Name: في فيفو التصوير من داور محددة العصبية في إعادة عرض C. ايليجانس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: اكتشف تصوير إعادة تشكيل العصبونات الحسية في مرحلة دور في C. elegans باستخدام الفيرومون الخام والتصوير الحي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة اللدونة العصبية استجابة للإجهاد البيئي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

أشكر الدكتورة مورين بار ، التي تم تمييز النمط الظاهري لإعادة تشكيل dauer IL2 تحت إشرافها في البداية. شكرا للدكتور سي بريت كارلسون على القراءة النقدية للمخطوطة. كان التمويل في مختبر بار من المعاهد الوطنية للصحة (5R01DK59418) وزمالات ما بعد الدكتوراه من وزارة الزراعة الأمريكية (2010-65106-20587) ولجنة نيوجيرسي لأبحاث الحبل الشوكي (CSCR12FEL004). التمويل الحالي لهذا العمل من منحة كلية جامعة إلينوي أوربانا شامبين في ACES FIRE.

1. الخام داور إنتاج فرمون <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو OP50 E. القولونية من مستعمرة يا واحد / N عند 37 درجة مئوية في حين تهتز في 100 مل من مرق LB عند 200 دورة في الدقيقة. ملاحظة: يمكن إجراء هذا O / N ثقافة مسبقا وتخزينها في 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو N2 C. ايليجانس في يونيو 15-20 سم أطباق بتري مع NGM أجار (انظر الوصفة في الجدول 1) المصنف مع 50 ميكرولتر من OP50 E. حتى البكتيريا القولونية يتم استنفاد ما يقرب من 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل 5X 250 مل من وسائل الإعلام S (انظر الوصفة في الجدول 1) في 1 L قوارير مخروطي 19. ملاحظة: يمكن إجراء هذا الحل مقدما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنمو ثقافة OP50 E. القولونية في 4 لتر ​​من مرق LB O / N، فحقن مع 1 مل من OP50 في E. القولونية وتهتز عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الديدان الخيطية من لوحات (الخطوة 1.2) مع 1 مل من محلول S القاعدية (انظر الوصفة في الجدول 1) والديدان الخيطية نقل 4-5 لوحات في كل من 4 1 L قوارير مخروطي مع وسائل الإعلام S أعدت في الخطوة 1.3 (4- 5 لوحاتلكل قارورة) 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي OP50 من الخطوة 1.4 في 650 x ج لمدة 10 دقيقة وإزالة طاف. و resuspend كل بيليه الجرثومي في 10 مل من محلول S القاعدية. نقل كميات متساوية من البكتيريا معلق على كل قارورة من الديدان الخيطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع قوارير على شاكر المداري في درجة حرارة الغرفة (20 - 25 ° C) و100-150 دورة في الدقيقة لمدة 4 - 5 ايام حتى يبدأ الحل لمسح، مما يشير إلى استنزاف المواد الغذائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم استنفاد المواد الغذائية، وتنمو ثقافة O / N آخر من OP50 E. القولونية في 4X 1 لتر من مرق LB. أجهزة الطرد المركزي البكتيريا في 650 x ج لمدة 10 دقيقة وإضافة بيليه من قارورة واحدة إلى كل من قوارير S سائل الاعلام مع الديدان الخيطية. العودة القوارير S سائل الإعلام إلى شاكر المداري، كما في الخطوة 1.7، ل3-4 أيام إضافية حتى يتم استنفاد الطعام مرة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نلقي ~ 1 مل قسامة من حل من كل قارورة وتقدير تركيز النيماتودا التي كتبها الفرعية أخذ العينات 1 ميكرولتر من كل 1 مل قسامة وتعول عدد من الديدان الخيطية. ملاحظة:يجب أن يكون السكان الخيطية 50،000 - 75،000 الديدان الخيطية / مل. في هذه تركيز غالبية الديدان الخيطية هي dauers. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجاهل أي قوارير الملوثة. ملاحظة: يظهر التلوث في كثير من الأحيان كما خيوط فطرية ينظر خلال خطوة 1.9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الديدان الخيطية الطرد المركزي في 4000 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية. تجاهل بيليه الخيطية والاحتفاظ طاف. بدلا من ذلك، انظر مناقشة لاستخدام هذه الحيوانات لجعل فرمون منخفضة رجولية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصفية طاف من خلال رقم 1 هتما التصفية. ملاحظة: سوف قارورة فراغ تعجيل هذه العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وعلاوة على ذلك تصفية طاف من خلال 0.45 ميكرون وحدات الترشيح الفراغ العقيم. ملاحظة: رشح يمكن أن تظل O / N عند 4 درجات مئوية أو المضي إلى 1.14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الراشح إلى دورق 2 لتر مع بقضيب. وضع في غطاء الدخان على لوحة التدفئة ضجة. تقديمهم ليغلي مع التحريك وتتبخر إلى حوالي 200 مل. نقل الحل إلى كوب 500 مل. تواصل المغلي حتى ما يقرب من 50 مل هي جنيهقدم ملاحظة: يجب توخي الحذر خلال هذه الخطوة لأنه من الممكن حل الغليان. لون النهائية 50 مل هو البني الداكن. في أي وقت أثناء عملية الطبخ، ويمكن أن تحول الحرارة قبالة والراشح تخزين O / N في RT أو 4 درجات مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح لتبرد وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 1،000 ز س. صب طاف في 100 مل كوب وتجاهل بيليه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغلي طاف وصولا الى القشرة البني. إزالة من الحرارة وتفريق القشرة مع ملعقة. إضافة الإيثانول 200 دليلا كافيا لتغطية القشرة. تغطية الكأس مع parafilm والسماح لها الجلوس O / N في RT. تخلصي من الايثانول في كوب نظيف ووضع إلى الجانب. إضافة الإيثانول النقي لتغطية القشرة. تكرار الاستخراج O / N 3 مرات. تجميع مقتطفات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مضخة فراغ لتجفيف مستخلصات الايثانول. إذا مضخة فراغ غير متوفرة، إضافة إلى استخراج الإيثانول دورق نظيفة ودافئة إلى 50 درجة مئوية مع التحريك في غطاء الدخان. ملاحظة: عندما تبخرت الايثانول بقايا لزجة من لترينبغي أن تظل آيت اللون البني. إذا تم استخدام التدفئة، وينبغي الحرص على عدم حرق حل عن طريق التسخين لفترة طويلة جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل بقايا في 10 مل من الماء المعقم المقطر. فلتر تعقيم هذا الحل مع فلتر حقنة 0.22 ميكرون وتخزينها في -20 درجة مئوية في 1 مل مأخوذة. ملاحظة: 1 مل من الماء يستخدم لإذابة بقايا لكل 100 مل من ثقافة الخيطية السائلة الأصلية. على سبيل المثال، إذا تم تجاهل واحد من قوارير ثقافة السائلة بسبب التلوث، ثم ضبط كمية المياه المستخدمة لإذابة بقايا. </li></ol> 2. تحديد الجرعة فرمون الاستجابة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد داور فرمون بجعل 6X 5 مل من NGM مع وسائل الإعلام نوبل أجار، دون ببتون، وتستكمل مع 50 ميكروغرام / مل كبريتات الستربتومايسين ومجموعة من داور فرمون (انظر الوصفة في الجدول رقم 1) 4، 19. اخلطي المكونات في 13x100 ملم الزجاج أنبوب الثقافة، وتغلي على موقد بنسن، ثم تصب في أطباق بتري 3 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تزن صباحاأنبوب icrocentrifuge. إضافة 1 مل من O / N ثقافة E. القولونية OP50 إلى أنبوب وأجهزة الطرد المركزي في ~ 17،000 x ج في أنبوب microcentrifuge. إزالة كافة طاف. وزن الأنبوب مرة أخرى وتحديد وزن بيليه البكتيرية. resuspend الكرية مع M9 عازلة (انظر الوصفة في الجدول 1) لتركيز النهائي من 4٪ (ث / ت). قسامة 10 ميكرولتر من تعليق البكتيرية على مركز كل لوحة فرمون 4. مخزن لوحات O / N في RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختيار 10-15 حبلي N2 من النوع البري المنحرفين بعد يوم واحد تساقط في مرحلة البلوغ على لوحات فرمون 4. تخزين لوحات عند 25 درجة مئوية لمدة 3-4 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سلخ كل من المنحرفين الكبار. تسجيل عدد البيض الذي تضعه على كل لوحة. ختم لوحات مع parafilm والعودة إلى 25 درجة مئوية لمدة 3 أيام 17. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد نسبة dauers (الشكل 2). ملاحظة: بالنسبة لكلتا الطريقتين من المهم أن نلاحظ أن dauers (وإلى أقل السابقوخيمة غير dauers) يتسلق الجدران وعلى غطاء من أطباق بتري. ولذلك فمن المهم أن تدرس جميع الأسطح الطبق لالديدان الخيطية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تناسب البيانات إلى منحنى الاستجابة للجرعة وتقدير تركيز EC 90 من فرمون (فرمون كافية لإحداث 90٪ من الحيوانات لتشكيل dauers) كما هو مبين في الشكل (3) ملاحظة: نحن عادة استخدام نموذج الانحدار اللوجستي لتقدير EC 90 ، ولكن حزم البرامج الإحصائية المختلفة قد يكون لها طرق البديلة التي تنتج تقديرات مماثلة. </li></ol> 3. تصوير لايف من داور IL2 الخلايا العصبية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد لوحات داور فرمون كما في بروتوكول 2 باستخدام القيمة EC 90 تحديدها في الخطوة 2.6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حمل dauers باستخدام الأساليب في بروتوكول 2 مع سلالة تحمل متكامل IL2 مراسل التحوير (myIs13 [P-6 ​​KLP :: GFP]، myIs14 [P-6 ​​KLP :: GFP]، myIs16 [P <eم&gt; KLP-6 :: tdTomato] أو qIs56 [P-2 :: تأخر GFP]) 12، 20، 21 ملاحظة: إذا تم استخدام ف Is56، والتعبير عن GFP لا تكون مرئية في IL2Qs حتى عدة ساعات في تساقط داور وبعض الأحداث إعادة الأولية لا تكون مرئية. بالإضافة إلى ذلك، في حين أن إشارة الفلورسنت من تأخر P-2 :: GFP التحوير هي أكثر إشراقا في نهاية المطاف في IL2s خلال داور من KLP P-6 صحفيين الفلورسنت، وP :: يعبر عن التأخر-2 التحوير GFP أيضا ضعيفة في عضلات الرأس التي يمكن أن تحجب فروع IL2 غرامة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد وضع البيض، وإزالة المنحرفين الكبار، وختم لوحات مع parafilm واحتضان لمدة 34 ساعة عند 25 ° C 17. ملاحظة: طول الوقت لتساقط داور يختلف قليلا بين الأفراد. في معظم فترة سريعة من التغصنات تشجر تبدأ 4-5 ساعة بعد بداية تساقط داور (39-44آخر ساعة عند 25 درجة مئوية) 12 وضع البيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل يوم من التصوير، وتشكل حلا من 10٪ (ث / ت) الاغاروز في المخزن M9 مع داور فرمون في تركيز EC 90. قسامة حوالي 100 ميكرولتر من الاغاروز على شريحة المجهر وبسرعة، ولكن بلطف، ووضع شريحة أخرى على رأس لخلق سطح مسطح الاغاروز. بعد أن عززت agarose، والتفاف الشرائح في التفاف ساران وتخزينها في غرفة الرطوبة (ماصة مربع تلميح مع مناشف ورقية مبللة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد فترة الحضانة 34 ساعة، وفحص لوحات فرمون عن الديدان الخيطية التي توقفت عن ضخ البلعوم. شرائح منفصلة بحيث سطح واحد فقط من شريحة واحدة لديه الاغاروز على ذلك. اختيار واحد أو أكثر من الديدان الخيطية على لوحة agarose 10٪ و 1 μ لتر من 0.1 ميكرون الخرز البوليسترين 22. ملاحظة: ويبلغ عدد سكانها متزامنة جيدا، وغالبية الديدان الخيطية على لوحة سوف تدخل في تساقط من L2d إلى داور. ومع ذلك، قد يكون هناك تباين بين طndividuals. ولذا فمن المهم أن نلاحظ الميزات الإضافية (انسداد أسنان، البلعوم إعادة عرض) لتقدير مقدار الوقت كانت الحيوانات داخل تساقط داور (انظر نتائج ممثلة على سبيل المثال). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد اتجاه (يسار / يمين، الظهرية / بطني) من الديدان الخيطية. التقاط الصور Z-كومة من التغصنات IL2Q في التكبير 100X بأقل كثافة مضان ممكن كل 15 دقيقة أو حسب الحاجة للتجربة محددة. مواصلة التقاط الصور حتى فصل الخيطية من إهاب L2d والشلل مستحيل أو إذا يتعافى الحيوان من داور (البلعوم يبدأ ضخ). عندما لا التصوير بنشاط، ضع الشريحة في غرفة الرطوبة. ملاحظة: نحن نستخدم مجهر المجهر epifluorescent مع الآلية تدخل مرحلة والتفضيلية النقيض (DIC) البصريات. </li></ol>

<ol><li>West-Eberhard, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWest-Eberhard%2C+MJ+%22Developmental+Plasticity+and+Evolution%22">Developmental Plasticity and Evolution</a>. , Oxford University Press. (2003).</li>
<li>Cassada, R. C., Russell, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dauerlarva%2C+a+post-embryonic+developmental+variant+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The dauerlarva, a post-embryonic developmental variant of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 46, 326-342 (1975).</li>
<li>Riddle, D. L., Albert, P. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiddle%2C+DL+%22C.+elegans+II%22">C. elegans II</a>. Riddle , D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, NY. 739-768 (1998).</li>
<li>Golden, J. W., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+dauer+larva%3A+developmental+effects+of+pheromone%2C+food%2C+and+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans dauer larva: developmental effects of pheromone, food, and temperature.</a> Dev. Biol. 102, 368-378 (1984).</li>
<li>Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiddle%2C+DL+%22The+Nematode+C.+elegans%22">The Nematode C. elegans</a>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, NY. 393-412 (1988).</li>
<li>Fielenbach, N., Antebi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+dauer+formation+and+the+molecular+basis+of+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">C. elegans dauer formation and the molecular basis of plasticity.</a> Genes Dev. 22, 2149-2165 (2008).</li>
<li>Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHu%2C+PJ+%22WormBook%22">WormBook</a>. , 1-19 (2007).</li>
<li>Golden, J. W., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pheromone+influences+larval+development+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A pheromone influences larval development in the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Science. 218, 578-580 (1982).</li>
<li>Butcher, R. A., Fujita, M., Schroeder, F. C., Clardy, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+pheromones+that+control+dauer+development+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Small-molecule pheromones that control dauer development in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Chemical Biology. 3, 420-422 (2007).</li>
<li>Jeong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+structure+and+biological+activity+of+the+Caenorhabditis+elegans+dauer-inducing+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemical structure and biological activity of the Caenorhabditis elegans dauer-inducing pheromone.</a> Nature. 433, 541-545 (2005).</li>
<li>Srinivasan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blend+of+small+molecules+regulates+both+mating+and+development+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A blend of small molecules regulates both mating and development in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 454, 1115-1118 (2008).</li>
<li>Schroeder, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dauer-Specific+dendrite+arborization+in+C.+regulated+by+KPC-1%2FFurin%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Dauer-Specific dendrite arborization in C. regulated by KPC-1/Furin.</a> Curr. Biol. 16, 1527-1535 (2013).</li>
<li>Procko, C., Lu, Y., Shaham, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia+delimit+shape+changes+of+sensory+neuron+receptive+endings+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Glia delimit shape changes of sensory neuron receptive endings in C. elegans.</a> Development. 138, 1371-1381 (2011).</li>
<li>Albert, P. S., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+alterations+in+sensory+neuroanatomy+of+the+Caenorhabditis+elegans+dauer+larva%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Developmental alterations in sensory neuroanatomy of the Caenorhabditis elegans dauer larva.</a> J. Comp. Neurol. 219, 461-481 (1983).</li>
<li>Vowels, J. J., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+chemosensory+control+of+dauer+formation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of chemosensory control of dauer formation in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 130, 105-123 (1992).</li>
<li>Vowels, J. J., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+chemosensory+defects+in+daf-11+and+daf-21+mutants+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Multiple chemosensory defects in daf-11 and daf-21 mutants of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 138, 303-316 (1994).</li>
<li>Ailion, M., Thomas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dauer+formation+induced+by+high+temperatures+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Dauer formation induced by high temperatures in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 156, 1047-1067 (2000).</li>
<li>Neal, S. J., Kim, K., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNeal%2C+SJ+%22Pheromone+Signaling%22">Pheromone Signaling</a>. , Springer. 273-283 (2013).</li>
<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Ouellet, J., Li, S., Roy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signalling+is+required+for+both+dauer+maintenance+and+recovery+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Notch signalling is required for both dauer maintenance and recovery in C. elegans.</a> Development. 135, 2583-2592 (2008).</li>
<li>Blelloch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gon-1+gene+is+required+for+gonadal+morphogenesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The gon-1 gene is required for gonadal morphogenesis in Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 216, 382-393 (1999).</li>
<li>Fang-Yen, C., Gabel, C. V., Samuel, A. D., Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+microsurgery+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser microsurgery in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 107, (2012).</li>
<li>Nelson, F. K., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+study+of+the+Caenorhabditis+elegans+secretory-excretory+system+using+laser+microsurgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool%22%5BJournal%5D)">Functional study of the Caenorhabditis elegans secretory-excretory system using laser microsurgery.</a> J. Exp. Zool. 231, 45-56 (1984).</li>
<li>Sulston, J. E., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-embryonic+cell+lineages+of+the+nematode%2C+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Post-embryonic cell lineages of the nematode, Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 56, 110-156 (1977).</li>
<li>Singh, R., Sulston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+observations+on+moulting+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nematologica%22%5BJournal%5D)">Some observations on moulting in Caenorhabditis elegans.</a> Nematologica. 24, 63-71 (1978).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه

دراسة المرونة العصبية داور محددة وغيرها من التغيرات المورفولوجية المرتبطة داور يتطلب التحكم وتشكيل موثوق بها من dauers إما عن طريق طفرة جينية (أي داف المسوخ ج) أو عن طريق التعرض البرية من نوع الحيوانات لفرمون. في حين أن استخدام طفرة جينية للحث dauers مريحة، قد اربكت النتائج. لذلك البيانات التي تم جمعها مع داف ج الطفرات ينبغي تأكيد في وقت لاحق مع الحيوانات البرية من نوع يسببها لدخول مرحلة داور عن التعرض لداور فرمون. <p class="jove_content" style=";tex...

اللدونة المظهري، بما في ذلك اللدونة التنموية والسلوكية، مهم لعمليات التكيف مع الظروف البيئية المعاكسة وتعتبر قوة دافعة في التطور 1. C. ايليجانس هو كائن نموذج كثيرا ما تستخدم للدراسات في التنمية وبيولوجيا الأعصاب. في ظل ظروف مثالية، C. ايليجانس يتطور من خلال أربع مراحل اليرقات قبل دخول المرحلة الإنجابية الكبار. ومع ذلك، في ظل ظروف انخفاض توافر الغذاء والكثافة السكانية العالية، C. ايليجانس يمكن أن يخضع لعملية التحول التنموي والدخول في معمرة ومقاومة للإجهاد مرحلة داور 2. عرض Dauers العديد من الاختلافات الشكلية والسلوكية من غير dauers، والتي من المرجح توسط هذه المقاومة الإجهاد. كانت العظة البيئية والوراثية التي تنظم مسارات دخول داور وصف على نطاق واسع 3، 4، 5، 6، 7، إلا أن الآليات الجزيئية التي تتحكم في التغيرات المظهرية الفردية التي تحدث دأقل مفهومة جيدا تشكيل داور خلال شهر. دراسة الظواهر داور محددة يتطلب إنتاج الحيوانات داور. ويمكن تحقيق ذلك من خلال ثلاث طرق: 1) اختيار من ثقافة محرومة من C. ايليجانس، 2) استخدام داور تشكيل التأسيسية (داف ج) المسوخ، 3) تحريض تشكيل داور من خلال فرمون تنقيته. أنها بسيطة نسبيا لاختيار dauers من لوحة NGM القياسية مع C. السكان ايليجانس أن استنفد البكتيرية الإمدادات الغذائية لها. في أيدينا، وهي لوحة NGM القياسية المصنفة أصلا مع 50 ميكرولتر من OP50 القولونية، سمح لتنمو لمدة 3 أيام، وبعد ذلك تلقيح مع 3 - 4 المنحرفين الكبار أبقى عند 25 درجة مئوية واستنفاد الإمدادات الغذائية في غضون أسبوع وإنتاج عدة آلاف dauers في غضون 3 أيام إضافية (بالإضافة إلى العديد من تجويع غير dauers). ومع ذلك، وهذه الطريقة غير مرضية لعمليات فحص تحدث أثناء تساقط في دأوير. فإنه من الصعب تحديد أي من عدة آلاف من الحيوانات على لوحة تجويع نموذجية ندخل داور. وعلاوة على ذلك استخدام لوحة تجويع، لا يقدم أي إمكانية للتزامن. استخدام داف ج المسوخ يسمح لمزامنة والجيل موثوق بها من dauers. ومع ذلك، ليس هناك ما يضمن أن سوف معينة داف ج طفرة لا تؤثر الظواهر الأخرى داور الخاصة وحدها أو بالاشتراك مع الطفرات إضافية. وقد ضمنا وجود فرمون داور أول من Cassada وراسل وأظهرت في وقت لاحق من قبل الذهبي وريدل. فرمون داور منذ ذلك الحين اتسمت كيميائيا 2، 8، 9، 10. يتكون فرمون تنقيته من مزيج معقد من ascarosides، التي تنظم في أشكال مختلفة سواء العمليات السلوكية والتنموية 9 و 11. استخدام استخراج فرمون داور الخام يسمح لل الحث موثوق رقابة من dauers متزامنة في الخلفية من النوع البري. </P&gt; الجهاز العصبي والخلايا الدبقية المرتبطة الخضوع لإعادة تشكيل داور خلال 12 و 13 و 14 يرقة. بعض هذه التغيرات لا رجعة فيها، مثل إعادة الخلايا الدبقية خلال داور 13 و 14، ولكن غيرها من الأحداث هي إعادة عرض عكسها على العودة إلى مواتية الظروف البيئية. على سبيل المثال، مجموعة من أربعة الخلايا العصبية IL2Q الخضوع لإعادة الخلايا العصبية السريع وعكسها خلال تشكيل داور بما في ذلك: تشجر تغصناته، والتحول من واحد إلى شجيري الخلايا العصبية محوار multidendritic وإعادة 12. الطرق تسمح هذه الوثيقة لموثوق التصوير في الجسم الحي من التوتر الناجم المرونة العصبية في كائن نموذج. الأساليب المقدمة للإنتاج واختبار داور فرمون الخام موصوفة سابقا وتجميعها من عدة مصادر 4، 8، 15، 16، 17، 18.

<table><tbody><tr><td>N2 C. elegans سلالة بريستول</td> مركز <td></td><td></td><td>علم الوراثة Caenorhabditis</td></tr><tr><td>PT2660 myIs13 [Pklp-6:: gfp] III</td><td>عند الطلب من مختبر</td><td></td><td></td>شرودر</tr><tr><td>PT2762 myIs14 [Pklp-6:: gfp] V</td><td>عند الطلب من مختبر</td><td></td><td></td>شرودر</tr><tr><td>JK2868 qIs56 [Plag-2:: gfp] V</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>OP50 E. coli</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>أطباق بتري</td><td>Tritech Research</td><td>60 مم T3308 ، 35 مم T3501</td><td></td></tr><tr><td>NGM أجار</td><td>متنوعة</td><td></td><td>3 جم كلوريد الصوديوم ، 17 جم أجار ، 2.5 جم بيبتون في 975 مل H2O معقمة مبردة إلى 55 درجة ؛ C متبوعا ب 1 مل من 5 مجم / مل من الكوليسترول في الإيثانول ، 25 مل من 1 M KPO4 عازلة (درجة الحموضة 6.0) ، 1 مل من 1 M CaCl 2 ، 1 مل من 1 M MgSO4</td></tr><tr><td>S</td> وسائط <td>S تتكون وسائط S المختلفة</td><td></td><td>من محلول قاعدي S (1.46 جم كلوريد الصوديوم ، 0.25 جم K2HPO4 ، 1.5 جم KH2PO4 ، 0.25 مل من 5 مجم / مل من الكوليسترول في الإيثانول و H2O إلى 250 مل. أضف إلى المحلول القاعدي S 2.5 مل من سترات البوتاسيوم درجة الحموضة 6.0 (2 جم أحادي هيدرات حامض الستريك ، 29.4 جم ثلاثي سترات البوتاسيوم أحادي هيدرات < فرعي > ، < / فرعي > H 2O إلى 100 مل ، معقم) ، 2.5 مل من محلول المعادن النادرة (1.86 جم EDTA ثنائي الصوديوم ، 0.69 جم FeSO4&nbsp ؛ & 7 H2O ، 0.2 جم MnCl2 & bull ؛ 4 H2O, 0.29 g ZnSO4&nbsp; & 7 H2O, 0.025 g CuSO4&nbsp; & 5 H2O ، H2O إلى 1 L. تعقيم وتخزينها في الظلام) ، 0.75 مل من 1 M CaCl 2 ، و 0.75 مل من 1 M MgSO4.</td></tr><tr><td>لوحات فرمون داور لفحص الجرعة والاستجابة</td><td>مزيج مختلف</td><td></td><td>0.085 جم أجار نوبل ، 0.5 مل من 0.513 م كلوريد الصوديوم و 5 & مايكرو ؛ لتر من 5 مجم / مل من الكوليسترول المذاب في الإيثانول في كل من أنابيب الثقافة 6 × 15 مل. أضف ما يكفي من الفرمون الخام إلى كل أنبوب لإنشاء مجموعة من التركيزات. أضف H2O لرفع الحجم إلى 4.725 ml. يغلي فوق موقد بنسن حتى يذوب الأجار ثم يبرد إلى 55 درجة مئوية. أضف 125 ميكرو ؛ ل 1 M KPO4 عازلة (درجة الحموضة 6.0), 50 & micro; ل 0.1 م CaCl 2 ، 50 & micro ؛ ل 0.1 م MgSO4 و 50 & micro; ل من 5 مجم / مل كبريتات الستربتومايسين لكل أنبوب. صب محتويات كل أنبوب في طبق بتري بقطر 35 مم. دع الأجار يتصلب في درجة حرارة الغرفة طوال الليل (إذا كان لفترة أطول ، احفظه في وعاء مغلق لمنع الجفاف المفرط).</td></tr><tr><td>حبات الغلاف المجهري 0.1 ميكرون</td><td>Polysciences Inc.</td><td>00876-15</td><td></td></tr><tr><td>M9 مخزن</td><td>مؤقت مختلف</td><td></td><td>مزيج 3 جم كيه< ساب >2< / فرعي > PO 4 ، 6 جم Na 2 HPO 4 ، 5 جم كلوريد الصوديوم ، 1 مل 1 م MgSO4 ، H2O إلى 1 لتر. التعقيم عن طريق التعقيم</td></tr></tbody></table>

في فيفو التصوير من داور محددة العصبية في إعادة عرض c. ايليجانس

In Vivo Imaging of Dauer-specific Neuronal Remodeling in C. elegans

آليات السيطرة على الإجهاد الناجم عن المظهرية اللدونة في الحيوانات كثيرا ما تكون معقدة وصعبة للدراسة في الجسم الحي. والمثال الكلاسيكي من التوتر الناجم اللدونة هي المرحلة داور من C. ايليجانس. Dauers هي مرحلة اليرقات التنموية البديلة تشكلت في ظل ظروف تركيزات منخفضة من المواد الغذائية البكتيرية وتركيزات عالية من فرمون داور. عرض Dauers اللدونة التنموية والسلوكية واسعة النطاق. على سبيل المثال، مجموعة من أربعة رباعي الداخلية-شفوي (IL2Q) الخلايا العصبية تخضع لإعادة عكسها واسعة خلال تشكيل داور. الاستفادة من دخول مسارات بيئية تنظيم داور معروفة، وهي طريقة المحددة سابقا لإنتاج النفط الخام داور من فرمون على نطاق واسع الثقافات الخيطية السائلة ويتجلى. مع هذا الأسلوب، وهو تركيز 50،000 - 75،000 الديدان الخيطية / مل من ثقافة السائل كافية لإنتاج قوية للغاية داور الخام فرمون. رجولية فرمون الخام هي DETErmined من قبل الأحيائي الاستجابة للجرعة. وأخيرا، يتم وصف الأساليب المستخدمة لفي الجسم الحي الوقت الفاصل بين التصوير من خلال تشكيل IL2Qs داور.

إنتاج النفط الخام النتائج داور فرمون في السائل الأصفر (الشكل 1) في آن معا الحرارة ومستقرة البارد. يتم تخزين aliquots من فرمون الخام عند -20 درجة مئوية إلى أجل غير مسمى دون أي خسارة واضحة في النشاط. بعد إنتاج فرمون، واحد الأحيائي الاستجابة للجرعة كافية لتقدير تقريبي للقوة. ومع ذلك، بالنسبة لمعظم التجارب من الضروري تكرار الأحيائي 2 - 3 مرات، وتأخذ في المتوسط ​​من كل تجربة. وتعطى نتائج ممثلة من اثنين من اختبارات بيولوجية فرمون في الشكل 3. من هذه البي...

بعد التعرض لضغوط بيئية محددة ، تخضع الديدان الخيطية Caenorhabditis elegans لدونة نمطية مظهرية واسعة النطاق للدخول في مرحلة الأحداث "dauer" المقاومة للإجهاد. نقدم طرقا للتحريض الخاضع للرصدة وتصوير المرونة العصبية أثناء الدوير.

في فيفو التصوير من داور محددة العصبية في إعادة عرض C. ايليجانس

The mechanisms controlling stress-induced phenotypic plasticity in animals are frequently complex and difficult to study in vivo. A classic example of ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تصوير إعادة تشكيل محددة للمهر للخلايا العصبية الحسية في أناقة البحر. يتم تحقيق ذلك عن طريق استخراج الفرمون الخام أولا من الثقافة السائلة. الخطوة الثانية هي قياس فاعلية الفرمون الخام.بعد ذلك ، يتم استخدام الفرمون للحث على تكوين قاسية في الذي يعبر عن GFP في الخلايا العصبية IL. الخطوة الأخيرة هي تركيب على شريحة المجهر أثناء مرحلة DMT وإجراء تصوير مباشر لإظهار تشجير التغصنات. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال المرونة العصبية ، مثل كيفية إعادة تشكيل الخلايا العصبية استجابة للظروف البيئية.على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لإعادة تشكيل IL two ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على أحداث أخرى محددة مثل إعادة تشكيل البلعوم. لبدء هذا الإجراء ، قم بزراعة OP 50 e coli من مستعمرة واحدة بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية أثناء رجها في 100 مل من مرق رطل عند 200 دورة في الدقيقة. ثم قم بزراعة أناقة N two C على أطباق بتري من 15 إلى 26 سم مع NGM Agar جالسا مع 50 ميكرولتر من الإشريكية القولونية حتى تنضب البكتيريا تقريبا.بعد ذلك ، قم بزراعة ثقافة الإشريكية القولونية في أربعة لترات من مرق LB عن طريق تلقيح مليلتر واحد من القولونية ورجها عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة. بعد ذلك ، اغسل الديدان الخيطية من الأطباق بمليلتر واحد من محلول الريحان S. انقل أربعة إلى خمسة أطباق من الديدان الخيطية إلى قارورة إرلينماير سعة لتر واحد من جهاز الطرد المركزي S media ، وقم بإزالة الإشريكية القولونية عند 650 جم لمدة 10 دقائق ، وقم بإزالة المقاومة الطافية ، كل حبيبات بكتيرية في 10 مل من محلول الريحان S.بعد ذلك ، انقل كميات متساوية من البكتيريا المعلقة إلى كل قارورة من الديدان الخيطية. ضع القارورة على شاكر مداري في درجة حرارة الغرفة عند 100 إلى 150 دورة في الدقيقة لمدة أربعة أيام حتى يبدأ المحلول في التنظيف ، مما يشير إلى استنفاد الطعام. بمجرد نفاد الطعام ، قم بزراعة الإشريكية القولونية في أربع ثقافات من مرق لتر واحد بين عشية وضحاها.ثم الطرد المركزي للبكتيريا عند 650 Gs لمدة 10 دقائق. أضف الكريات البكتيرية إلى قوارير الوسائط S مع الديدان الخيطية ، وأعد جميع قوارير وسائط S إلى الغرفة المدارية لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام إضافية حتى ينضب الطعام مرة أخرى. بعد ذلك ، انقل كمية واحدة من المحلول إلى طبق بتري واحسب عدد الديدان الخيطية تحت مجهر تشريح.بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للديدان الخيطية عند 4 ، 000 جي ثانية لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية ، وتخلص من حبيبات الديدان الخيطية واحتفظ بالمادة الطافية. ثم قم بتصفية المادة الطافية من خلال ورق ترشيح واتمان رقم واحد. قم بتصفية المادة الطافية من خلال وحدات الترشيح الفراغي المعقمة بمقياس 45 ميكرومتر.بعد ذلك ، أضف المرشح إلى دورق سعة لترين باستخدام قضيب التقليب. ضعه على طبق تحريك للتسخين في غطاء دخان ، واتركه حتى يغلي مع التحريك والتبخر إلى حوالي 200 مل. بعد ذلك ، انقل المحلول إلى دورق سعة 500 مل واستمر في الغليان حتى يتبقى حوالي 50 مل.اتركه يبرد وجهاز الطرد المركزي لمدة خمس دقائق عند 1000 Gs.ثم اسكب snat في دورق سعة 100 مل وتخلص من الحبيبات. بعد ذلك ، قم بغلي السنات إلى قشرة بنية. يرفع عن النار ويقطع القشرة بالملعقة بعد ذلك.أضف ما يكفي من الإيثانول 200 لتغطية القشرة. غطي الدورق بالشكلي واتركيه طوال الليل في درجة حرارة الغرفة. ثم صب الإيثانول في دورق نظيف وضعه جانبا.أضف الإيثانول الطازج لتغطية القشرة وكرر عمليات الاستخراج طوال الليل ثلاث مرات متبوعة بتجميع المستخلصات. بعد ذلك ، استخدم مضخة تفريغ لتجفيف مستخلصات الإيثانول. إذا لم تكن مضخة التفريغ متوفرة ، أضف مستخلص الإيثانول إلى دورق نظيف وقم بتسخينه إلى 50 درجة مئوية مع التقليب في غطاء الدخان.ثم قم بإذابة البقايا في 10 مل من الماء المقطر المعقم. قم بتعقيم هذا المحلول باستخدام حقنة 22 ميكرومتر ، وقم بتصفيته وتخزينه عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر في مليلتر واحد. أ واط.في هذا الإجراء ، قم بوزن أنبوب الطرد المركزي الصغير. أضف ملليلتر واحد من ثقافة التساوي بين عشية وضحاها إلى الأنبوب وجهاز الطرد المركزي عند 17 ، 000 Gs.ثم قم بإزالة كل snat. قم بوزن الأنبوب مرة أخرى وحدد وزن الحبيبات البكتيرية.بعد ذلك ، أعد تعليق الحبيبات باستخدام المخزن المؤقت M تسعة للحصول على تركيز نهائي قدره 4٪ الوزن لكل حجم. قم بتخزين 10 ميكرولترات من المعلق البكتيري في وسط كل صفيحة فرمونية ، وقم بتخزين الألواح طوال الليل. في درجة حرارة الغرفة.انقل 10 إلى 15 جرافيت إلى خنثى من النوع البري على ألواح الفرمون بعد يوم واحد من طرح الريش في مرحلة البلوغ. قم بتخزين الأطباق على حرارة 25 درجة مئوية لمدة ثلاث إلى أربع ساعات. ثم اختر كل الخنثى البالغين.سجل عدد البيض الموضوع لكل طبق. أغلق الصفائح بالشكلي والعودة إلى 25 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام قبل حساب النسبة المئوية للعاملين. الآن قم بإعداد لوحات الفرمون الفاعل باستخدام قيمة EC 90 وحفز الفاعلين بسلالة تحمل جين متحول وراثيا متكاملا من IL two reporter بعد وضع البيض.قم بإزالة الخنثى البالغة. أغلق الألواح بالبيرفيل واحتضانها لمدة 34 ساعة عند 25 درجة مئوية في اليوم السابق للتصوير. اصنع محلولا بوزن 10٪ لكل حجم agros في M تسعة عازلة مع الفرمون الفاعل عند تركيز EC 90.ما يقرب من 100 ميكرولتر من agros على شريحة مجهرية ، وقم بوضع شريحة أخرى بسرعة ولكن برفق في الأعلى لإنشاء سطح زراعي مستو بعد أن تصلب agros ، افصل الشرائح. لفها في غلاف الساران وتخزينها في غرفة الرطوبة. بعد فترة الحضانة التي تبلغ 34 ساعة ، افحص ألواح الفرمون بحثا عن الديدان الخيطية التي توقفت عن ضخ البلعوم.افصل الشرائح بحيث يكون هناك سطح واحد فقط من الشريحة. انقل ديدان خيطية واحدة أو أكثر إلى وسادة 10٪ agros باستخدام ميكرولتر واحد من حبات البوليسترين 0.1 ميكرون ثم حدد اتجاه الديدان الخيطية. التقط صورا Zack لتغصنات IL two Q بتكبير 100 × بأقل شدة مضان ممكنة كل 15 دقيقة أو حسب الحاجة للتجربة المحددة.يوضح هذا الشكل الصور المجهرية للعرض الأيمن الجانبي ل DIC لأناقة C خلال مراحل القالب القاسية المختلفة. هذا L Two مع بصلة بلعومية طرفية مستديرة نموذجية. بعد حوالي ثلاث ساعات من الذوبان في المهر ، تتقلص اللمبة الطرفية وتبدأ بشرة L 2D في الانفصال عن بشرة المهر المشكلة حديثا.بعد حوالي 10 ساعات من ظهور تساقط الفاعل ، خضع لانكماش شعاعي واسع النطاق وانفصال عن بشرة L 2D. من حين لآخر ، لا يزال من الممكن رؤية القناة الإخراجية المبطنة بالبشرة في مرحلة L 2D متصلة بالمهر النامي. يظهر هنا صورة مجهرية جانبية لحيوان واحد يعبر عن مراسل IL الثاني.تظهر هذه الإدخالات تغصنات IL two Q في نقاط زمنية مختلفة بعد بداية طرح المهر. يحدث تسريع فرعي IL اثنين من فروع Q بعد حوالي خمس ساعات من بداية طرح الريش الفاعل. عند محاولة تنقية الفرمون الفاعل ، من المهم أن تتذكر استخدام تقنية معقمة لمنع التلوث.بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنقية وتقييم فاعلية فرمون المهر الخام ، بالإضافة إلى استخدام هذا الفرمون لتصوير إعادة تشكيل المهر المحدد في الجسم الحي.

in-vivo-imaging-of-dauer-specific-neuronal-remodeling-in-c-elegans

Research

JoVE Journal

Neuroscience

علم الأعصاب

التصوير C. ايليجانس الأجنة باستخدام مجهر Epifluorescent وبرمجيات المصدر المفتوح

وقد تم تطوير جهاز بسيط ميكروفلويديك لأداء مخدر...

ميكروفلويديك أجهزة بسيطة لل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من<em&gt; C. ايليجانس</em&gt;،<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; واسماك الزرد

المصدر: Doser، R.، et al. التصوير تحت الخلوي لمعالجة الكالسيوم العصبي في الجسم الحي. J. Vis. Exp. (2023)يوضح هذا الفيديو التصوير في الجسم الحي لتدفق الكالسيوم تحت الخلوي في الخلايا العصبية في الحبل العصبي البطني لسلالات Caenorhabditis elegans المعدلة وراثيا. يتم استخدام مؤشرين متميزين للكالسيوم: مؤشر سيتوبلازمي في سلالة واحدة ومؤشر الميتوكوندريا في سلالة أخرى. لوحظت الخلايا العصبية تحت المجهر الفلوري لمراقبة التغيرات في الوقت الفعلي في شدة التألق داخل السيتوبلازم العصبي والميتوكوندريا ، مما...

تصوير ديناميكيات الكالسيوم تحت الخلايا في الخلايا العصبية لالتهاب الغدة المائية

مع صغر الجسم التشريح العصبي شفافة موثقة جيدا، ومجموعة من التقنيات الجينية قابلة...

الكالسيوم في الجسم الحي التصوير الخلايا العصبية في C. ايليجانس

يعد تصوير السلوك والنشاط العصبي على مدى فترات زمنية طويلة دون تثبيت شرطا أساسيا لفهم السلوك. يمكن استخدام تصوير غرف الموائع الدقيقة الاغاروز (AMI) لتصوير النشاط العصبي والسلوك لجميع مراحل حياة Caenorhabditis elegans.

Microchambers الاغاروز لفترة طويلة التصوير الكالسيوم من<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em

هذا الأسلوب يوفر وسيله للزوجين optogenetics والمشفرة وراثيا مجسات الكالسيوم إلى مستويات الكالسيوم القاعدية صوره الأساس والتغيرات في العابرين الكالسيوم أثارت في عضلات الجسم الجدار من الكائن الحي النموذجي c. اليجنتس.

في فيفو الكالسيوم التصوير في c. الهيئة عضلات الجدار الجسم

هنا ، نقدم نهج التوافقية باستخدام المجهر عاليه الدقة ، والاداات الحسابية ، ووضع العلامات خليه واحده في الاجنه c. ايليجنس المعيشة لفهم ديناميات خليه واحده اثناء النمو العصبي.

المجهر الضوئي ورقه الخفيفة والمؤتمتة الخلايا النسب تحليلات لكتالوج Caenorhabditis الاجنه الجنينية مع القرار تحت الخلوية

العمود الفقري التغصني هي السمات الخلوية الهامة للجهاز العصبي. هنا يتم وصف طرق التصوير الحية لتقييم بنية ووظيفة العمود الفقري الشجيري في C. elegans. تدعم هذه الأساليب تطوير شاشات متحولة للجينات التي تحدد شكل العمود الفقري الشجيري أو وظيفته.

تصوير العمود الفقري التغصني في Caenorhabditis elegans

وقد تم تقديم بروتوكول لتصوير microtubules الحيوية في الجسم الحي باستخدام البروتين ملزمة نهاية المسمى fluorescently. وصفنا أساليب لتسمية, صورة, وتحليل microtubules الحيوية في الخلايا العصبية الميكروتبول الجانبي الخلفي (PLM) من C. elegans.

في الجسم الحي تقييم ديناميات Microtubule والتوجه في Caenorhabditis elegans الخلايا العصبية

يصف البروتوكول تصميما بسيطا لرقاقة الموائع الدقيقة ومنهجية التصنيع الدقيق المستخدمة لزراعة C. elegans في وجود إمدادات غذائية مستمرة لمدة تصل إلى 36 ساعة. يتيح جهاز النمو والتصوير أيضا تصويرا متقطعا عالي الدقة طويل المدى للعمليات الخلوية وشبه الخلوية أثناء التطوير لعدة أيام.

شريحة موائع دقيقة بسيطة للنمو على المدى الطويل وتصوير Caenorhabditis elegans

تصف الطرق الحالية نهجا غير متناسب لتصوير الكالسيوم عالي الدقة وشبه المجزأ في الجسم الحي في Caenorhabditis elegans باستخدام مؤشرات الكالسيوم المشفرة وراثيا المتاحة بسهولة.

التصوير تحت الخلوي للتعامل مع الكالسيوم العصبي في الجسم الحي

اكتشف تصوير إعادة تشكيل العصبونات الحسية في مرحلة دور في C. elegans باستخدام الفيرومون الخام والتصوير الحي. تساعد هذه الطريقة الباحثين على دراسة اللدونة العصبية استجابة للإجهاد البيئي.

في فيفو التصوير من داور محددة العصبية في إعادة عرض C. ايليجانس

استكشف المزيد من الفيديوهات