Analysis of Translation Initiation During Stress Conditions by Polysome Profiling

La&#235;titia Coudert; Pauline Adjibade; Rachid Mazroui

doi:10.3791/51164

تحليل ترجمة بدء أثناء حالة الإجهاد التي كتبها Polysome التنميط

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Analysis of Translation Initiation During Stress Conditions by Polysome Profiling

تحليل ترجمة بدء أثناء حالة الإجهاد التي كتبها Polysome التنميط

Full Text

18,901 Views

10:59 min

May 19, 2014

DOI: 10.3791/51164-v

Laëtitia Coudert*^1,2, Pauline Adjibade*^1,2, Rachid Mazroui^1,2

¹Department of Molecular Biology, Medical Biochemistry, and Pathology, Faculty of Medicine,Laval University, ²CHU de Quebec Research Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

هنا، نحن تصف طريقة لتحليل التغيرات في الشروع في ترجمة مرنا من خلايا حقيقية النواة في الاستجابة لنؤكد الظروف. ويستند هذا الأسلوب على سرعة الفصل في التدرجات السكروز من ترجمة ريبوسوم من ريبوسوم غير ترجمة.

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس آثار ظروف الإجهاد على الترجمة وبدء خلايا وأنسجة الثدييات عن طريق التنميط متعدد الجدول. يتم تحقيق ذلك عن طريق معالجة الخلايا السرطانية للثدييات أولا بدواء مضاد للسرطان ثم تحضير مستخلصات الخلايا. الخطوة الثانية هي صنع السكروز والتدرجات.

بعد ذلك ، يتم تحميل مستخلصات الخلايا على السكروز والتدرجات والطرد المركزي الفائق لفصل الكسور الريبوزومية. في النهاية ، يتم إجراء تحليل اللطخة الغربية باستخدام أجسام مضادة محددة لتقييم ارتباط البروتينات المختبرة مع البوليسوم. الميزة الرئيسية لهذه التقنية لطريقة موجودة مثل وضع العلامات الأيضية ، هي أنها تسمح لنا بتقييم تأثير ظروف الإجهاد على خطوة بدء الترجمة.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos