Use of a Caspase Multiplexing Assay to Determine Apoptosis in a Hypothalamic Cell Model

Tammy A. Butterick; Cayla M. Duffy; Rachel E. Lee; Charles J. Billington; Catherine M. Kotz; Joshua P. Nixon

doi:10.3791/51305

استخدام كاسباس المتعدد الفحص لتحديد موت الخلايا المبرمج في المهاد الخليوي نموذج

JoVE Journal
Neuroscience

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Neuroscience

Use of a Caspase Multiplexing Assay to Determine Apoptosis in a Hypothalamic Cell Model

استخدام كاسباس المتعدد الفحص لتحديد موت الخلايا المبرمج في المهاد الخليوي نموذج

Full Text

16,415 Views

08:27 min

April 16, 2014

DOI: 10.3791/51305-v

Tammy A. Butterick^1,2, Cayla M. Duffy^1,2, Rachel E. Lee³, Charles J. Billington^1,2,4, Catherine M. Kotz^1,2, Joshua P. Nixon^1,2

¹Department of Veterans Affairs,Minneapolis Veterans Affairs Health Care System, ²Department of Food Science and Nutrition,University of Minnesota, ³Department of Integrative Biology and Physiology,University of Minnesota, ⁴Department of Medicine, University of Minnesota Medical School,University of Minnesota

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

يمكن فحوصات متعددة لتوفير المعلومات المفيدة الآليات الخلوية الأساسية والقضاء على النفايات من الكواشف والتجارب المتكررة التي لا داعي لها. نحن هنا وصف متعددة كاسباس 3/7 النشاط الفحص، وذلك باستخدام أساليب الفلورسنت والقائم على الانارة، لتحديد بقاء الخلية في نموذج طائي في المختبر التالية التحدي التأكسدي مع حمض البالمتيك.

الهدف العام من هذا الفيديو هو إظهار مقايسة متعددة الإرسال عالية الإخراج لتحديد بداية موت الخلايا المبرمج كما تم قياسه بواسطة caspase. ثلاثة سبعة. يتم تحدي الخلايا العصبية تحت المهاد الأولى مع حمض الدهون المشبعة التي تحفز موت الخلايا المبرمج ، حمض البالمتيك.

ثم يتم قياس صلاحية الخلايا العصبية باستخدام كاشف قائم على الفلورسنت وقارئ صفيحة دقيقة بعد ظهور موت الخلايا المبرمج. تضاف الركيزة اللومينو ، DEVD ، وهي عبارة عن تسلسل من الأحماض الأمينية المشقوقة بواسطة الكاسباز ثلاثة ، إلى الخلايا. تتمثل الخطوة الأخيرة من الإجراء في قياس اللمعان باستخدام قارئ صفيحة دقيقة لتحديد نشاط الكاسباز ، والذي يزداد في الخلايا التي تخضع لموت الخلايا المبرمج.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos