تتبع تكييف الخوف في الفئران

الهدف العام من التجربة التالية هو تقييم التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران من خلال استخدام إشراط الكرة الأثرية. ويتم تحقيق ذلك عن طريق تدريب الحيوان أولاً على ربط نغمة سمعية بمحفز منفر. وفي اليوم التالي، يتم وضع الحيوان في سياق جديد وتسجيل سلوك التجميد كرد فعل تجاه النغمة.

في اليوم الثالث، يتم إرجاع الحيوان إلى السياق الأصلي وتسجيل سلوك التجميد. وتظهر النتائج أن الفئران التي تدربت على الاقتران بين نغمة الصوت والصدمة تظهر سلوك تجميد أكثر من تلك التي لم تتلق الصدمة. يمكن استخدام هذه الطريقة لتوفير رؤى حول التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران، وهي مفيدة بشكل خاص عند استخدامها في دراسة الحيوانات المعدلة وراثياً وحيوانات التعطيل الجيني (knockout).

يتم تنفيذ الإجراء التالي في غرفة تكييف الخوف الموجودة داخل غرفة أكبر لعزل الصوت. مع إغلاق باب الغرفة، اضبط المصابيح للوصول إلى مستوى الإضاءة المطلوب؛ وإذا تم وضعها بشكل صحيح، يجب أن يكون ضوء مؤشر مستوى الإضاءة مطفأً. استخدم مقياس مستوى الصوت للتأكد من ثبات مستوى ضوضاء الخلفية داخل كل غرفة.

بعد ذلك، قم بمعايرة النغمة المستخدمة أثناء التدريب. استخدم جهاز معايرة خارجي لمعايرة مستوى الصدمة. ضع سلكاً واحداً على قضيب، وسلكاً آخر على بعد ثلاثة أو أربعة قضبان.

استخدم مولد الصدمات لإعطاء الصدمة وقم بالمعايرة حتى يتم الوصول إلى المستوى الصحيح. كرر هذه الخطوة لكل غرفة من غرف الإشراط الخوفي. وبمجرد تجهيز الجهاز، انقل الخاضعين للتجربة إلى غرفة احتجاز منفصلة عن غرفة الاختبار لتقليل التعامل المفرط معهم.

قبل إجراء الاختبار، قم بتمييز الذيول قبل 30 دقيقة على الأقل من بدء الاختبار أو في اليوم السابق له. وعند الاستعداد للبدء، انقل الفأر المخصص للاختبار إلى قفص نظيف ومميز لنقله إلى غرفة الإشراط الخوفي. ضع الفأر في الغرفة، ثم أغلق الباب وشغل البرنامج البرمجي.

في اليوم الأول من التدريب، تُترك الفئران لاستكشاف الحجرة لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك، يقوم البرنامج بإصدار نغمة لمدة 22 ثانية، يتبعها فاصل زمني للتتبع لمدة 22 ثانية ينتهي بصدمة كهربائية خفيفة في القدم. راقب الحيوان للتأكد من تلقيه للمنبهات المنفرة.

يفصل فاصل زمني بين التجارب مدته 20s خمس تجارب إشراطية. بعد التجارب، اترك الحيوان في غرفة الاختبار لمدة دقيقة واحدة قبل إخراجه، ثم ضع الحيوان مرة أخرى في قفص النقل وأعده إلى غرفة الإيواء. إذا كان هناك فئران إضافية سيتم اختبارها في أقفاصها الأصلية بشكل فردي، احتفظ بالفأر حتى تكمل جميع الفئران الاختبار.

نظف غرفة الاختبار باستخدام 30%isopropanol استعداداً للحيوان التالي. كرر هذه الخطوات حتى يتم تدريب جميع الفئران. ثم أعد جميع الفئران إلى غرفة المستعمرة الخاصة بها.

بعد اختبار آخر فأر في المجموعة في اليوم التالي، يتم اختبار الحيوانات لقياس ذاكرة الخوف الأثرية. في هذا اليوم، استبدل فرش أقفاص النقل بورق ممزق لتغيير سياقها البيئي.

يتم تغيير سياق الغرفة أيضاً. ضع ورقة من الفوم تحت قطعة إدراج من الأكريليك الشفاف على الأرضية لتغيير ملمسها ومظهرها. ضع فاصلاً من الأكريليك داخل منطقة الاختبار.

قم بتغيير الرائحة عن طريق وضع مستخلص الفانيليا في وعاء مصل تحت الأرضية. وفي هذا اليوم، قم بتنظيف الغرفة باستخدام 70%ethanol بدلاً من 30%isopropanol بين كل فأر وآخر. وعندما تكون مستعداً، ضع الفأر في غرفة الاختبار وابدأ البرنامج.

تبدأ الجلسة بفترة أساس مدتها دقيقتان، تليها ثلاثة عروض للنغمة 22nd. وتوجد فترة فاصلة بين التجارب مدتها 222nd بين كل عرض للنغمة والآخر. بعد انتهاء الجلسة، تُعاد الفئران إلى أقفاصها الرئيسية ويستمر العمل حتى يتم اختبار جميع الحيوانات استعدادًا للاختبار في اليوم التالي.

استعد نفس السياق المستخدم في اليوم الأول. نظف الحجرة باستخدام 30%isopropanol. يتم إجراء التكييف السياقي في اليوم الثالث.

باستخدام أقفاص النقل نفسها المستخدمة في اليوم الأول، استرجع فأر الاختبار من غرفة الحفظ. ضع الفأر في غرفة الاختبار ثم ابدأ برنامج اختبار الذاكرة السياقية. قم بتشغيل برنامج لتسجيل سلوك التجمد لمدة ثماني دقائق.

بعد انقضاء هذا الوقت، يتم إرجاع الفئران إلى أقفاصها الأصلية ومتابعة الاختبار كما تم توضيحه سابقاً؛ وتظهر النتائج النموذجية زيادة في سلوك التجمد لدى الحيوانات التي تعرضت للاقتران بين الصدمة والنغمة على مدار جلسة التدريب. وفي سياق جديد، أظهرت الفئران التي تعرضت لمحفز الصدمة المنفر تجمدًا أكبر مقارنة بالفئران التي لم تتعرض للصدمة خلال فترة تتبع النغمة المرجعية والفاصل الزمني بين التجارب. وعند إعادتها إلى السياق الأصلي، أظهرت الحيوانات التي تعرضت لمحفز الصدمة المنفر سلوك تجمد أعلى بشكل مستمر على مدار فترة الثماني دقائق.

بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام تكييف الخوف الأثري من أجل فهم التعلم والذاكرة المعتمدين على الحصين في الفئران.