والفحص السلوكية بسيطة لاختبار وظيفة البصرية في القيطم المورق

الهدف العام من هذا الإجراء هو اختبار الوظيفة البصرية للضفادع الصغيرة عن طريق تسجيل مقدار الوقت الذي يقضيه في نصف خزان الاختبار المغطى باللون الأسود. يتم تحقيق ذلك عن طريق رفع الضفادع الصغيرة أولا إلى المراحل من 45 إلى 50. الخطوة الثانية هي إعداد خزان نصف أسود ونصف أبيض مع كاميرا لمقايسة السلوك.

بعد ذلك ، ضع خزانا ثانيا مع شرغوف في الخزان الخارجي. لكل سجل شرغوف ، يتم تغيير السلوك الموجه للرؤية كخلفية في بيئته. الخطوة الأخيرة هي إجراء اللواط السابق في الشبكية على الضفادع الصغيرة ثم تكرار فحص السلوك.

في النهاية ، يتم استخدام البيانات من هذا الاختبار البسيط وغير المكلف لإظهار أن الضفادع الصغيرة تفضل السباحة على جانب واحد من الخزان على الجانب الآخر ، تحت اختبارات الرؤية الضوئية. الميزة الرئيسية لاستخدام هذه الطريقة على التقنيات الأخرى مثل الاستجابة الحركية البصرية أو مقايسة قلب الذيل ، هي أنها طريقة غير مكلفة وبسيطة تستخدم المعدات المتوفرة بسهولة في معظم مختبرات opus. لتحضير الضفادع الصغيرة ، أولا ، احصل على أجنة xenopus المخصبة ، أو ضع علامات ، أو رنين معدلة ، أو MMR مخففة بمعامل 10 في أطباق بتري 60 ملم مع 50 ميكروغرام لكل مليلتر.

المضاد الحيوي جنتاميسين يضع الأريمة في أجنة مرحلة الصفيحة العصبية. المراحل من الثانية إلى 15 عند 18 درجة مئوية في أطباق بتري. بمجرد أن تصل الأجنة إلى كوب جديد في مرحلة تفضيلية من حوالي 27 إلى 30 ، قم بتبديلها إلى 0.1 XMMR بدون مضادات حيوية للسماح بنمو بكتيريا الأمعاء.

عندما تصل الضفادع الصغيرة إلى مرحلة التغذية حول المرحلة 45 ، انقلها إلى أطباق بتري 100 ملم مع 0.1 XMMR. في اليوم التالي ، قم بإطعامهم مسحوق نبات القراص الطافي. بعد أسبوع واحد في طبق بتري 100 ملم ، املأ خزانا نصف جالون بماء الضفدع.

انقل إلى الخزان واستمر في جدول تغذية مسحوق نبات القراص الطافي ، لكن قم بتغيير الماء مرتين إلى ثلاث مرات فقط في الأسبوع. عندما تكون في خزانات نصف جالون ، احتفظ بها في ضوء 12 ساعة ، 12 ساعة من دورة الظلام مع إضاءة الأضواء في الساعة 6:00 صباحا قبل الاختبار ، ضع خزان نصف جالون مع الأشخاص الخاضعين للاختبار على سطح أبيض طوال الليل لمدة 12 ساعة على الأقل قبل الاختبار. يجب إجراء فحص السلوك في منطقة هادئة ومنخفضة حركة المرور مع إضاءة الفلورسنت القياسية.

قم بإعداد خزانين لاختبار نصف جالون متداخلين في الزوايا الخارجية لما سيكون الخزان الداخلي. استخدم Sharpie لتمييز خط الماء على ارتفاع خمسة سنتيمترات فوق القاع. أيضا بالنسبة للخزان الداخلي ، حدد أي فتحات في داخله.

املأها بمركب خامل لمنع الضفادع الصغيرة من البقاء فيها. الآن وجه الانتباه إلى الخزان الخارجي الثاني. للخطوة التالية ، احصل على شريط كهربائي أسود ومناديل ورقية بيضاء.

استخدم الشريط لتغطية الجزء الخارجي من نصف الخزان والمناديل الورقية لتغطية الجزء الخارجي من الخزان كما هو موضح هنا. بمجرد تحضير الخزانات ، قم بإعداد قرص دوار للتلقيح وضع الخزانات المتداخلة عليه. ضع حامل ثلاثي القوائم وكاميرا ويب حتى تتمكن الكاميرا من تصوير الجزء الداخلي من الخزانات من الأعلى.

قم بتوصيل كاميرا الويب بجهاز كمبيوتر باستخدام برنامج التقاط الفيديو وتشغيله. قم بتشغيل الكاميرا واستعد لتسجيل فيلم جديد. بعد ذلك ، قم بلف قطعة قماش قطنية خفيفة الوزن فوق الكاميرا والخزانات.

لتقليل الإشارات الخارجية للضفادع الصغيرة ، استخدم مقياس النصوع وتأكد من أن النصوع تحت القماش يتراوح بين 35 إلى 50 شمعة لكل متر مربع. ابدأ مقايسة السلوك عن طريق استرداد خزان الاختبار الداخلي. املأها بماء الضفدع حتى علامة الخمسة سنتيمترات.

استخدم شبكة لنقل من حاوية نصف جالون إلى خزان الاختبار الداخلي في الكمبيوتر. تأكد من أن برنامج التسجيل مفتوح وتسجيل منطقة الاختبار لحفظ السجلات. اكتب اسم والتاريخ والوقت على قطعة من الورق.

ضع هذا أسفل الكاميرا للتسجيل. بعد الانتهاء من ذلك ، اضبط مؤقتا مسبقا لمدة دقيقتين. بعد ذلك ، قم بتوجيه الخزان الخارجي على القرص الدوار ، بحيث يكون الجانب الأسود على اليمين.

الآن ضع خزان الاختبار في الخزان الخارجي. في منطقة التسجيل ، أغلق الستارة واستخدم شاشة الكمبيوتر لضمان اتجاه الخزان الخارجي. تأكد من تسجيل الفيديو وابدأ المؤقت.

عندما يصدر المؤقت صفيرا ، احتفظ بالستارة في موضعها وقم بإزالة خزان الاختبار الداخلي. بعد ذلك ، قم بتدوير الخزان الخارجي 180 درجة بحيث يكون الجانب الأسود الآن على اليسار. أعد خزان الاختبار إلى الخزان الخارجي وابدأ المؤقت لمدة دقيقتين.

مرة أخرى ، قم بإزالة الخزان الداخلي. قم بتدوير الخزان الخارجي بمقدار 180 درجة ، واستبدل الخزان الداخلي كل دقيقتين ليصبح المجموع 10 مرات. عند الانتهاء ، أوقف تسجيل الفيديو.

أعد الشرغوف إلى خزان نصف جالون. قم بإعداد مجهر لأداء الريتينول ex sodom. املأ طبق بتري مقاس 60 ملم ب 1٪ أروس مذاب في 0.1 XMMR واتركه يتصلب.

قم بإزالة قطعة صغيرة مستطيلة الشكل من الأروس بحجم الشرغوف. عندما تكون جاهزا للمتابعة ، استرجع الاختبار وضعه في 0.02٪ تريكا. استمر عندما لا يستجيب لقرصة الذيل بالملقط رقم ثلاثة.

ثم انقل إلى الطبق. تابع عن طريق تركيب طبق بتري على المجهر. استعد لتدعيم بالملقط على جانب واحد.

على الجانب الآخر ، استخدم إبرة قياس 25 لثقب الجلد خلف المنطقة الظهرية للعين بزاوية 45 درجة ، والوصول بعناية إلى الفتحة بالرقم خمسة ، والملقط وقص العصب البصري مع تجنب الوريد المجاور له. اقلب العصب بعيدا عن الطريق واسحب الملقط بعد الجراحة. استرجع عن طريق وضعه في طبق بتري 100 ملم مع 0.7 XMMR و 50 ميكروغرام لكل ملليلتر.

جنتاميسين لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك ، انقل الشرغوف إلى خزان استرداد بماء الضفدع. ضع الخزان على سطح أبيض استعدادا للاختبار.

دع يرتاح طوال الليل. في صباح اليوم التالي ، استخدم المقايسة السلوكية لاختبار الوظيفة البصرية. يعرض هذا الفيلم بيانات تمثيلية للتجربة.

على اليسار توجد قبل الجراحة على اليمين هي نفس بعد قطع محاور الشبكية من كلتا العينين. يشار إلى ذلك من خلال التخطيطي في الزوايا السفلية. تم إزعاج الماء لإظهار أنه لم تتم إضافة أي شيء لصد من الجانب الأسود أو جذبها إلى الجانب الأبيض.

تستجيب الضفادع الصغيرة قبل الجراحة للون الخلفية في أقل من 30 ثانية بينما تسبح الضفادع الصغيرة العمياء بلا هدف حول الخزان. يوضح هذا الرسم البياني النسبة المئوية للوقت الذي يقضيه واحد في المناطق البيضاء والسوداء في ظل ثلاثة ظروف. أولا ، لوحظ قبل أي عملية جراحية باستخدام الفحص.

في يومين متتاليين بعد قطع العصب البصري الأيمن ، لوحظ سلوكه على مدار يومين من الاختبار. أخيرا ، بعد قطع كلا الأعصاب البصرية ، كان هناك يومان آخران من المراقبة باستخدام الفحص. أمضى أياما أكثر على الجانب الأبيض من الخزان عندما كان هناك عصب بصري واحد على الأقل سليما.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية اختبار رؤية الضفادع الصغيرة باستخدام الكواشف والمعدات البسيطة الموجودة في معظم مختبرات الضفادع. حظا سعيدا في تجاربك.