المحفظة المصلي من

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء تحديد للنمط المصلي للمحفظة لبكتيريا streptococcus pneumoniae أو المكورات الرئوية باستخدام تفاعل التخميد (quelling reaction). يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تلقيح مرق تسريب القلب بمزرعة نقية وحديثة من المكورات الرئوية تم تحضيرها طوال الليل. وفي الخطوة الثانية، يتم نقل قطرة من اللقاح إلى شريحة مجهرية زجاجية.

بعد ذلك، يُضاف مصل مضاد بحجم مساوٍ على الشريحة. وفي الخطوة النهائية، تُخلط القطرتان معاً وتوضع شريحة غطاء فوق المعلق. وفي النهاية، يمكن فحص المعلق تحت مجهر تباين الأطوار لملاحظة تفاعل Quell للرئة سواء كان إيجابياً أو سلبياً.

توضح هذه الطريقة المعيار الذهبي لتحديد النمط المصلي للمكورات الرئوية. وتتميز هذه الطريقة بكونها بسيطة وسهلة التنفيذ والتفسير. ويعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمراً هاماً، حيث قد يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه التقنية صعوبة في التعرف على كثافة الخلايا المناسبة لإجراء اختبار التراص (quellung test).

ابدأ باستخدام عروة معقمة تستخدم لمرة واحدة بسعة 1 µL لأخذ مسحة صغيرة من مزرعة نقية حديثة من المكورات الرئوية (pneumococci) نمت طوال الليل على طبق أغار دم الحصان غير الانتقائي، ثم قم بتلقيح المكورات الرئوية في 100 µL من مرق تسريب القلب. يجب أن يظهر المعلق عكراً بشكل مرئي بالكاد، ثم قم برج الأنبوب برفق لاستحلاب محلول الخلايا. استخدم عروة جديدة بسعة 1 µL لنقل قطرة من اللقاح إلى شريحة مجهر زجاجية.

بعد ذلك، ضع غطاء شريحة دائري صغير فوق المعلق، وافحص كثافة المعلق تحت مجهر تباين الأطوار بقوة تكبير 400 مرة. إذا كان اللقاح كثيفاً جداً، خفف معلق الخلايا بمزيد من المرق واخلط الخلايا بلطف مرة أخرى؛ أما إذا كان اللقاح خفيفاً جداً، فعلى سبيل المثال، إذا كان هناك أقل من 50 خلية مرئية، أضف المزيد من البكتيريا إلى معلق الخلايا واخلطها بلطف مرة أخرى.

مع اكتساب الخبرة، يمكن تقدير كثافة معلق الخلايا عن طريق رج المعلق ورفعه في مواجهة الضوء، حيث يجب أن يظهر عكراً بشكل مرئي بالكاد. وعند فحص محلول الخلايا تحت المجهر، يجب أن تكون كثافته تقريباً بهذا المستوى.

بمجرد الوصول إلى التخفيف الأمثل للخلايا البكتيرية، انقل حوالي 1 µL من اللقاح إلى شريحة المجهر الزجاجية. باستخدام عروة جديدة، أضف حجماً مساوياً في درجة حرارة الغرفة.

ضع المصل المضاد على الشريحة واخلط القطرتين معًا جيدًا. وباستخدام الحلقة، ضع فوراً غطاءً شرائحياً صغيراً فوق المعلق، مع الحرص على عدم لمس القطرة بالملقط. ثم افحص المعلق تحت مجهر تباين الطور كما تم توضيحه للتو.

يتم ملاحظة تفاعل كويل (Quell reaction) سلبي عندما لا يُلاحظ تورم في الخلايا العقدية الرئوية أو يكون تورمها طفيفاً، وهو ما يماثل العينة الضابطة السلبية التي تكون عبارة عن معلق للخلايا العقدية الرئوية دون إضافة أي أمصال مضادة. أما تفاعل كويل الإيجابي فيحدث عندما يرتبط الجسم المضاد النوعي بالمحفظة الخاصة بالمكورات الرئوية، مما يؤدي إلى تغيير في معامل انكسارها.

عند الفحص باستخدام تباين الطور، تظهر البكتيريا متورمة وأكثر وضوحاً. تذكر عند تنفيذ هذا الإجراء أنك تتعامل في الواقع مع كائنات حية دقيقة؛ ولذلك، يجب توخي الحذر واتباع الممارسات المختبرية الجيدة، وارتداء الملابس الواقية، واستخدام معدات المختبر المناسبة، والتخلص من جميع المعدات والكواشف في نهاية العملية بشكل آمن.

بمجرد إتقان هذه التقنية، يمكن تنفيذها في غضون 10 دقائق تقريبًا إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. بعد مشاهدة هذا الإجراء، يجب أن تتكون لديك فكرة جيدة عن كيفية تحديد النمط المصلي لبكتيريا pneumococcus باستخدام تفاعل qua lung. وتعد هذه التقنية مهمة لفهم وبائيات المكورات الرئوية، سواء في حالة الاستعمار الأنفي البلعومي أو في الأمراض الغازية.