التوليف وتنقية Iodoaziridines إشراك الكمي التحديد الأمثل للقرطاسية المرحلة اللوني لل

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحضير وتنقية مركب اليود النهائي. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق توليد ثنائي ميثيل الليثيوم من خلال نزع البروتون من ثنائي ميثان في درجة حرارة منخفضة والتفاعل مع إيمين. تتمثل الخطوة الثانية في تسخين خليط التفاعل بسرعة لتحفيز حلقنة الوسيط ثنائي اليود لإنتاج منتج اليوريدين المطلوب.

بعد ذلك، يتم تقييم استقرار منتج I oto Uridine تجاه مختلف الأطوار الساكنة المستخدمة في الكروماتوغرافيا لتحديد الأكثر ملاءمة للتنقية. وتتمثل الخطوة النهائية في تنقية I oto a iodine وإجراء تحليل proton NMR. وفي النهاية، يُستخدم هذا الفحص للأطوار الساكنة في الكروماتوغرافيا لإظهار أن basic Illumina modified to activity four هو الأكثر ملاءمة لتنقية IDO odine.

لقد خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما وجدنا أن منتجات اليود IDO الجديدة غير مستقرة عند استخدام كروماتوغرافيا هلام السيليكا، مما جعلنا بحاجة إلى طريقة تنقية بديلة. ومن هنا، صممنا إجراءً لتقييم استقرار اليود IO تجاه مجموعة من الأطوار الساكنة للكروماتوغرافيا، وهو إجراء يمكن تطبيقه أيضاً على مركبات أخرى قد تكون حساسة. وسيقوم كل من توم ودوم، وهما طالبان في مرحلة الدكتوراه في مجموعتي البحثية، بتوضيح هذا الإجراء.

أولاً، يتم تجفيف دورق مستدير القاع سعة 100 milliliter يحتوي على قضيب تحريك ومزود بسدادة مطاطية (septum) باستخدام اللهب تحت تيار من argonne. بعد ترك الدورق ليبرد حتى درجة حرارة الغرفة، يُضاف 5.7 milliliters من anhydrous tetrahedran و2.7 milliliters من anhydrous ethyl ether باستخدام سرنجة، و315 microliters من hexa ethyl dilane المقطر حديثاً باستخدام سرنجة دقيقة. يُوضع الدورق في حمام مائي بحجم مناسب يضمن غمره بشكل جيد.

بعد بدء عملية التحريك، أضف الثلج الجاف والأسيتون إلى الحمام التبريدي لتبريد المحلول إلى -78 °C. بعد ذلك، غطِ الحمام التبريدي بورق الألمنيوم لتقليل تعريض وعاء التفاعل للضوء. تلي ذلك إضافة 0.6 mL من n-butyl lithium بتركيز 2.5 M في الهكسان قطرة تلو الأخرى باستخدام سرنجة على مدار دقيقتين إلى ثلاث دقائق.

بعد ترك الخليط يُقلب عند درجة حرارة -78 °C لمدة 30 دقيقة. ولتحضير محلول lithium hexa ethyl dilane، أضف 1 mL من anhydrous terah hydro ferran إلى دورق مستدير القاع سعة 10 mL تم تجفيفه باللهب باستخدام سرنجة. ثم أضف 135 µL من di ITOM methane باستخدام سرنجة دقيقة، وقم بتدوير الدورق برفق لضمان خلط المحلول جيداً.

بعد ذلك، أضف محلول ميثان di ITOM قطرة تلو الأخرى على مدار دقيقتين إلى محلول الليثيوم hexa ethyl dilane عند درجة حرارة -78 °C مع ترك المحلول يستمر في التقليب لمدة 20 دقيقة. زِن 135 mg من الأمين في دورق مستدير القاع سعة 10 mL آخر تم تجفيفه باللهب، وأذبه في 2 mL من tetra hydro ferran اللامائي. بعد مرور 20 دقيقة من وقت إزالة البروتون، أضف محلول الأمين قطرة تلو الأخرى إلى محلول di ito methyl الليثيوم على مدار خمس دقائق عند درجة حرارة -78 °C.

فور اكتمال الإضافة بالتنقيط، ارفع وعاء التفاعل من حمام الثلج الجاف. غطِّ القارورة بورق الألمنيوم وانقلها إلى حمام مائي مثلج عند صفر درجة Celsius. قلّب المحلول لمدة 15 دقيقة عند صفر درجة Celsius.

بعد ذلك، يتم إيقاف التفاعل بإضافة 30 milliliters من محلول بيكربونات الصوديوم المائي المشبع. يُنقل الخليط إلى قمع فصل ويُضاف إليه 30 milliliters من di chloro methane. يُرج الخليط، ثم يتم تنفيس القمع وإزالة الطبقة العضوية السفلية.

بعد تكرار عملية الاستخلاص مرتين، أضف كبريتات الصوديوم إلى الطبقات العضوية المجمعة لإزالة أي ماء موجود في المحلول. ثم قم بترشيح كبريتات الصوديوم باستخدام الترشيح الفراغي بواسطة قمع زجاجي مزود بسدادة قطنية، مع تجميع الرشاحة في دورق مستدير القاع سعة 250 milliliter، ثم قم بإزالة المذيب تحت ضغط منخفض باستخدام مبخر دوار، وذلك للحصول على عينة غير نقية من منتج ITO uridine المطلوب.

أضف 1 3 5 TRIMETH oxy benzene كمعيار داخلي إلى العينة الخام، ثم أذب عينة العينة الخام في di chloro methane. تأكد من ذوبانها تماماً. خذ جزءاً من هذا الخليط، ثم قم بإزالة المذيب تحت ضغط منخفض.

عند الانتهاء، قم بتحليل العينة بواسطة مطيافية الرنين المغناطيسي النووي البروتوني (proton NMR spectroscopy). بعد تحليل الرنين المغناطيسي النووي، افتح طيف الرنين المغناطيسي النووي البروتوني المسجل باستخدام برنامج معالجة الرنين المغناطيسي النووي القياسي مثل mast nova. انقر بزر الماوس الأيمن على الطيف واختر التكامل (integration).

بعد ذلك، اختر الخيار اليدوي (manual) لتوفير أداة التكامل. انقر واسحب لتغطية عرض القمم عند 6.08 PP m و 4.87 PP M لتكامل إشارات المعيار الداخلي وإشارة aine CHI على التوالي. انقر بزر الماوس الأيمن على تكامل القمة عند 6.08 PP m، واختر "تحرير التكامل" (edit integral)، ثم قم بتغيير القيمة المعيارية إلى 3.0.

بعد ذلك، استخدم قيمة التكامل المحدثة لإشارة CHI لليود لتحديد إنتاجية يود I OTO. وبمجرد اكتمال تحليل NMR، اخلط 25 جراماً من الأطوار الساكنة التالية مع 50 ملليلتر من 5% ethyl acetate hexane في ست دوارق مخروطية منفصلة سعة 250 ملليلتر تحتوي على قضبان تحريك في الدوارق المخروطية. قم بتحضير محلول سعة 50 ملليلتر من 5% ethyl acetate heane لاستخدامه كعينة ضابطة.

بعد ذلك، قم بتقليب المعلقات على لوح تحريك مغناطيسي. أضف حصصاً مقدارها 2 mL من محلول المعيار الداخلي I OTO Azarin إلى كل دورق مخروطي في درجة حرارة الغرفة. ثم قم بتقليب خلائط المعلقات لمدة 30 دقيقة.

بعد مرور 30 دقيقة، قم بترشيح كل خليط من المعلق تحت تفريغ الهواء باستخدام قمع مركزي، مع تجميع كل رشيحة في دورق مستدير القاع سعة 250 milliliter. اغسل الراسب الموجود في القمع المركزي مرتين باستخدام 30 milliliters من di chloro methane. قم بإزالة المذيب من العينات الناتجة باستخدام مبخر دوار.

بعد ذلك، قم بتحليل العينات باستخدام مطيافية الرنين المغناطيسي النووي للبروتون (proton NMR spectroscopy) لحساب كمية اليود المستردة في كل حالة. وكما تم وصفه سابقاً، سجل الإنتاجية في دفتر ملاحظات المختبر. قارن بين إنتاجية I OTO Aine التي تم الحصول عليها من كل طور ساكن تم اختباره وتلك التي تم الحصول عليها سابقاً لتحديد العينة التي تعطي أعلى إنتاجية.

بعد ذلك، كرر عملية التخليق الموصوفة سابقاً لتحضير خليط IO اليودي الخام من أجل توليد نشاط Illumina الأساسي. رابعاً، أضف 100 grams من نشاط Illumina الأساسي في دورق مستدير القاع سعة 500 milliliter، ثم أضف 10 milliliters من الماء إلى الدورق. بعد إغلاق الدورق بسدادة زجاجية، رجه بقوة حتى تختفي جميع التكتلات، مما يشير إلى توزيع الماء بشكل متساوٍ في جميع أنحاء Illumina.

بمجرد أن تبرد Illumina إلى درجة حرارة الغرفة، قم بتنقية IO iodine الخام عن طريق كروماتوغرافيا العمود باستخدام Illumina activity four الأساسي. وبالنسبة للطور الساكن، قم بالشطف باستخدام hexane بتدرج يصل إلى 5%YL acetate taxane. اجمع الكسور التي تحتوي على المنتج في دورق مستدير القاعدة وقم بإزالة المذيب باستخدام المبخر الدوار للحصول على I oto iodine النقي.

قبل التنقية، تم حساب مردود بنسبة 59% من I oto a iodine باستخدام الرنين المغناطيسي النووي البروتوني (proton NMR). ومع ذلك، كان تنقية I oto a iodine هذه أمراً صعباً وتعرض لتحلل ملحوظ أثناء التنقية باستخدام السيليكا على Illumina قاعدية. وقد وفر التفاعل الرابع المنتج بمردود قدره 48%.

أعطى تحليل رنين البروتون النووي المغناطيسي (Proton NMR) سلسلة من العوائد للأطوار الساكنة فيما يتعلق بالمعيار الداخلي، حيث حققت basic Illumina activity four أعلى عائد بنسبة 53% وهي القيمة الأقرب لعائد NMR. وبناءً على ذلك، تم اختيار basic Illumina activity four للمرحلة النهائية من تنقية Toal iota باستخدام الأشعة تحت الحمراء (IR).

يمكن الحصول على مجموعة واسعة من أمينات ITO بإنتاجية عالية. وتتوافق كل من الكحولات والأمينات العطرية والأليفاتية مع التفاعل، بما في ذلك تلك التي تتطلب إعاقة فراغية مثل مجموعات tert وortho. وبناءً على الأمثلة، يُقترح أن التفاعل يحدث عن طريق نزع البروتون، يليه إضافة نيوكليوفيلية.

لإعطاء وسيط ثنائي يوديد الأمينو جيم، يؤدي التسخين اللاحق إلى تحفيز عملية حلقنة ذات انتقائية فراغية عالية من نوع DIA، مما يرجح تكوين اليود في الوضع cis. ونظراً للتفاعلات الفراغية الدقيقة في الحالة الانتقالية للحلقنة أثناء تحسين التفاعل، كان التحكم في درجة الحرارة والتوقيت ضروريين للوصة إلى النتيجة المرجوة للتفاعل. أما إخماد التفاعل دون تسخين فقد أدى إلى الحصول على يوديد end toal IO وثنائي يوديد amge.

ومع ذلك، تتعرض النواتج للتحلل تحت ظروف التفاعل، وهو ما يمكن تجنبه عن طريق تدفئة التفاعل وتقليل أوقات التفاعل. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تخليق منتج الإيريديوم IO وتقييم استقراره تجاه مجموعة واسعة من الأطوار الساكنة للتنقية عن طريق الكروماتوغرافيا. ولا تنسَ أن التعامل مع mbu lithium قد يكون خطيراً للغاية، لذا يجب اتخاذ احتياطات مثل العمل تحت جو خامل وإخماد الزيادات بشكل آمن.

يجب دائمًا استخدام الكاشف عند تنفيذ هذا الإجراء.