طوال الليل؛ وبالنسبة للنيماتودا الصغيرة والمتوسطة و encanto cephas، قم بتصفيتها عن طريق وضعها في مثبتات اللاكتوفينول على شريحة مجهرية وتغطيتها بغطاء شريحي لمدة تتراوح من 15 إلى 30 دقيقة، وكذلك بالنسبة للنيماتودا الكبيرة و encanto Cephas.

ضع العينة في فينول بتركيز 80% لمدة تصل إلى 60 دقيقة. افحصها باستخدام المجهر الضوئي للتحقق من شفافية الهياكل الأصغر لفحص culex atos. قم بقطعها ووضعها في كمية من اللاكتوفينول.

على شريحة مجهرية. استخدم غطاء الشريحة لضغط الـ culex لتمكين قياس وعدّ الخطاطيف النجمية الوريدية. اقطع الطرف الأمامي وثبته على شريحة Foss تحت المجهر.

ضع الشريحة تحت بضع قطرات من اللاكتوفينول أو في هلام الجلسرين للتثبيت الدائم. افحص أجزاء الفم تحت مجهر ضوئي. بعد قطع ذيول النيماتودا الكبيرة وتثبيتها في اللاكتوفينول، افحص شكل الحليمات البطنية والشوكة في الذكور تحت مجهر ضوئي باستخدام الطرق الموضحة في هذا الفيديو.

أُجري مسح للخوذات الخاصة بـ mask shrew Sox scenarios في مقاطعة ميسولا بولاية مونتانا، وذلك في الفترة ما بين عامي 2007 و2011. تم جمع ما مجموعه 56 من الزبابات من مصائد الحفر وفحصها خلال ساعتين من الوفاة.

كان معدل الانتشار الإجمالي للعدوى 96%، حيث كان هناك حيوانان فقط من الزبابات خاليين من الطفيليات. تم تحديد 15 نوعاً من الديدان الخيطية، بما في ذلك تسعة أنواع من الديدان الخيطية (estos) وستة أنواع من النيماتودا. وكان هناك نوع واحد من جنس Esto staphylo لم يتم وصفه سابقاً.

شملت الأعضاء التي تبين أنها مصابة الأمعاء الدقيقة والمعدة والرئتين والمثانة البولية. وتراوحت شدة العدوى الكلية من سبعة إلى 234 دودة لكل نوع مضيف مصاب، بينما تراوح غنى الأنواع أو عدد أنواع الديدان الخوذية لكل مضيف مصاب من واحد إلى ثمانية، بمتوسط قدره 4.1. وبمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون ساعة إلى ساعتين على ثدييات صغيرة مثل السنجاب، ومن أربع إلى خمس ساعات على ثدييات أكبر مثل الراكون.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكتسب فهماً جيداً جداً لكيفية جمع خوذات الحياة البرية وحفظها وتحديد هويتها.