قياس التغيرات في حساسية اللمس في المخلب الخلفي للفئران باستخدام جهاز فون فراي الإلكتروني

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس استجابات عدم التحسس للضغط الميكانيكي في القائمة الخلفية للفئران. يتم تحقيق ذلك أولاً بوضع الحيوانات على أرضية من الشبكة السلكية والسماح لها بالتعود عليها عندما تكون مستعدة. يتم تطبيق طرف من مادة البولي بروبيلين على الجانب السفلي من القائمة الخلفية، ويتم زيادة الضغط تدريجياً.

عند ملاحظة الاستجابة السلوكية المناسبة، يتم سحب المثير. وبمجرد جمع القيم القاعدية، تتلقى الحيوانات تدخلاً تجريبياً قبل إجراء المزيد من الاختبارات. وفي النهاية، تتم مقارنة التغيرات في عتبات سحب المخلب الخلفي عبر مجموعات العلاج لتحديد تأثير علاج معين على التغيرات في الحساسية اللمسية للضغط.

يُعد الألم مكوناً أساسياً من مكونات الالتهاب، لذا من المهم قياس الألم وتوصيفه في سياقات مختلفة. ويمكن تطبيق هذه الطريقة البسيطة نسبياً لتقييم الألم على العديد من النماذج المختلفة للالتهاب.

ستقوم بتوضيح الإجراء تيانا، وهي فنية أبحاث في مختبري، وماديسون ماك، التي شاركت في هذا العمل كطالبة جامعية، وأكيلا سايكس، وهي حالياً طالبة جامعية في مختبري. نبدأ بتجهيز جهاز الاختبار لضمان سهولة الوصول إلى القوائم الخلفية.

ضع الغرف الفردية فوق أرضية شبكية. يجب أن تكون الأرضية الشبكية على ارتفاع مناسب وعلى سطح ثابت. بعد ذلك، ضع جهاز Von Frey الإلكتروني على سطح طاولة المختبر.

تأكد من توصيل المسبار والكابل بشكل صحيح بوحدة العرض، وقم بتشغيل الجهاز في وضع الإعداد. اضبط القراءة على الصفر وضع وزن الاختبار المرفق برفق فوق مخروط مسبار Von Frey. سجل القراءة وكرر هذه العملية مرة أخرى في نهاية الاختبار؛ فإذا كان هناك تباين بين القيمتين، فقد يحتاج الجهاز إلى إعادة معايرة.

اختر طرفًا من البولي بروبيلين بالحجم المناسب للنسيج المراد اختباره. وتعد الأطراف الصلبة مناسبة لأنسجة القدم الخلفية الأكثر قوة والأقل حساسية. قم بتركيب الطرف برفق على مخروط المسبار.

انتقل بعد ذلك من وضع الإعداد إلى وضع التشغيل. سيظهر هذا أقصى ضغط تم تطبيقه عند سحب المسبار. يلزم وجود باحثين اثنين لقياس عتبات سحب القدم الخلفية.

يقوم شخص بتشغيل الجهاز وإجراء القياسات، ويقوم شخص آخر بتسجيل هذه القياسات من أجل تقليل الانحياز. يجب أن يكون الباحث الذي يشغل جهاز التخدير معميًا عن العلاجات وكذلك عن قيم عتبة الانسحاب المسجلة. علاوة على ذلك، ولضمان الاتساق بين القياسات، يجب أن يقوم الشخص نفسه بتسجيل جميع قيم خط الأساس وعتبة الانسحاب.

قبل 48 ساعة من العلاج، يتم تسجيل المجموعة الأولى من قياسات الخط الأساسي. ضع مادة ماصة أسفل الحامل لجمع الفضلات التي يتم إخراجها. بعد تركيب الرأس وتصفير المسبار، يجب على الباحث الذي يقوم بتسجيل القياسات وضع الفئران في غرف فردية.

غطِّ الحجرات بأغطية مثقبة، وضع جسماً ثقيلاً فوقها. ولمنع الفئران من الهروب، اترك الفئران تتأقلم مع الحجرة لمدة 15 دقيقة قبل المتابعة. وبشكل عام، يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه التقنية صعوبة في التطبيق التدريجي للضغط المتزايد، وفي تحقيق الاتساق الداخلي في قياساتهم الخاصة، لذا فإن التدريب أمر أساسي للحصول على نتائج قابلة للتكرار.

عندما تصبح مستعداً، استخدم كلتا اليدين لرفع المسبار ببطء وتحفيز وسادة القدم في إحدى القوائم الخلفية، سواء اليسرى أو اليمنى. قم بزيادة الضغط تدريجياً حتى يتم رصد سلوك ألم. ويتم التعرف على هذه السلوكيات من خلال سحب القائمة الخلفية، أو لعق القائمة الخلفية، أو القفز بالقائمة.

وجّه الباحث الآخر لتسجيل الضغط الذي أدى إلى السلوك الملحوظ. وأثناء القياس، من المفيد تشجيع الفأر على البقاء ساكناً عن طريق وضع قطعة من الطعام خارج الغرفة مباشرةً أو إصدار ضوضاء خفيفة مثل نقرة لطيفة قبل إجراء القياس. استمر في العمل مع الفأر التالي حتى يتم اختبار كل فأر مرة واحدة، ثم كرر هذا الإجراء أربع مرات إضافية.

بعد جمع خمس قيم أساسية، احسب المتوسط لكل فأر. كرر قياسات الخط الأساسي بعد 24 ساعة، واستخدم هذه القيم لحساب متوسط آخر. ولضمان اتساق استجابات الخط الأساسي لدى جميع الفئران، استبعد الحيوانات التي يقل متوسط عتبة السحب الأساسية لديها عن 3.5 grams أو التي تختلف عتبات الخط الأساسي لديها بمقدار جرامين أو أكثر.

أخيرًا، يتم توزيع الفئران على مجموعات علاجية منفصلة بحيث يكون متوسط خط الأساس لسحب الطرف في كل مجموعة متماثلاً قدر الإمكان. هنا، تم قياس عتبات سحب الطرف الخلفي بعد حقن السم، بينما أظهرت الفئران في مجموعة الضابطة التي عولجت بالمحلول الملحي تغيرًا طفيفًا مقارنة بخط الأساس في جميع الأوقات.

أظهرت نقاط الاختبار أن الاستجابات المسببة للألم في الفئران المعالجة استمرت بوضوح لمدة تصل إلى ست ساعات. بالإضافة إلى ذلك، كان وذمة الأنسجة، التي تميز الالتهاب، واضحة في القوائم الخلفية المعالجة بالسم، بينما لم تظهر في تلك المعالجة بالمحلول الملحي. وقد رافق التغيرات التي أحدثها السم في الحساسية اللمسية تدفق للخلايا المتعادلة بمقدار يصل إلى 1000 ضعف تقريبًا.

بالمقارنة مع القوائم الخلفية المعالجة بمحلول ملحي، كانت الخلايا الصارية في أنسجة باطن القائمة الخلفية سليمة إلى حد كبير أو أظهرت تحللاً حبيبيًا طفيفًا. وفي المقابل، أظهرت القوائم الخلفية المزاوجة تحللاً حبيبيًا متوسطًا وشاملًا للخلايا الصارية بنسبة تتراوح بين 15 إلى 20%. يمكن تطويع هذه التقنية لتقييم الحساسية الميكانيكية أو اللمسية في مجموعة واسعة من الأنسجة الأخرى غير القائمة الخلفية.

وبناءً على ذلك، يمكن دمج هذه التقنية في العديد من النماذج المختلفة للقوارض المصابة بالالتهاب والألم.