Name: تتبع تكييف الخوف في الفئران (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-20T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: تعلم تقنية تكييف الخوف المتقطع لتقييم التعلم والذاكرة المعتمدة على الحصين في الفئران. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة ذاكرة الترابط وتُطبق على الفئران المعدلة وراثياً.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ويدعم هذا العمل من خلال منحة مجلس بحوث جامعة بايلور ومن منحة بحثية من مؤسسة الصرع.

تم إنشاء الفئران المستخدمة في التجربة التالية ويضم في جامعة بايلور في درجة حرارة الغرفة من 22 درجة مئوية، مع ضوء 14 ساعة و 10 ساعة الظلام (20:00 حتي 06:00 ساعة) دورة نهاري. أعطيت الفئران بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية الوصول إلى الغذاء والماء. وكانت جميع الإجراءات للفئران في الامتثال مع المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة على بروتوكول الحيوان من جامعة بايلور رعاية الحيوان واستخدام اللجنة. نظرة عامة ويستند التتبع مكيفة المهمة الخوف على الإجراءات التي وصفها Wiltgen وزملاؤه 9. 1. إعداد معدات الخوف جهاز تكييف غرفة (26 سم × 22 سم × 18 سم) يتكون من جانبين التي هي الاكريليك، وجهان التي هي المعدن، وأسفل الطابق الشبكة الذي يستخدم لتقديم صدمة القدم معتدل. غرفة الاختبار هو منزلد في غرفة الموهنة الصوت. الغرفة هي أيضا ضيق ضوء لمنع الضوء من خارج التأثير على برامج كشف الحركة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مستويات الصدمة، ومستويات الضوء، ومستويات شدة الصوت للغرفة الاختبار. قياس مستوى الخلفية للغرفة الاختبار. الضوضاء الخلفية في هذه القاعة هو 65 ديسيبل. استخدام الصوت متر لقياس هذا المستوى. يجب تعيين متر إلى 70 ديسيبل، لتعيين C، والكشف عن وضع بطيئة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مستوى الصدمة ل0.5 مللي أمبير. استخدام جهاز معايرة الخارجية لمعايرة مستوى الصدمة (انظر الجدول مواد) بشكل صحيح. قياس الداخلية للمولد الصدمة ليست دقيقة. مولد صدمة تدير صدمة سارعت والتي لا يمكن قياسها بدقة من قبل أمبير متر القياسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الرصاص احد على واحد من القضبان الشبكة ووضع الآخر بنتيجة 3 أو 4 بارات أكثر. استخدام مولد صدمة لإدارة الصدمة. ضبط مستوى الصدمة حتى يتم تحقيق المستوى الصحيح. القيام بذلك لعصامالفصل يخشى غرفة تكييف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق باب الغرفة عند قياس مستوى الضوء للغرفة. معايرة مستوى الضوء إلى ما يقرب من 1.0. هذا هو عدد محدد لبرنامج FreezeFrame المستخدمة في هذه التجربة. وسوف ضوء متر خارجي قراءة هذا ك 2 لوكس. ويمكن تعديل مستوى الضوء عن طريق نقل موقع ضوء المنزل أو عن طريق ضبط مكثف للعدسة. تأكد من أن تضييق الخناق التشغيل للعدسة بعد تعديل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة مستوى الصوت ديسيبل إلى 85 ديسيبل. استخدام ديسيبل متر الخارجية داخل القفص اختبار لمعايرة مستوى ديسيبل (انظر الجدول مواد). سوف يكون الصوت قدم 2،700 هرتز لهجة. ملاحظة: في حالة استخدام الفئران الأكبر سنا من 6 أشهر من العمر قد يكون من الأفضل استخدام الضوضاء البيضاء منذ الفئران الأكبر سنا يمكن أن يكون السمع العجز. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد جهاز مستعدة تأخذ الموضوعات إلى غرفة عقد منفصل. ملاحظة: لا إيواء الماوس في نفس الغرفة مع غرفة الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ال التسميةه ذيل الفئران التي سيتم اختبار من أجل اختبار. فمن الأفضل للحد من التعامل المفرط قبل الاختبار. بدلا من ذلك، ذيول يمكن أن توصف اليوم قبل التجربة للحد من التعامل مع الإجهاد. بعد أن وصفت الفئران تسمح لهم يتأقلم مع الغرفة لمدة 30 دقيقة. لديهم أقفاص نظيفة اضافية لتأوي الفئران بعد اكتمال الاختبار. </li></ol> 2. تتبع تكييف يوم 1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كل فأر من القفص ووضعها في أقفاص الفردية لنقلها إلى الخوف تكييف الغرفة. استخدام الفراش نظيفة لكل القفص. وضع مذكرة لزجة على القفص نقل للحفاظ على النظام من الفئران اختبار الصحيح. ملاحظة: إذا تم إيواء الفئران منفردة ثم يمكن نقلها في قفص وطنهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في غرفة الاختبار وأغلق الباب. بدء برنامج حاسوبي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم التدريب، والسماح للفئران لاستكشاف الغرفة لمدة 3 دقائق. البرنامج ثم يقدم 20 ثانية نغمة (85 ديسيبل، 2،700 هرتز) رس الحيوان. بعد فترة ضئيلة من 20 ثانية يدار صدمة خفيفة (2 ثانية، 0.5 أمبير) للحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل رد فعل من هذا الموضوع للتأكد من أنها تلقت المحفزات مكره من خلال عرض الفيديو. A 200 ثانية الفاصل الزمني بين المحاكمة يفصل المحاكمات تكييف 5. يتكون كل محاكمة من 20 ثانية لهجة تليها تأخير 20 ثانية ثم صدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد اكتمال الاختبار تسمح بالبقاء الحيوان في غرفة الاختبار لمدة 1 دقيقة قبل إزالته من اختبار القفص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوان مرة أخرى في قفص نقل وإعادته إلى القفص وطنه. إذا كان هناك الفئران في قفص إضافية وطنهم ثم إيواء فردي الماوس حتى كل الفئران اختبار كامل. هذا سوف يقلل من الضغط على الفئران الأخرى التي لم يتم اختبارها. لن يكون حلا بديلا لإيواء منفردة كل الفئران أسبوع واحد قبل الاختبار للحد من تأثير إزالة باستمرار الفئران من القفص واحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف غرفة الاختبار مع 30٪ الأيزوبروبانول بعد مجموعة شرق افريقيايتم اختبار ح الحيوانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 2،2-2،7 لجميع الفئران في اختبار الفوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة إلى غرفة كل الفئران مستعمرتهم بعد أن تم اختبارها الماوس مشاركة في الفوج. </li></ol> 3. أثر الخوف تكييف يوم 2: تتبع الذاكرة اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سوف اختبار الذاكرة التتبع يحدث في يوم 2. في هذا البروتوكول هناك 3 عروض لهجة. وضع الفئران في سياق جديد للاختبار تكييف أثر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد برامج لتشغيل برنامج مع فترة الأساس 2 دقيقة تليها ثلاثة عروض 20 ثانية لهجة. هناك سا 220 ثانية بين كل عرض تقديمي ITI لهجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للشرط السياق الجديد، ضع إدراج الاكريليك واضحة على أرضية الغرفة لتغيير الشكل والملمس، ولون الغرفة تكييف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير رائحة في الغرفة من خلال وضع مستخلص الفانيليا في وزن القارب تحت إدراج الكلمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف الغرفة مع الايثانول 70٪ بدلا من 30٪ الأيزوبروبانول. ملاحظة: هذا سوف يساعدإنشاء سياق الرواية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل الفئران إلى غرفة عقد وrelabel ذيولها لاختبار إذا لزم الأمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد أقفاص نقل سياق الرواية عن طريق استبدال الفراش مع ورقة ممزقة. ملاحظة: هذا سوف يساعد في خلق سياق الرواية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الفئران في غرفة الاختبار ثم بدء تشغيل البرنامج. تنظيف الغرفة مع الايثانول 70٪ بعد الانتهاء من الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة إلى قفص الفئران وطنهم بعد الانتهاء من تكييف أثر. العودة إلى غرفة كل الفئران مستعمرتهم عندما تم اختبار جميع الفئران. </li></ol> 4. أثر الخوف تكييف يوم 3: الذاكرة السياقية اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في اليوم الثالث ويجري تكييف السياقية. إعداد برامج لتشغيل برنامج لتسجيل السلوك تجميد لمدة 8 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف غرفة مع 30٪ الأيزوبروبانول قبل اختبار وبعد اختبار كل فأر. وينبغي أن يكون سياق مماثلة ليوم 1. يجب أن يكون أقفاص نقل نفس في يوم و1. </li><li&gt; جلب الفئران إلى غرفة عقد وتسمية ذيولها للاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل فأر في غرفة الاختبار ثم بدء تشغيل البرنامج. تنظيف غرفة مع 30٪ الأيزوبروبانول بعد اكتمال الاختبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العودة إلى غرفة كل الفئران مستعمرتهم عند اكتماله. </li></ol>

<ol><li>Powell, R. A., Honey, P. L., Symbaluk, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPowell%2C+RA+%22Introduction+to+learning+and+behavior%22">Introduction to learning and behavior</a>. , 4th ed, Wadsworth Cengage Learning. Forthcoming.</li>
<li>Tsaltas, E., Preston, G. C., Gray, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+dorsal+bundle+lesions+on+serial+and+trace+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The effects of dorsal bundle lesions on serial and trace conditioning.</a> Behav. Brain Res. 10, 361-374 (1983).</li>
<li>McAlonan, G. M., Dawson, G. R., Wilkinson, L. O., Robbins, T. W., Everitt, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+AMPA-induced+lesions+of+the+medial+septum+and+vertical+limb+nucleus+of+the+diagonal+band+of+Broca+on+spatial+delayed+non-matching+to+sample+and+spatial+learning+in+the+water+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The effects of AMPA-induced lesions of the medial septum and vertical limb nucleus of the diagonal band of Broca on spatial delayed non-matching to sample and spatial learning in the water maze.</a> Eur. J. Neurosci. 7, 1034-1049 (1995).</li>
<li>Chowdhury, N., Quinn, J. J., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+hippocampus+involvement+in+trace+fear+conditioning+with+long%2C+but+not+short%2C+trace+intervals+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dorsal hippocampus involvement in trace fear conditioning with long, but not short, trace intervals in mice.</a> Behav. Neurosci. 119, 1396-1402 (2005).</li>
<li>Quinn, J. J., Oommen, S. S., Morrison, G. E., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-training+excitotoxic+lesions+of+the+dorsal+hippocampus+attenuate+forward+trace%2C+backward+trace%2C+and+delay+fear+conditioning+in+a+temporally+specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Post-training excitotoxic lesions of the dorsal hippocampus attenuate forward trace, backward trace, and delay fear conditioning in a temporally specific manner.</a> Hippocampus. 12, 495-504 (2002).</li>
<li>Misane, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-dependent+involvement+of+the+dorsal+hippocampus+in+trace+fear+conditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Time-dependent involvement of the dorsal hippocampus in trace fear conditioning in mice.</a> Hippocampus. 15, 418-426 (2005).</li>
<li>Quinn, J. J., Loya, F., Ma, Q. D., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+hippocampus+NMDA+receptors+differentially+mediate+trace+and+contextual+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Dorsal hippocampus NMDA receptors differentially mediate trace and contextual fear conditioning.</a> Hippocampus. 15, 665-674 (2005).</li>
<li>McEchron, M. D., Bouwmeester, H., Tseng, W., Weiss, C., Disterhoft, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampectomy+disrupts+auditory+trace+fear+conditioning+and+contextual+fear+conditioning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Hippocampectomy disrupts auditory trace fear conditioning and contextual fear conditioning in the rat.</a> Hippocampus. 8, 638-646 (1998).</li>
<li>Wiltgen, B. J., Sanders, M. J., Ferguson, C., Homanics, G. E., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+fear+conditioning+is+enhanced+in+mice+lacking+the+delta+subunit+of+the+GABAA+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Trace fear conditioning is enhanced in mice lacking the delta subunit of the GABAA receptor.</a> Learn. Mem. 12, 327-333 (2005).</li>
<li>Davis, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+basis+for+susceptibility+to+noise-induced+hearing+loss+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic basis for susceptibility to noise-induced hearing loss in mice.</a> Hear. Res. 155, 82-90 (2001).</li>
<li>Zheng, Q. Y., Johnson, K. R., Erway, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+hearing+in+80+inbred+strains+of+mice+by+ABR+threshold+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Assessment of hearing in 80 inbred strains of mice by ABR threshold analyses.</a> Hear. Res. 130, 94-107 (1999).</li>
<li>Moyer, J. R., Thompson, L. T., Disterhoft, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+eyeblink+conditioning+increases+CA1+excitability+in+a+transient+and+learning-specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Trace eyeblink conditioning increases CA1 excitability in a transient and learning-specific manner.</a> 16, 5536-5546 (1996).</li>
<li>Leuner, B., Falduto, J., Shors, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+memory+formation+increases+the+observation+of+dendritic+spines+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Associative memory formation increases the observation of dendritic spines in the hippocampus.</a> J. Neurosci. 23, 659-665 (2003).</li>
<li>McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+encoding+of+non-spatial+trace+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Hippocampal encoding of non-spatial trace conditioning.</a> Hippocampus. 9, 385-396 (1999).</li>
<li>McLaughlin, J., Skaggs, H., Churchwell, J., Powell, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medial+prefrontal+cortex+and+pavlovian+conditioning%3A+trace+versus+delay+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Medial prefrontal cortex and pavlovian conditioning: trace versus delay conditioning.</a> Behav. Neurosci. 116, 37-47 (2002).</li>
<li>Runyan, J. D., Moore, A. N., Dash, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+prefrontal+cortex+in+memory+storage+for+trace+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A role for prefrontal cortex in memory storage for trace fear conditioning.</a> J. Neurosci. 24, 1288-1295 (2004).</li>
<li>Gilmartin, M. R., McEchron, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+neurons+in+the+medial+prefrontal+cortex+of+the+rat+exhibit+tonic+and+phasic+coding+during+trace+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Single neurons in the medial prefrontal cortex of the rat exhibit tonic and phasic coding during trace fear conditioning.</a> Behav. Neurosci. 119, 1496-1510 (2005).</li>
<li>Crow, T., Xue-Bian, J. J., Siddiqi, V., Kang, Y., Neary, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+of+mitogen-activated+protein+kinase+by+one-trial+and+multi-trial+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation of mitogen-activated protein kinase by one-trial and multi-trial classical conditioning.</a> J. Neurosci. 18, 3480-3487 (1998).</li>
<li>Martin, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAP+kinase+translocates+into+the+nucleus+of+the+presynaptic+cell+and+is+required+for+long-term+facilitation+in+Aplysia%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">MAP kinase translocates into the nucleus of the presynaptic cell and is required for long-term facilitation in Aplysia.</a> Neuron. 18, 899-912 (1997).</li>
<li>Crestani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+fear+conditioning+involves+hippocampal+alpha5+GABA%28A%29+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trace fear conditioning involves hippocampal alpha5 GABA(A) receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 8980-8985 (2002).</li>
<li>Crestani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+GABAA-receptor+clustering+results+in+enhanced+anxiety+and+a+bias+for+threat+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Decreased GABAA-receptor clustering results in enhanced anxiety and a bias for threat cues.</a> Nat. Neurosci. 2, 833-839 (1999).</li>
<li>Moore, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+and+contextual+fear+conditioning+is+enhanced+in+mice+lacking+the+alpha4+subunit+of+the+GABA%28A%29+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Trace and contextual fear conditioning is enhanced in mice lacking the alpha4 subunit of the GABA(A) receptor.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 93, 383-387 (2010).</li>
<li>Cushman, J. D., Moore, M. D., Jacobs, N. S., Olsen, R. W., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+pharmacogenetic+analysis+on+the+role+of+the+alpha4+GABA%28A%29+receptor+subunit+in+the+ethanol-mediated+impairment+of+hippocampus-dependent+contextual+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral pharmacogenetic analysis on the role of the alpha4 GABA(A) receptor subunit in the ethanol-mediated impairment of hippocampus-dependent contextual learning.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 35, 1948-1959 (2011).</li>
<li>Raybuck, J. D., Lattal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double+dissociation+of+amygdala+and+hippocampal+contributions+to+trace+and+delay+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Double dissociation of amygdala and hippocampal contributions to trace and delay fear conditioning.</a> PLoS ONE. 6, (2011).</li>
<li>Kwapis, J. L., Jarome, T. J., Schiff, J. C., Helmstetter, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+consolidation+in+both+trace+and+delay+fear+conditioning+is+disrupted+by+intra-amygdala+infusion+of+the+protein+synthesis+inhibitor+anisomycin%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Memory consolidation in both trace and delay fear conditioning is disrupted by intra-amygdala infusion of the protein synthesis inhibitor anisomycin.</a> Learn. Mem. 18, 728-732 (2011).</li>
<li>Gilmartin, M. R., Kwapis, J. L., Helmstetter, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+and+contextual+fear+conditioning+are+impaired+following+unilateral+microinjection+of+muscimol+in+the+ventral+hippocampus+or+amygdala%2C+but+not+the+medial+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Trace and contextual fear conditioning are impaired following unilateral microinjection of muscimol in the ventral hippocampus or amygdala, but not the medial prefrontal cortex.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 97, 452-464 (2012).</li>
<li>Baysinger, A. N., Kent, B. A., Brown, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptors+in+amygdala+control+trace+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptors in amygdala control trace fear conditioning.</a> PLoS ONE. 7, (2012).</li>
<li>Wanisch, K., Tang, J., Mederer, A., Wotjak, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trace+fear+conditioning+depends+on+NMDA+receptor+activation+and+protein+synthesis+within+the+dorsal+hippocampus+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain%22%5BJournal%5D)">Trace fear conditioning depends on NMDA receptor activation and protein synthesis within the dorsal hippocampus of mice.</a> Behav. Brain. 157, 63-69 (2005).</li>
<li>Smith, D. R., Gallagher, M., Stanton, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+differences+and+nonassociative+effects+in+mouse+trace+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Genetic background differences and nonassociative effects in mouse trace fear conditioning.</a> Learn. Mem. 14, 597-605 (2007).</li>
<li>Rudy, J. W., O'Reilly, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contextual+fear+conditioning%2C+conjunctive+representations%2C+pattern+completion%2C+and+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Contextual fear conditioning, conjunctive representations, pattern completion, and the hippocampus.</a> Behav. Neurosci. 113, 867-880 (1999).</li>
<li>Wiltgen, B. J., Sanders, M. J., Anagnostaras, S. G., Sage, J. R., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Context+fear+learning+in+the+absence+of+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Context fear learning in the absence of the hippocampus.</a> J. Neurosci. 26, 5484-5491 (2006).</li>
<li>Reijmers, L. G., Perkins, B. L., Matsuo, N., Mayford, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+a+stable+neural+correlate+of+associative+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Localization of a stable neural correlate of associative memory.</a> Science. 317, 1230-1233 (2007).</li>
<li>Huerta, P. T., Sun, L. D., Wilson, M. A., Tonegawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+temporal+memory+requires+NMDA+receptors+within+CA1+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Formation of temporal memory requires NMDA receptors within CA1 pyramidal neurons.</a> Neuron. 25, 473-480 (2000).</li>
<li>Jacobs, N. S., Cushman, J. D., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+accurate+measurement+of+fear+memory+in+Pavlovian+conditioning%3A+Resolving+the+baseline+issue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">The accurate measurement of fear memory in Pavlovian conditioning: Resolving the baseline issue.</a> J. Neurosci. Methods. 190, 235-239 (2010).</li>
</ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

كانت هناك العديد من الدراسات التي أوضحت أن الدوائر العصبية التي ترتكز عليها تتبع تكييف الخوف. ويعتقد تتبع تكييف الخوف لإشراك CA1 من الحصين 12-14. وهناك أيضا أدلة على أن قشرة الفص الجبهي الأنسي (mPFC) يلعب دورا كبيرا في تتبع العين طرفة تكييف 15، وقد تم العثور على mPFC أن تشارك في تتبع تكييف الخوف. وجدت إحدى الدراسات أن الخلايا العصبية mPFC توفير النشاط المتواصل خلال فترة التتبع، وبالتالي توفير هيكل التي يمكن أن تحافظ على الذاكرة أثناء الفاصل الزمني تتبع 1...

في تكييف الخوف يقترن حافزا محايد (NS) مع حافزا دون شروط مكره (الولايات المتحدة). وNS عادة لهجة ويصبح حافزا مكيفة (CS) من خلال عمليات التزاوج المتكررة مع الولايات المتحدة. ثم يمكن للCS استثارة رد فعل مشروط (CR)، مثل تجميد، في غياب الولايات المتحدة مكره. A استخداما الخوف بروتوكول ظروف غير ظروف تأخير. في هذا البروتوكول بداية NS والولايات المتحدة هي متجاورة أو مع بعض التداخل في عرض الحوافز. على الرغم من تكييف الخوف التأخير هو واحد من أنواع الأكثر شيوعا من تكييف النقابي الزمانية، وهناك عدة أنواع أخرى من تكييف النقابي الترتيبات الزمنية: تكييف في وقت واحد، تكييف الوراء، وتكييف التتبع 1. في تتبع تكييف الخوف هناك فاصل زمني خالية من التحفيز بين NS والولايات المتحدة من عدة ثوان مما أدى إلى &quot;التتبع&quot; الفترة. أفادت عدة دراسات العجزق في تتبع تكييف الخوف عندما يتم إنتاج أعصاب الآفات في الهياكل التي مدخلات الحصين 2-5 أو عند استخدام وكلاء الدوائية لمنع وظيفة مستقبلات في قرن آمون. الآفة إلى نتائج الحصين في العجز في تكييف التتبع وتكييف السياقية، ولكن لا يضعف تكييف الخوف تأخير 8. هناك العديد من الفوائد لاستخدام التتبع تكييف الخوف. لا يمكن أن يتحقق بروتوكول تكييف الخوف على مدى فترة اختبار لمدة ثلاثة أيام ويسمح للذاكرة تعتمد على الحصين الذي لا يتوقف مكانيا. تكييف تتبع الخوف يمكن استخدامها كاختبار مكملة لمتاهة موريس المائية، رواية اختبار الاعتراف الكائن، أو اختبارات متاهة أخرى في التحقيق في الذاكرة التي تعتمد على الحصين.

<table><tbody><tr><td>FreezeFrame</td><td>Coulbourn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30٪ إيزوبروبانول</td><td></td><td></td><td>قم بشراء 90٪ من الأيزوبروبانول وتخفيفه إلى 30٪</td></tr> <tr><td>70٪ من الإيثانول</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amp-meter</td><td>Med-Associates</td><td>ENV-420</td><td>Windows XP و Vista و 7 متوافق مع (32 بت فقط)</td></tr> مقياس <tr><td>مستوى</td><td></td> الصوت الرقمي <td>33-2055</td><td></td></tr><tr><td>مستخلص الفانيليا</td><td>ماكورميك مستخلص</td><td></td><td></td>الفانيليا النقي</tr><tr><td>ملاحظات لاصقة</td><td>بعد 3</td><td></td><td>في × 3 بوصة</td></tr></tbody></table>

تتبع تكييف الخوف في الفئران

Trace Fear Conditioning in Mice

في هذه التجربة نقدم تقنية لقياس التعلم والذاكرة. في الخوف التتبع بروتوكول تكييف المقدمة هنا وهناك خمسة أزواج بين التحفيز محايدة وحافزا دون شروط. هناك فترة التتبع و 20 ثانية الذي يفصل كل محاكمة تكييف. بشأن تجميد اليوم التالي يقاس خلال تقديم المثير الشرطي (CS) وفترة التتبع. في اليوم الثالث هناك اختبار لقياس 8 دقيقة الذاكرة السياقية. النتائج هي ممثل من الفئران التي عرضت مع التحفيز دون شروط مكره (الصدمة) بالمقارنة مع الفئران التي تلقت عروضا لهجة دون المثير غير الشرطي. تتبع تكييف الخوف قد استخدمت بنجاح للكشف عن العجز والتحسينات التعلم والذاكرة في الفئران خفية التي لم يتم العثور عليها مع غيرها من وسائل تكييف الخوف. ويعتقد هذا النوع من تكييف الخوف أن تعتمد على الاتصالات بين قشرة الفص الجبهي الإنسي والحصين. واحد الجدل الحالي هو ما إذا كان يعتقد هذا الأسلوب لتكون اللوزة مستقلة. وبالتالي، هناك حاجة أخرى الخوف تكييف اختبار لفحص آثار التعلم والذاكرة التي تعتمد على اللوزة، مثل من خلال تكييف الخوف من التأخير.

لنتائج ممثل نقدم البيانات من السيطرة C57BL/6J الفئران التي حصلت على أزواج التحفيز محايدة مع المثير غير الشرطي (حالة الصدمة) بالمقارنة مع الفئران التي تلقت التحفيز محايدة ولكن لم يحصل على التحفيز دون شروط (أي شرط الصدمة). من المهم لتشغيل هذا الشرط عند وضع أول مرة هذا الاختبار السلوكية لتحديد ما إذا كان قد تم تنفيذ البروتوكول بشكل صحيح. البيانات في الشكل 1 يمثل اليوم تدريب الفئران C57BL/6J في الخوف...

في التجربة التالية وصفنا بروتوكول للتكييف الخوف التتبع في الفئران. هذا النوع من الذاكرة النقابي يشمل فترة التتبع التي تفصل بين التحفيز محايدة والتحفيز دون شروط.

In this experiment we present a technique to measure learning and memory. In the trace fear conditioning protocol presented here there are five pairings ...

الهدف العام من التجربة التالية هو تقييم التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران من خلال استخدام إشراط الكرة الأثرية. ويتم تحقيق ذلك عن طريق تدريب الحيوان أولاً على ربط نغمة سمعية بمحفز منفر. وفي اليوم التالي، يتم وضع الحيوان في سياق جديد وتسجيل سلوك التجميد كرد فعل تجاه النغمة.في اليوم الثالث، يتم إرجاع الحيوان إلى السياق الأصلي وتسجيل سلوك التجميد. وتظهر النتائج أن الفئران التي تدربت على الاقتران بين نغمة الصوت والصدمة تظهر سلوك تجميد أكثر من تلك التي لم تتلق الصدمة. يمكن استخدام هذه الطريقة لتوفير رؤى حول التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران، وهي مفيدة بشكل خاص عند استخدامها في دراسة الحيوانات المعدلة وراثياً وحيوانات التعطيل الجيني (knockout).يتم تنفيذ الإجراء التالي في غرفة تكييف الخوف الموجودة داخل غرفة أكبر لعزل الصوت. مع إغلاق باب الغرفة، اضبط المصابيح للوصول إلى مستوى الإضاءة المطلوب؛ وإذا تم وضعها بشكل صحيح، يجب أن يكون ضوء مؤشر مستوى الإضاءة مطفأً. استخدم مقياس مستوى الصوت للتأكد من ثبات مستوى ضوضاء الخلفية داخل كل غرفة.بعد ذلك، قم بمعايرة النغمة المستخدمة أثناء التدريب. استخدم جهاز معايرة خارجي لمعايرة مستوى الصدمة. ضع سلكاً واحداً على قضيب، وسلكاً آخر على بعد ثلاثة أو أربعة قضبان.استخدم مولد الصدمات لإعطاء الصدمة وقم بالمعايرة حتى يتم الوصول إلى المستوى الصحيح. كرر هذه الخطوة لكل غرفة من غرف الإشراط الخوفي. وبمجرد تجهيز الجهاز، انقل الخاضعين للتجربة إلى غرفة احتجاز منفصلة عن غرفة الاختبار لتقليل التعامل المفرط معهم.قبل إجراء الاختبار، قم بتمييز الذيول قبل 30 دقيقة على الأقل من بدء الاختبار أو في اليوم السابق له. وعند الاستعداد للبدء، انقل الفأر المخصص للاختبار إلى قفص نظيف ومميز لنقله إلى غرفة الإشراط الخوفي. ضع الفأر في الغرفة، ثم أغلق الباب وشغل البرنامج البرمجي.في اليوم الأول من التدريب، تُترك الفئران لاستكشاف الحجرة لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك، يقوم البرنامج بإصدار نغمة لمدة 22 ثانية، يتبعها فاصل زمني للتتبع لمدة 22 ثانية ينتهي بصدمة كهربائية خفيفة في القدم. راقب الحيوان للتأكد من تلقيه للمنبهات المنفرة.يفصل فاصل زمني بين التجارب مدته 20s خمس تجارب إشراطية. بعد التجارب، اترك الحيوان في غرفة الاختبار لمدة دقيقة واحدة قبل إخراجه، ثم ضع الحيوان مرة أخرى في قفص النقل وأعده إلى غرفة الإيواء. إذا كان هناك فئران إضافية سيتم اختبارها في أقفاصها الأصلية بشكل فردي، احتفظ بالفأر حتى تكمل جميع الفئران الاختبار.نظف غرفة الاختبار باستخدام 30%isopropanol استعداداً للحيوان التالي. كرر هذه الخطوات حتى يتم تدريب جميع الفئران. ثم أعد جميع الفئران إلى غرفة المستعمرة الخاصة بها.بعد اختبار آخر فأر في المجموعة في اليوم التالي، يتم اختبار الحيوانات لقياس ذاكرة الخوف الأثرية. في هذا اليوم، استبدل فرش أقفاص النقل بورق ممزق لتغيير سياقها البيئي.يتم تغيير سياق الغرفة أيضاً. ضع ورقة من الفوم تحت قطعة إدراج من الأكريليك الشفاف على الأرضية لتغيير ملمسها ومظهرها. ضع فاصلاً من الأكريليك داخل منطقة الاختبار.قم بتغيير الرائحة عن طريق وضع مستخلص الفانيليا في وعاء مصل تحت الأرضية. وفي هذا اليوم، قم بتنظيف الغرفة باستخدام 70%ethanol بدلاً من 30%isopropanol بين كل فأر وآخر. وعندما تكون مستعداً، ضع الفأر في غرفة الاختبار وابدأ البرنامج.تبدأ الجلسة بفترة أساس مدتها دقيقتان، تليها ثلاثة عروض للنغمة 22nd. وتوجد فترة فاصلة بين التجارب مدتها 222nd بين كل عرض للنغمة والآخر. بعد انتهاء الجلسة، تُعاد الفئران إلى أقفاصها الرئيسية ويستمر العمل حتى يتم اختبار جميع الحيوانات استعدادًا للاختبار في اليوم التالي.استعد نفس السياق المستخدم في اليوم الأول. نظف الحجرة باستخدام 30%isopropanol. يتم إجراء التكييف السياقي في اليوم الثالث.باستخدام أقفاص النقل نفسها المستخدمة في اليوم الأول، استرجع فأر الاختبار من غرفة الحفظ. ضع الفأر في غرفة الاختبار ثم ابدأ برنامج اختبار الذاكرة السياقية. قم بتشغيل برنامج لتسجيل سلوك التجمد لمدة ثماني دقائق.بعد انقضاء هذا الوقت، يتم إرجاع الفئران إلى أقفاصها الأصلية ومتابعة الاختبار كما تم توضيحه سابقاً؛ وتظهر النتائج النموذجية زيادة في سلوك التجمد لدى الحيوانات التي تعرضت للاقتران بين الصدمة والنغمة على مدار جلسة التدريب. وفي سياق جديد، أظهرت الفئران التي تعرضت لمحفز الصدمة المنفر تجمدًا أكبر مقارنة بالفئران التي لم تتعرض للصدمة خلال فترة تتبع النغمة المرجعية والفاصل الزمني بين التجارب. وعند إعادتها إلى السياق الأصلي، أظهرت الحيوانات التي تعرضت لمحفز الصدمة المنفر سلوك تجمد أعلى بشكل مستمر على مدار فترة الثماني دقائق.بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام تكييف الخوف الأثري من أجل فهم التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران.

Research

JoVE Journal

Behavior

سلوك

تقدم هذه المقالة بروتوكول لالسياقية وملقن الخوف تكييف الاختبار باستخدام نظام تحليل الفيديو لتقييم الخوف التعلم والذاكرة في الفئران.

السياقية وملقن الخوف تكييف اختبار باستخدام نظام تحليل الفيديو في الفئران

توضح هذه المقالة طريقة لإشعال المواد الكيميائية مع بينتيلينيتيترازولي هذا البروتوكول ويقدم نموذجا ماوس من الصرع. يمكن أيضا استخدام هذا البروتوكول للتحقيق في التعرض للاستيلاء على الاستقراء والمرضية بعد نوبات الصرع في الفئران.

نموذج الماوس إشعال الناجمة عن بينتيلينيتيترازولي

هنا يمكننا وصف المنهجية التفصيلية المطلوبة لإجراء تجارب التعلم (سفل) الإجهاد--تعزيز الخوف، نموذج السريرية لاضطراب الإجهاد اللاحق للصدمة النفسية، في كل من الفئران والجرذان. النموذج يستخدم جوانب الخوف Pavlovian تكييف وتجميد كفهرس للخوف المعززة في القوارض.

الخوف الإجهاد--تعزيز التعلم، نموذج القوارض قوية من اضطراب الإجهاد اللاحق للصدمة النفسية

نحن نصف بروتوكول تكييف الخوف الموسعة التي تنتج الإفراط في التدريب والخوف من الحضانة في الفئران. ويتضمن هذا البروتوكول دورة تدريبية واحدة مع 25 نغمة صدمة الاقتران (أي الإفراط في التدريب) ومقارنة الاستجابات تجميد مشروط خلال السياق واختبارات جديلة 48 ساعة (قصيرة الأجل) و 6 أسابيع (على المدى الطويل) بعد التدريب.

حضانة الخوف باستخدام بروتوكول تكييف الخوف الموسعة للفئران

وتتوقف الاستجابات السلوكية الدفاعية على شدة التهديد وقربه، ومدى تعرضه للخطر. وبناء على هذه العوامل، قمنا بتطوير نموذج تكييف الكلاسيكية التي تثير التحولات واضحة بين تجميد مشروط وسلوك الطيران داخل المواضيع الفردية. هذا النموذج هو أمر بالغ الأهمية لفهم الأمراض التي تنطوي عليها في القلق, الذعر, واضطرابات ما بعد الصدمة.

رواية بافلوفيان الخوف تكييف نموذج لدراسة تجميد وسلوك الطيران

لدراسة سلوكيات الطيران في سياق مخيف ، نقدم بروتوكول تكييف الخوف المعدل. يضمن هذا البروتوكول أن الفئران تظهر باستمرار سلوكيات الطيران أثناء عرض الإشارات في تكييف الخوف.

تعديل تكييف الخوف للحث على سلوكيات الطيران في الفئران

يقيم نموذج الخوف الرصدي التجميد غير المباشر في القوارض كنموذج للتعاطف العاطفي. يستلزم هذا الإجراء تعريض القوارض المراقبة لمتظاهرين محددين يتلقون صدمات كرهة في القدم لاستنباط استجابات تجميد تعاطفية. من خلال استخدام فحوصات الخوف القائمة على الملاحظة ، يمكن للباحثين التحقيق في الآليات العصبية الكامنة وراء التعاطف العاطفي.

الخوف الرصدي كنموذج للتعاطف العاطفي في الفئران

تعطيل إعادة التوحيد هو نهج واعد لتثبيط التعبير السلوكي لذاكرة الخوف لدى المرضى الذين يعانون من اضطرابات القلق أو اضطراب ما بعد الصدمة. في سلسلة من دراسات تكييف الخوف البشري ، أظهرنا أن تعطيل إعادة التوحيد بواسطة بروبرانولول β النورآدرينالية فعال جدا في محو استجابة الخوف المشروطة.

تعطيل إعادة الوحدة من الخوف الذاكرة في البشر من قبل نورأدريني β-مانع

تعدل هرمونات الغدد التناسلية مثل هرمون الاستروجين تكوين الذاكرة في عدد من النماذج التجريبية بما في ذلك ذاكرة انقراض الخوف. يصف هذا البروتوكول مجموعة من الطرق للتحقيق في تأثير هرمونات الغدد التناسلية على وجه التحديد أثناء الانقراض في الإناث اللواتي يركبن الدراجات بشكل طبيعي ، بما في ذلك مراقبة دورة الشبق وإعطاء هرمون الاستروجين الخارجي.

بروتوكول لدراسة الانقراض من الخوف مشروطة في ركوب الدراجات وبطبيعة الحال إناث الفئران

تصف هذه المقالة بروتوكولا جديدا للقياس الكمي للدافع الاجتماعي في الفئران التي تستخدم التكييف الفعال للحصول على مكافأة اجتماعية. البروتوكول مفيد لقياس الدافع الاجتماعي في نماذج الفئران للتوحد واضطرابات السلوك الاجتماعي الأخرى.

قياس الدافع الاجتماعي في الفئران عن طريق تكييف هواء فعال

تعلم تقنية تكييف الخوف المتقطع لتقييم التعلم والذاكرة المعتمدة على الحصين في الفئران. تُستخدم هذه الطريقة لدراسة ذاكرة الترابط وتُطبق على الفئران المعدلة وراثياً.

تتبع تكييف الخوف في الفئران

استكشف المزيد من الفيديوهات