مكافحة النووية عن طريق فحص الأجسام المضادة التهاب الكبد-2 خلايا

الهدف العام من التجربة التالية هو استخدام مقايسة الفلورسنت المناعي غير المباشر للكشف عن الأجسام المضادة للنواة. يتم تحقيق ذلك عن طريق احتضان مصل المريض بشريحة ركيزة من التهاب الكبد السلبي. يتم غسل مصل المريض غير المرتبط ، ثم يتم تحضين الأجسام المضادة الذاتية المرتبطة بالفلورسين المحدد المسمى مترافق ، ويتم غسل الكاشف غير المرتبط.

عند عرضها من خلال المجهر الفلوري ، ستظهر العينات الإيجابية للأجسام المضادة التلقائية تألق أخضر التفاح يتوافق مع مناطق الخلية أو النوى حيث يرتبط الجسم المضاد التلقائي بنمط مضان يدل على وجود المستضد. في النهاية ، يمكن استخدام وجود الأرنا للمساعدة في تشخيص أمراض النسيج الضام. الميزة الرئيسية لطريقة الفلورسنت المناعي غير المباشر على الطرق الأخرى مثل الطور الصلب إليزا ، هي أن ركيزة Hep ذات الخليتين تحتوي على أكثر من 100 مستضد معبرا عنها في تكوينها الأصلي.

يسمح هذا بتحديد جميع الأجسام المضادة O ذات الصلة سريريا تقريبا ، وهو أمر غير ممكن مع تقنيات الوجه الصلب لأن طريقة الفلورسنت المناعي غير المباشر هي تقنية متخصصة للغاية. يحتاج الأفراد الجدد في هذه الطريقة إلى الوقت والممارسة ليصبحوا بارعين في إجراء معالجة الشرائح. يعد تفسير صور المجهر وتعلم تحديد الأنماط ذات الصلة أيضا مهارة تستغرق وقتا لإتقانها.

باستخدام الكواشف والأدوات الصحيحة ، تكون النتائج أكثر اتساقا وأسهل في التفسير. ستظهر كاساندرا براينت ، وهي تقنية من مختبر تطوير Asay المناعي الفلوري. قم بإزالة الكواشف من العبوة والسماح لكل عنصر بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة ، وإعداد الكواشف وتخفيف مصل المريض وفقا للاتجاه ، يتم ترميز شرائح الإدخال ويمكن دمجها بسهولة في الأنظمة الآلية.

هذا الإجراء معالجة الشرائح يدويا. ومع ذلك ، قد تختار المختبرات عالية الإنتاجية معدات معالجة الشرائح الآلية مع إمكانات مسح الباركود. ترتبط أدوات Inova من خلال شبكة ذكية مركزية توفر التحكم في نتائج سير العمل وإعداد التقارير.

ل IFA. ينتج عن هذا تحديد هوية إيجابية للمريض من المعالجة والقضاء على النسخ والأخطاء ذات الصلة. استغن عن قطرة واحدة من التحكم الإيجابي وقطرة واحدة من التحكم السلبي على الشريحة المناسبة.

ماصة الآبار من 20 إلى 25 ميكرولتر من مصل المريض المخفف إلى الآبار المتبقية. قم بمعالجة شريحة واحدة في كل مرة. ضع الشريحة في وعاء تلطيخ بمنشفة ورقية مبللة في الأسفل ، وقم بتغطية الحاوية واحتضان الشريحة لمدة 30 دقيقة.

ستمنع الظروف الرطبة الركيزة من الجفاف ، مما قد يؤدي إلى تلطيخ مصطنع. خلال فترة الحضانة هذه ، ترتبط الأجسام المضادة للنواة في مصل المريض بمستضدات الخلايا المثبتة على كل بئر. بعد فترة الحضانة ، اشطف المصل باستخدام تيار لطيف من محلول الغسيل لتجنب إتلاف الركيزة.

قم بزاوية الشريحة قليلا بحيث لا يتم توجيه التيار مباشرة على الركيزة. سيساعد هذا الاتجاه للشرائح أيضا على منع تقاطع العينات بين الآبار. اضغط على عازلة الغسيل الزائدة وضع الشريحة في برطمان كوبلاند يحتوي على مخزن غسيل.

يجب أن يكون وقت الحضانة لخطوة الغسيل حوالي خمس دقائق. قم بإزالة الشرائح من مخزن الغسيل واضغط برفق. لإزالة مخزن الغسيل الزائد ، ضع قطرة واحدة من مترافق الفلورسنت على كل بئر.

لاختبار NA ، يوصى باستخدام مترافق خاص ب IgG FC. احتضن الشرائح لمدة 30 دقيقة في الحاوية المرطبة وتأكد من استبدال غطاء التلوين. المترافق حساس للضوء وسيحمي الغطاء الشرائح من التعرض للضوء.

خلال فترة الحضانة هذه ، يرتبط المترافق بالأجسام المضادة للنواة للمريض التي ترتبط بمستضدات الخلية. ينتج عن هذا الارتباط المترافق وجود مضان في الآبار بعد الحضانة. اغسل الشريحة بمحلول الغسيل.

كما كان من قبل ، ضع زلة غطاء على منشفة ورقية وقم بتطبيق وسيط التثبيت في خط مستمر على الحافة السفلية لزلة الغطاء. قم بإزالة كل شريحة من مخزن الغسيل واضغط على الشريحة برفق. لإزالة المخزن المؤقت للغسيل الزائد، المس الحافة السفلية للشريحة على حافة زلة الغطاء.

قم بخفض الشريحة برفق على زلة الغطاء بحيث يتدفق وسط التثبيت على زلة الغطاء إلى الحافة العلوية للشريحة دون انزلاق غطاء فقاعة الهواء ، بما في ذلك الكمية المثلى من وسط التثبيت هي تقنية تتطلب الممارسة للحصول على رؤية مثالية. الشرائح المزودة بمجهر الفلورسنت الموجود في غرفة مظلمة ، يجب إجراء مسح للبئر بأكمله بهدف 20 × أو 25 ×. لتقييم توزيع الخلايا وتوحيد التألق ، قم بالتبديل إلى هدف 40 ×.

لعمل التفسير النهائي فيما يتعلق بالإيجابية والنمط ، انظر إلى الضوابط الإيجابية والسلبية. قد لا يظهر عنصر التحكم السلبي مظلما تماما ، ولكنه غالبا ما يعرض مضان منخفض المستوى غير محدد. سيعرض التحكم الإيجابي تألق التفاح الأخضر اللامع في النواة.

يمكن تقدير الإيجابية باستخدام مقياس تقدير التفاعل من واحد زائد إلى أربعة زائد. بالإضافة إلى التفسير اليدوي ، يمكن تحميل الشرائح ومسحها ضوئيا بواسطة المجهر الفلوري الآلي. لا توجد غرفة مظلمة ضرورية.

بعد إنشاء مشروع عن طريق تحديد نوع الشريحة المناسب ، تحصل الأداة على صور رقمية عالية الدقة للخلايا في كل بئر وتخزنها. بالإضافة إلى ذلك ، يقيس عرض Nova شدة ضوء الفلورسنت ويصنف النتائج على أنها إيجابية أو سلبية ويوفر التعرف على الأنماط للعينات الإيجابية. يتم عرض الصور من قبل المشغل على شاشة كمبيوتر عالية الدقة ، مما يسمح بالتفسير النهائي والمراجعة والتأكيد ل Nova View.

يمكن إنشاء تقارير النتائج بناء على النتائج المؤكدة. ينتج عن ارتباط الجسم المضاد الذاتي بهياكل البروتين المكونة داخل النواة خمسة أنماط نووية رئيسية ، بما في ذلك السنترومير المتجانس والمرقط والنووية والنقطة النووية. لتحديد نمط متجانس كما هو موضح هنا ، حدد الخلايا الانقسامية أو المنقسمة.

تظهر الخلايا الانقسامية مضان موحدا صلبا ، والذي غالبا ما يكون أكثر وضوحا من الخلايا المريحة. يجب أن تكون نوى الخلية المريحة موحدة مع تلطيخ منتشر. هذا النمط المميز هو على الأرجح نتيجة الأجسام المضادة الذاتية لمضاعفة الحمض النووي الذي تقطعت به السبل.

السمة الرئيسية للنمط المرقط هي مظهر فتحة العملة المعدنية للخلايا الانقسامية الطورية. المنطقة الكروموسومية لهذه الخلايا سالبة. تظهر الخلايا المريحة نمطا مرقطا في جميع أنحاء النوى.

يمكن تعريف البقع على أنها خشنة أو ناعمة. بقع الدورة هي نتيجة الأجسام المضادة الذاتية ل SM و RNP. يمكن أن تكون البقع الدقيقة ناتجة عن الأجسام المضادة التلقائية ل S-S-A-S-S-B وكذلك بوليميراز الحمض النووي الريبي.

يشار إلى نمط DFS على أنه كثيف ومرقط ناعم ، وهو مؤشر على الأجسام المضادة الذاتية ل DFS 70. تظهر الخلايا الانقسامية تلطيخا مرقطا بينما تظهر الخلايا المريحة بقعا دقيقة موزعة بشكل موحد في جميع أنحاء النواة. في هذه الحالات ، يجب إجراء الاختبارات التأكيدية لأن الأجسام المضادة الذاتية DFS 70 منتشرة في الأفراد الأصحاء مقابل المرضى الذين يعانون من مرض النسيج الضام.

لتحديد نمط السنترومير ، قم بمسح الآبار وتحديد الخلايا الانقسامية أو المنقسمة. تحتوي الخلايا المنقسمة على العديد من البقع السرية المرتبطة ارتباطا وثيقا ببعضها البعض ، وغالبا ما تسمى شريط الطور. تظهر الخلايا المريحة ما يقرب من 40 إلى 60 نقطة منفصلة موزعة في جميع أنحاء النواة.

يرتبط نمط السنترومير بالأجسام المضادة الذاتية لبروتينات السنترومير ذات النمط النووي. تلطيخ منطقة الكروموسومات في الخلايا الانقسامية متغير. يرتبط النمط النووي بالتلوين المتجانس أو المرقط للنوى ، جنبا إلى جنب مع تلطيخ ضعيف أو مرقط أو متجانس للنيوكليوبلازم لنوى الخلية المريحة.

يرتبط هذا النمط بالأجسام المضادة الذاتية لبوليميراز الحمض النووي الريبي وثلاثة فيبريلين وأجسام مضادة PM SCL. يرتبط نمط النقطة النووية بالطور السلب والخلايا الانقسامية وعدد قليل من النقاط المنفصلة في نوى الخلية الراحة. غالبا ما يكون هذا النمط المميز نتيجة للأجسام المضادة الذاتية ل SP 100 PML أو P 80 colan.

ترتبط هذه الأجسام المضادة بتليف الكبد الصفراوي الأولي والتهاب الكبد المناعي الذاتي. في الصورة الموضحة ، يعرض نمط النقطة النووية تلطيخا سيتوبلازميا بسبب الأجسام المضادة الذاتية لمستضدات الميتوكوندريا. يعمل الكشف عن الأجسام المضادة للنواة والتعرف على الأنماط كأداة مهمة للمساعدة في تشخيص المرضى.

إن فهم أهمية الأنماط المختلفة يمكن الأطباء والعاملين في المختبر من إجراء اختبارات المتابعة المناسبة. تتمثل أهم العوامل لتحديد أنماط الأجسام المضادة للنواة بشكل صحيح في اختيار ركيزة خلية عالية الجودة ومعالجة الشرائح بتقنية جيدة متسقة. يتم إجراء قراءة الشرائح تقليديا عن طريق المجهر الفلوري في الغرف المظلمة ويتم إجراؤها بواسطة تقنيين مدربين على دراية بالأنماط المختلفة في سياق دورة الخلية ومورفولوجيا الخلية.

في السنوات القليلة الماضية ، تم تطوير أنظمة التصوير الرقمي للقراءة الآلية للشرائح ، ومثل هذه الأدوات أتمتة سير العمل وزيادة اتساق القراءة والتفسير. علاوة على ذلك ، باستخدام الشرائح المشفرة ، فإن إمكانية تتبع العينة طوال العملية تقضي على أخطاء النسخ المحتملة وتزيد من سلامة البيانات وسلامة المرضى. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ كل خطوة من خطوات إجراء الفلورسنت المناعي غير المباشر وكيفية تحديد أنماط الأجسام المضادة للنواة ذات الصلة سريريا.