Name: تسجيل الكهربية من ذبابة الفاكهة Labellar طعم الشعيرات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-26T23:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: تعلم تقنية التسجيل الكهربائي لأعصاب التذوق في ذبابة الفاكهة Drosophila. يوضح هذا البروتوكول كيفية قياس استجابات الخلايا العصبية للمنبهات الكيميائية المختلفة بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأيد هذا العمل من قبل NRSA 1F31DC012985 منحة دكتوراه مسبقا (لRD) ومنح المعاهد الوطنية للصحة لJC نود أن نشكر الدكتور ينيا فايس لتعليقات مفيدة على المخطوطة، والدكتور ريان جوزيف لشخصيات مساعدة تجميع، والدكتور فريدريك ماريون-الإستطلاع للحصول على المشورة التقنية مفيدة. نود أيضا أن نعترف تعليقات مفيدة من أربعة المعلقين.

<ol><li>Glendinning, J. I., Jerud, A., Reinherz, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hungry+caterpillar%3A+an+analysis+of+how+carbohydrates+stimulate+feeding+in+Manduca+sexta%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+biology%22%5BJournal%5D)">The hungry caterpillar: an analysis of how carbohydrates stimulate feeding in Manduca sexta.</a> The Journal of experimental biology. 210, 3054-3067 (2007).</li>
<li>Yarmolinsky, D. A., Zuker, C. S., Ryba, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+sense+about+taste%3A+from+mammals+to+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Common sense about taste: from mammals to insects.</a> Cell. 139, 234-244 (2009).</li>
<li>Thistle, R., Cameron, P., Ghorayshi, A., Dennison, L., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+chemoreceptors+mediate+male-male+repulsion+and+male-female+attraction+during+Drosophila+courtship%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Contact chemoreceptors mediate male-male repulsion and male-female attraction during Drosophila courtship.</a> Cell. 149, 1140-1151 (2012).</li>
<li>Toda, H., Zhao, X., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+female+aphrodisiac+pheromone+activates+ppk23%28%2B%29+sensory+neurons+to+elicit+male+courtship+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">The Drosophila female aphrodisiac pheromone activates ppk23(+) sensory neurons to elicit male courtship behavior.</a> Cell reports. 1, 599-607 (2012).</li>
<li>Lu, B., LaMora, A., Sun, Y., Welsh, M. J., Ben-Shahar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ppk23-Dependent+chemosensory+functions+contribute+to+courtship+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">ppk23-Dependent chemosensory functions contribute to courtship behavior in Drosophila melanogaster.</a> PLoS Genet. 8, e1002587(2012).</li>
<li>Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organization+of+the+chemosensory+system+in+Drosophila+melanogaster%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+tissue+research%22%5BJournal%5D)">The organization of the chemosensory system in Drosophila melanogaster: a review.</a> Cell and tissue research. 275, 3-26 (1994).</li>
<li>Hiroi, M., Marion-Poll, F., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiated+response+to+sugars+among+labellar+chemosensilla+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Science%22%5BJournal%5D)">Differentiated response to sugars among labellar chemosensilla in Drosophila.</a> Zoological Science. 19, 1009-1018 (2002).</li>
<li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Molecular+and+Cellular+Basis+of+Bitter+Taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Molecular and Cellular Basis of Bitter Taste in Drosophila.</a> Neuron. 69, 258-272 (2011).</li>
<li>Falk, R., Bleiser-Avivi, N., Atidia, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labellar+taste+organs+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">Labellar taste organs of Drosophila melanogaster.</a> Journal of Morphology. 150, 327-341 (1976).</li>
<li>Hiroi, M., Meunier, N., Marion-Poll, F., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+antagonistic+gustatory+receptor+neurons+responding+to+sweet-salty+and+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Two antagonistic gustatory receptor neurons responding to sweet-salty and bitter taste in Drosophila.</a> Journal of neurobiology. 61, 333-342 (2004).</li>
<li>Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+taste+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Candidate taste receptors in Drosophila.</a> Science (New York, N.Y.). 287, 1830-1834 (2000).</li>
<li>Cameron, P., Hiroi, M., Ngai, J., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+water+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for water taste in Drosophila.</a> Nature. 465, 91-95 (2010).</li>
<li>Croset, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ancient+protostome+origin+of+chemosensory+ionotropic+glutamate+receptors+and+the+evolution+of+insect+taste+and+olfaction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Ancient protostome origin of chemosensory ionotropic glutamate receptors and the evolution of insect taste and olfaction.</a> PLoS Genet. 6, e1001064(2010).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development (Cambridge, England). 118, 401-415 (1993).</li>
<li>Parks, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+genetics%22%5BJournal%5D)">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36, 288-292 (2004).</li>
<li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+primary+chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%28New+York%2C+N.Y.%29%22%5BJournal%5D)">Physiology of a primary chemoreceptor unit.</a> Science (New York, N.Y.). 122, 417-418 (1955).</li>
<li>Dahanukar, A., Lei, Y. T., Kwon, J. Y., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+Gr+genes+underlie+sugar+reception+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Two Gr genes underlie sugar reception in Drosophila.</a> Neuron. 56, 503-516 (2007).</li>
<li>Lee, Y., Kim, S. H., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Avoiding+DEET+through+insect+gustatory+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Avoiding DEET through insect gustatory receptors.</a> Neuron. 67, 555-561 (2010).</li>
<li>Descoins, C., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+gustatory+sensilla+of+Mamestra+brassicae+%28Lepidoptera%2C+Noctuidae%29+larvae+to+three+ecdysteroids%3A+ecdysone%2C+20-hydroxyecdysone+and+ponasterone%5BTitle%5D)+AND+%22A.+J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of gustatory sensilla of Mamestra brassicae (Lepidoptera, Noctuidae) larvae to three ecdysteroids: ecdysone, 20-hydroxyecdysone and ponasterone.</a> A. J Insect Physiol. 45, 871-876 (1999).</li>
<li>Glendinning, J. I., Davis, A., Ramaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+different+taste+cells+and+signaling+pathways+to+the+discrimination+of+%22bitter%22+taste+stimuli+by+an+insect%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+%3A+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Contribution of different taste cells and signaling pathways to the discrimination of "bitter" taste stimuli by an insect.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 22, 7281-7287 (2002).</li>
<li>Sanford, J. L., Shields, V. D., Dickens, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gustatory+receptor+neuron+responds+to+DEET+and+other+insect+repellents+in+the+yellow-fever+mosquito%2C+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Die+Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Gustatory receptor neuron responds to DEET and other insect repellents in the yellow-fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Die Naturwissenschaften. 100, 269-273 (2013).</li>
<li>Merivee, E., Must, A., Milius, M., Luik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+identification+of+the+sugar+cell+in+antennal+taste+sensilla+of+the+predatory+ground+beetle+Pterostichus+aethiops%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological identification of the sugar cell in antennal taste sensilla of the predatory ground beetle Pterostichus aethiops.</a> J Insect Physiol. 53, 377-384 (2007).</li>
<li>Popescu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+central+projections+of+gustatory+receptor+neurons+on+the+antenna+of+the+noctuid+moth+Spodoptera+littoralis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+comparative+physiology.+A%2C+Neuroethology%22%5BJournal%5D)">Function and central projections of gustatory receptor neurons on the antenna of the noctuid moth Spodoptera littoralis.</a> Journal of comparative physiology. A, Neuroethology. 199, 403-416 (2013).</li>
<li>Marion-Poll, F., Der Pers, J. V. an <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Un-filtered+recordings+from+insect+taste+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Entomologia+Experimentalis+et+Applicata%22%5BJournal%5D)">Un-filtered recordings from insect taste sensilla.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 80, 113-115 (1996).</li>
<li>Wieczorek, H., Wolff, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+labellar+sugar+receptor+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A.+Neuroethol+Sens.+Neural+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The labellar sugar receptor of Drosophila.</a> J. Comp. Physiol. A. Neuroethol Sens. Neural Behav. Physiol. 164, 825-834 (1989).</li>
<li>Morita, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+spike+potentials+in+contact+chemosensory+hairs+of+insects.+III.+D.C.+stimulation+and+generator+potential+of+labellar+chemoreceptor+of+calliphora%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cellular+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">Initiation of spike potentials in contact chemosensory hairs of insects. III. D.C. stimulation and generator potential of labellar chemoreceptor of calliphora.</a> Journal of cellular and comparative physiology. 54, 189-204 (1959).</li>
<li>Lacaille, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inhibitory+sex+pheromone+tastes+bitter+for+Drosophila+males%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An inhibitory sex pheromone tastes bitter for Drosophila males.</a> PLoS One. 2, e661(2007).</li>
<li>Benton, R., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recording+from+Drosophila+taste+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+protocols%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recording from Drosophila taste sensilla.</a> Cold Spring Harbor protocols. 2011, 839-850 (2011).</li>
<li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+sensillum+recordings+in+the+insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Single sensillum recordings in the insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> J. Vis. Exp. , e1725(2010).</li>
<li>Axon Instruments. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+Axon+Guide+for+Electrophysiology+%26+Biophysics+Laboratory+Techniques%22">The Axon Guide for Electrophysiology & Biophysics Laboratory Techniques</a>. , (1993).</li>
<li>Fujishiro, N., Kijima, H., Morita, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impulse+frequency+and+action+potential+amplitude+in+labellar+chemosensory+neurones+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+insect+physiology%22%5BJournal%5D)">Impulse frequency and action potential amplitude in labellar chemosensory neurones of Drosophila melanogaster.</a> Journal of insect physiology. 30, 317-325 (1984).</li>
<li>Marion-Poll, F., Tobin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Software+filter+for+detecting+spikes+superimposed+on+a+fluctuating+baseline%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Software filter for detecting spikes superimposed on a fluctuating baseline.</a> Journal of neuroscience. 37, 1-6 (1991).</li>
<li>Meunier, N., Marion-Poll, F., Lansky, P., Rospars, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimation+of+the+individual+firing+frequencies+of+two+neurons+recorded+with+a+single+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Senses%22%5BJournal%5D)">Estimation of the individual firing frequencies of two neurons recorded with a single electrode.</a> Chem Senses. 28, 671-679 (2003).</li>
<li>Marion-Poll Lab Website. , Available from: 
 
 	 <a target="_blank" href="http://taste.versailles.inra.fr/fred">http://taste.versailles.inra.fr/fred</a> (2013).</li>
<li>Meunier, N., Marion-Poll, F., Rospars, J. P., Tanimura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+coding+of+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Peripheral coding of bitter taste in Drosophila.</a> Journal of neurobiology. 56, 139-152 (2003).</li>
</ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

الشعيرات Labellar تختلف في سهولة تسجيل بسبب الاختلافات في التشكل وتنظيم التشريحية. أحيانا لا يستجيب إلى أي sensillum وtastants، حتى واحد ما هو معروف للحصول على رد إيجابي. التردد الذي يحدث هذا يختلف تبعا لنوع sensillum و. L الشعيرات هي الأكثر استجابة باستمرار وسهلة نسبيا للوصول بسبب طولها. بشكل عام، S الشعيرات تستجيب باستمرار، ولكن طولها قصيرة والموقف على labellum إجراء اتصالات جيدة الصعبة. أنا الشعيرات يمكن الوصول إليها بسهولة أكبر، تبعا لزاوية من إعداد، ولكن، هم أكثر لا تستجيب بش...

حاسة التذوق يسمح حشرة للكشف عن مجموعة واسعة من المواد الكيميائية القابلة للذوبان، ويلعب دورا هاما في قبول مادة مغذية، أو رفض واحد الضارة أو السامة. ويعتقد الذوق أيضا للعب دور في اختيار الشريك، من خلال الكشف عن الفيرومونات 1-5. جعلت هذه الوظائف الهامة والمتنوعة النظام طعم الحشرات هدفا مقنعة للتحقيق في كيفية النظم الحسية ترجمة الاشارات البيئية في المخرجات السلوكية ذات الصلة. الوحدة الأساسية للنظام طعم البطن ذبابة الفاكهة هو الشعر والذوق، أو sensillum و. جزيئات دخول sensillum وعبر المسام في 2،6 طرفها. تم العثور على الشعيرات labellum، والساقين، وهامش الجناح، والبلعوم 6. على labellum، والنمطية عدد وموقع الشعيرات. هناك ثلاث فئات من الشعيرات المورفولوجية بناء على طول: طويل (L) والمتوسطة (I)، وقصيرة (S<html> ) الشعيرات 7،8. يحتوي كل sensillum وإما اثنين (I-نوع) أو أربعة (L-S-نوع و) الخلايا العصبية مستقبلات الذوقية (GRNs) 9. GRNs مختلفة الرد على فئات مختلفة من المحفزات طعم: المر والسكر والملح والأسمولية 7،10 والتعبير عن مجموعات فرعية مختلفة من المستقبلات الذوقية 8،11-13. فقط أنا وS-نوع الشعيرات تحتوي GRNs المر استجابة 8،10. يتم ترحيل المشروع GRNs إلى العقدة تحت المريء (مجموعة العمليات الخاصة) والتنشيط من خلال جزيئات الذوق إلى الجهاز العصبي المركزي العالي لفك التشفير، مما أدى إلى استجابة سلوكية 6. عدد قليل نسبيا من الخلايا العصبية وقابليته للتحليل الجزيئي والسلوكية جعل النظام طعم ذبابة الفاكهة نموذجا ممتازا للتحقيق في أنظمة الذوقية بشكل عام. السهولة النسبية التي يمكن التلاعب بها النظام عبر طفرة جينية أو نظام التعبير GAL4-UAS أيضا بمثابة أداة قيمة 14،15. ontent &quot;&gt; لأن هذه الشعيرات تبرز من سطح labellum، لأنها تجعل أهداف ممتازة للالكهربية. اطلاق النار من GRNs يمكن رصدها باستخدام تسجيل خارج الخلية. تاريخيا، وطريقة تسجيل جنبا إلى الجدار، والذي يستخدم الزجاج الكهربائي إدراجها في sensillum وتسجيل نشاط الخلايا العصبية، وقد استخدم 26، ولكن هذا الأسلوب يمثل تحديا تقنيا على القيام بها، وأنه من الصعب أن يسجل لفترة طويلة من كل إعداد. طريقة غيض تسجيل، والذي يقيس استجابة الخلايا العصبية مع القطب أن في وقت واحد يسلم منبهة للذوق، وأصبح منذ الأسلوب المفضل 9،16. وقد استخدمت وللتحقيق في نظام طعم ذبابة الفاكهة السوداء البطن 8،10،17،18 فضلا عن عدد من أنواع الحشرات الأخرى 19-23. له تم سهلت كثيرا من خلال تطوير مكبر للصوت tastePROBE، التي تغلبت احدة من العوائق الرئيسية لطريقة التسجيل عن طريق بلاغ للتعويضفرق الجهد الكبير بين الإلكترود المرجعي وsensillum والحشرات، مما يتيح للإمكانات العمل GRN ليتم تسجيلها دون التضخيم المفرط أو التصفية 24. وثمة تطور مهم آخر استخدام tricholine سترات كما بالكهرباء يسجل 25. TCC يقمع الاستجابات من GRN الحساسة للالأسمولية ولا تحفيز GRN الحساسة الملح، مما يجعل الاستجابات التي تم إنشاؤها بواسطة tastants المر والسكر أسهل بكثير لتحليل 25. نحن هنا تصف كيف يتم تنفيذ تسجيل غيض من ذبابة الفاكهة labellar الشعيرات حاليا في المختبر كارلسون. وهذا البروتوكول شرح كيفية تأسيس منصة مناسبة الكهربية، وكيفية إعداد الطاير، وكيفية تنفيذ تسجيلات الذوق. كما نقدم بعض البيانات التي تم الحصول عليها عن طريق تسجيل ممثل من مجموعات فرعية من ذبابة الفاكهة الشعيرات، وكذلك بعض القضايا المشتركة والحلول المحتملة التي يمكن مواجهتها عند استخدام هذاالتقنية.

<table><tbody><tr><td>مجهر تكبير ستيريو</td><td>أوليمبوس</td><td>SZX12 DFPLFL1.6x PF عدسات: WHN10x-H / 22</td><td>قادر على التكبير ~ 150X مع مسافة عمل طويلة حامل جبل الطاولة</td></tr><tr><td>المضادة للاهتزاز</td><td>أنظمة الحركية</td><td>BenchMate2210</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulators</td><td>Narishige</td><td>NMN-21</td><td></td></tr><tr><td>حوامل مغناطيسية</td><td>ENCO</td><td>نموذج # 625-0930</td><td></td></tr><tr><td>الرقم المرجعي حامل القطب الكهربائي</td><td>جهاز هارفارد</td><td>ESP / W-F10N</td><td>يمكن تركيبه على ماصة مصلية سعة 5 مل لنطاق ممتد</td></tr><tr><td>من الأسلاك الفضية</td><td>أدوات الدقة العالمية</td><td>AGW1510</td><td>قطر 0.3-0.5 مم</td></tr><tr><td>حامل معوجة</td><td></td><td></td><td></td></tr> عام <tr><td>مخرج أنبوب</td><td></td><td></td> بلاستيكي <td>عام ، قطر 1 سم</td></tr><tr><td>أنابيب بلاستيكية مرنة</td><td>Nalgene</td><td>8000-0060</td><td>سادسا الصف 1/4 في القطر الداخلي &nbsp ؛</td></tr><tr><td>500 مل قارورة</td><td></td><td></td> مخروطية <td>عامة ، مع ذراع جانبي</td></tr><tr><td>مضخة حوض السمك</td><td>الحدائق</td><td>المائية Airpump 2000</td><td></td></tr><tr><td>مصدر ضوء الألياف</td><td>البصرية Dolan-Jenner Industries</td><td>Fiber-Lite 2100</td><td></td></tr><tr><td>بطاقة بيضاء / ورق</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr><tr><td>نظام الاستحواذ الرقمي</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>البديل: National Instruments NI-6251 &nbsp;</td></tr><tr><td>Headstage</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>Tasteprobe مكبر للصوت</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>مقاطع التمساح</td><td>Grainger</td><td>1XWN7</td><td>أي علامة تجارية جيدة</td></tr><tr><td>معزول الأسلاك</td><td></td><td></td> الكهربائية <td>عام</td></tr><tr><td>الذهب موصل دبابيس العالم</td><td>الدقة</td><td>5482</td><td></td></tr><tr><td>الكمبيوتر الشخصي</td><td></td> التحقق من Dell <td>Vostro</td><td>للتأكد من توافقه مع نظام الاستحواذ الرقمي والبرامج</td></tr><tr><td>برنامج اكتساب</td><td>Syntech</td><td>Autospike</td><td>يعمل Autospike مع IDAC-4 ؛ بدلا من ذلك ، استخدم LabView مع</td></tr><tr><td>رقائق الألومنيوم NI-6251 و / أو Faraday Cage</td><td></td><td></td><td>Magnetic Noise Shielding</td></tr> Wall Glass <tr><td>Caveries</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>ماصة مجتذب</td><td>آلة الوتر أداة الشركة</td><td>نموذج P-87 مشتعل / براون مجتذب مجتذب</td><td></td></tr><tr><td>الخرز و Ephrussi Ringer Solution</td><td></td><td></td><td>انظر الوصفة في قسم البروتوكول</td></tr> سترات <tr><td>التريكولين ، 65٪ & nbsp ؛</td><td>سيجما</td><td>T0252-100G</td><td></td></tr><tr><td>مجهر مجسم</td><td>أوليمبوس</td><td>VMZ 1x-4x</td><td>قادر على تكبير 10-40X</td></tr><tr><td>دلو</td><td></td><td></td> الثلج <td>عام</td></tr><tr><td>p200 أطراف</td><td></td><td></td><td>الماصة</td></tr><tr><td>إبرة العمود الفقري</td><td>العامة Terumo</td><td>SN * 2590</td><td></td></tr><tr><td>1 مل حقنة</td><td>Beckton-Dickenson</td><td>301025</td><td></td></tr><tr><td>شفاط الذبابة</td><td></td><td></td><td>مجمعة من أطراف ماصة P1000 ، وأنابيب بلاستيكية مرنة ، وشبكة</td></tr><tr><td>نمذجة</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ملقط</td> عام <td>من أدوات العلوم الدقيقة من Dumont</td><td>11252-00</td><td>#5SF (أطراف فائقة الدقة)</td></tr><tr><td>10 مل حقنة</td><td>بيكتون-ديكنسون</td><td>301029</td><td></td></tr><tr><td>أنابيب بلاستيكية</td><td>Tygon</td><td>R-3603</td><td></td></tr></tbody></table>

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; labellar طعم الشعيرات

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

استجابة طعم الطرفية من الحشرات يمكن التحقيق بقوة مع تقنيات الكهربية. الطريقة الموضحة هنا يسمح الباحث لقياس الاستجابات الذوقية مباشرة وكميا، مما يعكس المدخلات الحسية أن الجهاز العصبي للحشرات تتلقاها من المحفزات طعم في بيئته. يحدد هذا البروتوكول جميع الخطوات الرئيسية في أداء هذه التقنية. الخطوات الحاسمة في تجميع وتلاعب الكهربية، مثل اختيار المعدات اللازمة وبيئة مناسبة للتسجيل، ويتم رسم. نحن تصف أيضا كيفية الاستعداد لتسجيل بجعل المرجعية وتسجيل الأقطاب المناسبة، والحلول منبهة للذوق. نحن تصف بالتفصيل الطريقة المستخدمة لإعداد الحشرات عن طريق ادراج الإلكترود المرجعي الزجاج في ذبابة من أجل شل خرطوم. نظهر آثار النبضات الكهربائية التي أطلقها الخلايا العصبية الذوق ردا على السكر ومجمع المر. جوانب البروتوكول هي رechnically صعبة ونحن وتشمل وصفا واسعة من بعض التحديات التقنية المشتركة التي يمكن مواجهتها، مثل عدم وجود إشارة أو الضوضاء المفرطة في النظام، والحلول المحتملة. تقنية له حدود، مثل عدم القدرة على تقديم المحفزات المعقدة زمنيا، ومراقبة خلفية إطلاق النار مباشرة قبل التحفيز التسليم، أو استخدام مركبات غير قابلة للذوبان في الماء طعم مريح. على الرغم من هذه القيود، هذه التقنية (بما في ذلك الاختلافات الطفيفة المشار إليها في البروتوكول) هو المعيار، والإجراءات المقبولة على نطاق واسع لتسجيل الاستجابات العصبية ذبابة الفاكهة لتذوق المركبات.

ويبين الشكل 5A الاستجابة لL sensillum وإلى السكر، السكروز. لا يستجيب نفس sensillum والى مجمع المر، بربارين. الشكل 5B يظهر أن sensillum والنوع الأول، والذي يحتوي على الخلايا العصبية تستجيب المر، ويعرض المسامير السعة أكبر في استجابة لبربارين، وارتفاع السعة أصغر ردا على السكروز. L الشعيرات عرضه استجابة الخلفية الحد الأدنى لسيطرة المذيبات، TCC، بينما أنا الشعيرات عرضه تقريبا أي رد على TCC (الشكل 5). لمزيد من المعلومات حول الملح والماء...

يصف هذا البروتوكول تسجيل خارج الخلية من العمل الاستجابات المحتملة التي أطلقتها الخلايا العصبية الذوق labellar في ذبابة الفاكهة.

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; Labellar طعم الشعيرات

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس استجابات الحواس الذوقية الفردية على شفة (labum) ذبابة Drosophila. ويتم تحقيق ذلك أولاً من خلال بناء منصة الفيزيولوجيا الكهربائية وإعداد جميع المعدات اللازمة. أما الخطوة الثانية فهي تحضير الذبابة للتسجيل.بعد ذلك، يتم تحفيز شعيرة تذوق (lum) فردية بمركب تذوق مع تسجيل الاستجابة العصبية في آن واحد. وفي النهاية، يُستخدم تسجيل طرف الإلكتروفيزيولوجيا من خلايا silla موسومة بشكل فردي لإظهار استجابات خلايا illa التذوقية لمركبات تذوق مختلفة. ويعد العرض المرئي لهذه الطريقة أمراً بالغ الأهمية لأن خطوات تحضير الذبابة قد تكون صعبة من الناحية التقنية ويصعب تعلمها.في هذا الإجراء، يتم جمع ذباب ELOs حديث الظهور من مزارع الذباب التي تمت صيانتها جيداً. بعد ذلك، تُترك الحشرات لمدة تتراوح من 5 إلى 10 أيام في أنابيب زراعة جديدة قبل التسجيل، وقبل تحضير الذباب، يتم تبريد شريحة المجهر على الثلج لمدة تتراوح من 15 إلى 30 دقيقة. بعد ذلك، يتم ملء القطب المرجعي الزجاجي بمحلول B و e.ثم قم بالنقر برفق لإخراج أي فقاعات هواء تحت مجهر التشريح. استخدم الملقط لكسر جزء صغير من الطرف. بعد ذلك، استخدم الخاصية الشعرية لسحب أي فقاعات متبقية مع النسيج.بعد ذلك، قم بتمرير القطب المرجعي المملوء بـ B و E فوق سلك حامل القطب، ولتجنب إدخال أي فقاعات هواء بعد ذلك، قم بسحب ذبابة إلى طرف ماصة P 200. ضع

electrophysiological-recording-from-drosophila-labellar-taste-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

نحن هنا وصف أساليب الكهربية لقياس انتقال متشابك عند تقاطع العصبية والعضلية لليرقة ذبابة الفاكهة. أثار إطلاق سراح يبدأ بشكل مصطنع من خلال تحفيز الخلايا العصبية الحركية المحاور ، ويمكن قياسها من خلال انتقال NMJ التي أثارت استجابة بعد المشبكي في العضلات.

الكهربية طرق تسجيل الإمكانيات متشابك من يرقات ذبابة الفاكهة من NMJ

الكهربية في تسجيل ذبابة الفاكهة الأجنة

ويمكن قياس ردود الكهربية للخلايا العصبية الحسية الشمية إلى odorants في الحشرات باستخدام التسجيلات sensillum واحد. في هذه المقالة سوف نقوم الفيديو لشرح كيفية تنفيذ تسجيلات sensillum واحدة في هوائيات على ذبابة الخل...

تسجيلات Sensillum واحدة في الحشرات ذبابة الفاكهة السوداء البطن و الأنوفيلة الغامبية</em

نظام الألياف العملاق هو الدائرة العصبية بسيطة من...

تسجيلات الكهربية من الألياف المسار عملاق د. melanogaster</em

يوضح هذا الفيديو بروتوكول التسجيل الفيزيولوجي الكهربي لنشاط المستقبلات الضوئية في عين ذبابة الفاكهة الجامدة ، مما يتيح القياس الدقيق لتغيرات الجهد استجابة لمنبهات الضوء.

التسجيل الفيزيولوجي الكهربي لاستجابات الجهد لذبابة الفاكهة المستقبلات الضوئية لشبكية العين لمحفزات الضوء

في هذا الفيديو ، يتم تركيب ذبابة الفاكهة الحية في أنبوب لإجراء دراسات الفيزيولوجيا الكهربية. يتم وضع الأقطاب الكهربائية في قاعدة الحس لتسجيل استجابات عصبية محددة للفيرومونات باستخدام الخلايا العصبية المستقبلة الشمية للذبابة.

التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية من ذبابة الفاكهة Sensilla استجابة للروائح المتطايرة

تحتوي الأرجل الأمامية والخرطوم ذبابة الفاكهة على ذخيرة غنية من الخلايا العصبية الحسية الذوقية. هنا ، نقدم طريقة باستخدام تصوير الكالسيوم لقياس الاستجابات الفسيولوجية من الخلايا العصبية الحسية في مقدمة الساق ورطوم الذباب الحي عند التطبيق الخارجي للفرمون الذوقي.

قياس الاستجابات الفسيولوجية لل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا العصبية الحسية إلى الدهن الفيرومونات عن طريق لايف التصوير الكالسيوم

الهدف العام من هذا البروتوكول هو للتدليل على كيفية تقديم الروائح من تقلبات منخفضة لتسجيل واحد سينسيلوم من ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية مستقبلات الشمية التي تستجيب لفيرومونات القشرية طويلة السلسلة.

تسجيل الكهربية من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تريتشويد سنسيلا في الاستجابة ل أودورانتس من التقلب المنخفض

ويصف هذا البروتوكول وسيلة لتسجيل النشاط الكهربائي تنازلي للنظام العصبي المركزي melanogaster المورفولوجية لتمكين فعالة من حيث التكلفة ومريحة لاختبار وكلاء الدوائية، الطفرات الوراثية للبروتينات العصبية، و/أو دور مسارات الفيزيولوجية غير مستكشفة.

تسجيل الكهربية لنشاط الجهاز العصبي المركزي للطور الثالث Melanogaster المورفولوجية

تسمح طريقة نادرة الاستخدام للتسجيل الكهربي ، التسجيل الأساسي ، بتحليل ميزات ترميز الذوق التي لا يمكن فحصها بواسطة طرق التسجيل التقليدية. يسمح التسجيل الأساسي أيضا بتحليل استجابات الذوق للمنبهات الكارهة للماء التي لا يمكن دراستها باستخدام الطرق الكهربية التقليدية.

التسجيل الأساسي: تقنية لتحليل استجابات الخلايا العصبية الذوقية في ذبابة الفاكهة

يتيح نهج تصوير الكالسيوم تسجيل الاستجابات التي يسببها الذوق في أدمغة الذباب المستيقظ أثناء تطبيق محلول على الملصق. تستخدم الاستجابات الذوقية الأولية في ذبابة الفاكهة السوداء كمثال ، ولكن يمكن تكييف هذا البروتوكول لدراسة الخلايا العصبية النهائية أو الأنواع الأخرى.

في الجسم الحي تصوير الكالسيوم للاستجابات العصبية الناجمة عن التذوق في ذبابة الفاكهة البالغة

تعلم تقنية التسجيل الكهربائي لأعصاب التذوق في ذبابة الفاكهة Drosophila. يوضح هذا البروتوكول كيفية قياس استجابات الخلايا العصبية للمنبهات الكيميائية المختلفة بدقة عالية.

تسجيل الكهربية من

استكشف المزيد من الفيديوهات