فبراير 24, 2014
رد فعل الانتباج هو المعيار الذهبي لتقنية التصنيف المصلي العقدية الرئوية. هذه التقنية يستخدم المجهر وأمصال مضادة للمكورات الرئوية محددة، ويستخدم عادة في المختبرات المرجعية والبحثية في جميع أنحاء العالم.
الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء القوالب النمطية للمكورات العقدية الرئوية أو المكورات الرئوية باستخدام تفاعل الإخماد. يتم تحقيق ذلك عن طريق تلقيح مرق تسريب القلب أولا بمزرعة المكورات الرئوية الطازجة والنقية طوال الليل. في الخطوة الثانية ، يتم نقل قطرة من اللقاح إلى شريحة مجهر زجاجي.
يضاف مصل مضاد التالي بحجم متساو على الشريحة. في الخطوة الأخيرة ، يتم خلط كلتا القطرتين ويتم وضع زلة غطاء فوق التعليق. في النهاية ، يمكن رؤية التعليق تحت تباين الطور لملاحظة رد فعل الرئة الإيجابي أو السلبي.
توضح هذه الطريقة الطريقة القياسية الذهبية للمكورات الرئوية. الطريقة بسيطة وسهلة التنفيذ وسهلة التفسير. يعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمرا مهما لأن الأفراد الجدد في هذه التقنية قد يكافحون للتعرف على كثافة الخلايا المناسبة لإجراء اختبار الكوالم.
ابدأ باستخدام حلقة معقمة يمكن التخلص منها بحجم ميكرولتر واحد للحصول على اكتساح صغير من ثقافة نقية طازجة بين عشية وضحاها من المكورات الرئوية المزروعة على صفيحة أجار دم الحصان الصلبة وغير الانتقائية التي تلقح المكورات الرئوية في 100 ميكرولتر من مرق تسريب القلب. يجب أن يبدو التعليق عكرا بشكل واضح ويحرك الأنبوب برفق لاستحلاب محلول الخلية. استخدم حلقة ميكرولتر جديدة لنقل قطرة من اللقاح إلى مجهر زجاجي.
قم بالتمرير بعد ذلك ، ضع غطاء دائريا صغيرا فوق التعليق وتحقق من كثافة التعليق تحت تباين الطور في بعض الأحيان 400 تكبير. إذا كان اللقاح ثقيلا جدا ، فقم بتخفيف معلق الخلية بمزيد من المرق واخلط الخلايا برفق مرة أخرى إذا كان اللقاح خفيفا جدا. على سبيل المثال ، إذا كان هناك أقل من 50 خلية مرئية ، أضف المزيد من البكتيريا إلى تعليق الخلية واخلطها برفق مرة أخرى.
مع الخبرة. يمكن الحكم على كثافة تعليق الخلية عن طريق هز التعليق وتثبيته على الضوء حيث يجب أن يبدو عكرا بشكل واضح. عند النظر إليها تحت المجهر ، يجب أن يكون محلول الخلية بهذه الكثافة.
بمجرد تحقيق التخفيف الأمثل للخلايا البكتيرية ، انقل حوالي ميكرولتر واحد من اللقاح إلى المجهر الزجاجي. مرر بعد ذلك. باستخدام حلقة جديدة ، أضف حجما متساويا من درجة حرارة الغرفة.
مضاد المصل على الشريحة وخلط كلتا القطرتين جيدا. باستخدام الحلقة ، ضع على الفور زلة غطاء صغيرة على التعليق ، مع الحرص على عدم لمس القطرة بالملقط. ثم اعرض التعليق تحت تباين الطور كما هو موضح للتو.
لوحظ رد فعل سلبي للرئة عند ملاحظة تورم طفيف أو معدوم في خلايا المكورات الرئوية. على غرار التحكم السلبي ، تعليق خلايا المكورات الرئوية بدون مضاد للأمصال. يحدث تفاعل الرئة الإيجابي عندما يرتبط الجسم المضاد من النوع المحدد بكبسولة المكورات الرئوية مما يؤدي إلى تغيير في معامل الانكسار.
عند النظر إليها تحت تباين الطور ، تبدو البكتيريا منتفخة وأكثر وضوحا. لا تنس أنه عند القيام بهذا الإجراء ، فأنت تعمل بالفعل مع الكائنات الحية الدقيقة الحية. لهذا السبب ، يجب أن تكون حريصا على اتباع الممارسات المعملية الجيدة ، وارتداء الملابس الواقية ، ومعدات المختبر المناسبة ، والتخلص من جميع المعدات والكواشف في نهاية العملية بأمان.
بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في حوالي 10 دقائق إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد عرض هذا الإجراء ، يجب أن يكون لديك فكرة جيدة عن كيفية التنميط المصلي للمكورات الرئوية باستخدام تفاعل كوا. هذه التقنية مهمة لفهم وبائيات المكورات الرئوية ، سواء في النقل الأنفي البلعومي أو المرض الغازي.
إن تفاعل كيلونج هو تقنية حاسمة لتصنيف المكورات الرئوية المصلية، ويستخدم على نطاق واسع في المختبرات. تتضمن هذه الطريقة استخدام أمصال خاصة ومجهر لملاحظة تفاعل أغلفة المكورات الرئوية.
Capsular serotyping of Streptococcus pneumoniae using the Quellung reaction is foundational for vaccine impact studies and epidemiological surveillance in biopharma R&D. This gold standard method enables precise identification of pneumococcal serotypes, supporting portfolio decisions in vaccine development and infectious disease research. Reliable serotyping informs translational continuity from discovery through clinical evaluation of vaccine candidates.
The Quellung reaction integrates at the interface of early discovery and translational research, providing critical serotype data for vaccine target selection and epidemiological modeling.