Name: و خارج الحي نظام الثقافة لدراسة التنمية الغدة الدرقية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-06T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: تعلم زراعة الغدة الدرقية الجنينية للفئران خارج الجسم لدراسة أحداث التشكل والتمايز. يتيح هذا البروتوكول إجراء تجارب الكسب والخسارة الوظيفية لفهم تطور الغدة الدرقية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

تم دعم العمل بمنح من جامعة لوفان الكاثوليكية (Action de recherché concertées) وصندوق البحث الطبي العلمي (F.R.S.-FNRS, Belgium). A.-S.D. زميل دكتوراه من Télévie، A.-C.H. حصل على زمالة من Fonds pour la formation à la Recherche dans l'Industrie et dans l'Agriculture (بلجيكا) ، M.V. مدعوم من معهد de Duve و C.E.P. هو باحث مشارك أول في F.R.S.-FNRS (بلجيكا).

<ol><li>Colin, I. M., Denef, J. -F., Lengelé, B., Many, M. -C., Gérard, A. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+the+cell+biology+of+thyroid+angiofollicular+units%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr.+Rev%22%5BJournal%5D)">Recent insights into the cell biology of thyroid angiofollicular units.</a> Endocr. Rev. 34 (2), 209-238 (2013).</li>
<li>Fagman, H., Andersson, L., Nilsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+developing+mouse+thyroid+embryonic+vessel+contacts+and+parenchymal+growth+pattern+during+specification+budding%2C+migration%2C+and+lobulation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">The developing mouse thyroid embryonic vessel contacts and parenchymal growth pattern during specification budding, migration, and lobulation.</a> Dev. Dyn. 235 (2), 444-455 (2006).</li>
<li>Fagman, H., Nilsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenesis+of+the+thyroid+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Morphogenesis of the thyroid gland.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 323 (1), 35-54 (2010).</li>
<li>Fagman, H., Nilsson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphogenetics+of+early+thyroid+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Morphogenetics of early thyroid development.</a> J. Mol. Endocrinol. 46 (1), (2011).</li>
<li>De Felice, M., Di Lauro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thyroid+development+and+its+disorders+genetics+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr.+Rev%22%5BJournal%5D)">Thyroid development and its disorders genetics and molecular mechanisms.</a> Endocr. Rev. 25 (5), 722-746 (2004).</li>
<li>De Felice, M., Di Lauro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+and+extrinsic+factors+in+thyroid+gland+development%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Intrinsic and extrinsic factors in thyroid gland development: an update.</a> Endocrinology. 152 (8), 2948-2956 (2011).</li>
<li>Hick, A. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+epithelial+paracrine+interactions+during+thyroid+development+govern+follicular+organization+and+C-cells+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Reciprocal epithelial paracrine interactions during thyroid development govern follicular organization and C-cells differentiation.</a> Dev. Biol. 381 (1), 227-240 (2013).</li>
<li>Toda, S., Koike, N., Sugihara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+integration+of+thyrocytes+and+thyroid+folliculogenesis%3A+a+perspective+for+thyroid+tissue+regeneration+and+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr.+J%22%5BJournal%5D)">Cellular integration of thyrocytes and thyroid folliculogenesis: a perspective for thyroid tissue regeneration and engineering.</a> Endocr. J. 48, 407-425 (2001).</li>
<li>Toda, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+models+for+studying+thyroid+biology+and+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22ISRN+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Culture models for studying thyroid biology and disorders.</a> ISRN Endocrinol. , (2011).</li>
<li>Eggo, M. C., Quiney, V. M., Campbell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+factors+regulating+growth+and+function+of+human+thyroid+cells+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Local factors regulating growth and function of human thyroid cells in vitro and in vivo.</a> 213, 47-58 (2003).</li>
<li>Antonica, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+thyroid+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of functional thyroid from embryonic stem cells.</a> Nature. 491, 66-71 (2012).</li>
<li>van Eyll, J. M., Pierreux, C. E., Lemaigre, F. P., Rousseau, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shh-dependent+differentiation+of+intestinal+tissue+from+embryonic+pancreas+by+activin+A%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Shh-dependent differentiation of intestinal tissue from embryonic pancreas by activin A.</a> J. Cell Sci. 117, 2077-2086 (2004).</li>
<li>Hick, A. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+primitive+duct+formation+in+the+pancreas+and+submandibular+glands%3A+a+role+for+SDF-1%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.+Biol.+9%22%5BJournal%5D)">Mechanism of primitive duct formation in the pancreas and submandibular glands: a role for SDF-1.</a> BMC Dev. Biol. 9. , (2009).</li>
<li>Pierreux, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial%3AEndothelial+cross-talk+regulates+exocrine+differentiation+in+developing+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial:Endothelial cross-talk regulates exocrine differentiation in developing pancreas.</a> Dev. Biol. 347, 216-227 (2010).</li>
<li>Puri, S., Hebrok, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+embryonic+pancreas+development+using+real-time+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of embryonic pancreas development using real-time imaging.</a> Dev. Biol. 306, 82-93 (2007).</li>
<li>Petzold, K. M., Spagnoli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+system+for+ex-vivo+culturing+of+embryonic+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A system for ex-vivo culturing of embryonic pancreas.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li>
<li>Watanabe, T., Costantini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+analysis+of+ureteric+bud+branching+morphogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Real-time analysis of ureteric bud branching morphogenesis in vitro.</a> Dev. Biol. 271, 98-108 (2004).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

وتصف هذه الورقة طريقة لتشريح وزراعة إإكسبلنتس الغدة الدرقية (E12.5) أو فصوص (E14.5) من أجل دراسة وفهم أفضل للأحداث المعقدة التي تفضي إلى تشكيل الغدة الدرقية. ويرجع ذلك إلى الأصل المزدوج للANLAGEN الغدة الدرقية (بدأة خط الوسط واثنين من الهيئات التالية للخيشومية الجانبية)، وصغر حجمها، وهو جزء من النسيج E12.5 المترجمة منقاري إلى الشرايين البلعوم القوس، والتي تحتوي على القصبة الهوائية، ولكن ليس المريء وmicrodissected. كما يتضح، في غضون فترة أربعة أيام، وهذا النظام الثقافة يلخص بأمانة ...

الغدة الدرقية هي عبارة عن مجموعة من المجالات الظهارية مستقلة، ودعا بصيلات، وتحيط بها شبكة كثيفة من الشعيرات الدموية البطانية. هذه المنظمة تسمح وظيفة الغدة الدرقية: توفير الشعيرات الدموية البطانية thyrocytes مع اليود، اللازمة لT3 و T4 هرمون التوليف، وتوزيع هذه الأخيرة إلى الجسم كله. منتشرة في بين بصيلات والشعيرات الدموية، C خلايا إنتاج هرمون الكالسيتونين نقص كلس الدم 1. على الرغم من أن العمارة الغدة الدرقية الكبار وظائف معروفة، الآليات الخلوية والجزيئية المشاركة في التطور الجنيني الغدة الدرقية (تشكيل المسام والتمايز) بعيدة كل البعد عن أن يكون مفهوما. خلال مرحلة التطور الجنيني، thyrocytes السلف كما تنبع سماكة (بدأة خط الوسط) من الجدار البطني من الأديم الباطن المعى الأمامي في اليوم الجنينية (ه) 8.5 في جنين الفأر، في حين C خلايا الأسلاف تنشأ في E11.5 كما نتوءات على شكل قطرات ( بو التالية للخيشوميةيموت) من الحقائب البلعوم الرابع 2-6. برعم خط الوسط ثم يفصل من الأديم الباطن، ويوسع ثنائيا لتندمج في E13.5 مع الهيئات التالية للخيشومية على كل جانب من القصبة الهوائية. أخيرا، thyrocytes تنظيم في بصيلات وخلايا C-التفريق. المعرفة الحالية على تشكيل الغدة الدرقية يأتي أساسا من التحليل النسيجي لأنسجة ثابتة، ولكن الأحداث التخلق المشاركة في تشكيل الغدة الدرقية هي ديناميكية للغاية وتنطوي على الاتصالات والتفاعلات بين أنواع مختلفة من الخلايا ومع المصفوفة خارج الخلية. وأظهرت الأعمال الأخيرة التي الأسلاف thyrocyte تنتج مستويات عالية من VEGF لتجنيد الخلايا البطانية إلى الغدة الدرقية النامية، وبدوره بتجنيد الخلايا البطانية تشجيع تشكيل بصيلات وخلايا C التمايز 7. وقد أجريت معظم الدراسات المجراة سابقا على الغدة الدرقية على الخلايا المشتقة من الغدة الدرقية الكبار معزولة، ونمت إما على 2D البلاستيك زراعة الأنسجة ديتضاءل المجموع المذكور أعلاه أو في المصفوفات 3D. باستخدام هذه الأنواع من الثقافات، والخلايا الجريبي متباينة إما البقاء الاستقطاب وتنظيمها في بصيلات أو إعادة الاستحواذ على منظمة 3D 8-10. ومع ذلك، وهذه الخلايا الظهارية نقية، explanted من بيئتهم الفسيولوجية، والمثقف في 2D، تجاهل التفاعل مع المصفوفة خارج الخلية، السيتوكينات وعوامل النمو ومع أنواع الخلايا الأخرى مثل الخلايا البطانية أو الأعصاب التي يواجهونها عادة في الجسم الحي. وصفت دراسة لطيفة جدا مؤخرا بروتوكول تمايز الخلايا ES في بصيلات الغدة الدرقية باستخدام الخطوة النهائية في الثقافة 3D matrigel 11. ومع ذلك، هذه الثقافات 3D تفتقر اتصال مع أنواع الخلايا الأخرى. بناء على الخبرة السابقة على البنكرياس والغدد اللعابية ثقافة الجهاز 12-14، طريقة لتشريح الفأر الجنينية ANLAGEN الغدة الدرقية وزراعة لل explants على مرشحات semiporous أو على شرائح البلاستيك المجهر وقد وضعت. عندماالعمل مع الأجنة E12.5، والأصل المزدوج للANLAGEN الغدة الدرقية (بدأة خط الوسط واثنين من الهيئات التالية للخيشومية الجانبي) فرضت تسليخ مجهري من جزء كبير من الأنسجة. يرد هذا القصبة الهوائية، ولكن ليس المريء، وامتدت من الشرايين البلعوم القوس حتى تورم الطرجهالي. عند تربيتها على مرشحات، وبدأة خط الوسط يمتد أفقيا على كل جانب من القصبة الهوائية، حيث تلتحم مع الهيئات التالية للخيشومية لتشكيل اثنين من فصوص الغدة الدرقية، لا تزال متصلة بواسطة برزخ ضيق. في الثقافة، وتتكاثر الخلايا الظهارية، وتنظيم في بصيلات والتمايز إلى خلايا thyrocytes وC، اعتمادا على أصلهم. الخلايا البطانية الواردة في الأنسجة microdissected أيضا تتكاثر وتغزو فصوص الغدة الدرقية لربط أخيرا بشكل وثيق مع هيكل مسامي الظهارية، بصرف النظر عن تدفق الدم أو عوامل المنتشرة. كما تطور لل explants يلخص بأمانة في الجسم الحي تطويرمنة، وهذا النظام هو الأمثل الثقافة لدراسة التخلق والتمايز الأحداث التي تحدث أثناء نمو الغدة الدرقية. ويمكن الحصول على أنسجة الغدة الدرقية من النوع البري، بالضربة القاضية أو الأجنة وراثيا الفلورسنت، ونظام الثقافة هي قابلة للخسارة والربح من وظيفة التجارب. أخيرا، يمكن استغلال الوقت الفاصل بين التصوير من إإكسبلنتس الغدة الدرقية fluorescently المسمى على أطباق البلاستيك المجهري للتحقيق أفضل حركية واستمرارية حركات التخلق التي تحدث في الجسم الحي. وقد تم بالفعل استخدام الوقت الفاصل بين التصوير لدراسة التشكل المتفرعة من البنكرياس 15،16 أو الحالبي برعم 17.

<table><tbody><tr><td>& micro ؛ - slide 8 well ، ibiTreat ، معالجة زراعة الأنسجة ، معقم</td><td>proxylab</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>الكولاجين من النوع الأول ، ذيل الفئران</td><td>Millipore</td><td>08-115</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectin من البلازما البشرية</td><td>Invitrogen</td> <td># 33010-018</td><td></td></tr><tr><td>M199</td><td>Invitrogen</td><td>31150-022</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Invitrogen</td><td>14025-100</td><td></td></tr><tr><td>سلك التنغستن</td><td></td> إدراج لوحة ثقافة LS237450 <td></td><td>Goodfellow</td></tr><tr><td>(قطر 12 مم)</td> <td>Millipore</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>GlycoBlue</td><td>Invitrogen</td><td>AM9516</td><td></td></tr><tr><td>E-cadherin</td><td>BD Biosciences</td><td>610182</td><td>1/1,000</td></tr><tr><td>Ezrin</td><td>Thermo Scientific</td><td>MS-661-P1</td><td>1/400</td></tr><tr><td>PECAM</td><td>BD Biosciences</td><td>550274</td><td>1/100</td></tr><tr><td>هوشتت</td><td>سيجما</td><td>B2261</td><td></td></tr></tbody></table>

و<em&gt; خارج الحي</em&gt; نظام الثقافة لدراسة التنمية الغدة الدرقية

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

الغدة الدرقية هي غدة الصماء bilobated المترجمة في قاعدة العنق، وتنتج هرمونات الغدة الدرقية T3، T4، والكالسيتونين. ويتم إنتاج T3 و T4 من قبل thyrocytes المتباينة، التي نظمت في مجالات مغلقة تسمى المسام، في حين يتم تصنيعه بواسطة C الكالسيتونين الخلايا، ويتخلل بين بصيلات وشبكة كثيفة من الشعيرات الدموية. على الرغم من أن العمارة الغدة الدرقية الكبار وظائف وقد وصفت على نطاق واسع، ودرس، وتشكيل وحدات &quot;الوعاء الجريبي&quot;، وتوزيع خلايا C-في لحمة والاتصالات نظير الصماوي بين الظهارية والخلايا البطانية بعيد كل البعد عن أن يكون مفهوما. يصف هذا الأسلوب في خطوات متتابعة من الماوس الغدة الدرقية الجنينية ANLAGEN تشريح وثقافتها على مرشحات semiporous أو على شرائح البلاستيك المجهري. في غضون أربعة أيام، وهذا النظام الثقافة يلخص بأمانة في التنمية الغدة الدرقية الجسم الحي. في الواقع، (ط) مليارobation من الجهاز يحدث (لإإكسبلنتس E12.5)، (ب) تنظيم thyrocytes السلائف في بصيلات واستقطاب، (ج) C وthyrocytes الخلايا التفريق، و (iv) الخلايا البطانية موجودة في الأنسجة تتكاثر microdissected، تهاجر إلى فصوص الغدة الدرقية، وبشكل وثيق مع ربط الخلايا الظهارية، كما يفعلون في الجسم الحي. ويمكن الحصول على أنسجة الغدة الدرقية من النوع البري، بالضربة القاضية أو الأجنة وراثيا الفلورسنت. علاوة على ذلك، إإكسبلنتس الثقافة يمكن التلاعب بها عن طريق إضافة مثبطات، ومنع الأجسام المضادة، عوامل النمو، أو حتى الخلايا أو المتوسطة مكيفة. يمكن تحليلها خارج الحي التنمية في الوقت الحقيقي، أو في أي وقت من الثقافة التي كتبها المناعية وRT-QPCR. في الختام، والثقافة ازدراع الغدة الدرقية جنبا إلى جنب مع المصب كامل جبل أو على توفر أقسام التصوير والتعبير الجيني التنميط نظام قوي لمعالجة ودراسة التخلق والتمايز أحداث س الغدة الدرقيةrganogenesis.

يتم تشريح anlages الغدة الدرقية (خط الوسط وUB، جنبا إلى جنب مع الأنسجة المحيطة بها)، وفصوص الغدة الدرقية من أجنة الفئران في E12.5 وe13.5/e14.5، على التوالي (الشكل 1). بعد يوم واحد في الثقافة على مرشح، وبدأة خط الوسط مرئيا (الشكل 2A) باعتبارها نسيج ممدود تمتد على الجزء العلوي من القصبة الهوائية. أنها تشكل تدريجيا فصين على كل جانب من القصبة الهوائية. إذا فصوص الغدة الدرقية معزولة (E13.5 أو E14.5) هي مثقف، وسوف تتوسع، وسوف يخضع التشكل وتنظيم الخلايا ...

يصف هذا البروتوكول تشريح أنلاجين الغدة الدرقية الجنينية للفأر وثقافة النباتات السطحية على مرشحات شبه مسامية أو على شرائح بلاستيكية مجهرية. هذا النظام مثالي لدراسة الأحداث المورفولوجية أو التمايز التي تحدث أثناء تطور الغدة الدرقية للأجنة البرية أو الأجنة بالضربة القاضية ، وهو قابل لتجارب اكتساب وفقدان الوظيفة.

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح زراعات خارجية (ex vivo) لغرسات أو فصوص الغدة الدرقية الجنينية للفأر، وذلك للسماح بدراسة أحداث التخلق المورفولوجي والتمايز التي تحدث أثناء تطور الغدة الدرقية. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق إزالة الفك العلوي والجزء السفلي من جسم أجنة الفئران في اليوم الجنيني E 12.5 إلى E 14.5 لعزل منطقة الرقبة من الأجنة.في الخطوة الثانية، يتم إزالة الأنبوب العصبي والأنسجة الجانبية واللسان للكشف عن الجزء العلوي من القصبة الهوائية والمريء. بعد ذلك، يتم تنظيف برعم الغدة الدرقية أو مناطقها أو فصوصها بشكل أكبر من أي أنسجة غير مرغوب فيها. وفي الخطوة النهائية، يتم وضع غرسات الغدة الدرقية في أطباق للاستزراع على بئر دقيق مطلي أو على مرشح.في نهاية المطاف، يمكن إجراء التصوير بفاصل زمني، أو التلوين المناعي، أو تحليل التعبير الجيني لدراسة التنظيم ثلاثي الأبعاد لتخلق الظهارة والجريبات، أو تكوين الأوعية الدموية في الغرسات، أو تمايز سلائف الغدة الدرقية. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على أسئلة جوهرية تتعلق بالتطور والتمايز بشأن تنظيم الخلايا الظهارية للغدة الدرقية في الأبعاد الثلاثية، وتكوين اللمعة، وتمايز الخلايا، والاستقطاب، والنمو.سيقوم بتقديم هذا الإجراء فيديل مارسيل، طالب دراسات عليا، ومايلا لاكورت، باحثة ما بعد الدكتوراه، وكلاهما من مختبري، وذلك تحت ظروف معقمة داخل غطاء التدفق الصفائحي. قبل ساعتين من عزل أنسجة الغدة الدرقية، قم بتخفيف كولاجين النوع الأول المعقم إلى تركيز نهائي قدره 50 microgram/mL في 10 millimolar من حمض الهيدروكلوريك، ثم ضع الكولاجين على الثلج.بعد ذلك، قم بتغطية كل بئر من آبار غرفة زراعة بلاستيكية بـ 200 µL من الكولاجين المخفف، واحضن الغرفة في درجة حرارة الغرفة. وبعد مرور ساعتين، قم بشفط الكولاجين. اشطف الآبار بوسط M1 99 وأضف حجماً أدنى قدره 200 µL من وسط الزراعة إلى كل بئر. ضع الغرف المطلية في الحاضنة، ثم ابدأ في عملية تشريح الغدة الدرقية.أولاً، ضع الرحم الذي تم تشريحه في طبق قطر 10 سنتيمتر يحتوي على HBSS. بعد ذلك، استخدم ملقطاً للإمساك بأحد طرفي الرحم، ثم افتح الرحم باستخدام مقص صغير لتحرير كل جنين من الأجنة على التوالي. استخدم المقص لفصل الأجنة عن المشيمة، ثم انقل الأجنة مع أغشيتها خارج الجنينية إلى طبق جديد قطر 10 سنتيمتر يحتوي على HBSS طازج.بعد ذلك، استمر في عملية التشريح لكل جنين تحت مجهر ستيريو. أولاً، قم بإزالة كيس المح والكيس السلوي. ثم استخدم إبر التنجستن الموجودة داخل أنابيب شعرية زجاجية كسكين وشوكة.أزل الجزء العلوي من الرأس، بما في ذلك الفك العلوي والأذنين. ثبّت الجنين على ظهره. ثم أزل قطعة إضافية من الأنبوب العصبي، وبعد ذلك أزل الجزء السفلي من الجنين أسفل الأطراف الأمامية مباشرة وفوق القلب.لتوجيه النسيج، انقل شريحة الجنين التي تحتوي على اللسان ومنطقة الرقبة إلى طبق جديد سعة 10 سنتيمتر يحتوي على محلول HBSS جديد، ثم قم بإزالة الأنبوب العصبي والأنسجة الموجودة خلف المريء والقصبة الهوائية. الآن، قم بتقطيع شريحة النسيج برفق على كلا جانبي اللسان. بعد ذلك، حدد موقع المريء والقصبة الهوائية، ثم استأصل اللسان، مع ترك تورم الريتينويد والنسيج على كلا جانبي المريء والقصبة الهوائية.بعد إزالة اللسان، قم بتشريح المريء بعيداً ووضع القصبة الهوائية بحيث يكون الجانب البطني للأعلى. ثم قم بتشريح الأنسجة غير المرغوب فيها مثل الغدة الزعترية وجميع الأنسجة الموجودة جانبياً بالنسبة لشرايين القوس البلعومي. بعد ذلك، بالنسبة للأجنة في المرحلة E 13.5 أو E 14.5، قم بتحديد فصوص الغدة الدرقية على كل جانب من القصبة الهوائية ثم قم بتشريح هذه الفصوص وفصلها عن القصبة الهوائية.بالنسبة للأجنة في المرحلة E 12.5، يمكن إجراء عملية التشريح كما تم توضيحه للتو حتى مرحلة استئصال اللسان والمريء. بعد ذلك، وعقب تحديد شرايين القوس البلعومية، يتم إزالة جميع الأنسجة الجانبية كما هو متبع مع الأجنة في المرحلة E 13.5 إلى 14.5. وأخيراً، وباستخدام طرف مرشح مبلل مسبقاً على ماصة دقيقة P 200، يتم نقل النسيج المعزول إلى طبق زراعة بقطر 35 millimeter يحتوي على وسط زراعي مسخن مسبقاً.قبل زراعة مستأصلات الغدة الدرقية من الأجنة في المرحلة E 13.5 إلى E 14.5. أولاً، اغسل الأنسجة عن طريق النقل المتتالي إلى ثلاث آبار في طبق مكون من 24 بئراً يحتوي كل منها على 1 mL من وسط استزراع مُدفأ مسبقاً لزراعة الفصوص في الحجرات المطلية مسبقاً. أولاً، اشفط وسط الاستزراع واستخدم ماصة دقيقة ذات رؤوس مرشحة لزراعة فص درقي واحد بعناية في كل حجرة من حجرات الاستزراع.قم بإزالة أي وسط زائد، ثم ضع غرفة الزرع في حاضنة زراعة الأنسجة للسماح للمستأصلات بالالتصاق بالمصفوفة. بعد ذلك، وبعد مرور ساعتين، أضف بلطف من 200 إلى 300 µL من وسط الزرع المسخن مسبقاً إلى كل بئر، وأعد الغرف إلى الحاضنة لزرع منطقة الرغامي أو فصوص الغدة الدرقية في المرحلة E 12.5 على مرشحات شبه مسامية. أولاً، املأ آبار طبق يحتوي على 24 بئراً بـ 130 µL من وسط الزرع المسخن مسبقاً.ضع مرشحات الوسط على الوسط الغذائي، مع الحرص على تجنب حبس فقاعات الهواء أسفل مرشح المزرعة. ثم استخدم ماصة دقيقة ذات رؤوس مرشحة لنقل قطعة الغدة الدرقية المستأصلة أو الفصوص بعناية، مع أقل حجم ممكن من الوسط، إلى مركز كل مرشح، وبحد أقصى أربع قطع مستأصلة لكل مرشح.عندما يتم صب المستخلص X على المرشح، من المهم نقل المكونات إلى مركز المرشح باستخدام كمية قليلة من الوسط لتجنب ملامسة الوسط لجدار المرشح وتكوين سطح مقعر. وأخيرًا، قم بإزالة أي وسط زائد واستخدم إبرة تنجستن لتوزيع المكونات. ثم ضعها في حاضنة زراعة الأنسجة لمدة تصل إلى سبعة أيام، مع تغيير وسط الزراعة كل يومين تحت غطاء التدفق الصفائحي.بعد يوم واحد من الزرع على مرشح، يظهر الخط الناصف في laa على شكل نسيج مستطيل يمتد على طول الجزء العلوي ويشكل فصين على كل جانب من القصبة الهوائية. ومع استمرار الزرع، تتوسع الفصوص وتخضع لعملية تشكل مورفولوجي يتم من خلالها تنظيم الخلايا الظهارية في بنى جريبية مرئية عيانياً. وكما هو موضح في هذه الصور، يمكن تصور تنظيم واستقطاب الخلايا الظهارية الموجبة والمتماسكة عن طريق الوسم المناعي لبروتين ezrin.مع مرور الوقت، اندمجت البنى داخل الخلوية الإيجابية لبروتين ezrin مع قطب الخلية الذي سيصبح القطب القمي. وخلال هذه العملية، تتكاثر الخلايا البطانية الإيجابية لـ pcam وتنتظم حول الجريبات النامية لتشكل وحدات وعائية جريبية. ولتقدير تمايز الخلايا الدرقية وخلايا C كمياً، يمكن فحص التعبير الجيني عن طريق R-T-Q-P-C-R لـ RNA المعزول من الفصوص الدرقية المستنبتة.بينما لا يتغير تعبير عامل النسخ الدرقي، NK X 2.1 أثناء الزراعة، فإن تعبير الثيروغلوبولين النوعي للغدة الدرقية والكالسيتونين النوعي للخلايا C يزداد بشكل كبير، مما يشير إلى تمايز وظيفي. بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن تكون لديك معرفة جيدة بكيفية تشريح وزراعة مستأصلات الغدة الدرقية. لست مستعداً بعد لإجراء تجارب اكتساب وفقدان الوظيفة باستخدام أجنة النوع البري أو NOCO.

an-ex-vivo-culture-system-to-study-thyroid-development

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يصف هذا الفيديو إجراء التلقيح التقويمي لخلايا سرطان الغدة الدرقية في الغدة الدرقية لنماذج الفئران ، والتي قد تكون بمثابة منصة قيمة لتقييم التسرطن واكتشاف استراتيجيات العلاج المحتملة.

التلقيح التقويمي لخلايا سرطان الغدة الدرقية في الغدة الدرقية الفئرانية: إجراء لإنشاء نموذج فأر سرطان الغدة الدرقية لتقويم العظام

يوصف جيل من نموذج الفأر مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي هنا. هذه التقنية توظف التنسيب الجراحية للكشمي خلايا سرطان الغدة الدرقية الإنسان في الغدة الدرقية من الفئران العوز المناعي، وبالتالي خلق بيئة أكثر سريريا ذات الصلة لدراسة تطور المرض وكذلك شاشة التدخلات العلاجية المبتكرة.

ماوس نموذج مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي

تسمح تقنية التصوير المحسنة بالتصوير ثلاثي الأبعاد للأعضاء أثناء النمو. نصف هنا نظام زراعة الأعضاء الكامل الذي يسمح بالتصوير الحي للزغابات النامية في أمعاء فأر الجنين.

نظام الثقافة الماوس الجنين الأمعاء الجامعة ل فيفو السابقين التلاعب في مسارات إشارات وتصوير لايف ثلاثي الأبعاد التنمية الزغبة

تعد ثقافة القطرات المستقيمة خارج الجسم الحي بديلا للتقنيات التجريبية الحالية في المختبر وفي الجسم الحي. هذا البروتوكول سهل التنفيذ ويتطلب كميات أقل من الكاشف ، مع السماح بالقدرة على التلاعب بالأوعية الدموية الجنينية ودراستها ، وتشكل التشكل ، وتكوين الأعضاء.

باستخدام<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الثقافات تستقيم القطرة من الجامعة الجنين هيئات لدراسة العمليات التنموية خلال الماوس توالد

توفر هذه المقالة نهج تحديث للنظام الكلاسيكي الدجاج السمان الوهم لدراسة تكوين الجهاز، ومن خلال الجمع بين رواية الإجراءات التجريبية في المختبر و في ovo .

نهج خطوتين لاستكشاف ومتأخرة-المراحل الأولى من تشكيل الهيئة في نموذج إنفلونزا الطيور: الغدة الصعترية ونموذج Organogenesis الغدد الجار درقية

يصف هذا البروتوكول نماذج الماوس الترصيع وتقويم العظام من تكوين أورام الغدة الدرقية البشرية كمنصة لاختبار العلاجات المثبطة المستندة إلى microRNA. هذا النهج مثالي لدراسة وظيفة RNAs غير الترميز وإمكاناتها كأهداف علاجية جديدة.

في تثبيط فيفو من MicroRNA لتقليل نمو الورم في الفئران

هنا ، نقدم خط أنابيب قياسي للحصول على أورام ATC الفئران بواسطة نماذج الفئران العفوية المعدلة وراثيا. علاوة على ذلك ، نقدم ديناميات الورم والمعلومات المرضية حول الآفات الأولية والمنتشرة. سيساعد هذا النموذج الباحثين على فهم تكوين الأورام وتسهيل اكتشاف الأدوية.

نموذج الفئران العفوية لسرطان الغدة الدرقية الكشمي

يصف البروتوكول الحالي التصوير بالموجات فوق الصوتية عالي التردد لتصور الغدة الدرقية للفأر بالكامل ومراقبة نمو سرطان الغدة الدرقية الكشمي.

التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية الدقة لتحليل أورام ATC التقويمية في نموذج فأر مهندس وراثيا

تم تطوير نموذج الماوس مؤشر عمل هرمون الغدة الدرقية لتمكين القياس الكمي الخاص بالأنسجة لعمل هرمون الغدة الدرقية المحلي باستخدام آليته التنظيمية الداخلية. في الآونة الأخيرة ، ثبت أن النموذج مناسب لتوصيف المواد الكيميائية المسببة لاضطرابات الغدد الصماء التي تتفاعل مع اقتصاد هرمون الغدة الدرقية ، سواء من خلال منهجيات خارج الجسم الحي أو في الجسم الحي .

في الجسم الحي توصيف الآثار الكيميائية لتعطيل الغدد الصماء عن طريق هرمون الغدة الدرقية مؤشر عمل الماوس

هذا الفيديو يوضح ثقافة جديدة ، وهي الطريقة التي يتم تربيتها افراخ الدجاج خارج البويضة لمدة تصل إلى 24 ساعة. هذه الطريقة تمكن واحد لدراسة التطور المبكر (مسحة البدائية إلى 14 سوم) ، وهي الفترة المقابلة ل9 - E7 في الماوس. تطبيقات هذه التقنية تشمل electroporation ، التهجين في الموضع والمناعية.

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

تعلم زراعة الغدة الدرقية الجنينية للفئران خارج الجسم لدراسة أحداث التشكل والتمايز. يتيح هذا البروتوكول إجراء تجارب الكسب والخسارة الوظيفية لفهم تطور الغدة الدرقية.

و

استكشف المزيد من الفيديوهات