تطوير أميلوجينين-الشيتوزان هيدروجيل ل في المختبر إعادة نمو المينا مع واجهة الكثيفة

الهدف العام من هذا الإجراء هو تطوير بروتوكول لتصنيع هيدروجيل AMLO و chitosan لإعادة بناء المينا السطحية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تحضير شرائح الأسنان المحفورة أولا. في الخطوة الثانية ، يتم تحضير هيدروجيل AMLO و kitan الطازج.

بعد ذلك ، يتم تطبيق هيدروجيل AMLO و kitan على سطح شريحة السن. أخيرا ، يتم إعادة نمو مينا الأسنان باستخدام هيدروجيل AMLO chizen في اللعاب الاصطناعي. في النهاية ، يمكن استخدام العلاج بالموجات فوق الصوتية والمسافة البادئة النانوية لتقييم القوة الميكانيكية للطبقة المشكلة حديثا وارتباطها بالمينا الطبيعية.

تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى تطويرنا لتقنية أكثر من تطبيقها على مينا الأسنان المصابة ، سواء لدى البالغين أو الأطفال ، وتوقف آفة التسوس المبكر ، وتعيد بناء فقدان المينا بسبب التسوس ، وتحافظ على بنية الأسنان ، وتمنع تطور تسوس الأسنان. سيوضح الإجراء الدكتور شيتار ، زميل ما بعد الدكتوراه من مختبري. ابدأ باختيار ضرس ثالث بشري دون أي تسوس مستعاد.

استخدم منشارا ماسيا منخفض السرعة مبرد بالماء لقطع التاج طوليا إلى شرائح بسمك ملليمترين ، ثم قم بإزالة الجزء الجذري من الضرس بالموجات فوق الصوتية. نظف الشرائح لمدة دقيقتين ثم اشطفها بالماء المتأين ثلاث مرات لمحاكاة الآفات التآكلية. احفر الشريحتين بحمض الفوسفوريك بنسبة 30٪ لمدة 30 ثانية.

ثم اشطفها على الفور بالماء المتأين. ثم بالموجات فوق الصوتية. نظف الشرائح المحفورة لمدة دقيقتين مرة أخرى واشطفها بالماء المتأين.

ثلاث مرات أخرى. لتحضير محلول مخزون قازان. أولا قم بإذابة 1٪ من الوزن لكل حجم ، قازان في محلول حمض الأسيتيك 1٪ لكل حجم ، متبوعا بالتقليب عند 80 درجة مئوية بين عشية وضحاها.

بعد تبريد المحلول إلى درجة حرارة الغرفة ، قم بتصفية ESAN من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر ، ثم أضف هيدروكسيد الصوديوم المولي لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 5.0. لتحضير محلول مخزون الكالسيوم والفوسفات ، قم بوزن كلوريد الكالسيوم واخلط محلول 0.1 مولاري. بعد ذلك ، قم بتدوير المحلول حتى يزول واضبط قيمة الأس الهيدروجيني على 11 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم المولي الواحد.

ثم قم بوزن فوسفات الصوديوم ديبا. امزج محلول 0.1 مولار ودوامة حتى يصبح المحلول صافيا. لتحضير هيدروجيل AMLO Genin kaizan ، أضف 960 ميكرولتر من محلول 1٪ esan المحضر حديثا إلى أنبوب يحتوي على 200 ميكروغرام من جين الخنازير المؤتلف AMLO.

ثم دوامة المحلول حتى يصبح واضحا. الآن ، أضف 25 ميكرولترا من محلول كلوريد الكالسيوم 0.1 مولار ، متبوعا ب 15 ميكرولترا من محلول ديبا فوسفات الصوديوم 0.1 مولار إلى محلول أوزان AMLO المحتوي على ذلك. دوامة الحل لمدة خمس دقائق.

ثم أضف بعناية هيدروكسيد الصوديوم المولي لضبط الرقم الهيدروجيني لمحلول AMLO والأوزان إلى 6.5 AMLO وسيتشكل هيدروجيل الأوزان عندما تصل قيمة الأس الهيدروجيني إلى 6.5 لبدء إعادة نمو المينا في AMLO andaz ، وهو هيدروجيل. أولا ، اضبط الرقم الهيدروجيني لمحلول اللعاب الاصطناعي إلى 7.0 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم المولي ، وقم بتخزين المحلول عند أربع درجات مئوية. ثم استخدم حقنة لتطبيق حوالي 20 ميكرولترا من AMLO و chizen hydrogel على شريحة أسنان الحافة ، وضعها في مجفف في درجة حرارة الغرفة.

بعد ساعتين ، أضف 300 جزء في المليون من فلوريد الصوديوم إلى محلول اللعاب ، ثم انقل شريحة السن إلى دورق يحتوي على 30 مل من المحلول. غطي الدورق بورق الألمنيوم ثم ضعي الدورق في فرن على حرارة 37 درجة مئوية. أخيرا ، قم بإزالة شريحة السن بعد ثلاثة إلى سبعة أيام وضعها في مجففة في درجة حرارة الغرفة حتى تجف بعد إصلاحها بواسطة AMLO و chizen hydrogel لمدة سبعة أيام ، تتشكل طبقة شبيهة بالمينا بسمك 15 ميكرومتر على سطح المينا المحفور.

تتكون الطبقة المزروعة حديثا من مصفوفات من البلورات عالية الترتيب يبلغ قطرها حوالي 50 نانومتر تنمو بشكل تفضيلي على طول محور البحر بشكل عمودي على السطح. لاحظ أن هذه البلورات الشبيهة بالإبرة منظمة في حزم مشابهة للوحدات الأساسية للمينا الطبيعية. تعرض صورة حيود الإلكترون في المنطقة المحددة للطبقة التي تم إصلاحها نمطا على شكل قوس يكشف عن محاذاة هرمية للبلورات المزروعة حديثا.

على طول تحليل حيود الأشعة السينية في الاتجاه 0 0 2 يؤكد أن الطبقة المزروعة حديثا تتكون من الشهية ، والتي يتم محاذاتها على طول المحور C البلوري وفقا للفحص المجهري الإلكتروني الماسح وملاحظات حيود الإلكترون في المنطقة المختارة في هذه الصورة ، يتم عرض البنية المجهرية للواجهة بين الطبقة المزروعة حديثا والمينا الطبيعية. لاحظ أن البلورات المزروعة حديثا لم تنمو في نفس اتجاه بلورات المينا الأصلية ، وأن نمو الشهية بوساطة البروتين يؤدي إلى اتجاه عمودي للبلورات المزروعة حديثا بالنسبة لبلورات المينا الطبيعية. لا توجد فجوة واضحة في الواجهة بين الطبقة المزروعة حديثا والركيزة المينا.

على المقياس النانوي ، اندمجت المينا والبلورات المعاد نموها معا لتشكيل واجهة سلسة. بعد 10 دقائق من العلاج بالموجات فوق الصوتية ، لا تزال الطبقة المزروعة حديثا المتكونة في هيدروجيل AMLO Genin chito مرتبطة بإحكام بسطح المينا ويتم الحفاظ على الهيكل المنظم للعينة المعالجة بهيدروجيل tizen بدون مولوجين. ومع ذلك ، لوحظ وجود فجوة كبيرة بين المينا والطبقة التي تم إصلاحها تميز بوضوح بين الطبقة المزروعة حديثا والمينا الطبيعية.

في هذه التجربة ، تم تسمية جين AMLO في الطبقة المزروعة حديثا بالفلورسنت المناعي ، ثم تم تأكيد وجود جين AMLO من خلال التألق الأخضر داخل الطبقة المزروعة حديثا. كما هو موضح في الرسم البياني بعد النقش الحمضي ، تنخفض صلابة ومعامل سطح المينا بنسبة 98 و 88٪ تقريبا على التوالي. تظهر المجموعة الضابطة التي عولجت بهيدروجيل الأوزان بدون جينين AMLO تحسنا محدودا فقط في كل من الصلابة والمعامل.

في المقابل ، بعد التمعدن في أوبرو وأوزان هيدروجيل ، لوحظت زيادة تقارب أربع مرات في المعامل وتسع مرات في الصلابة بعد تطورها. في VI ومزيد من التقييم في النماذج ، يمكن توسيع هذا البروتوكول لتصميم تقنية لعلاج عيب الأشعة المتحركة مثل مسافة التسوس المبكر والتآكل. إينا.