طريقة الحصول على خلايا سرطان المبيض الابتدائية من العينات الصلبة

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية الصلبة. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع عينة ورم المبيض أولا ووضعها في طبق بتري. الخطوة الثانية هي تقطيع العينة إلى قطع ونقل القطع إلى أنبوب مخروطي الشكل مع كواشف الهضم للحضانة.

بعد ذلك ، يتم تشغيل ملاط الخلية من خلال مرشح حيث يتم جمع الخلايا فقط للطرد المركزي ، والخطوة الأخيرة هي التخلص من المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في الوسائط للحضانة بين عشية وضحاها. في النهاية ، ستنمو خلايا سرطان المبيض الظهارية في الثقافة لأسابيع ، مما يسمح بالتطبيقات النهائية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان المبيض ، مثل أفضل خيار علاجي لكل مريض على حدة.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج سرطان المبيض لأنها تسمح لنا باستخدام مزارع خلايا أكثر واقعية ، وهي شديدة التأثر بالتلاعب الجيني وأكثر فائدة لاختبارات فحص الأدوية. للبدء ، استكمل 500 مل من delcos أو النسور المعدلة أو المتوسطة أو DMEM مع 10٪ مصل بقري الجنين أو FBS و 1٪ بنسلين أو ستربتومايسين أو متلازمة جنينية. قم بتخزين الوسط عند أربع درجات مئوية.

اجمع العينة من غرفة العمليات وانقلها على الجليد إلى المختبر الذي لا يزال داخل الحاوية المنقولة. ضع العينة في غطاء السلامة البيولوجية. انقل العينة من أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر إلى طبق بتري مقاس 60 ملم × 60 ملم يحتوي على 10 ملليلتر من PBS المثلج الطازج.

بعد ذلك ، باستخدام شفرة حلاقة معقمة ، قم بتقطيع العينة إلى ملليمترين أو قطع أصغر. ثم عالج DMEM بأنبوب لصق القرص في أنبوب مخروطي سعة 15 لترا. انقل الأنسجة المفرومة إلى أنبوب خليط DMEM dispa.

ثم احتضان العينة عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. حرك ملاط الخلية يدويا كل خمس دقائق لضمان الهضم الأمثل. بعد الحضانة ، انقل ملاط الخلية من خلال مصفاة خلية شبكية 70 ميكرومتر موضوعة فوق أنبوب مخروطي سعة 50 مل.

اضغط برفق على الشبكة باستخدام مكبس حقنة ، وتخلص من أي أنسجة غير مرتبطة متبقية أعلى الشبكة ، واجمع تعليق الخلية الذي تم الحصول عليه في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 مل. بعد ذلك ، أجهزة الطرد المركزي. الأنبوب المخروطي عند 320 ضعف جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في 10 ملليلتر من DMEM تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ ps. ثم انقل معلق الخلية إلى طبق بتري واحتضان المعلق عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية. قم بتغيير الوسط بعد 24 ساعة من الطلاء الأولي لإزالة الحطام الخلوي وغالبية كريات الدم الحمراء الموجودة في المزرعة.

أخيرا ، قم بتغيير الوسط كل ثلاثة أيام خلال الأسبوعين التاليين وبعد ذلك تكون مزارع خلايا EOC الأولية جاهزة للتطبيقات النهائية. مباشرة بعد الطلاء. تظهر خلايا سرطان المبيض الظهارية أو خلايا EOC على شكل معلقات أحادية الخلية وفي كتل بها كريات الدم الحمراء وحطام الخلايا كثيرة.

زراعة خلايا EOC بعد ثلاثة أيام من الطلاء مجموعات خلايا EOC شبه ملتصقة وتلوث أقل لكريات الدم الحمراء. بعد أسبوع واحد من الطلاء الأولي ، تصبح ثقافة خلايا EOC دوامة مثل مجموعة الخلايا المنتشرة على بلاستيك زراعة الأنسجة. يمكن رؤية مورفولوجيا الحجر المرصوفة بالحصى الظهارية النموذجية في طبقة أحادية متقاربة من خلايا EOC بعد 14 يوما في الثقافة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية الصلبة.