Juxtasomal Biocytin وصفها لدراسة بنية وظيفة علاقة فردية القشرية الخلايا العصبية

الهدف العام من هذا الإجراء هو ربط جهد الفعل المحدد لنوع الخلية في القشرة الحسية أثناء معالجة المعلومات بالهوية المورفولوجية للخلايا العصبية المسجلة. يتم تحقيق ذلك عن طريق إعداد الجرذ جراحيا أولا للتسجيلات الجثية المجاورة. بمجرد التحضير ، يسجل القطب الكهربائي نشاط الارتفاع التلقائي والحسي ، ويتم تحميل الخلايا العصبية المسجلة باستخدام التيار والحقن.

بعد ذلك ، تتم معالجة الدماغ لتلوين البيوتين. أخيرا ، يتم إعادة بناء الخلايا العصبية المملوءة بالبيوتين رقميا من الأقسام اللاحقة لتصنيف نوع الخلية. في النهاية ، تسمح التسجيلات الصومالية المجاورة للخلايا العصبية الفردية بدراسة المعالجة الحسية والمعلومات الهيكلية داخل الشبكة القشرية.

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم الأعصاب مثل ما هو دور أنواع الخلايا الفردية وطبقاتها أثناء المعالجة الحسية؟ بشكل عام ، يحتاج الأفراد إلى هذه الطريقة سوف يكافحون لأنه من السهل جدا قتل الخلايا العصبية أثناء إجراء التعبئة. تزداد فرص التعبئة الناجحة للبيوسيدين عن طريق تحضير ماصات عالية الجودة، بالإضافة إلى ذلك، من الضروري استخدام عين مدربة للتحكم في حقن التيار ضيق النطاق.

لذلك ، يتطلب الأمر خبرة لزيادة معدل نجاح استعادة الخلايا العصبية المملوءة جيدا. للبدء ، ضع فأر ويستار مخدر على إطار تجسيمي مجهز بوسادة تدفئة. تأكد من عمق التخدير عن طريق اختبار منعكس قرصة إصبع القدم.

ثم أدخل مسبار المستقيم للحفاظ على درجة حرارة الجسم الصحيحة. قم بتأمين رأس وإزالة الشعر من موقع الجراحة. ضع مرهما على العينين لمنع الجفاف.

انتظر من ثلاث إلى خمس دقائق بعد حقن الليدوكائين في موقع العملية وقم بإزالة الجلد الذي يغطي سطح الجمجمة. بعد ذلك ، قم بإزالة أي أنسجة متبقية وتنظيف الجمجمة على نطاق واسع باستخدام 0.9٪ من كلوريد الصوديوم. حدد إحداثيات القشرة الحسية الجسدية الأولية في نصف الكرة الأيسر وحدد الموقع على الجمجمة بقلم تحديد الجلد الجراحي.

استخدم مثقاب الأسنان لكشط العظم من المنطقة المعنية. استمر في كشط العظم حتى يصبح شفافا وتظهر الأوعية الدموية بوضوح. بعد ذلك ، قم بقطع نافذة صغيرة في الجمجمة الرقيقة بمشرط.

الحرص على عدم إتلاف الأم الجافية والأوعية الدموية. ضع علامة على حواف حج القحف باستخدام قلم تحديد الجلد الجراحي. لتحسين الرؤية ، ضع طبقة رقيقة من الغراء الفائق على الجمجمة الجافة ، ثم أسمنت الأسنان لبناء حمام.

عند إغلاق حج القحف ، قم بقص الشعيرات الموجودة على الجانب المقابل إلى خمسة ملليمترات بالضبط للمساعدة في رؤيتها. قم بتسليط الضوء على الشعيرات المشذبة باستخدام الماسكارا السوداء قبل بدء التسجيلات ، وقم بعمل ماصات رقعة من زجاج بورو سيليك. مورفولوجيا الماصة المثالية هي تفتق تدريجي نحيف وزاوية مخروط منخفضة وقطر طرف داخلي يبلغ ميكرون واحد تقريبا.

قم بتحميل ماصة التصحيح بجرس راد عادي، مكمل بنسبة 2٪ من البيوتين، وقم بتركيب ماصة التصحيح على حامل ماصة، ومثبتة على مرحلة الرأس، ومتصلة بمناور ميكرومتر. لاستهداف عمودين D من الفئران S واحد على وجه التحديد ، اضبط زاوية حامل القطب الكهربائي على 34 درجة فيما يتعلق بالمستوى السهمي. بعد ذلك، ضع الماصة اللاصقة على مقربة من حج القحف.

املأ الحمام ب 0.9٪ كلوريد الصوديوم. مع وجود مكبر الصوت في وضع الجسر ، قم بتطبيق نبضات مربعة مع حقن التيار الموجب لتحديد مقاومة القطب. تقع مقاومة القطب المثلى بين ثلاثة وخمسة ميغا.

قم بإنشاء ضغط زائد من 100 إلى 150 مللي بار ودفع ماصة التصحيح بخطوات ميكرون واحدة مع تطبيق التيار الموجب على شكل نبضات مربعة. راقب التغير القوي في المقاومة عند الاتصال بالأم الجافية. في هذه المرحلة ، اضبط إحداثيات المعالج الصغير على الصفر للسماح بقياسات عمق دقيقة.

تقدم في وضع خطوة ميكرون واحدة حتى تخترق ماصة الرقعة الأم الجافية المشار إليها بالانخفاض المفاجئ في مقاومة القطب. قم بإزالة ضغط تثبيت الماصة. بعد ذلك ، ابحث عن وحدات مفردة أثناء التقدم بخطوات ميكرون واحدة.

راقب مقاومة القطب الكهربائي باستمرار عن طريق تطبيق 200 مللي ثانية على النبضات المغلقة وتشير الزيادة في مقاومة القطب الكهربائي عادة إلى قرب خلية عصبية واحدة تقدم القطب حتى العمل الإيجابي. يتم تسجيل الأشكال الموجية المحتملة التي تبلغ حوالي مللي فولت. اختياريا ، قم بتسجيل نشاط الارتفاع التلقائي وحدد نشاط الارتفاع الملغى عن طريق تحويل الشعيرات الفردية بشكل لطيف باستخدام جهاز كهربائي بيزو للحصول على الظروف المثلى لملء الجاور السومي.

تقدم القطب الكهربائي حتى تصل المقاومة إلى 25 إلى 35. أوم الضخم والمسامير لها سعة من ثلاثة إلى ثمانية مللي فولت لبدء الحشو الصومي المجاور. قم بتطبيق نبضات تيار مربع موجبة تبدأ من نانو أمبير واحد.

قم بزيادة التيار ببطء وتدريجي بخطوات 0.1 نانو أمبير أثناء مراقبة شكل موجة AP وترددها. راقب فتحة الغشاء كزيادة واضحة في تردد AP أثناء المرحلة من نبضة الكتلة ، يظهر شكل موجة السنبلة أثناء الملء عرضا متزايدا وينخفض بعد زيادة الاستقطاب أو تقليل التيار أثناء الملء للحفاظ على ضخ البيوتين المستقر ، وتقليل أو إيقاف النبضات الحالية عند الزيادة المفاجئة في تردد AP. لتجنب السمية عن طريق التدفق الزائد للأيونات خارج الخلية مثل أيونات الصوديوم.

من المهم ملاحظة أن كل خلية عصبية ستستجيب بشكل مختلف لإجراء الحشو. لذلك ، يجب تعديل معلمات الملصقات الصومالية المجاورة اعتمادا على حالة التسجيل. راقب الإشارة عن كثب بعد إيقاف الحقن الحالي.

عادة ما يتم توسيع شكل موجة السنبلة بعد جلسة التعبئة ويظهر انخفاضا قويا بعد انتظار فرط الاستقطاب لاستعادة الخلايا العصبية ، وهو ما يتضح عندما يعود شكل موجة السنبلة إلى خصائصه الأصلية لتقليل أي ضغط ميكانيكي على الخلية. اسحب الماصة اللاصقة بخطوات ميكرون واحد حتى تنخفض سعة السنبلة ، وانتظر ساعة واحدة على الأقل حتى ينتشر البيوتين داخل الخلايا مع مراقبة درجة حرارة جسم وتنفسه عن كثب. أخيرا ، يتم الحصول على عينات الدماغ ومعالجتها للكشف عن جودة وضع العلامات الجوار.

تظهر هذه الصور صورا لخلايا عصبية مملوءة بالمفاصل في القشرة الحسية الجسدية الأولية. توضح هذه النظرة العرضية للخلايا العصبية شبه المعدنية الفرق في الحجم بين التشعبات والمحاور. في هذه إعادة البناء الرقمي لخلية عصبية صومالية مجاورة ، تظهر صورة إسقاط الخلايا العصبية بدقة عالية ، ولكن تكبير منخفض ، ومع محور عصبي متراكب للبناء الرقمي الآلي باللون الأزرق والتغصنات باللون الأحمر على التوالي.

هنا يتم توسيع منطقة الصندوق لإظهار محور البوتون على طول المحور العصبي. في هذه الرسوم المتحركة النهائية ، نجسد خط أنابيب إعادة البناء لطبقة واحدة من خمس خلايا عصبية شبه فلزات سميكة من القشرة الحسية الجسدية الأولية للفئران. يستلزم خط الأنابيب إعادة بناء التشكل الشجيري والمحوري عند تكبير 100 مرة وملامح البرميل بتكبير أربعة أضعاف.

والنتيجة هي إعادة بناء ثلاثية الأبعاد كاملة ، والتي يتم تسجيلها لاحقا في إطار مرجعي موحد لإجراء تحليل كمي للخصائص المورفولوجية. وبالتالي ، فإن وضع العلامات الجوارية في الجسم الحي يسمح بجودة وضع العلامات الاستثنائية لإعادة بناء موثوقة لمورفولوجيا ثلاثية الأبعاد الكاملة. هنا أظهرنا الطريقة في المخدرة باليوريثان.

ومع ذلك ، يمكن أيضا استخدام تسجيلات Jux Somal في المقيدة برأس مستيقظ لدراسة دور أنواع الخلايا الفردية والطبقات أثناء الاستكشاف النشط للبيئة. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم أفضل لكيفية إجراء وضع العلامات على Biocidin على الخلايا العصبية الفردية لتحديد ما بعد الحرب وإعادة البناء المورفولوجي.