Name: التصوير MALDI الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في Medicago truncatula الجذر العقيدات (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-05T17:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 59 s
Description: اكتشف تقنية التصوير الطيفي الكتلي MALDI لتحليل المستقلبات في عقد جذور النباتات. تتيح هذه الطريقة رصد توزيع الجزيئات الحيوية في أنسجة Medicago truncatula بدقة عالية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

فإن الكتاب أود أن أنوه الدكتور جان ميشيل مرة في قسم الهندسة الزراعية في جامعة ويسكونس ماديسون لتقديم عينات truncatula Medicago. وأيد هذا العمل في جزء من التمويل من مؤسسة العلوم الوطنية (NSF) منحة CHE-0957784، ومدرسة جامعة ويسكونسن العليا ومؤسسة ولاية ويسكونسن الخريجين بحوث (وارف) وبرنامج زمالة Romnes بحوث كلية (ليرة لبنانية). يقر EG زمالة أبحاث الدراسات العليا NSF (DGE-1256259).

1. الأجهزة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> MALDI-TOF/TOF MSI. استخدام مطياف الكتلة مجهزة مصدر MALDI لتحليل الجزيئات الصغيرة (انظر جدول المواد / المعدات). أداء عمليات الاستحواذ في وضع أيون إيجابية أو سلبية اعتمادا على التحاليل من الفائدة. تحديد نطاق شامل من الفائدة وجمع 500 طلقات الليزر / بقعة في 50 ميكرومتر فترات في كل من x و أبعاد ذ عبر سطح العينة لتوليد الصور أيون. ويمكن تعديل العرض النقطية وعدد من الطلقات ليزر للحصول على القرار المكانية أعلى وأقصى كثافة إشارة على التوالي. استخدام DHB قمم مصفوفة أو المعايير الداخلية المطبقة على الشريحة أو مباشرة إلى الأنسجة لمعايرة الأطياف الشامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتفاع القرار LC-MS. (انظر جدول المواد / المعدات) مقتطفات عينة تشغيل مع LC-MS باستخدام إما المرحلة عكسها (RP) LC مع عمود C-18، أو مرحلة طبيعية (NP) مع عمود HILIC اعتمادا على التحاليل من الفائدة. استخدام المحمول ومراحلالتدرجات بما يتناسب مع نوع عينة محددة. تنفيذ عمليات استحواذ في وسائط أيون إيجابية أو سلبية تبعا لنوع العينة. </li></ol> 2. إعداد الأنسجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقليم العقيدات الجذرية من النبات، وترك 3-4 ملم من الجذر تعلق على العقيدات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة بعد تشريح، واستخدام ملقط لوضع الأنسجة في كوب ناظم البرد، وتغطي مع الجيلاتين (100 ملغ / مل في الماء منزوع الأيونات). فمن الضروري لأنسجة ليكون عالقا في قاع الكأس مع عدم وجود فقاعات الهواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فلاش تجميد الأنسجة عن طريق وضع كوب في حمام الثلج الجاف / الإيثانول حتى يصلب الجيلاتين ويصبح غير شفاف. مخزن العينات في -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عينات من الفريزر -80 درجة مئوية، وقطع بعيدا ناظم البرد كوب من البلاستيك وتقليم بعيدا الجيلاتين الزائدة. تركيب الأنسجة جزءا لا يتجزأ من لتشاك ناظم البرد مع كمية سنتات الحجم من درجة الحرارة المثلى القطع (أكتوبر) وسائل الإعلام، في حين أن عدم السماح للأكتوبر تلمس الأنسجة. وضع في ناظم البردمربع حتى يتصلب أكتوبر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للتشوك والجيلاتين لكي تتوازن في مربع ناظم البرد (مجموعة إلى -20 أو -25 درجة مئوية) لمدة حوالي 15 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ناظم البرد (انظر جدول المواد / المعدات) إلى قسم الأنسجة تقريبا سمك خلية واحدة (8-20 ميكرون تبعا لنوع الأنسجة) وذوبان الجليد جبل كل شريحة على الزجاج ايتو المغلفة من قبل ارتفاع درجة حرارة الظهر (غير ايتو- المغلفة الجانب) من شريحة زجاجية ايتو المغلفة على الجزء الخلفي من يدك. وضع الجانب ايتو المغلفة من الشريحة تحسنت بالقرب من شريحة الأنسجة المجمدة والسماح للشريحة التمسك على الشريحة. ووضع المقاطع قريبة من بعضها البعض على الشريحة توفير المحاذاة أفضل أثناء MSI. </li></ol> 3. مصفوفة التطبيق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البخاخة تطبيق مصفوفة MALDI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات البخاخة في غطاء الدخان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تماما تنظيف الحاويات الحل البخاخة وفوهة (انظر جدول المواد / المعدات) مع الميثانول وملء حاوية الحل مع حل DHB مصفوفة (150 ملغ / مل في 50٪ methanol/0.1٪ TFA ت / ت). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عقد البخاخة حوالي 35 سم من العينة وتطبيق 10-15 المعاطف من المصفوفة على سطح الشريحة مع مدة 10 ثانية رذاذ و 30 ثانية في وقت التجفيف بين كل طبقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تماما تنظيف البخاخة مرة أخرى مع الميثانول عند الانتهاء لتجنب انسداد من حل المصفوفة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التلقائي تطبيق البخاخ من MALDI مصفوفة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الإرشادات بدء المقدمة من قبل الشركات المصنعة لنظام الرش التلقائي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لMSI من نواتج الأيض في العقد الجذرية باستخدام 40 ملغ / مل (في 50٪ methanol/0.1٪ TFA ت / ت) DHB مثل المصفوفة، ضبط درجة الحرارة إلى 80 درجة مئوية ~، والسرعة إلى 1،250 ملم / دقيقة، ومعدل التدفق الى 50 ميكرولتر / دقيقة، وعدد من يمر إلى 24. لأفضل تغطية، فمن المستحسن لتدوير فوهة 90 ° و / أو تعويض فوهة 1.5 ملم بين كل تمريرة. بدء طريقة الرش. كما الاشتراكيةدي علما، ونظام الرش خاصة مع ارتفاع درجات الحرارة المستخدمة هنا فوهة للتبخر أسرع من المذيبات. كما يتبخر المذيب، وتركيز مصفوفة يزيد بسرعة. مصفوفة تطبيقها على عينة مع البخاخة والرش التلقائي لديها تركيزات قابلة للمقارنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتبع الإرشادات اغلاق القناة التي تقدمها الشركات المصنعة لنظام الرش التلقائي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التسامي تطبيق مصفوفة MALDI <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن من 300 ملغ DHB في الجزء السفلي من الغرفة التسامي (انظر جدول المواد / المعدات). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عصا شريحة زجاجية لالاصبع الباردة (الجزء العلوي من غرفة التسامي) مع أقسام الأنسجة أسفل مع الوجهين، والشريط موصل. تغطية الجزء الخلفي بأكمله من الشريحة مع الشريط مزدوجة من جانب لحتى الموصلية، وتنتج حتى ترسب مصفوفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المشبك نصفي العلوي والسفلي من الغرفة التسامي جنبا إلى جنب مع C-المشبك. ربط الفراغ والإعلاند الجليد والماء البارد إلى الخزان العلوي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع غرفة التسامي في عباءة التدفئة التي هي في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة فراغ. انتظر 15 دقيقة وتشغيل عباءة التدفئة. عباءة التدفئة يجب أن تصل إلى 120 درجة مئوية على مدار 10 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 10 دقيقة، وإيقاف الحرارة، وصمام مقربة من فراغ (حتى داخل غرفة لا يزال تحت فراغ) وإيقاف مضخة فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للغرفة أن يأتي إلى درجة حرارة الغرفة، افتح صمام تحرير الضغط فراغ وإزالة العينة. فإن حجم الغرفة التسامي تحديد مقدار مصفوفة المتسامي إلى شريحة زجاجية. فإن أكبر غرف التسامي (حجم 400 مل دورق) استخدام حوالي 300 ملغ من DHB في حين أن غرف أصغر (حجم مل دورق 150) سيتم استخدام ما يقرب من 100 ملغ من DHB وسوف تتطلب قطع شريحة زجاجية بحيث تناسبها في الغرفة. </li></ol></li></ol> 4. الحصول على الصور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"> &lt;لى&gt; الأقسام نمط + على كل ركن من أركان عينة مع القلم WiteOut تصحيح السوائل لاستخدامها &quot;تعليم نقاط&quot;. وضع شريحة زجاجية في MALDI لوحة محول الشريحة وتأخذ الصورة البصرية من العينة باستخدام الماسح الضوئي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ملف الحصول على الصور باستخدام البرامج المقدمة من قبل الشركة الصك مع النقطية حجم الخطوة من 50 ميكرون ويبلغ قطرها الليزر مساوية أو أصغر من حجم الخطوة النقطية. على هذا الصك وجه الخصوص، يعطي الإعداد ليزر الحد الأدنى يبلغ قطرها الليزر حوالي 10 ميكرون والصغيرة إعداد الليزر التي يبلغ قطرها 40-50 ميكرون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الصورة البصرية في البرنامج ومحاذاة اللوحة مع الصورة البصرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة أداة قبل البدء في اقتناء باستخدام أيونات مشتركة المصفوفة العنقودية، والمعايير الداخلية، أو مزيج المعايرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد مجالات الأنسجة لتحليلها مع MSI، بما في ذلك بقعة من مصفوفة نقية على الشريحة ليتم استخدامها ك &quot;فارغة&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يبدأ ميلانquisition. </li></ol> 5. انشاء صورة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح الملف في برنامج التصوير المتاحة تجاريا التي يقدمها البائع واستخراج الصور أيون. غيرها من البرامج مفتوحة المصدر متاحة لمعالجة البيانات MSI 19. </li></ol> 6. تحديد المستقلب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار محددة م / ض من الاهتمام من الطيف الشامل باستخدام برامج معينة بائع (انظر جدول المواد / المعدات). وتحليلها يمكن تمييزها عن أيون مصفوفة عند تحديد ذروة الحليلة من الطيف الشامل ويتم إنشاء الصور أيون المترجمة تحديدا إلى قسم الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء قائمة من analytes من الاهتمام وإجراء تجارب MS / MS. انظر الجدول 1 والجدول 2 في ممثل النتائج للقوائم عينة من التحاليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء المستهدفة تحليل LC-MS في مطياف الكتلة عالية الدقة (أو عالية الدقة MALDI-MS إذا كان متوفرا) للحصول دقيقةقياسات كتلة التحاليل من الاهتمام وأيضا تنفيذ LC-MS/MS من التحاليل المستهدفة للحصول على أنماط تجزئة مميزة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء قاعدة بيانات البحث لتحديد هويات المفترضة للالتحاليل المستهدفة. أمثلة على قواعد البيانات المستقلب تشمل: METLIN، ChemSpider، بوب كيم، KEGG، وHMDB. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتأكد من هويات المفترضة من دقيقة قاعدة بيانات البحث الشامل، تتناسب مع MS / MS من التحاليل التي تستهدف MS / MS أطياف المعايير، والأدب، و/ أو برامج التنبؤ تجزئة. </li></ol>

<ol><li>Seeley, E. H., Schwamborn, K., Caprioli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Intact+Tissue+Sections%3A+Moving+beyond+the+Microscope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Imaging of Intact Tissue Sections: Moving beyond the Microscope.</a> J. Biol. Chem. 286, 25459-25466 (2011).</li>
<li>van Hove, E. R. A., Smith, D. F., Heeren, R. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+concise+review+of+mass+spectrometry+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">A concise review of mass spectrometry imaging.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 3946-3954 (2010).</li>
<li>Lietz, C. B., Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Qualitative+and+quantitative+mass+spectrometry+imaging+of+drugs+and+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Qualitative and quantitative mass spectrometry imaging of drugs and metabolites.</a> Adv. Drug Deliv. Rev. 65, 1074-1085 (2013).</li>
<li>Ye, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALDI+mass+spectrometry-assisted+molecular+imaging+of+metabolites+during+nitrogen+fixation+in+the+Medicago+truncatula-Sinorhizobium+meliloti+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">MALDI mass spectrometry-assisted molecular imaging of metabolites during nitrogen fixation in the Medicago truncatula-Sinorhizobium meliloti symbiosis.</a> Plant J. 75, 130-145 (2013).</li>
<li>Ye, H., Gemperline, E., Li, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vision+for+better+health%3A+mass+spectrometry+imaging+for+clinical+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A vision for better health: mass spectrometry imaging for clinical diagnostics.</a> Clin. Chim. Acta. 420, 11-22 (2013).</li>
<li>Wei, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+and+Its+Practical+Value+in+Pharmaceutical+Industry%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Metab%22%5BJournal%5D)">Metabolomics and Its Practical Value in Pharmaceutical Industry.</a> Curr. Drug Metab. 12, 345-358 (2011).</li>
<li>Kobayashi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Serum+Metabolomics-Based+Diagnostic+Approach+to+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidem.+Biomar%22%5BJournal%5D)">A Novel Serum Metabolomics-Based Diagnostic Approach to Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidem. Biomar. 22, 571-579 (2013).</li>
<li>West, P. R., Weir, A. M., Smith, A. M., Donley, E. L. R., Cezar, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+human+developmental+toxicity+of+pharmaceuticals+using+human+embryonic+stem+cells+and+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Appl.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Predicting human developmental toxicity of pharmaceuticals using human embryonic stem cells and metabolomics.</a> Toxicol. Appl. Pharm. 247, 18-27 (2010).</li>
<li>Spegel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-resolved+metabolomics+analysis+of+beta-cells+implicates+the+pentose+phosphate+pathway+in+the+control+of+insulin+release%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Time-resolved metabolomics analysis of beta-cells implicates the pentose phosphate pathway in the control of insulin release.</a> Biochem. J. 450, 595-605 (2013).</li>
<li>Pendyala, G., Want, E. J., Webb, W., Siuzdak, G., Fox, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+for+neuroAIDS%3A+The+widening+scope+of+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmune.+Pharm%22%5BJournal%5D)">Biomarkers for neuroAIDS: The widening scope of metabolomics.</a> J. Neuroimmune. Pharm. 2, 72-80 (2007).</li>
<li>Prell, J., Poole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+of+rhizobia+in+legume+nodules%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes of rhizobia in legume nodules.</a> Trends Microbiol. 14, 161-168 (2006).</li>
<li>Kutz, K. K., Schmidt, J. J., Li, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+tissue+analysis+of+neuropeptides+by+MALDI+FTMS+in-cell+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ tissue analysis of neuropeptides by MALDI FTMS in-cell accumulation.</a> Anal. Chem. 76, 5630-5640 (1021).</li>
<li>Stemmler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-mass-resolution+direct-tissue+MALDI-FTMS+reveals+broad+conservation+of+three+neuropeptides+%28APSGFLGMRamide%2C+GYRKPPFNGSIFamide+and+pQDLDHVFLRFamide%29+across+members+of+seven+decapod+crustaean+infraorders%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">High-mass-resolution direct-tissue MALDI-FTMS reveals broad conservation of three neuropeptides (APSGFLGMRamide, GYRKPPFNGSIFamide and pQDLDHVFLRFamide) across members of seven decapod crustaean infraorders.</a> Peptides. 28, 2104-2115 (2007).</li>
<li>Rubakhin, S. S., Churchill, J. D., Greenough, W. T., Sweedler, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+signaling+peptides+in+single+mammalian+cells+using+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Profiling signaling peptides in single mammalian cells using mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 78, 7267-7272 (1021).</li>
<li>Neupert, S., Predel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric+analysis+of+single+identified+neurons+of+an+insect%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Bioph.+Res.+Co%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric analysis of single identified neurons of an insect.</a> Biochem. Bioph. Res. Co. 327, 640-645 (2005).</li>
<li>Caprioli, R. M., Farmer, T. B., Gile, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+biological+samples%3A+localization+of+peptides+and+proteins+using%5BTitle%5D)+AND+%22MALDI-TOF+MS.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of biological samples: localization of peptides and proteins using.</a> MALDI-TOF MS. Anal. Chem. 69, 4751-4760 (1997).</li>
<li>Baluya, D. L., Garrett, T. J., Yost, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+MALDI+matrix+deposition+method+with+inkjet+printing+for+imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Automated MALDI matrix deposition method with inkjet printing for imaging mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 79, 6862-6867 (2007).</li>
<li>Hankin, J. A., Barkley, R. M., Murphy, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublimation+as+a+method+of+matrix+application+for+mass+spectrometric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Sublimation as a method of matrix application for mass spectrometric imaging.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 18, 1646-1652 (2007).</li>
<li>Robichaud, G., Garrard, K. P., Barry, J. A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MSiReader%3A+an+open-source+interface+to+view+and+analyze+high+resolving+power+MS+imaging+files+on+Matlab+platform%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">MSiReader: an open-source interface to view and analyze high resolving power MS imaging files on Matlab platform.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 718-721 (2013).</li>
<li>Northen, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clathrate+nanostructures+for+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Clathrate nanostructures for mass spectrometry.</a> Nature. 449, (2007).</li>
<li>Shrivas, K., Hayasaka, T., Sugiura, Y., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+simultaneous+imaging+of+endogenous+low+molecular+weight+metabolites+in+mouse+brain+using+TiO2+nanoparticles+in+nanoparticle-assisted+laser+desorption%2Fionization-imaging+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Method for simultaneous imaging of endogenous low molecular weight metabolites in mouse brain using TiO2 nanoparticles in nanoparticle-assisted laser desorption/ionization-imaging mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 83, 7283-7289 (2011).</li>
<li>Thomas, A., Charbonneau, J. L., Fournaise, E., Chaurand, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublimation+of+new+matrix+candidates+for+high+spatial+resolution+imaging+mass+spectrometry+of+lipids%3A+enhanced+information+in+both+positive+and+negative+polarities+after+1%2C5-diaminonapthalene+deposition%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Sublimation of new matrix candidates for high spatial resolution imaging mass spectrometry of lipids: enhanced information in both positive and negative polarities after 1,5-diaminonapthalene deposition.</a> Anal. Chem. 84, 2048-2054 (2012).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C3%2C4%2C5-Tetrakis%283%27%2C4%27-dihydroxylphenyl%29thiophene%3A+a+new+matrix+for+the+selective+analysis+of+low+molecular+weight+amines+and+direct+determination+of+creatinine+in+urine+by+MALDI-TOF+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">2,3,4,5-Tetrakis(3',4'-dihydroxylphenyl)thiophene: a new matrix for the selective analysis of low molecular weight amines and direct determination of creatinine in urine by MALDI-TOF MS.</a> Anal. Chem. 84, 10291-10297 (2012).</li>
<li>Shroff, R., Rulisek, L., Doubsky, J., Svatos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid-base-driven+matrix-assisted+mass+spectrometry+for+targeted+metabolomics%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Acid-base-driven matrix-assisted mass spectrometry for targeted metabolomics.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 10092-10096 (2009).</li>
<li>Shroff, R., Svatos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proton+sponge%3A+a+novel+and+versatile+MALDI+matrix+for+the+analysis+of+metabolites+using+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Proton sponge: a novel and versatile MALDI matrix for the analysis of metabolites using mass spectrometry.</a> Anal. Chem. 81, 7954-7959 (2009).</li>
<li>Shimma, S., Setou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Microscopy+to+Reveal+Distinct+Localization+of+Heme+B+%28m%2Fz+616%29+in+Colon+Cancer+Liver+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mass+Spectrom.+Soc.+Jpn%22%5BJournal%5D)">Mass Microscopy to Reveal Distinct Localization of Heme B (m/z 616) in Colon Cancer Liver Metastasis.</a> J. Mass Spectrom. Soc. Jpn. 55, 145-148 (2007).</li>
<li>Paschke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirion-A+Software+Package+for+Automatic+Processing+of+Mass+Spectrometric+Images%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Mirion-A Software Package for Automatic Processing of Mass Spectrometric Images.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 1296-1306 (2013).</li>
<li>Parry, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((omniSpect%3A+an+open+MATLAB-based+tool+for+visualization+and+analysis+of+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+and+desorption+electrospray+ionization+mass+spectrometry+images%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">omniSpect: an open MATLAB-based tool for visualization and analysis of matrix-assisted laser desorption/ionization and desorption electrospray ionization mass spectrometry images.</a> J. Am. Soc. Mass Spectrom. 24, 646-649 (2013).</li>
</ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

كما نوقش أعلاه، وإعداد العينات هي الخطوة الأكثر أهمية في سير العمل MSI. سوف تضمين الأنسجة بشكل غير متساو تسبب باجتزاء ليكون من الصعب أو غير الممكن في بعض الحالات. حجم القسم والوقت الكافي موازنة ضرورية للحفاظ على سلامة الأنسجة وتجنب للطي والدموع. واختيار مصفوفة وتقنية تطبيق تلعب دورا في تحديد أنواع التحاليل ليتم الكشف عن والقرار المكانية، واستنساخ النتائج. يمكن استخدام مزيج من المصفوفات أو تقنيات التطبيق تقديم نتائج التكميلية. <p class="jove_content" style=";text-align:right;di...

مجال متزايد من الايض العديد من التطبيقات البيولوجية الهامة بما في ذلك اكتشاف العلامات البيولوجية، فك رموز المسارات الأيضية في النباتات وغيرها من النظم البيولوجية، وعلم السموم التنميط 4،6-10. ويتمثل أحد التحديات التقنية الكبرى عند دراسة النظم البيولوجية هو دراسة مسارات metabolomic دون تعطيل لهم 11. MALDI-MSI يسمح للتحليل المباشر للأنسجة سليمة تمكن من analytes كشف حساسة في أجهزة احد 12،13 وحتى 14،15 الخلايا واحد. إعداد نموذج هو خطوة حاسمة في إنتاج الصور الطيفية الشامل استنساخه وموثوق بها. جودة الصور تعتمد إلى حد كبير على عوامل مثل الأنسجة التضمين المتوسطة، شريحة سمك، MALDI مصفوفة، وتقنية تطبيق المصفوفة. لتطبيقات التصوير، قسم مثالية سمك هو العرض من خلية واحدة (8-20 ميكرون اعتمادا على نوع العينة). يتطلب MALDI ترسب عضوي، غلوبولين العدسةه مصفوفة مركب، وعادة حمض ضعيف، على عينة لتحليلها ومساعدة الاجتثاث التأين. توفير 16 مصفوفات مختلفة كثافات مختلفة إشارة، أيونات التدخل، والكفاءة التأين من فئات مختلفة من المركبات. تقنية تطبيق مصفوفة يلعب أيضا دورا في نوعية الصور الطيفية الشامل والتقنيات المختلفة المناسبة لفئات مختلفة من التحاليل. يتم عرض ثلاثة أساليب تطبيق المصفوفة في هذا البروتوكول: البخاخة، بخاخ التلقائي، والتسامي. وقد استخدم على نطاق واسع البخاخة تطبيق مصفوفة في مجال التصوير MALDI. ميزة البخاخة تطبيق مصفوفة هو أنه سريع نسبيا وسهلة. ومع ذلك، فإن نوعية تطبيق مصفوفة البخاخة يعتمد إلى حد كبير على مهارة المستخدم ويميل إلى أن يكون أقل استنساخه وتسبب نشر التحاليل، خصوصا جزيئات صغيرة 17. نظم الرش التلقائي ديك ميكانيكا مماثلة لالبخاخة تطبيق مصفوفة، ولكن هفه تم تطويرها لإزالة التباين ينظر مع دليل تطبيق البخاخة، مما يجعل من رذاذ أكثر استنساخه. هذا الأسلوب يمكن أن يكون في بعض الأحيان أكثر تستغرق وقتا طويلا من التقليدية البخاخة تطبيق المصفوفة. كلا البخاخة اليدوية وأنظمة الرش التلقائي وسائل تطبيق مصفوفة المذيبات. التسامي هو جاف مصفوفة تقنية التطبيقات التي أصبحت أكثر وأكثر شعبية للتصوير الطيفي الشامل من المركبات والجزيئات الصغيرة لأنها تقلل الحليلة نشرها، إلا أنها تفتقر إلى ما يلزم من المذيبات لاستخراج ومراقبة المركبات الشامل أعلى 18. تحديد واثق من المركبات عادة ما يتطلب قياسات دقيقة الشامل للحصول على هويات المفترضة تليها جنبا إلى جنب الشامل (MS / MS) للتحقق من صحة التجارب، مع MS / MS الأطياف يجري مقارنة للمعايير والأدب، أو أطياف النظرية. في هذا البروتوكول عالية الدقة (حل شامل قوة 60،000 في م / ض 400)، اللوني السائل (ويقترن LC)-MS لMALDI-MSI إلى الحصول على كل المعلومات المكانية والتعرف على ثقة من نواتج الأيض الذاتية، وذلك باستخدام Medicago truncatula الجذور والعقد الجذرية مثل النظام البيولوجي. تجارب MS / MS يمكن القيام بها مباشرة على النسيج مع MALDI-MSI أو على مقتطفات الأنسجة مع LC-MS وتستخدم للتحقق من هويات الأيض. يوفر هذا البروتوكول طريقة بسيطة لرسم خريطة نواتج الأيض الذاتية في M. truncatula، والتي يمكن تكييفها وتطبيقها على MSI من الجزيئات الصغيرة في مختلف أنواع الأنسجة والنظم البيولوجية.

<table><tbody><tr><td>الجيلاتين</td><td>Difco</td><td><a href = "http://catalog.bd.com/bdCat/viewProduct.doCustomer?productNumber=214340" >214340< / a></td> <td>الحرارة لإذابة</td></tr><tr><td>Cryostat - HM 550</td><td>Thermo Scientific</td><td>956564A</td><td></td></tr> شرائح <tr><td>زجاجية مطلية بأكسيد قصدير الإنديوم (ITO) &nbsp ؛</td><td>دلتا تكنولوجيز</td><td>CB-90IN-S107</td><td>25 مم × 75 مم × 0.8 مم (العرض × الطول × السماكة)</td></tr> <tr><td>2،5-حمض ثنائي هيدروكسي بنزويك (DHB) مصفوفة &nbsp ؛</td><td>ICN Biomedicals</td><td><a href="http://www.labsource.com/Catalog/Item.aspx? ItemID = 1787195 ">PI90033< / a></td><td></td></tr> <tr><td>Airbrush</td><td>Paasche Airbrush Company</td><td>TG-100D</td><td>إلى جانب نظام بخاخ المصفوفة الأوتوماتيكي لحاوية فولاذية 75</td></tr><tr><td>مل - TM-Sspray</td><td>HTX Technologies، LLC</td><td>HTX. TMSP. H021-U</td><td>سيتم إعطاء تعليمات محددة لبدء التشغيل والإغلاق عند تثبيت الجهاز</td></tr><tr><td>التسامي &nbsp ؛</td><td>Chemglass Life Science</td> <td><a href = "http://www.chemglass.com/product_view.asp?pnr=CG-3038" >CG-3038-01 < / a ></td><td></td></tr> <tr><td>مضخة الفراغ - Alcatel 2008 A</td><td>Ideal Vacuum Products</td><td>P10976</td><td>الضغط النهائي = 1 × 10 -4 Torr</td></tr><tr><td>ultrafleXtreme MALDI-TOF / TOF</td><td>Bruker Daltonics</td><td>276601</td><td></td></tr><tr><td>FlexImaging</td><td>Bruker Daltonics</td><td>269841</td><td>مثال واحد على "برنامج خاص بالبائع"</td></tr> <tr><td>MALDI LTQ Orbitrap</td><td>Thermo Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFADBMASZ</td><td>أداة MALDI عالية الدقة لقياسات الكتلة الدقيقة</td></tr><tr><td>Q Exactive</td><td>Thermo Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMAZR</td><td>أداة LC-MS عالية الدقة لقياسات الكتلة الدقيقة</td></tr></tbody></table>

التصوير maldi الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في<em&gt; medicago truncatula</em&gt; الجذر العقيدات

MALDI-Mass Spectrometric Imaging for the Investigation of Metabolites in Medicago truncatula Root Nodules

معظم التقنيات المستخدمة لدراسة الجزيئات الصغيرة، مثل العقاقير الدوائية او نواتج الذاتية، وتوظيف مقتطفات الأنسجة التي تتطلب تجانس الأنسجة من الاهتمام التي يمكن أن تسبب تغيرات في المسارات الأيضية التي تجري دراستها 1. الكتلة الطيفي التصوير (MSI) هو أداة تحليلية قوية التي يمكن أن توفر المعلومات المكانية من analytes داخل شرائح سليمة من عينات الأنسجة البيولوجية 1-5. وقد استخدمت هذه التقنية على نطاق واسع لدراسة أنواع مختلفة من المركبات بما في ذلك البروتينات والببتيدات، والدهون، والجزيئات الصغيرة مثل الأيض الذاتية. مع بمساعدة الليزر مصفوفة الامتزاز / التأين (MALDI) MSI، التوزيعات المكانية من نواتج متعددة في وقت واحد يمكن اكتشافه. هنا، يتم تقديم وسيلة وضعت خصيصا لإجراء التجارب غير مستهدفة الايض MSI على جذور البقوليات والعقد الجذرية التي يمكن أن تكشف عن نظرة ثاقبة العمليات البيولوجية التي تحدث. الالطريقة المعروضة هنا يبين سير العمل MSI نموذجي، من إعداد العينات إلى الحصول على الصور، ويركز على خطوة تطبيق المصفوفة، مما يدل على تطبيق عدة تقنيات المصفوفة التي هي مفيدة للكشف عن جزيئات صغيرة. مرة واحدة يتم إنشاء الصور MS، ويناقش تحليل وتحديد نواتج الأيض من الاهتمام وبرهن. سير العمل القياسية المعروضة هنا يمكن تعديلها بسهولة لأنواع مختلفة الأنسجة، والأنواع الجزيئية، والأجهزة.

يتم عرض لمحة عامة التجريبية من MSI في الشكل 1. في بداية التجربة، وإعداد العينات هو خطوة حاسمة. يتم قطع العقيدات من جذور النباتات وجزءا لا يتجزأ من الجيلاتين. يجب الضغط على الأنسجة شقة ضد الكأس ناظم البرد، مع عدم وجود فقاعات، بينما يتم تجميده، وهذا سوف ضمان المواءمة أسهل والسليم للأنسجة أثناء مقطوع به. عندما يتم شرائح الأنسجة، فمن المهم لقطع الأنسجة في سمك السليم؛ رقيقة جدا من المقاطع سوف المسيل للدموع، وتدمير سلامة الأنسجة، في حين سميكة جدا من المقاطع سوف يقلل من ...

الكتلة الطيفي التصوير (MSI) هو أداة قوية التي يمكن استخدامها لاكتشاف وتحديد الأنواع الكيميائية المختلفة في أنسجة سليمة، والحفاظ على المركبات في بيئاتها المحلية، والتي يمكن أن توفر رؤى جديدة في العمليات البيولوجية. هنا يتم وصف أسلوب MSI وضعت لتحليل جزيئات صغيرة.

التصوير MALDI الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في<em&gt; Medicago truncatula</em&gt; الجذر العقيدات

Most techniques used to study small molecules, such as pharmaceutical drugs or endogenous metabolites, employ tissue extracts which require the ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء تصوير موثوق ومتعددة الكتلة عبر مطياف الكتلة للجزيئات الصغيرة في أنسجة جذور النبات. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحضير عينات الأنسجة بالحجم المناسب. وتتمثل الخطوة الثانية في تحسين وتطبيق مصفوفة MALDI على عينة النسيج.بعد ذلك، تخضع العينة لتقنية MALDI، حيث يتم جمع صور MSI والأطياف عبر الأنسجة. والخطوة النهائية هي معالجة البيانات التي يمكن من خلالها تحديد المحللات ذات الأهمية البيولوجية. وفي نهاية المطاف، تُستخدم تقنية MALDI MSI للكشف عن المستقلبات الداخلية الموجودة في العقد الجذرية للبقوليات.يمكن لهذه الطريقة أن توفر رؤية متعمقة حول المستقلبات الموجودة في أنسجة جذور النبات، ولكن يمكن تطبيقها أيضاً لدراسة الجزيئات الصغيرة والأنسجة من أنظمة نموذجية أخرى، بما في ذلك الثدييات، والحشرات القشريات، وغيرها. أولاً، أخرج عينات أنسجة النبات التي تم تحضيرها مسبقاً من المجمد عند درجة حرارة 80- °C. ثم قم بقص كوب الكرايوستات البلاستيكي وإزالة الجيلاتين الزائد، وثبّت النسيج المضمّن على حامل الكرايوستات باستخدام كمية بحجم العملة المعدنية من وسط درجة حرارة القطع المثالية أو وسط OCT، مع الحرص على عدم ملامسة OCT للنسيج.ضع حامل العينات في صندوق مبرد (cryostat box) مضبوط على درجة حرارة 20- °C حتى يتصلب مركب OCT. بعد ترك الحامل والجيلاتين ليتوازنا في درجة حرارة صندوق المبرد لمدة 15 دقيقة تقريبًا، استخدم المبرد (cryostat) لتقطيع النسيج بسمك يقارب سمك خلية واحدة. ثم قم بتثبيت كل شريحة يدويًا على شريحة زجاجية مبردة مسبقًا عن طريق تدفئة الجانب غير المطلي من الشريحة باستخدام ظهر اليد.بعد ذلك، ضع الجانب المطلي بـ ITO من الشريحة الدافئة بالقرب من شريحة النسيج المجمدة، واترك الشريحة تلتصق بالشريحة الزجاجية من أجل تطبيق مصفوفة MALDI باستخدام الرش الهوائي. نظف حاوية محلول الرش الهوائي وفوهتها جيدًا باستخدام الميثانول، ثم املأ حاوية المحلول بمحلول مصفوفة DHB. أمسك الرش الهوائي على بُعد 35 سنتيمترًا تقريبًا من العينة، وقم بتطبيق من 10 إلى 15 طبقة من المصفوفة على سطح الشريحة، مع مدة رش تبلغ 10 ثوانٍ ووقت تجفيف يبلغ 30 ثانية بين كل طبقة وأخرى.عند الانتهاء، قم بتنظيف الرشاش الهوائي جيدًا باستخدام الميثانول لتجنب الانسداد. وبسبب محلول المصفوفة، من المهم ملاحظة أنه على الرغم من أن الرشاشات الهوائية تكون متاحة بسهولة أكبر، إلا أن أنظمة رش المصفوفة الآلية غالبًا ما تنتج تغطية أكثر تساوياً وقابلية للتكرار للمصفوفة عند تطبيق التسامي لمصفوفة maldi Matrixx. قم بوزن 300 milligrams من DHB في قاع غرفة التسامي. ثبت الشريحة الزجاجية على الإصبع البارد بحيث تكون مقاطع الأنسجة متجهة لأسفل باستخدام شريط لاصق موصل مزدوج الوجه. قم بقص الشريحة إذا كانت كبيرة جدًا.بالنسبة لغرفة التسامي، قم بتثبيت النصفين العلوي والسفلي من غرفة التسامي معاً باستخدام مشبك C. ثم ضع غرفة التسامي في غطاء تسخين في درجة حرارة الغرفة. قم بتوصيل المفرغة وأضف الثلج في الماء البارد إلى الخزان العلوي.بمجرد تشغيل مضخة التفريغ، انتظر لمدة 15 دقيقة ثم قم بتشغيل عباءة التسخين. بعد مرور 10 دقائق، أوقف التسخين، وأغلق صمام التفريغ، ثم أوقف تشغيل مضخة التفريغ. بمجرد أن تبرد الحجرة وصولاً إلى درجة حرارة الغرفة، افتح الصمام لتحرير ضغط التفريغ ثم قم بإزالة العينة.بعد ذلك، ضع علامة على شكل زائد (+) في كل ركن من أركان العينة باستخدام قلم سائل التصحيح لتُستخدم كنقاط إرشادية. ضع الشريحة الزجاجية في لوحة محول شرائح Maldi والتقط صورة بصرية للعينة باستخدام الماسح الضوئي. تحقق من الصورة على الكمبيوتر وقم بتدوير الصورة بحيث تظهر بوضوح على الشاشة.سيتم وضع العينة في الجهاز بنفس الاتجاه. قم بإعداد ملف الحصول على الصور باستخدام البرنامج المقدم من الشركة المصنعة للجهاز مع ضبط حجم خطوة المسح (raster step size) على 50 micrometers وقطر ليزر مساوٍ لحجم خطوة المسح أو أصغر منه. في هذه المرحلة، قم بتحميل الصورة الضوئية في البرنامج وقم بمحاذاة الطبقة مع الصورة الضوئية.بعد معايرة الجهاز، حدد مناطق الأنسجة المراد تحليلها بواسطة تقنية MSI، مع تضمين بقعة من المصفوفة النقية على الشريحة لاستخدامها كعينة فارغة. بعد ذلك، ابدأ عملية الحصول على البيانات، ومن ثم افتح ملف التصوير في البرنامج المقدم من المورد واستخرج صور الأيونات عن طريق اختيار نسبة كتلة إلى شحنة محددة ومطلوبة من طيف الكتلة. وباستخدام البرنامج، أنشئ قائمة بالمحللات المحددة المطلوبة لمزيد من التحديد.أجرِ بحثاً في قاعدة بيانات الكتلة الدقيقة لتحديد التعريفات المفترضة للمواد التحليلية المستهدفة. ولتأكيد تطابق التعريفات المفترضة الناتجة عن بحث قاعدة بيانات الكتلة الدقيقة لمطياف الكتلة (ms) للمواد التحليلية المستهدفة مع أطياف التجزئة (msms) للمواد القياسية والمراجع الأدبية و/أو برامج التنبؤ بالتجزئة، تظهر هنا صورة بصرية لمقطع في عقدة جذرية من نبات mego Tula.إليك مثال لصورة بصرية لتغطية المصفوفة وأحجام البلورات باستخدام الرشاش الأوتوماتيكي والفرشاة الهوائية، والتسامي على التوالي. تؤدي طريقة التطبيق بالفرشاة الهوائية إلى تكوين بلورات كبيرة وصغيرة. وبينما ينتج الرشاش الأوتوماتيكي بلورات صغيرة متساوية الحجم، ينتج التسامي طبقة واحدة متساوية من المصفوفة.تنتج القوالب التقليدية مثل DHB العديد من الأيونات في نطاق الكتلة المنخفضة التي تقل عن 500 Daltons. ويمكن لهذه الأيونات الناتجة عن القالب أن تتدخل في عملية الكشف عن المستقلبات في هذا النطاق. تظهر هنا أطياف MS لقالب DHB وحده مقارنة بأنسجة العقد الجذرية المغطاة بقالب DHB.يمكن تمييز قمم الماتريكس عن المستقلبات الحقيقية باستخدام صور MS. عند النقر على قمة معينة، يتم استخلاص صورة الأيون وعرضها متراكبة مع الصورة الضوئية. تُعتبر القمم التي تُنتج صوراً ذات تموضع محدد في النسيج وغير موجودة في المنطقة المصورة للماتريكس فقط بمثابة مستقلبات؛ تظهر هنا عدة صور أيونية تمثيلية لمستقلبات وجدت في نسيج العقد الجذرية.بينما تظهر هنا أمثلة لصور مطيافية الكتلة (MS) المقابلة للقمم المرتبطة بالمصفوفة، تُظهر هذه الصورة تموضعاً واضحاً في نسيج العقدة الجذرية وغياباً للإشارة في المنطقة التي صُوِّرت وبها المصفوفة فقط. تُظهر هذه الإشارة تموضعاً ضئيلاً وهي موجودة في كامل النسيج. كما تظهر الإشارة أيضاً في المنطقة التي صُوِّرت وبها المصفوفة فقط.يكمن الهدف النهائي من تجارب الميتابولوميات غير المستهدفة في الكشف عن المحللات ذات الأهمية البيولوجية وتحديدها، والتعرف على المركبات محل الاهتمام. يظهر هنا مثال لأحد المستقلبات التي تم الكشف عنها باستخدام MSI و LCMS. وقد تم تحديد هذا المستقلب على أنه heme بناءً على الكتلة الدقيقة التي تم جمعها بواسطة LCMS عالي الدقة وطيف MSM MSS.تمت مقارنة بيانات MSMS هذه مع أطياف MSM S التي نشرها سابقاً Shima وSato، وقد تطابق طيفا MSM S. وبناءً على ذلك، تم تحديد هوية نسبة الكتلة إلى الشحنة 6 1 6 0.2 بثقة على أنها heme، استناداً إلى البحث في قاعدة بيانات الكتلة الدقيقة ومقارنة بيانات Ms.MS ببيانات Ms.MS الموجودة في المراجع العلمية. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة جيدة بكيفية استخدام maldi، والتصوير الطيفي للكتلة للكشف عن التوزيع المكاني للمستقلبات ذات الصلة بيولوجياً ورسم خرائطها باستخدام طريقة يمكن تطبيقها على دراسة الجزيئات الصغيرة في مجموعة متنوعة من أنواع الأنسجة والنظم النموذجية.

maldi-mass-spectrometric-imaging-for-investigation-metabolites

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

وصفت وسيلة سريعة للحصول على نظرة ثاقبة لبنية السكريات في المصفوفة خارج الخلية. الأسلوب يستفيد من خصوصية وحساسية glycosylhydrolases من مطياف الكتلة يسمح تحليل كميات ضئيلة من المواد. هذا الأسلوب هو قابل للتكيف لاستخدامها مباشرة على النسيج نفسه.

أليغو التنميط قداس (OLIMP) من السكريات خارج الخلية

&lt; p class = 'jove_content'&gt; تم تطوير مصدر تصوير قياس الطيف الكتلي (MSI) الذي يعمل بالضغط الجوي عن طريق اقتران امتصاص الليزر بالأشعة تحت الحمراء المتوسطة والرش الكهربائي بعد التأين تم استخدام مصفوفة الجليد الخارجية كمصفوفة لامتصاص الطاقة لتسهيل الامتصاص بالرنين للمواد المتعلقة بالأنسجة. توفر هذه المخطوطة بروتوكولا خطوة بخطوة لأداء IR-MALDESI MSI لفأر حديثي الولادة لكامل الجسم.

كامل الجسم الطيف الكتلي التصوير من قبل بمساعدة مصفوفة الأشعة تحت الحمراء ليزر الامتزاز Electrospray التأين (IR-MALDESI)

نبات رذاذ الكتلي هو أسلوب تحليل الكيميائي مباشر أن يقلل إعداد العينة ويلغي الفصل اللوني، مما يسمح للكشف السريع عن جزيئات صغيرة من الأنسجة النباتية.

نبات رذاذ الكتلي: أسلوب تاين المحيطة سريع مباشرة تقييم نواتج الأيض من الأنسجة النباتية

تستخدم هذه الطريقة التصوير الطيفي الكتلي (MSI) لفهم عمليات التمثيل الغذائي في أوراق S. alba عند التعرض للزينوبيوتكس. تسمح هذه الطريقة بالتوطين المكاني للمركبات ذات الاهتمام ونواتج الأيض المتوقعة داخل أنسجة محددة سليمة.

التحقيق في التمثيل الغذائي Xenobiotics في ساليس ألبا يترك عن طريق التصوير الطيفي الشامل

يتم تقديم بروتوكول لدراسة الأنسجة البيولوجية بدقة مكانية عالية باستخدام المجهر بالرنين المغناطيسي العالي المجال (MRM) باستخدام ميكروكويل. يتم توفير تعليمات خطوة بخطوة لتميز microcoils. وأخيراً، يتم إظهار الأمثل للتصوير على جذور النبات.

MRM Microcoil معايرة الأداء والاستخدام أظهرت على جذور طاعون Medicago في 22 T

والهدف من هذا البروتوكول هو تقديم إرشادات مفصلة بشأن إعداد العينات عند التخطيط للتجارب باستخدام MALDI MSI لتحقيق أقصى قدر من الكشف الأيضي والجزيئي في العينات البيولوجية.

إعداد عينة للتنميط الأيضي باستخدام التصوير الطيفي الشامل MALDI

في هذه الدراسة ، يتم تقديم سلسلة من الطرق لإعداد عينات DESI-MSI من النباتات ، ويتم وصف إجراء تركيب تجميع DESI ، والحصول على بيانات MSI ، والمعالجة بالتفصيل. يمكن تطبيق هذا البروتوكول في عدة شروط للحصول على معلومات الأيض المكاني في النباتات.

تصور المستقلبات المحددة في الأيض المكاني للطب الصيني التقليدي باستخدام DESI-MSI

يهدف هذا البروتوكول إلى وصف إرشادات مفصلة حول تحضير أقسام عينات البذور الصلبة ذات المحتوى المائي المنخفض لتحليل نظام الرصد الدولي MALDI-IMS ، والحفاظ على التوزيع الأصلي للتحليلات ووفرتها وتوفير إشارة عالية الجودة ودقة مكانية.

تحضير بذور النخيل الصلبة لتحليل قياس الطيف الكتلي بالليزر بمساعدة المصفوفة / تصوير التأين

تم تطوير طريقة متقدمة لتصوير قياس الطيف الكتلي (MSI) لعضيات الدماغ التي تسمح برسم خرائط لتوزيعات المستقلب داخل هذه النماذج. تقدم هذه التقنية رؤى حول مسارات التمثيل الغذائي للدماغ وتوقيعات الأيض أثناء التطور المبكر وفي المرض ، مما يعد بفهم أعمق لوظيفة الدماغ البشري.

التصوير الجزيئي لعضيات الدماغ البشري باستخدام قياس الطيف الكتلي 

نظهر كيف يمكن استخدام جذور النباتات شعر مركب لدراسة النباتات الريزوبيم التفاعلات وnodulation في الأنواع يصعب تحويل...

جيل من النباتات في المركب Medicago truncatula تستخدم لفحوصات Nodulation

اكتشف تقنية التصوير الطيفي الكتلي MALDI لتحليل المستقلبات في عقد جذور النباتات. تتيح هذه الطريقة رصد توزيع الجزيئات الحيوية في أنسجة Medicago truncatula بدقة عالية.

التصوير MALDI الكتلة الطيفي للتحقيق في المستقلبات في

استكشف المزيد من الفيديوهات