طريقة الحصول على خلايا سرطان المبيض الابتدائية من العينات الصلبة
فبراير 4, 2014
توضح هذه الدراسة طريقة مفصلة لعزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولي من العينات السريرية الصلبة. تخضع سرطان المبيض العينات السريرية للهضم الأنزيمية للحصول قابلة للحياة، وخالية من الخلايا الليفية سرطان المبيض الظهاري (EOC) الخلايا مناسبة تماما للتطبيقات المصب.
الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية الصلبة. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع عينة ورم المبيض أولا ووضعها في طبق بتري. الخطوة الثانية هي تقطيع العينة إلى قطع ونقل القطع إلى أنبوب مخروطي الشكل مع كواشف الهضم للحضانة.
بعد ذلك ، يتم تشغيل ملاط الخلية من خلال مرشح حيث يتم جمع الخلايا فقط للطرد المركزي ، والخطوة الأخيرة هي التخلص من المادة الطافية وإعادة تعليق الخلايا في الوسائط للحضانة بين عشية وضحاها. في النهاية ، ستنمو خلايا سرطان المبيض الظهارية في الثقافة لأسابيع ، مما يسمح بالتطبيقات النهائية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال سرطان المبيض ، مثل أفضل خيار علاجي لكل مريض على حدة.
تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى علاج سرطان المبيض لأنها تسمح لنا باستخدام مزارع خلايا أكثر واقعية ، وهي شديدة التأثر بالتلاعب الجيني وأكثر فائدة لاختبارات فحص الأدوية. للبدء ، استكمل 500 مل من delcos أو النسور المعدلة أو المتوسطة أو DMEM مع 10٪ مصل بقري الجنين أو FBS و 1٪ بنسلين أو ستربتومايسين أو متلازمة جنينية. قم بتخزين الوسط عند أربع درجات مئوية.
اجمع العينة من غرفة العمليات وانقلها على الجليد إلى المختبر الذي لا يزال داخل الحاوية المنقولة. ضع العينة في غطاء السلامة البيولوجية. انقل العينة من أنبوب مخروطي سعة 50 مليلتر إلى طبق بتري مقاس 60 ملم × 60 ملم يحتوي على 10 ملليلتر من PBS المثلج الطازج.
بعد ذلك ، باستخدام شفرة حلاقة معقمة ، قم بتقطيع العينة إلى ملليمترين أو قطع أصغر. ثم عالج DMEM بأنبوب لصق القرص في أنبوب مخروطي سعة 15 لترا. انقل الأنسجة المفرومة إلى أنبوب خليط DMEM dispa.
ثم احتضان العينة عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. حرك ملاط الخلية يدويا كل خمس دقائق لضمان الهضم الأمثل. بعد الحضانة ، انقل ملاط الخلية من خلال مصفاة خلية شبكية 70 ميكرومتر موضوعة فوق أنبوب مخروطي سعة 50 مل.
اضغط برفق على الشبكة باستخدام مكبس حقنة ، وتخلص من أي أنسجة غير مرتبطة متبقية أعلى الشبكة ، واجمع تعليق الخلية الذي تم الحصول عليه في أنبوب مخروطي معقم سعة 50 مل. بعد ذلك ، أجهزة الطرد المركزي. الأنبوب المخروطي عند 320 ضعف جم لمدة سبع دقائق عند أربع درجات مئوية.
تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في 10 ملليلتر من DMEM تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ ps. ثم انقل معلق الخلية إلى طبق بتري واحتضان المعلق عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون و 37 درجة مئوية. قم بتغيير الوسط بعد 24 ساعة من الطلاء الأولي لإزالة الحطام الخلوي وغالبية كريات الدم الحمراء الموجودة في المزرعة.
أخيرا ، قم بتغيير الوسط كل ثلاثة أيام خلال الأسبوعين التاليين وبعد ذلك تكون مزارع خلايا EOC الأولية جاهزة للتطبيقات النهائية. مباشرة بعد الطلاء. تظهر خلايا سرطان المبيض الظهارية أو خلايا EOC على شكل معلقات أحادية الخلية وفي كتل بها كريات الدم الحمراء وحطام الخلايا كثيرة.
تظهرزراعة خلايا EOC بعد ثلاثة أيام من الطلاء مجموعات خلايا EOC شبه ملتصقة وتلوث أقل لكريات الدم الحمراء. بعد أسبوع واحد من الطلاء الأولي ، تصبح ثقافة خلايا EOC دوامة مثل مجموعة الخلايا المنتشرة على بلاستيك زراعة الأنسجة. يمكن رؤية مورفولوجيا الحجر المرصوفة بالحصى الظهارية النموذجية في طبقة أحادية متقاربة من خلايا EOC بعد 14 يوما في الثقافة.
بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية عزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية الصلبة.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
تصف هذه الدراسة طريقة مفصلة لعزل وتوصيف خلايا سرطان المبيض الأولية من عينات سريرية صلبة. ويتيح هذا الإجراء نمو خلايا سرطان المبيض الظهارية في المزارع الخلوية، مما يسهل التطبيقات اللاحقة.
المكونات الرئيسية للدراسة
مجال العلوم
- علم الأورام
- بيولوجيا الخلية
- الأبحاث السريرية
خلفية علمية
- يعد سرطان المبيض مصدر قلق صحي كبير مع خيارات علاجية معقدة.
- يعد عزل الخلايا السرطانية الحيوية أمراً بالغ الأهمية للطب الشخصي.
- قد لا تؤدي الطرق الحالية إلى الحصول على خلايا نقية من سرطان المبيض الظهاري.
- تهدف هذه الدراسة إلى تحسين عملية العزل لتحقيق نتائج بحثية أفضل.
الغرض من الدراسة
- عزل خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية.
- توصيف الخلايا المعزولة لاستخدامها في تطبيقات لاحقة.
- تعزيز فهم خيارات العلاج المتاحة لمريضات سرطان المبيض.
الطرق المستخدمة
- جمع عينات من أورام المبيض.
- الهضم الإنزيمي لعينات الأنسجة.
- الترشيح لعزل الخلايا الحية.
- الطرد المركزي وإعادة التعليق في أوساط الزرع.
النتائج الرئيسية
- العزل الناجح لخلايا سرطان المبيض الظهارية الخالية من الخلايا الليفية.
- يمكن استنبات الخلايا لعدة أسابيع، مما يتيح إجراء دراسة مستفيضة.
- توفر هذه الطريقة مصدراً موثوقاً لخلايا السرطان لأغراض البحث.
- إمكانية المساهمة في تحديد استراتيجيات العلاج الشخصي.
الاستنتاجات
- تعتبر الطريقة الموضحة فعالة في عزل خلايا سرطان المبيض.
- وهي تدعم إجراء المزيد من الأبحاث حول علاجات سرطان المبيض.
- يمكن للدراسات المستقبلية الاعتماد على هذه الطريقة لتحسين النتائج المرضية.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
يتيح استخلاص خلايا سرطان المبيض الأولية من العينات السريرية الصلبة إنشاء نماذج ذات صلة بالمريض، مما يقلل الاعتماد على الخطوط الخلوية الممررة التي تراكمت فيها تشوهات جينية. ويدعم هذا النهج تقليل المخاطر الميكانيكية في عملية التحقق من الأهداف من خلال الحفاظ على التغاير الورمي والبيولوجيا الخاصة بموقع الإصابة في الآفات الأولية أو النقيلية. وتوفر المزارع الناتجة مصدراً متجدداً لعمليات الفرز اللاحقة، مما يعزز الثقة التنبؤية في اتخاذ القرارات في المرحلة ما قبل السريرية.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير الصيدلاني الحيوي
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- القيمة العلمية: تتيح اختبار الفرضيات العلاجية باستخدام خلايا تعكس المظهر الجيني والمظهري للعينة السريرية الأصلية.
- القيمة التشغيلية: تقلل من الغموض الميكانيكي من خلال تجنب الشوائب المصنعة المرتبطة بخطوط الخلايا التي خضعت لعمليات تمرير طويلة الأمد.
- القيمة التنبؤية: تدعم عملية فرز المحفظة العلاجية من خلال التحقق من صحة الأهداف مع تقليل المخاطر البيولوجية في نظام ذي صلة بالمرض.
الفحص وتطوير المقايسة
- القيمة العلمية: إنتاج خلايا سرطان المبيض الظهارية المناسبة لفحص الأدوية مع الحفاظ على الخصائص المسرطنة.
- القيمة التشغيلية: توفير معلقات خلوية قياسية وقابلة للتكرار بعد الهضم الإنزيمي والترشيح.
- القابلية للتوسع: تمكين تحضير مزارع أولية متعددة من عينات متنوعة لإجراء اختبارات المقايسة المتوازية.
الأبحاث الانتقالية والقبل سريرية
- الاستمرارية الانتقالية: تعمل كجسر يربط بين مرحلة الاكتشاف والعمل ما قبل السريري من خلال استخدام خلايا مشتقة مباشرة من عينات المرضى.
- توافق المؤشرات الحيوية: تدعم تقييم الأهداف والمؤشرات الحيوية في سياق يعكس طبيعة ورم المريض.
- التقدم المعدل حسب المخاطر: تساهم في اتخاذ قرارات المتابعة أو الإيقاف (go/no-go) بناءً على الاستجابات في الخلايا الأولية التي تتنبأ بالنتائج السريرية بشكل أفضل.
تكامل خطوط المعالجة وسير العمل
تندرج هذه الطريقة ضمن سلسلة الاكتشافات بدءاً من علم الأحياء المبكر وصولاً إلى تحديد المركبات الرائدة، حيث توفر خلايا أولية تعزز من مدى ملاءمة جهود الفحص والتحقق اللاحقة.
- بيولوجيا الاكتشاف: تدعم اختبار الفرضيات وتوضيح المسارات باستخدام خلايا تحتفظ بخصائصها المحددة للأورام.
- الفحص: توفر خلايا أولية لسرطان المبيض الظهاري جاهزة للمقايسات، مع نمو ومورفولوجيا قابلة للقياس لتقييم المركبات.
- التحليلات: تتيح قياس الاستجابة الدوائية، والتكاثر، والتغيرات المظهرية في نظام مستقر جينياً ومنخفض الممرات.
- الأبحاث الانتقالية: تحافظ على الصلة السريرية من خلال الاشتقاق المباشر من العينات، مما يدعم التحقق من المؤشرات الحيوية والأهداف.
- إعادة الاستخدام المؤسسي: تؤسس منصة قابلة لإعادة الاستخدام لإنتاج مستنبتات أولية من عينات متنوعة، مما يقلل الاعتماد على الخطوط الخلوية المحدودة.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تزيد من الموثوقية التنبؤية عبر استخدام خلايا تعكس التباين والبيولوجيا الخاصة بالورم الأصلي.
- القيمة التشغيلية: تضمن قابلية التكرار من خلال توحيد خطوات الهضم الإنزيمي، والترشيح، وبدء الزراعة الخلوية.
- القيمة الاستراتيجية: تحسن كفاءة رأس المال عن طريق تقليل مخاطر الفشل في المراحل المتأخرة من خلال التحقق الأفضل من الأهداف في المرحلة قبل السريرية.
- التأثير على المحفظة: تتيح تحديد أولويات المرشحين بناءً على تعديل المخاطر وفقاً لنشاطهم في الخلايا الأولية المشتقة من المرضى.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في التعامل المعقم مع الأنسجة، والهضم الإنزيمي، وتقنيات زراعة الخلايا الأولية.
- يعتمد على توفر عينات حديثة أو محفوظة بشكل صحيح من أورام المبيض تم جمعها تحت ظروف معقمة.
- يستلزم توفر أجهزة الطرد المركزي، والترشيح، ومعدات الزراعة بما في ذلك غطاءات السلامة البيولوجية وحاضنات CO2.
- يتضمن تحسين وقت الهضم والتفكيك الميكانيكي لزيادة عائد الخلايا الظهارية مع تقليل تلوث الخلايا الليفية إلى أدنى حد.
- يتقيد بمدى توفر العينات وحيويتها، والتي قد تختلف بناءً على توقيت الجراحة وظروف النقل.
