في فيفو التصوير الضوئي من أورام الدماغ والتهاب المفاصل عن طريق نيون SapC-DOPS Nanovesicles

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء تصوير 360 درجة في الجسم الحي للفأر لتحديد الزاوية المثلى لتحليل الفلورة. يتم تحقيق ذلك عن طريق إعداد ورم الدماغ تقويم العظام أولا ، ورم المخ المصمم هندسيا ، ونماذج التهاب المفاصل. بعد ذلك يتم إنتاج بروتين SAP C ويتم تحضير حويصلات النانو SAP D-O-P-S-C-V-M.

ثم يتم حقن الحويصلات النانوية في وريد ذيل. أخيرا ، يتم التقاط صور الأشعة السينية والأشعة السينية وتحليلها. في النهاية ، يتم استخدام طريقة M-A-R-O-I لإظهار الزاوية المثلى لتحليل التصوير الفلوري.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل التصوير الفلوري 2D Planar ، هي أن طريقة M-A-O-M-A-R-O-I تسمح للمحققين بتحديد الزاوية المثلى لتحليل التصوير الفلوري. تتوسع الآثار المترتبة على هذا التقني نحو العلاج وتشخيص السرطان والتهاب المفاصل لأن CEP CS Vesical يمكن أن يستهدف الورم والأنسجة الالتهابية. تمت الموافقة على جميع الدراسات التي أجريت على من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه بجامعة سينسيناتي ومؤسسة أبحاث مستشفى سينسيناتي للأطفال لإجراء هذه الدراسات وفأر ورم المخ التقويمي.

يتم استخدام فأر ورم الدماغ المعدل وراثيا ونموذج فأر التهاب المفاصل A-K-B-X-N وفقا لبروتوكول النص ، استخدم نظام تسجيل فأر مفصل التهاب المفاصل لتقييم الفئران لالتهاب المفاصل على النحو التالي ، صفر يساوي عدم وجود التهاب مفاصل يمكن اكتشافه ، واحد يساوي تورما و / أو احمرار مخلب ، أو رقم واحد يساوي مفصلين معنيين. ثلاثة تساوي ثلاثة مفاصل معنية وأربعة تساوي التهاب المفاصل الحاد في المخلب والرقم بأكمله تنتج بروتين SAPs C البشري المؤتلف في خلايا الإشريكية القولونية قبل الترسيب بالإيثانول وتنقية الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء بعد التجميد تحدد تركيز SAP C الجاف بالوزن. لخلط بروتين SAP C ، امزج 0.18 ملليغرام من DOPS و 0.03 ملليغرام من CVM في أنبوب زجاجي واستخدم غاز النيتروجين لتبخير المذيبات الدهنية.

ثم أضف 0.32 ملليغرام من مسحوق بروتين البحر SAPs إلى الخليط. الخليط الجاف في ملليلتر واحد من PBS العازلة وحمام سونيكات لمدة 15 دقيقة. مرر التعليق عبر عمود Cidex G 25 لإزالة صبغة CVM المجانية.

سيكون للجسيمات النانوية SAP C-D-O-P-S-C-V-M أقصى إثارة وانبعاث يبلغ 653 نانومتر و 677 نانومتر على التوالي. لاختبار التصوير البصري الدوراني متعدد الزوايا أو طريقة M-A-R-O-I باستخدام نظام المريخ ، بعد تخدير فأر من أحد طرازات الماوس الموصوفة بفلور ISO بنسبة 2٪ ، ضع الماوس في وضع ضعيف في نظام المريخ مع توجيه عموده الفقري نحو الكاميرا من شاشة المعاينة لعلامة تبويب دوار MI brucker ، معايرة فيلم دعم المريخ بزاوية 380 درجة. لوضع الماوس لإدارة SAPs C-D-O-P-S-C-V-M في ذيل الماوس ، قم بحقن 200 ميكرولتر عن طريق الوريد بعد 24 ساعة ، ثم مرة أخرى بعد سبعة إلى تسعة أيام من الحقن ، التقط صورا مضان وأشعة سينية بزيادات قدرها 10 درجات على مدار 380 درجة ، مما يخلق تداخلا طفيفا لضمان عدم وجود فجوات في مجموعة البيانات الدورانية.

باستخدام برنامج الدوران Bruker ، قم بتركيب صور الفلورسنت على صور الأشعة السينية للتوطين التشريحي. لتحليل الصور ، ارسم منطقة مستطيلة ذات أهمية ، أو عائد استثمار يشمل عرض مجال الرؤية ، أو مجال الرؤية لموقع المرض لفئران ورم الدماغ. استخدم نفس عائد الاستثمار على كل نموذج ورم وفئران التحكم المعنية لجميع النقاط الزمنية باستخدام المعالم التشريحية لتحديد موضع عائد الاستثمار بعد طرح الخلفية تلقائيا.

حدد متوسط شدة التألق لكل صورة باستخدام برنامج Brucker MI لتحويل الصور الفلورية إلى فوتونات في الثانية لكل ملليمتر مربع ، ورسم قيم التألق كدالة لزوايا التصوير وتطبيقها كأشرطة خطأ. الانحراف المعياري لمتوسط قيم التألق التي تم الحصول عليها من الفئران الضابطة. تظهر الصورة المضان للفأر التمثيلي الذي يحمل ورم تقويم العظام في هذا الشكل.

نوضح هنا أن بذور SAPs ، الحويصلات النانوية DOPS المصنفة بصبغة حمراء بعيدة ، تتراكم على وجه التحديد في أورام دماغ الفئران التقويمية والعفوية ، وكذلك في المفاصل المصابة بالتهاب المفاصل لفئران KBXN. الغرض الأساسي من نظام المريخ هو تحديد الزاوية المثلى للتألق بحيث يمكن أخذ القياسات الأكثر دقة كما هو موضح هنا. زاوية الصورة المثلى لهذا هي 10 درجات.

تم أخذ الموضع الذي تكون فيه شدة الفوتون الفلوري هي أكبر قياسات خط الأساس قبل حقن SAP C-D-O-P-S-C-V-M ، وبعد 24 ساعة من الحقن تلقت الفئران الخالية من الورم علاجا مماثلا. تظهر هذه الأرقام بيانات قابلة للمقارنة من نموذج فأر ورم الدماغ المعدل وراثيا. تم التقاط الصور الفلورية وقياسات الفوتون في خط الأساس بعد 24 ساعة وتسعة أيام من حقن SAP C-D-O-P-S-C-V-M.

تظهر الرسوم البيانية أن زاوية التصوير المثلى في الورم الذي يحمل الورم الحيواني كتم الصوت 49 هي 20 درجة ، بعد 24 ساعة من الحقن ، ولكنها تتغير إلى 10 درجات بعد تسعة أيام من الحقن. يشير هذا إلى أن تغيير إشارة الفلورسنت يرتبط بالتغيرات المورفولوجية التي من المحتمل أن تعكس نمو الورم. كما هو موضح في هذا الجدول ، توضح طريقة M-A-R-O-I بوضوح أن إشارة الفلورسنت تنخفض للإسقاطات عند زيادة الدوران بعيدا عن زاوية التصوير المثلى.

في أورام المخ ، تم الحصول على انخفاض متوسط بنسبة 7٪ في إشارة الفلورسنت. إذا كان الاتجاه الجسدي للحيوان أكثر من زائد أو ناقص 10 درجات ، إزاحة زاوية التصوير المثلى. تم قياس متوسط 21٪ انخفاض في إشارة الفلورسنت عند زائد أو ناقص 20 درجة.

وبالتالي ، يمكن أن تؤدي الإزاحات الصغيرة نسبيا من الزاوية المثلى إلى انخفاض كبير في الإشارة بنسبة مئوية. سيسمح استخدام تقنية M-A-R-O-I لتحديد موقع الصور للمحققين بإنتاج بيانات أكثر اتساقا وموثوقية. تم استخدام طريقة M-A-R-O-I أخيرا لتقييم استهداف المفاصل المصابة بالتهاب المفاصل بواسطة SAPs C-D-O-P-S-C-V-M بعد 24 ساعة من الحقن.

سجل هذا ثلاثة مع ثلاثة مفاصل مصابة بالتهاب المفاصل. يتم عرض صور التألق لإصبع القدم والكاحل للفأر المصاب بالتهاب المفاصل هنا بناء على الرسوم البيانية لقياسات الفوتون المقابلة عند دوران 10 درجات ، تكون زوايا التصوير المثلى الموجودة لإصبع القدم والكاحل هي 140 درجة و 120 درجة على التوالي. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إعداد والحصول على بيانات M-A-R-O-I التي تسمح للمحققين بتحديد الزاوية المثلى لتحليل التصوير الفلوري.