4.5: الرعاية الأساسية للكتاكيت وصيانتها

تعتبر أجنة الدجاج نموذجا رائعا لدراسة التطور المبكر للفقاريات ، ويرجع ذلك جزئيا إلى سهولة صيانتها وغير مكلفة. على عكس معظم الكائنات الحية النموذجية ، التي يتم تربيتها في المختبر ، يتم شراء بيض الدجاج المخصب من مورد خارجي. بالإضافة إلى ذلك ، تتطلب صيانة البيض والعمل معه القليل جدا من المعدات المتخصصة. سيوفر هذا الفيديو خلفية عامة عن اكتساب بيض الكتاكيت وصيانته ، والتقنيات الأساسية للعمل مع الأجنة النامية ، وبعض التطبيقات العملية لهذه الأساليب.

قبل أن نناقش العمل مع الكتاكيت في المختبر ، دعنا نراجع كيفية رعاية الدجاج لبيضها في المنزل. على الرغم من أن البيض يتم تخصيبه بالفعل عند وضعه ، إلا أن نمو الكتاكيت يتوقف عندما يتعرض البيض لدرجات حرارة خارجية أكثر برودة. بعد وضع حوالي 12 بيضة ، تجلس الدجاجة على العش لاستئناف نمو الجنين. أثناء حضانة الدجاجة ، تقوم الدجاجة بتدوير البيض لتسخينه بالتساوي ومنع الجنين من الالتصاق بالقشرة. إذا سارت الأمور على ما يرام ، بعد 21 يوما ، تمتلك أمي حضنة من الكتاكيت.

فكيف يجمع العلماء ما يكفي من البيض لتجاربهم؟ قد يستغرق ذلك بعض الوقت. نظرا لأن الدجاج مستأنس على نطاق واسع ، يمكن الحصول على البيض المخصب بسهولة من المفرخ أو مزرعة التربية. يمكن طلب البيض في مراحل نمو محددة.

بمجرد وصول البيض إلى المختبر ، يمكن تخزينه في درجة حرارة 13-16 درجة مئوية لمدة تصل إلى 5 أيام. عندما تكون جاهزا لنموها ، اترك البيض يسخن إلى درجة حرارة الغرفة ، ثم انقله إلى حاضنة هزاز عند 37 درجة مئوية مع رطوبة 60٪ حتى يصل إلى المرحلة المرغوبة.

تتطلب معظم التجارب التي يتم إجراؤها على الكتاكيت بضع خطوات تحضيرية ، مثل التحقق مما إذا كان البويضات التي تلقيتها قد تم تخصيبها في المقام الأول. الطريقة السهلة هي استخدام مصدر ضوء ساطع أو صندوق شمعة لإضاءة البيضة. باستخدام هذه التقنية ، المعروفة باسم التشميع ، يمكن تصور الهياكل الداخلية مثل الأوعية الدموية لتأكيد وجود الجنين.

يؤدي ترك البويضة سليمة إلى تحسين بقاء الكتاكيت ، لكن القشرة تمنع الوصول إلى الجنين. لحل هذه المشكلة ، يستخدم الباحثون تقنية تسمى النوافذ.

ابدأ بوضع البيض على جانبهم ووضع علامة على الجزء العلوي لتحديد الجانب الذي سيرتفع إليه الجنين. لمنع تلف صفار البيض أثناء قطع النافذة ، تتم إزالة كمية صغيرة من الألبومين أو بياض البيض لخفض الجنين بعيدا عن القشرة. للقيام بذلك ، قم أولا بتعقيم القشرة عن طريق مسحها بنسبة 70٪ من الإيثانول. بعد أن تجف القشرة ، قم بتنعيم قطعة من الشريط اللاصق على الطرف الحاد للبيضة. ثم استخدم إبرة معقمة لثقب الشريط والقشرة. أدخل الإبرة لأسفل لتجنب إتلاف صفار البيض وإزالة 5 مل من الألبومين. أخيرا ، لمنع تسرب الألبومين ، أغلق الفتحة بقطعة أخرى من الشريط.

لقطع القشرة ، ضع قطعة من الشريط فوق المنطقة التي تخطط لفتحتها. باستخدام مقص ، قم بعمل ثقب صغير في القشرة وابدأ في قطع فتحة دائرية. خلال هذه العملية ، سيمنع الشريط شظايا القشرة من السقوط على الجنين.

حتى بعد النوافذ ، قد يكون من الصعب تصور الأجنة في المرحلة المبكرة نظرا لصغر حجمها وشفافيتها. لتحسين التباين بين الجنين وصفار البيض ، يمكن استخدام الحبر الهندي المخفف وغير السام. يتم حقن الحبر في صفار البيض تحت الجنين ويسمح له بالانتشار. يمكن الآن رؤية الجنين في تباين أعلى مع الخلفية الداكنة. بعد التلاعب التجريبي ، يجب إعادة إغلاق النافذة بشريط لاصق وإعادة البيضة إلى الحاضنة.

الآن بعد أن أصبحت على دراية بالتقنيات الأساسية للعمل مع البيض ، دعنا نرى كيف يتم استخدام هذه الطرق لإجراء تجارب على أجنة الدجاج.

للبدء ، يمكن استخدام الشمعاء لتحديد موقع الهياكل الجنينية في البيض السليم. على سبيل المثال ، تستخدم الأغشية خارج الجنين لجنين الدجاج بشكل شائع لتكاثر الفيروسات. لإصابة الغشاء ، يتم إجراء التشميع لتحديد موقع الواجهة بين التجويف الآلانتوي والكيس الهوائي ، من أجل حقن الفيروس مباشرة في التجويف الآلانتوي دون الإضرار بالجنين. بعد بضعة أيام من الحضانة ، يمكن حصاد أعداد كبيرة من الجزيئات الفيروسية من السائل الآلانتوي.

تعتبر نوافذ البيض ممارسة مفيدة للغاية لأنها تسمح بالوصول إلى الجنين للتجريب. تبدأ العديد من التجارب بتوصيل الحمض النووي إلى أنسجة معينة عن طريق الحقن المجهري. ثم يتم وضع الأقطاب الكهربائية حول الأنسجة محل الاهتمام ويتم تطبيق مجال كهربائي لاختراق غشاء الخلية مؤقتا ودفع الأحماض النووية إلى الخلية.

عند إجراء تجارب على الأجنة المبكرة ، يعد حقن الحبر الهندي مفيدا بشكل خاص لتصور الأنسجة الشفافة. هنا ، يسمح التباين المحسن للباحثين بحقن محلول الحمض النووي في مجالات الأنسجة المكررة. في النهاية ، يمكن لهذه التقنية إنتاج خلايا مصنفة بشكل فردي ، والتي يمكن مراقبتها بمرور الوقت لتتبع انقسامات الخلايا.

لقد شاهدت للتو فيديو JoVE حول صيانة الكتاكيت. غطى هذا العرض التقديمي المناولة الأساسية لبيض الدجاج وصيانته ، والتقنيات الشائعة للعمل مع الكتاكيت وبعض الأمثلة على كيفية تطبيق هذه الأساليب في البحوث البيولوجية. شكرا للمشاهدة!