إصابة الحبل الشوكي الكامل وبروتوكول تشريح الدماغ لاحقا Wholemount في الموقع التهجين في اليرقات البحر الجلكى

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء عملية كاملة للحبل الشوكي والقطع وتشريح الدماغ لدراسة توجيه Axon بعد الإصابة. يتم تحقيق ذلك عن طريق التحويل الأول ، وهو حبل شوكي لامبري على مستوى الخياشيم الخامسة. ثم يتم تشريح الدماغ وتثبيته على حارس السيل.

بعد إصلاح الدماغ ، يمكن تخزينه في الميثانول أو استخدامه على الفور للتهجين في الموقع الذي يتغير في النهاية في التعبير عن المحور العصبي. يمكن رؤية مستقبلات التوجيه في فقرات متجددة بعد إصابة في الحبل الشوكي. ميزة التقنية التي سنعرضها اليوم على تقسيم البارافين التقليدي أو قسم ناظم البرد ، هي أنها تسمح لك برؤية الدماغ بأكمله ، بما في ذلك الخلايا العصبية التي تنبثق على الحبل الشوكي الكبيرة والمحددة.

توضح الدكتورة كاثي زانغ ، عالمة أبحاث في مختبرنا من الجداول التي تغذي روافد بحيرة ميشيغان إلى نهر ديلاوير في ولاية بنسلفانيا ، أو الجداول في ولاية مين. لامبري البحر من النوع البري من الأنواع. تم الحصول على أليفة على Marus.

طول اليرقات التي تتراوح أعمارها بين أربع و 7 سنوات من 10 إلى 14 سم وهي كبيرة بما يكفي للإصابة والتشريح. احتفظ بها في مجموعات من 52 ، مائة. في خزانات مياه عذبة سعة 50 جالونا عند 16 درجة مئوية.

يتطلب الخزان ركيزة من الحصى بوصة واحدة حتى يتمكن اللامبري من استعارة جميع المياه المضافة إلى الخزان يجب أن تكون مكيفة بترشيح الفحم والتهوية لمدة 48 ساعة على الأقل قبل إضافتها إلى الخزان. شريطة استخدام في غضون عام واحد ، فلا داعي لإطعامها لهذا الإجراء. جهز محلول جرس طازج جاهز.

أولا ، انقل المصباح إلى محلول البنزوكايين المائي المشبع. بمجرد تخديره ، انقله إلى طبق نصف مليء بواقي السيل. ضعي الطبق على الثلج وغطي الطبق بالثلج.

الرنين البارد. قم بتأمين بثلاثة دبابيس حشرية بقطر 0.15 ، واحدة في الخطم واثنتان في الخياشيم الخامسة. ثم ضعه تحت مجهر استريو للجراحة.

ابدأ باستخدام مشرط رقم 11 لعمل شق طولي على طول خط الوسط الظهري على مستوى الخياشيم الخامسة. سيكشف هذا عن الحبل الشوكي أثناء إجراء هذا الشق. استخدم خطافين مصنوعين من دبابيس الحشرات لتأمين جدران الجسم باستخدام كاسترو يكشف عن رقم ثمانية ، المقص.

قم بعمل قطع عمودي عبر الحبل الشوكي المكشوف. افحص الأطراف المقطوعة للحبل الشوكي للتأكد من اكتمال عملية القطع. ثم باستخدام الملقط ، أعد تنظيم الأطراف المقطوعة وأغلق الجرح.

انقل الحمم البركانية إلى قطعة من ورق الترشيح مبللة بمحلول الرنين. انقل المستحضر إلى سرير من الثلج لمدة ساعة حتى يجف الجرح بعد ساعة. انقل الحمم البركانية إلى خزانها الصغير من الماء المثلج.

اتركه يشفى هناك لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، تحقق من الحركة اللاسلكية إلى المقطع العابر. إذا كانت هناك أي تحركات ، فإن القطع كان غير مكتمل.

إذا لم يكن هناك ، فإن المقطع العرضي كان جيدا ويمكن نقل إلى خزان درجة حرارة الغرفة للتعافي بينما يتعافى. قم بتغيير الماء كل يومين إلى ثلاثة أيام. بمجرد استعادة المنقول بشكل كاف ، قم بتخديره وإعداده للتشريح كما هو موضح سابقا.

لتشريح الدماغ، ابدأ بشق عرضي بين فتحة الأنف والعضو الصنوبري. ثم مع لحم العجل كاسترو ، يقطع المقص الأنسجة المحيطة بالدماغ أثناء تأمين. مع ملقط.

الهياكل البيضاوية البيضاء على جانبي جذع الدماغ هي كبسولات الأذن. بمجرد تعرض الدماغ، استخدم الملقط لإزالة الضفيرة المشيمية. بعد ذلك ، استخدم خطافات الدبوس المعدلة لنشر رأس وفضح الأعصاب القحفية.

ثم قطع الحبل الشوكي بشكل عرضي بالمقص مع تثبيت الحبل الشوكي بالملقط. قطع الأعصاب القحفية لتشريح الدماغ. ثم انقل الدماغ إلى قطعة صغيرة من السيليكون وقم بتثبيته هناك.

استخدام دبوس حشرة واحد في الحبل الشوكي ودبوس واحد من خلال إحدى المصابيح الشمية. ثم باستخدام المقص ، قم بقص البصلة الشمية بين الحاسوب ، ولجنة حامي الدماغ وجذع الدماغ على طول خط الوسط الظهري. بمجرد قطع المفوضين و oex ، قم بتحويل ألواح A LR بشكل جانبي وتثبيتها بشكل مسطح على السيليكون بإجمالي سبعة دبابيس حشرية ، اثنتان في المصابيح الشمية ، واثنتان في حواف القطع ، ولجنة حامي الدماغ ، واثنتان في oex الممتد ، وواحدة في خط الوسط للحبل الشوكي.

الآن باستخدام الكواشف الخالية من الحمض النووي الريبي ، قم بإصلاح المستحضر في 4٪ بارا فورمالديهايد في درجة حرارة الغرفة لمدة ثلاث ساعات مع تحريض لطيف. يمكن بعد ذلك تحليل الأدمغة عن طريق التهجين في الموقع باستخدام الطريقة الموصوفة للتعبير عن النيوجين في النصوص التي تم تحديدها في الحبل الشوكي ، مما يؤدي إلى إسقاط الخلايا العصبية للتحكم. بعد أسبوعين من الآفة التي تظهر هنا هي سيطرة تمثيلية غير مصابة.

بعد قطع الحبل الشوكي الكامل ، كانت هناك تغييرات في التعبير عن مستقبلات النيوجين. بعد أسبوعين ، تم التعبير عن مستقبلات النيوجين في حالة عدم السيطرة بشكل تفضيلي في المجددات السيئة مثل M1 I واحد I Two I أربعة ، أو الخلايا العصبية MTH. مهد تطوير هذه التقنية الطريق لقدرتنا على استكشاف مستقبلات التعبير عن التوجيه ، ومستقبلات كبريتات شوندروتن ، والبروتيو ، والجليكان ، وتنشيط قواعد الصب كلها في نفس الدماغ.