Name: العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 2 s
Description: تعلم عزل وزراعة الخلايا البطانية من أدمغة الأجنة لدراسة التوعية الدماغية والتفاعلات العصبية الوعائية. تُستخدم الفصل المغناطيسي باستخدام حبيبات CD31 لتحقيق نقاوة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل التحالف الوطني لأبحاث الفصام والاكتئاب (NARSAD) جائزة الباحث الشاب والمعاهد الوطنية للصحة منح R01NS073635 لAV.

1. إعداد الكواشف وحلول <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم تزويد الكولاجين من النوع 1 الحل بمثابة محلول مائي في 20 ملي حمض الخليك (~ 100 ملغم بروتين / قارورة): طلاء من 35 مم طبق الثقافة. تمييع حجم مناسب من حل الكولاجين لتركيز العمل من 0.01٪ باستخدام زراعة الأنسجة المعقمة للمياه الصف. أطباق معطف مع 1 مل من محلول الكولاجين لمدة 3-4 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) أو 37 درجة مئوية، أو بين عشية وضحاها في 2-8 درجة مئوية. إزالة الزائدة حل من الطبق المغلفة واتركه حتى يجف بين عشية وضحاها. شطف الطبق مع الماء زراعة الأنسجة الصف أو برنامج تلفزيوني قبل إضافة وسائل الإعلام. ويمكن تخزين الأطباق المغلفة في 4 درجة مئوية لمدة شهر واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد كاملة Dulbecco لتعديل النسر متوسطة (DMEM). تكملة DMEM (500 مل) مع 10٪ FBS وحل المضادات الحيوية مضاد فطري (تركيز 1X؛ ml/100 1 مل). DMEM كاملة يمكن تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة شهرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد قسامة (50 مل) من DMEM مع الدناز الأول (0.001 ملغ / مل)، (ويشار إلى DMEM-الدناز الأول). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد قسامة آخر (10 مل) من DMEM مع كولاجيناز وdispase (1 ملغ / مل) (ويشار إلى DMEM-collagenase/dispase). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الخلايا البطانية الثقافة المتوسطة (ECCM، 500 مل)، على أن تستكمل مع EGF (5 ميكروغرام)، رسم القلب (100 ملغ) و 5 ميكرولتر من محلول مضاد فطري للمضادات الحيوية. ECCM يمكن تخزينها في 4 درجة مئوية لمدة شهرين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Prewarm جميع وسائل الإعلام قبل الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تنقية العازلة: برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.2 مع 0.5٪ BSA و 2 ملي EDTA. إبقاء العازلة الباردة (2-8 درجة مئوية). </li></ol> 2. إزالة الأجنة وتشريح الدماغ الانتهائي تمت الموافقة على جميع التجارب باستخدام الحيوانات المختبرية بواسطة رعاية الحيوان واستخدام لجان من مستشفى ماكلين وتتفق مع المبادئ التوجيهية المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام توقيت الفئران CD1 الحوامل (اليوم الجنينية 15). ويعتبر اليوم من اكتشاف المكونات المهبلية اليوم الجنينية 0 (E0). السدود CD1 تنتج عادة الفضلات كبيرة، لذلك الجنين 10-12ويتوقع من سد الحوامل ق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبضع الرحم، تخدير الفئران الحوامل مع حقنة داخل الصفاق من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) / زيلازين (5 ملغ / كلغ). بالنسبة للفئران حوالي 20-30 غرام، تقديم 0.3 مل من محلول مخدر 10 مل / كغ الكيتامين / زيلازين والتأكد من أن الألم والضيق هو الحد الأدنى أثناء الحقن داخل الصفاق من تأثير المخدر. استخدام اليد لضبط النفس الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق التخدير العميق عن طريق قرصة أخمص قدميه. ازالة الأجنة من الفئران تخدير عميق. قطع رأس كل جنين فور إزالة من الأم. وضع رؤساء الجنينية في أطباق بتري معقمة في الجليد الباردة PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> متابعة استئصال الرحم عن طريق القتل الرحيم مع جرعة زائدة من مخدر فوري (130 ملغ / كغ بنتوباربيتال، والملكية الفكرية)، وهي طريقة للقتل الرحيم، وهو ما يتسق مع المبادئ التوجيهية اخر احصاء للالقتل الرحيم للحيوانات: 2013 الطبعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت المجهر ستيريو، وإزالة المخ من الرأس مع مقص microtip غرامة وملقط غرامة. ملاحظة: A تشريح عالية الجودةأيون هو ضروري لإزالة الغشاء حنوني بنجاح من المخ الجنينية. ويتحقق ذلك عن طريق الممارسة. ملقط غرامة ومقص microtip هي أيضا الأدوات الرئيسية من أجل الحصول على تشريح جيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط للحصول على احكام قبضتهم على الدماغ ومقص microtip لقشر بعيدا الغشاء حنوني. إزالة الدماغ المتوسط ​​والدماغ التالي وعزل لل telencephalon. نقل مجانية حنوني-الدماغ الانتهائي من جميع الأجنة إلى صحن الثقافة 35 ملم مع 2 مل PBS في الجليد. </li></ol> 3. عزل الخلايا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخطر لل telencephalon إلى 1-2 ملم شظايا بشفرة المشرط وجمع الأنسجة في 15 مل فالكون أنبوب يحتوي على 2 مل من DMEM كاملة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الأنسجة بلطف ولكن بدقة مع ماصة 1 مل حتى كتل تختفي ويتم التوصل إلى وقف حليبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي الخلايا في فصل 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية طاف و resuspend بيليه في DMEM الدناز أولا بلطف يفرق بين مLLS مرة أخرى باستخدام ماصة 1 مل وأجهزة الطرد المركزي في 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق على RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> resuspend الكرية في DMEM كاملة الدافئة. تصفية الخلايا من خلال العقيمة 70 ميكرومتر شبكة النايلون. جمع الخلايا التي تمت تصفيتها والاحتفاظ بها في الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع أجزاء الخلية، احتفظت على شبكة وهضم المزيد مع DMEM-collagenase/dispase (2 مل) لمدة 1-2 دقيقة في RT. غسل الخلايا 3X في DMEM الدناز أنا من خلال الطرد المركزي في 800-1،000 x ج لمدة 5 دقائق على RT. تجمع هذه الخلايا مع الخلايا التي تمت تصفيتها جمعها في الخطوة 3.5. غسل خلايا مرة واحدة مع مجموعه كاملة DMEM. المضي قدما لتحديد عدد الخلايا وخطوات وضع العلامات المغناطيسي. ملاحظة: من المهم الحصول على تعليق خلية واحدة قبل وضع العلامات المغناطيسي. </li></ol> 4. وصفها المغناطيسي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يظهر هذا البروتوكول وصفها المغناطيسي من 10 7 الخلايا. لأرقام الخلية أقل من 10 7، استخدام نفس حجم الكاشف وللأرقام الخلية أكبر من 10 7، زيادة كافة وحدات التخزين وكاشف إجمالي حجموفقا لذلك (على سبيل المثال ل2 × 10 7 مجموع الخلايا، استخدم مرتين حجم كل الكواشف المشار إليها). إبقاء كل الكواشف والخلايا في الجليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد عدد الخلايا مع عدادة الكريات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعليق خلية الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة في RT. نضح طاف تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 90 μl/10 7 خلايا العازلة تنقية لبيليه الخلية تليها 10 ميكرولتر من بلي CD31. ومترافق وبلي المقدمة من قبل الشركة المصنعة لوحيدة النسيلة المضادة للماوس CD31 الأجسام المضادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخلط جيدا واحتضان لمدة 15 دقيقة في الثلاجة. ملاحظة: ارتفاع درجات الحرارة و / أو أطول فترة حضانة خلال وضع العلامات المغناطيسي قد يؤدي إلى الربط غير محددة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الخلايا بإضافة 1-2 ml/10 7 خلايا العازلة تنقية وأجهزة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 10 دقيقة. إزالة الخلايا وطاف resuspend في 500 ميكرولتر من العازلة تنقية. انتقل إلى الفصل المغناطيسي أو خطوة التنقية. </li></ol> 5. بوrification <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع العمود MS في المجال المغناطيسي للفاصل MACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف العمود مع 500 ميكرولتر من العازلة تنقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنطبق على تعليق خلية العمود. تحميل عدد مناسب من الخلايا إلى العمود MS عن ارتفاع عدد الخلايا قد تسد العمود. تحذير: كل عمود MS يمكن أن تستوعب أكبر عدد ممكن من 2 × 10 7 خلايا، وذلك لعدد الخلايا أعلى، واستخدام أكثر من الأعمدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع وتجاهل التدفق من خلال الخلايا التي تحتوي على أونلبلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل العمود مع 500 ميكرولتر من العازلة تنقية ثلاث مرات. خلال خطوات الغسيل، تأكد من أن خزان العمود فارغة قبل إضافة اللاحقة مأخوذة العازلة تنقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عمود من فاصل MACS ووضعه على أنبوب فالكون 15 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم تزويد المكبس مع عمود MS. ماصة 1 مل من العازلة تنقية على عمود MS وعلى الفور طرد الخلايا المسمى مغناطيسيا عن طريق دفع المكبس بقوة في العمود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لوحة سلليرة سورية على طبق ثقافة 35 مم precoated مع الكولاجين من النوع 1 وتنمو الخلايا في ECCM في حاضنة تعيين إلى 37 درجة مئوية مع 95٪ O 2 و 5٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير المتوسطة كل أربعة أيام. استخدام PVECs للتجارب أو ثقافة فرعية بعد 10-12 يوما عندما طبق هو متموجة. </li></ol> 6. ثقافة فرعية من PV ECS <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ECCM وشطف أحادي الطبقة من PVECS مع 1-2 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بلطف إضافة 1.5 مل من 0.25٪ التربسين EDTA-حل لتغطية أحادي الطبقة الخلية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة الطبق إلى الحاضنة. في غضون 5-7 دقائق، وفصل الخلايا من سطح الطبق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن فصل الخلايا، إضافة على الفور حجم مساو من مثبط التربسين ويسحن عدة مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الخلايا إلى أنبوب العقيمة 15 مل فالكون. أجهزة الطرد المركزي في أنبوب في 500 x ج لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة طاف و resuspend بيليه في 1 مل من prewarmed ECCM. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بذر خلايا لتوسيع الثقافة، والتراسل الفوريالشيخوخة أو فحوصات أخرى. </li></ol>

<ol><li>Shen, Q., S, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+stimulate+self-renewal+and+expand+neurogenesis+of+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells stimulate self-renewal and expand neurogenesis of neural stem cells.</a> Science. 304, 1338-1340 (2004).</li>
<li>Milner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+three-dimensional+system+to+study+interactions+between+endothelial+cells+and+neural+cells+of+the+developing+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A novel three-dimensional system to study interactions between endothelial cells and neural cells of the developing central nervous system.</a> BMC Neurosci. 8, 3 (2007).</li>
<li>Rauch, M. F., Michaud, M., Xu, H., Madri, J. A., Lavik, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-culture+of+primary+neural+progenitor+and+endothelial+cells+in+a+macroporous+gel+promotes+stable+vascular+networks+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Co-culture of primary neural progenitor and endothelial cells in a macroporous gel promotes stable vascular networks in vivo.</a> 19, 1469-1485 (2008).</li>
<li>Vasudevan, A., Long, J. E., Crandall, J. E., Rubenstein, J. L., Bhide, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartment-specific+transcription+factors+orchestrate+angiogenesis+gradients+in+the+embryonic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Compartment-specific transcription factors orchestrate angiogenesis gradients in the embryonic brain.</a> Nat. Neurosci. 11, 429-439 (2008).</li>
<li>Vasudevan, A., Bhide, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+the+embryonic+CNS%3A+a+new+twist+on+an+old+tale%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh.+Migr%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in the embryonic CNS: a new twist on an old tale.</a> Cell Adh. Migr. 2, 167-169 (2008).</li>
<li>Won, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomous+vascular+networks+synchronize+GABA+neuron+migration+in+the+embryonic+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Autonomous vascular networks synchronize GABA neuron migration in the embryonic forebrain.</a> Nat. Commun. 4, 2149-2162 (2013).</li>
<li>Dong, Q. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+general+strategy+for+isolation+of+endothelial+cells+from+murine+tissues.+Characterization+of+two+endothelial+cell+lines+from+the+murine+lung+and+subcutaneous+sponge+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">A general strategy for isolation of endothelial cells from murine tissues. Characterization of two endothelial cell lines from the murine lung and subcutaneous sponge implants.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 17, 1599-1604 (1997).</li>
<li>Erblich, B., Zhu, L., Etgen, A. M., Dobrenis, K., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+colony+stimulation+factor-1+receptor+results+in+loss+of+microglia%2C+disrupted+brain+development+and+olfactory+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Absence of colony stimulation factor-1 receptor results in loss of microglia, disrupted brain development and olfactory deficits.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Wichterle, H., Garcia-Verdugo, J. M., Herrera, D. G., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Young+neurons+from+medial+ganglionic+eminence+disperse+in+adult+and+embryonic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Young neurons from medial ganglionic eminence disperse in adult and embryonic brain.</a> 2, 461-466 (1999).</li>
<li>Snapyan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculature+guides+migrating+neuronal+precursors+in+the+adult+mammalian+forebrain+via+brain-derived+neurotrophic+factor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Vasculature guides migrating neuronal precursors in the adult mammalian forebrain via brain-derived neurotrophic factor signaling.</a> J. Neurosci. 29, 4172-4188 (2009).</li>
<li>Whitman, M. C., Fan, W., Rela, L., Rodriguez-Gil, D. J., Greer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+vessels+form+a+migratory+scaffold+in+the+rostral+migratory+stream%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Blood vessels form a migratory scaffold in the rostral migratory stream.</a> J. Comp. Neurol. 516, 94-104 (2009).</li>
</ol>

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

في PVEC هي أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية من الخلايا البطانية الكبار الدماغ وECS من مصادر الأنسجة الأخرى للدراسات تركز على التفاعلات الوعائية العصبية وأيضا لديها الإمكانات العلاجية. لإعداد PVEC، فمن بداية حاسمة مع تشريح للعمل بسرعة لتحقيق الجدوى جيدة منذ الخلايا الميتة قد ربط nonspecifically لبلي CD31. بالإضافة إلى ذلك، إذا لم يتحقق تعليق خلية واحدة قبل الخطوة وضع العلامات المغناطيسي، وهذا سوف يؤدي إلى استكشاف الأخطاء وإصلاحها منذ كتل الخلايا سوف تسد العمود. ميزة هذا الأسلوب هو...

الأوعية الدموية، والخلايا العصبية الهجرة العصبية هي الأحداث الحاسمة في الجهاز العصبي المركزي (CNS) التنمية والإصلاح والتجديد. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن الخلايا البطانية أنيقة تحفيز انتشار العصبية والعكس بالعكس من خلال الافراج عن العوامل القابلة للذوبان وعن طريق الاتصال المباشر. وجدنا أنه من الغريب أنه في الغالبية العظمى من هذه الدراسات 1-3، في حين يتم عزل الأسلاف العصبية / الخلايا الجذعية العصبية من المخ الجنينية، وأنها cocultured مع الخلايا البطانية من الدماغ الكبار، الكبار مصادر الأنسجة الأخرى، أو مع خطوط الخلايا البطانية. وهذا قد يكون في جزء منه بسبب الصعوبات التقنية المرتبطة عزل وزراعة السكان نقية من الخلايا البطانية من المخ الجنينية. ومع ذلك، الأوعية الدموية، تكوين الخلايا العصبية، وهجرة الخلايا العصبية هي الأحداث المتزامنة التي تحدث في أوامر من حجم أكثر قوة في الدماغ الجنينية مما كانت عليه في الدماغ الكبار العادي. شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين من embryoniج الدماغ الأمامي (الدماغ الانتهائي) تنبع من سفينة تقع ضمن العقد القاعدية منشم ويتطور في شكل التدرج المنظم من بطني لالظهرية لل telencephalon بعد يوم الجنينية 11 (E11) 4،5. هذه الضفيرة من السفن من شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين تختلف عن السفن حنوني على أساس أصول والموقع التشريحي، وأنماط النمو، وتنظيم التنموية 4،5. اتجاه الانتشار من الأوعية الدموية المحيطة بالبطين مباريات متدرجة الانحدار العصبية الوراثية عرضية الدماغ الانتهائي. ضمن الدماغ الانتهائي، التدرج الأوعية الدموية المحيطة بالبطين والتدرج من الخلايا العصبية GABA المهاجرة تتداخل بشكل طفيف مكانيا كذلك 6. فيما يتعلق بالتوقيت، التدرج الأوعية الدموية في وقت مبكر من العصبية الوراثية الانحدار والخلايا العصبية GABA التدرج بنحو يوميا. وبالتالي، الخلايا البطانية حول البطينات الدماغية هي مكانيا وزمانيا في وضع جيد لتقديم العظة الحرجة لدعم تكوين الخلايا العصبية والدماغ الانتهائي4،6 هجرة الخلايا العصبية. ولذا، فإن استخدام الخلايا البطانية حول البطينات الدماغية الجنينية في التجارب coculture مع الأسلاف العصبية و / أو الخلايا العصبية تقدم نموذجا أكثر ملاءمة لدراسة التفاعلات الوعائية العصبية وتطوير سبل جديدة لعلاج المرض العصبي أو نقص تروية / إصابات في الدماغ. فإننا نؤكد على أهمية إزالة الغشاء حنوني، وليس فقط للحد من تلوث الخلايا الظهارية ولكن أيضا لفصل الخلايا البطانية حنوني التي هي جزيئيا ومتميزة وظيفيا من الخلايا البطانية في الأوعية الدموية المحيطة بالبطين شبكة 4،6 (PVECs يطلق تمييزها عن حنوني ECS) . هنا، نحن تصف طريقة التي نستخدمها بشكل روتيني في مختبرنا للحصول على العائد غنية ونقية من PVECs. وتعد هذه الخلايا البطانية من forebrains الجنينية معزولة عن ماوس توقيت الحوامل واحد. أنها يمكن توسيعها، subcultured، وتجميد أسفل بنجاح لاستخدامها في المستقبل.

<table><tbody><tr><td>DNase I</td><td>Sigma</td><td>D-4527</td> <td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>الكولاجين ، محلول النوع 1 من ذيل الفئران &nbsp ؛</td><td>سيجما</td><td>C3867</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>الجودة البيولوجية</td><td>114057-131</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>فيشر العلمي</td><td>M4055</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A2058</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>MS العمود</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-201</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>CD31 microbeads</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-418</td><td>&nbsp;</td></tr>فاصل <tr><td>MACS</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-102</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>ماك متعدد الحامل</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-303</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مصفاة الخلية 70 & micro; م</td><td>دكتوراه في العلوم البيولوجية</td><td>352350</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>محلول مضاد حيوي ومضاد للفطريات</td><td>Sigma</td><td>A5955</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>كولاجيناز/ديسباز</td><td>روش</td><td>10269638001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Lonza</td><td>12-604F</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>35 ملم صحن ثقافة</td><td>BD Bioscience</td><td>353001</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>15 مل أنبوب فالكون &nbsp;</td><td>BD Bioscience</td><td>352097</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>50 مل أنبوب فالكون</td><td>BD Bioscience</td><td>352098</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مجموعة ECCM</td> BD <td>Bioscience</td><td>355054</td><td>Kit تشمل مكمل نمو الخلايا البطانية ، EGF ، ومثبط فول الصويا</td></tr><tr><td>لنمو الخلايا البطانية (ECGS) BD</td> <td>Bioscience</td><td>354006</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>تطبيقات خلية</td> <td>RBECGM</td><td>R819-500</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>DMEM F12 &nbsp;</td><td>لايف</td><td>تكنولوجيز 10565-018</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Life Technologies</td><td>305050-061</td><td>&nbsp;</td></tr>زراعة <tr><td>الأنسجة الصف المياه</td><td>تقنيات الحياة</td><td>15230162</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>0.25٪ Trypsin</td><td>Life Technologies</td><td>15050</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مثبط فول الصويا التربسين</td><td>BD Bioscience</td><td>5425</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>354234</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Qtracker 655 مجموعة وضع العلامات على الخلايا</td><td>Life Technologies</td><td>Q25021</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>غشاء البلازما CellLight- RFP ، BacMam 2.0</td><td>Life Technologies</td><td>C10608</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>البيوتينيل إيسولكتين B4 الجسم المضاد</td><td>سيجما</td><td>L2140</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>عامل مكافحة فون ويلبراند</td><td>سيجما</td><td>F3520</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>Anti-CD31 / PECAM-1</td><td>BD Pharmingen</td><td>550274</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>وسائط تركيب VECTASHIELD الصلبة مع</td><td>مختبرات</td> DAPI Vector <td>H-1500</td> <td>&nbsp ؛</td></tr><tr><td>الكيتامين</td><td>بتلر شاين توريد صحة</td><td>44028</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مختبرات</td> <td>زيلازين</td> لويد <td>1009</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مجهر</td><td>مجسم موتيك</td><td>SMZ-168</td> <td>&nbsp ;</td></tr><tr><td>مقياس الدم</td><td>Fisher Scientific</td><td>267110</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>المجهر المقلوب</td><td>أوليمبوس CK-40</td><td>CK-40</td> <td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مجهر الفلورسنت</td><td>أوليمبوس FSX-100</td><td>FSX-100</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>ملقط دقيق</td><td>Roboz Surgical</td><td>Instrument 7 inox</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>مقص دقيق</td> دقيق <td>Roboz Surgical Instrument</td><td>RS5611</td> <td>&nbsp ؛</td></tr></tbody></table>

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

الخلايا البطانية المخ الجنينية يمكن أن تكون بمثابة أداة هامة في دراسة الأوعية الدموية والتنمية وعائية عصبية والتفاعلات. شبكات الأوعية الدموية وهما من الدماغ الأمامي الجنينية، حنوني وحول البطينات الدماغية، ومميزة مكانيا ولها أصول مختلفة وأنماط النمو. الخلايا البطانية من شبكات الأوعية الدموية حنوني وحول البطينات الدماغية وفريدة من نوعها ملامح التعبير الجيني ووظائفها. هنا نقدم بروتوكول خطوة بخطوة لعزل والثقافة، والتحقق من السكان نقية من الخلايا البطانية من شبكة الأوعية الدموية المحيطة بالبطين (PVECs) من الدماغ الأمامي الجنينية (الدماغ الانتهائي). في هذا النهج، ومفروم الدماغ الانتهائي خالية من الغشاء حنوني تم الحصول عليها من يوم الجنينية 15 الفئران، يتفاعل مع كولاجيناز / dispase، وفرقت ميكانيكيا في تعليق خلية واحدة. يتم تنقيته PVECs من الايقاف الخلية باستخدام اختيار إيجابية مع الأجسام المضادة anti-CD-31/PECAM-1 مترافق لبلي باستخدام مغناطيسي قويطريقة الانفصال. الخلايا تنقيته يتم تربيتها على الكولاجين 1 الأطباق الثقافة المغلفة في البطانية مستنبت الخلايا حتى تصبح متكدسة ومزيد من subcultured. الحصول PVECs مع هذا البروتوكول المعرض الحصوه والمغزل على شكل الظواهر، كما تصور من قبل على النقيض من المرحلة المجهر الضوئي ومضان المجهري. تأسست نقاء الثقافات PVEC مع علامات الخلايا البطانية. في أيدينا، وهذه الطريقة بشكل موثوق وثابت تعطي السكان نقية من PVECs. وهذا البروتوكول الاستفادة من الدراسات التي تهدف إلى اكتساب رؤى الآلي في الدماغ الأمامي الأوعية الدموية، وفهم التفاعلات PVEC، ومحادثات عبر أنواع الخلايا العصبية مع ويحمل إمكانات هائلة لتكوين الأوعية الدموية العلاجية.

يظهر توصيف المظهري من PVECs من يوم 1-12 خلال المرحلة على النقيض المجهر الضوئي (الشكل 2). الخلايا تعلق على طبق في يوم 1 عرض التشكل سمة من انقسام الخلايا (الشكل 2A). بين 5-8 أيام، PVECs الانتقال من المرصوفة بالحجارة لالمغزل التشكل على شكل نموذجي للخلايا البطانية وأقرب إلى الجسم الحي في الدولة (أرقام 2B و 2C). بعد يوم 12 ثقافة PVEC يحقق التقاء الكامل (الشكل 2D). PVECs يمكن subcultured بسهولة...

يوضح هذا الفيديو استراتيجية سهلة وموثوقة لإعداد الثقافات نقية من الخلايا البطانية من الدماغ الأمامي الجنينية داخل 10-12 يوما، وسوف يكون من المفيد للبحوث تركز على جوانب كثيرة من الأوعية الدموية الدماغية.

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير مستنبتات نقية من الخلايا البطانية من أدمغة أجنة في المرحلة الرابعة لدراسة تكوين الأوعية الدموية الدماغية والتفاعلات الوعائية العصبية. ويتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة الغشاء القشري وعزل الرأس من أدمغة الأجنة. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في إنتاج معلق من الخلايا المفردة باستخدام عمليات التفكيك والترشيح والهضم للأنسجة التي تم جمعها.تتمثل الخطوة الثالثة في وسم الخلايا مغناطيسياً باستخدام خرزات CD 31 الدقيقة. وتتمثل الخطوات النهائية في تنقية الخلايا الموّسمة بـ CD 31 عن طريق الفصل المغناطيسي ثم استزراعها. وفي النهاية، يتم الحصول على مجموعات نقية من الخلايا البطانية حول البطينية لإجراء مزيد من الدراسات من خلال مجهر التألق المناعي ومقاييس تكوين الأوعية الدموية.ستفيد هذه الطريقة الدراسات التي تركز على الآليات الخلوية والجزيئية. وبالنسبة لتحليل الدماغ، يمكنها أن تعمل كأداة لتوضيح التفاعلات بين الخلايا البطانية في البطينات والتبادل التأثيري مع أنواع الخلايا العصبية. كما أنها تنطوي على إمكانات هائلة لمهام التحليل العلاجي.يعد استعراض هذه الطريقة أمراً بالغ الأهمية للتغلب على بعض الصعوبات التقنية المرتبطة بعزل واستزراع مجموعات نقية من الخلايا البطانية من الدماغ الجنيني. لهذا البروتوكول، ضع رؤوس جراء في اليوم الجنيني E 15 من أمهات CD one في محلول PBS بارد جداً تحت المجهر الستيريوسكوب. قم بإزالة الأدمغة باستخدام مقص دقيق الرأس وملقط دقيق.يعد التشريح الجيد أمراً بالغ الأهمية، ويُكتسب من خلال الممارسة والحفاظ على الأدوات في حالة ممتازة. بعد ذلك، استخدم الملقط للإمساك بالدماغ بإحكام، واستخدم مقصات الطرف الدقيق (microtip scissors) لإزالة الغشاء المغلف. تعد هذه الخطوة الأكثر تحدياً في الإجراء، ولكن المهارات اللازمة ستُكتسب مع الممارسة.بعد ذلك، قم بإزالة الدماغ المتوسط (mesencephalon) والدماغ الخلفي (metencephalon). اعزل الرأس (cephalon). ثم انقله، مع التأكد من خلوه من الغشاء القشري، إلى طبق زراعة بحجم 35 مليمتر يحتوي على 2 مليلتر من PBS على الثلج.اجمع كل المخالب في طبق واحد. ابدأ بتقطيع المخالب إلى شظايا يتراوح حجمها بين واحد أو اثنين مليمتر باستخدام شفرة مشرط. اجمع الأنسجة في أنبوب سعة 15 milliliter يحتوي على 2 milliliter من وسط DMEM الكامل.قم بتفكيك النسيج بلطف ولكن بدقة باستخدام ماصة سعة 1 mL حتى تختفي التكتلات ويتم الحصول على معلق حليبي. قم بطرد المعلق مركزياً عند 800 إلى 1000 G لمدة خمس دقائق. في درجة حرارة الغرفة، قم بإزالة الطافي بعناية عن طريق الشفط ثم أعد التعليق.قم بتعليق الراسبة في وسط DMEM مع DS one. الآن، قم بتفكيك الخلايا مرة أخرى باستخدام عملية تدوير لطيفة وكرر خطوة الطرد المركزي. ثم أعد تعليق الراسبة في وسط DMEM كامل مدفأ.قم بترشيح الخلايا العالقة عبر مشبك نايلون بمسام 70 ميكرون، واجمع أجزاء الخلايا المحتجزة على المشبك ثم قم بهضمها بشكل إضافي في 2 مل من DMEM مع collagenase و dis bays. انتظر لبضع دقائق ثم اغسل النسيج. قم بإجراء عملية الطرد المركزي ثلاث مرات وأعد تعليق الراسب في DMEM مع DS one pool، ثم اجمع العينة المغسولة مع الراشح مع الحفاظ عليها مبردة على الثلج.بعد ذلك، اغسل المزيج باستخدام وسط DMEM كامل عن طريق الطرد المركزي ثم أعد تعليقه. الآن، حدد عدد الخلايا باستخدام مقياس كرات الدم (hemo cytometer) وابدأ عملية الوسم المغناطيسي. الأحجام المذكورة في هذا البروتوكول مناسبة لما يصل إلى 10 مليون خلية؛ وفي حال وجود أعداد أكبر من الخلايا، قم بزيادة المقادير بشكل تناسبي.ابدأ بطرد تعليق الخلايا مركزياً عند 300 G لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة، ثم اسحب السائل الطافي تماماً وأضف 90 µL من منظم التنقية المبرد إلى كرسلة الخلايا، يليه 10 µL من الخرزات الدقيقة المقترنة بـ CD 31. اخلط الخلايا جيداً باستخدام ماصة سعة 200 µL ثم حضّن التعليق لمدة 15 دقيقة في الثلاجة، مع مراعاة عدم تجاوز هذه المدة لضمان بقاء عملية الوسم نوعية. اغسل الخلايا بإضافة من 1 إلى 2 mL من منظم التنقية المبرد والطرد المركزي عند 300 G لمدة 10 دقائق.قم بإزالة الطافي وأعد تعليق الخلايا في 500 microliters من منظم التنقية المبرد. الآن، قم بتحميل عمود MS في المجال المغناطيسي لجهاز max separator. بعد ذلك، اشطف العمود بـ 500 microliters من منظم التنقية في درجة حرارة الغرفة.ثم قم بتطبيق معلق الخلايا على العمود. يتسع العمود لما يصل إلى 20 مليون خلية. اجمع وتخلص من جميع السوائل المارة التي تحتوي على الخلايا غير المسمىّة.اغسل العمود بـ 500 microliters من محلول التنقية المنظم ثلاث مرات. تأكد دائماً من أن خزان العمود فارغ قبل إضافة الحصص التالية من محلول التنقية المنظم. الآن، قم بإزالة العمود من جهاز الفصل الأقصى (max separator) وضعه على أنبوب سعة 15 milliliter.أضف 1 mL من محلول التنقية المنظم إلى العمود، وقم فوراً بغسل الخلايا الموُسمة مغناطيسياً عن طريق دفع المكبس المرفق بقوة داخل صفيحة العمود. يتم تجميع الخلايا المغسولة في طبق زراعة بقطر 35 mm مكسو مسبقاً بـ collagen type one.قم الآن بتنمية الخلايا باستخدام ECCM في حاضنة مضبوطة على درجة حرارة 37 °C مع 95% أكسجين و5% ثاني أكسيد الكربون. استبدل الوسط كل أربعة أيام. وراقب نمو الخلايا في طبق الزرع عبر المجهر يومياً.التوصيف المظهري للخلايا البطانية حول البطينات أو PVE CS يتغير من اليوم الأول إلى اليوم 12 كما يظهر عبر المجهر الضوئي بتباين الطور. أظهرت الخلايا الملتصقة بالطبق في اليوم الأول مورفولوجيا مميزة لانقسام الخلايا بين اليوم الخامس والثامن. تنتقل PVE CS من المورفولوجيا التي تشبه رصف الطريق إلى مورفولوجيا مغزلية الشكل نموذجية للخلايا البطانية وأكثر قرباً لحالتها في الجسم الحي.بحلول اليوم 12، تصل مستنبتات PVEC إلى مرحلة الالتحام الكامل. ويمكن استزراع p vs بسهولة لتوسيع المستعمرة بعد عملية الاستزراع الفرعي.تم تحديد نقاء مزارع الخلايا البطانية بنسبة 100% باستخدام علامات الخلايا البطانية التالية: ISO lectin وvon Willbrand factor وCD 31 PE وcam one وVE cadherin. تم وسم صور عالية التكبير لخلايا PV Cs المحضرة من أجنة CD one، وكذلك أجنة tie two GFP التي تعبر خلاياها البطانية عن GFP، باستخدام ISO lectin، حيث أظهرت تلك الخلايا المورفولوجيا الشائعة التي تشبه حصى الرصيف والشكل المغزلي، بالإضافة إلى مورفولوجيا مضلعة ذات بروزات نحيلة في بعض أطباق المزرعة المطلية بالكولاجين. وفي غياب matrigel، شكلت pve, CS أنماطاً شبكية تشبه الخصائص الفريدة للشبكة الوعائية المحيطة بالبطينات في الجسم الحي.يعكس هذا القدرة العالية على تكوين الأوعية الدموية لـ pve. Cs.An وقد تم إجراء اختبار تكوين الأوعية الدموية، حيث أضيفت 20, 000 من PVE CS إلى أطباق زراعة مغلفة بـ matrix gel matrix. وأظهرت خلايا PV Cs هذه تكويناً قوياً للأنابيب خلال 18 ساعة.يمكن إجراء دراسة طويلة المدى لـ pve CS بما في ذلك الهجرة والمورفولوجيا الحركية ومقاييس وظائف الخلايا، بالإضافة إلى التجارب الحيوية في الجسم الحي (in vivo)، عن طريق وسم PV مقابل Isolated from CD one embryos باستخدام بلورات Q dot النانوية. توفر هذه البلورات النانوية فلورة مستقرة وكثيفة داخل سيتوبلازم الخلايا الحية.يمكن نقل الجينات إلى خلايا Pve EECS باستخدام متتبعات خلوية مثل cell light plasma membrane. ويُستخدم RFP back MAM 2.0 لضمان رؤية واضحة لمورفولوجيا الخلايا في تجارب تصوير الخلايا الحية. وقد تم استزراع خلايا Pve CS في أوساط زراعية متعددة، وجرى مقارنة مورفولوجيا الخلايا بواسطة مجهر تباين الطور و ISO selectin قبل عملية الصبغ.بينما أظهرت خلايا PV CS التي نمت في وسط ECCM شكلاً مغزلياً ووصلت إلى مرحلة الاندماج بحلول اليوم 12، أظهرت خلايا pve CS التي نمت في وسط نمو الخلايا البطانية للدماغ لدى الجرذان شكلاً مستطالاً للغاية ووصلت إلى مرحلة الاندماج بحلول اليوم 20. من ناحية أخرى، أظهرت خلايا PV CS المستزرعة في وسط D-M-E-M-F 12 شكلاً مسطحاً ومضلعاً فقط دون تكوين أي أشكال مغزلية، وتميزت بنمو سريع جداً ووصلت إلى مرحلة الاندماج بحلول اليوم الرابع.تمت زراعة خلايا PVEC في وسط ECCM لمدة تصل إلى ثلاثة ممرات دون فقدان النمط الظاهري والوظيفة. وبناءً على ذلك، فإن ECCM هو الوسط المفضل لزراعة PVEC. وبمجرد إتقان هذه الخطوة، يمكن إنجازها في غضون ثلاث ساعات إذا تم تنفيذها بشكل صحيح.من المرجح أن يؤدي الاستزراع المشترك للخلايا البطانية المحيطة بالبطينات مع السلائف العصبية إلى تحفيز تكوين الخلايا العصبية وهجرتها بشكل أفضل بكثير من الخلايا البطانية المستمدة من دماغ بالغ أو من مصادر أخرى. وبالتالي، قد تكون هذه الخلايا ذات قيمة في المساعدة على استعادة الوظائف العصبية في العديد من السيناريوهات المختلفة.

isolation-culture-endothelial-cells-from-embryonic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

هنا ، نحن تصف بروتوكول للثقافة العزلة والفئران من خلايا بطانة الأوعية الدموية الرئوية. يضم هذا الأسلوب ميكانيكي والأنزيمية تفارق أنسجة الرئة ، فضلا عن عملية تنقية 2 - خطوة استخدام الألغام المضادة للPECAM - 1 ومعاداة ICAM - 2 الأضداد مترافق إلى حبات المغناطيسي ، والتي تنتج الخلايا البطانية نقية السكان من أصل الاوعية الدموية الدقيقة في معظمها.

العزلة والثقافة في الخلايا البطانية الرئوي من الفئران حديثي الولادة

هذه الطريقة يصف كيفية عزل خلايا بطانية وخلد الاوعية الدموية الدقيقة من مخ الفأر. وصفنا بروتوكول خطوة بخطوة بدءا من تجانس أنسجة المخ، والخطوات الهضم، والبذر وتخليد للخلايا. عادة، يستغرق حوالي خمسة أسابيع للحصول على متجانسة، خلدت الاوعية الدموية الدقيقة خط الخلية البطانية.

جيل من الاوعية الدموية الدقيقة في الدماغ الفئران مخلد الخط الخلية البطانية باعتبارها<em&gt; في المختبر</em&gt; حاجز الدم في الدماغ الموديل

يعرض هذا الفيديو عزل الأوعية الدقيقة عن دماغ الفئران باستخدام مزيج من الطرد المركزي المتدرج للكثافة وأجهزة الهضم الأنزيمية. يمكن زراعة الأوعية الدقيقة المعزولة في قارورة مزرعة مغلفة مسبقا بمصفوفة الكولاجين والفيبرونيكتين للحصول على مستعمرات الخلايا البطانية.

زراعة الخلايا البطانية من الأوعية الدقيقة لدماغ الفئران: إجراء لعزل وزراعة الخلايا البطانية من الأوعية الدقيقة لدماغ الفئران

&lt; p class = "jove_content"&gt;يوضح هذا الفيديو بروتوكولا للحث على تمايز الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات إلى خلايا بطانة الدماغ.

توليد الخلايا البطانية الدماغية من الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات

ثقافة الخلية الأولية هي تقنية مفيدة لتحليل فئات معينة من السكان من الخلايا، لا سيما من أجنة الفئران المعدلة وراثيا في مراحل نمو محددة. هنا، يتم تشريح البطينين الجنينية وفصلها، والخرز الأجسام المضادة، مترافق الاعتراف وفصل الخلايا البطانية لمزيد من التحليل.

عزلة الجنينية البطيني الخلايا البطانية

&lt; p class = 'jove_content'&gt; ترتبط الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في الدماغ (BMEC) بواسطة بروتينات وصلية محددة تشكل حاجزا شديد التنظيم يفصل بين الدم والجهاز العصبي المركزي (CNS) ، ما يسمى بالحاجز الدموي الدماغي (BBB). يتيح عزل الخلايا البطانية للأوعية الدموية الدقيقة في دماغ الفئران الأولية ، كما تمت مناقشته في هذا البروتوكول ، إجراء دراسات مفصلة في المختبر ل BBB.

عزل خلايا الدماغ الأولية الفئران الاوعية الدموية الدقيقة غشائي

تلعب الخلايا البطانية الوعائية دورا مهما في العديد من اضطرابات القلب والأوعية الدموية المهمة. توضح هذه المقالة طريقة بسيطة لعزل الخلايا البطانية وتوسيعها من الشريان الأورطي للفأر دون استخدام أي معدات خاصة. يوفر بروتوكولنا وسيلة فعالة لتحديد الآليات في علم الأمراض الفيزيائية للخلايا البطانية.

العزلة والثقافة الابتدائية من خلايا الفأر الأورطي غشائي

نبلغ عن طريقة موثوقة لعزل واستزراع الخلايا البطانية الأولية الخاصة بالورم من نماذج الفئران المعدلة وراثيا.

العزلة وثقافة توسيع ورم محددة الخلايا البطانية

للدم الجذعية والسلف الخلايا (HSPC) مستمدة من المتخصصة (مكون للدم) الخلايا البطانية خلال تطوير، ولكن لا يعرف الكثير عن العملية التي بعض الخلايا البطانية تحدد لتصبح تكوين الدم. ونحن لشرح طريقة التدفق الخلوي على أساس السماح العزلة في وقت واحد من الخلايا البطانية مكون للدم وHSPC من الأنسجة الجنينية في الفئران.

عزل خلايا الفئران الجنينية مكون للدم غشائي

والهدف من هذا البروتوكول عزل السلف غشائي الخلايا من دم الحبل السري. وتشمل بعض التطبيقات باستخدام هذه الخلايا كالعلامات البيولوجية لتحديد المرضى مع مخاطر القلب والأوعية الدموية، علاج الأمراض الدماغية، وخلق صمام الأوعية الدموية والقلب هندسة الأنسجة بنيات.

عزل خلايا غشائي السلف من دم الحبل السري البشري

تعلم عزل وزراعة الخلايا البطانية من أدمغة الأجنة لدراسة التوعية الدماغية والتفاعلات العصبية الوعائية. تُستخدم الفصل المغناطيسي باستخدام حبيبات CD31 لتحقيق نقاوة عالية.

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

استكشف المزيد من الفيديوهات