وهناك طريقة لتوليد الرئوي العدلات عن طريق رذاذ lipopolysaccharide في

الهدف العام من هذا الإجراء هو توليد عدلات مجرى الهواء متسقة وقابلة للتكرار عن طريق التعرض ل LPS الهباء الجوي. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحميل LPS المعلق في محلول ملحي أولا في البخاخات المتصلة بغرفة التعرض. تتعرض الفئران التالية ل LPS الهباء الجوي ثم يتم جمع غسل الشعب الهوائية ويتم تعداد الخلايا الالتهابية في الغسيل.

أخيرا ، يتم تثبيت أنسجة الرئة ، رسميا للتضمين والتقسيم والتحليل الكيميائي المناعي. في النهاية ، يمكن استخدام تعداد الخلايا الكلي والتفاضلي لغسل القصبات الهوائية لتقييم تجنيد العدلات في الرئتين. تتمثل المزايا الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل إدارة LPS داخل القصبة الهوائية في التوزيع المتساوي ل LPS الهباء الجوي في جميع أنحاء الرئتين ، وسهولة الأداء والحد الأدنى من التدريب المطلوب للتطبيق الناجح لإنشاء رذاذ LPS باستخدام معدات الوقاية الشخصية المناسبة وداخل غطاء المحرك الحيوي من المستوى الثاني من التهوية ، ابدأ بإدخال مدخل أحمر في البخاخات ثم توصيل البخاخات بهواء الغرفة المضغوط بواسطة الأنبوب الذي يوفره الشركه المصنعه.

بعد ذلك ، استخدم مرشح هواء لتوصيل مخرج البخاخات بمقياس تدفق الكتلة ، ثم قم بتوصيل مقياس تدفق الكتلة بمصدر كهربائي. اضبط تدفق الهواء على خمسة لترات في الدقيقة ، مع الحفاظ على الضغط عند بار إلى بارين ، ثم قم بإزالة مقياس تدفق الكتلة وافصل تدفق الهواء. بعد ذلك ، قم بتوصيل مخرج البخاخات بأنبوب متشعب 15.9 ملم متصل بصناديق زجاج شبكي 2 1 50 × 1 63 × 2 0 5 ملم مزودة بأغطية قابلة للإزالة.

يجب أن يحتوي كل صندوق على فتحة بطول خمسة ملليمترات في الجانب المقابل للمدخل لمنع تراكم الضغط. الآن ضع ما يصل إلى خمسة فئران في كل صندوق وأغلق الأغطية. ثم افتح البخاخات.

املأ الملحق بأربعة إلى ثمانية ملليلتر من LPS المذاب في مركبة ملحية أو مالحة وحدها ، وأعد توصيل المدخل بمصدر الهواء. اسمح للهباء الجوي بالتدفق إلى صناديق زجاج شبكي مغلقة مع المراقبة المستمرة للحيوانات والتأكد من أن إمداد الهواء يظل مؤمنا بإحكام بمدخل البخاخات أثناء الهباء الجوي. بعد 10 دقائق ، افصل مصدر الهواء واترك في صناديق زجاج شبكي لمدة دقيقتين أخريين.

ثم افتح الأغطية. اسمح للهباء الجوي بالتشتت وإعادة الفئران إلى أقفاصها عند نقطة النهاية التجريبية لكل بدوره ، استخدم المقص أولا لعمل قطع خلفي أمامي واحد لفضح الصدر. بعد ذلك ، ارفع القفص الصدري من الطرف الأمامي لعظم القص وثقب الحجاب الحاجز عند النقطة البطنية دون قطع أي نسيج في الرئة.

ثم افتح القفص الصدري بقطعتين تلتقيان أسفل الفك في الاتجاه الخلفي الأمامي. بمجرد فتح القفص الصدري ، استخدم الملقط لتفكيكه برفق وقطع القصبة الهوائية أسفل الحنجرة. الآن ارفع القصبة الهوائية وقطع الأربطة التي تربط فصوص الرئة بالتجويف الصدري.

ثم اسحب الرئتين والقصبة الهوائية برفق لأعلى وبعيدا عن الأنسجة الدهنية والقلب وضعها على قطعة من ورق تغليف الحقنة. بعد ذلك ، أدخل أنبوب بولي إيثيلين 0.965 ملم في القصبة الهوائية وقم بتثبيته بخيط من خيوط الحرير. اربط الفص المتعدد بخيط حريري أيضا ، ثم أدخل إبرة قياس 23 في أنبوب البولي إيثيلين.

ثم لجمع غسل الشعب الهوائية ، استخدم حقنة سعة ملليلتر واحد لحقن 250 ميكرولتر من الثلج ببطء تسمى PBS المعقمة في الفص الفردي ، وللنقر بعناية على الرئتين وعلى سطح مقعد العمل 30 مرة ، اسحب السائل ببطء مرة أخرى إلى المحقنة وجمعه في أنبوب بعد تكرار الإجراء مع 200 ميكرولتر من PBS الطازج ، ضع غسل القصبات الهوائية على الجليد لتحليله لاحقا. لإصلاح أنسجة الرئة للتحليل النسيجي ، قم بإزالة الفص المتعدد وقم بتثبيته. قم بتجميده على الثلج الجاف.

قم بتخزين الفص عند 80 درجة مئوية تحت الصفر. لإصلاح الأنسجة للتحليل النسيجي ، قم بتركيب حقنة سعة 60 مليلتر بدون مكبس على حامل دعم معدني ، وقم بنفخ الفص الفردي بالفورمالين لمدة خمس دقائق. ثم افصل الإبرة واسحب الخيط الحريري لإزالته مع أنبوب البولي إيثيلين من القصبة الهوائية.

إغلاق القصبة الهوائية في نفس الوقت والاحتفاظ بالضغط في الرئة. بعد ذلك ، اغمر الفص في فورمين لمدة 24 ساعة عند أربع درجات مئوية. في اليوم التالي ، اغسل المنديل الثابت ثلاث مرات لمدة 20 دقيقة على الأقل في كل مرة بنسبة 70٪ من الإيثانول.

بعد تضمين الأنسجة المجففة في الفيلم ، قم بتقطيع الفص إلى أربعة إلى خمسة ميكرون وقم بتلطيخ الأقسام بالهيماتين والإوين للتقييم النسيجي. عادة ما يكون العدد الإجمالي للخلايا في سائل غسل القصبات الهوائية للفئران المعرضة للهباء الجوي المتولد بالمركبة فقط حوالي أو أقل من 200،000 خلية. تتكون الخلايا من 95 إلى 100٪ من الخلايا أحادية النواة مع عدد قليل من الخلايا الليمفاوية ولا تحتوي على عدلات.

تحدت الفئران بملليغرام واحد لكل مليلتر من الهباء الجوي. لبس. ومع ذلك ، تظهر زيادة في العدد الإجمالي للخلايا في سائل الغسيل القصبي السنخي ، وعادة ما يكون أكبر من 500 ، 000 خلية بعد ست ساعات مع بقاء تسلل الخلية مرتفعا بعد 24 ساعة ، ومع تحول ملف تعريف الخلية نحو غلبة العدلات. لوحظ وجود ملف تعريف خلوي التهابي مماثل وعدلات رئوية مع رذاذ خمسة ملليغرام لكل مليلتر LPS أيضا.

لوحظت العدلات في تحت الغشاء المخاطي الظهاري وكذلك في المساحات المحيطة بالشعب الهوائية الموصلة والأوعية الدموية بعد ست و 24 ساعة من تحدي LPS ، ولكن ليس تحت السيطرة. الفئران المعالجة بالمحلول الملحي. يزداد المحتوى الكلي للبروتين في سائل الغسيل القصبي السنخي لفئران تحدي LPS مقارنة بالفئران المعرضة للمحلول الملحي ويزداد التعبير عن الكيموكينات الجاذبة للكيمياء الكيميائية المقاومة للعدلات c و XCL one و C XCL two في الفئران التي تواجه تحديا LPS أيضا.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة على التهاب الرئة الناجم عن LPs. يمكن أيضا تطبيقه على نماذج الأمراض الأخرى مثل الالتهابات البكتيرية أو الفيروسية ، حيث يمكن تكييف البخار الهباء الجوي لتقديم العديد من التحديات المختلفة.