تقييم الفئران تمرين التحمل من دون استخدام الشبكة من الصدمة: بديل لممارسة القسري

الهدف العام من هذا الإجراء هو تحديد القدرة على التحمل الطوعية. في فئران المختبر ، يتم تحقيق ذلك عن طريق السماح للفأر بالتأقلم أولا مع غرفة العمليات في قفصه المنزلي لمدة ساعة إلى ساعتين. ثم يسمح للفأر بالتأقلم مع جهاز المشي وصوت المحرك.

بعد ذلك ، يتم زيادة سرعة جهاز المشي تدريجيا حتى يعمل الماوس بشكل مريح بأقصى معدل مستدام. الخطوة الأخيرة هي تحديد متى وصل الماوس إلى الإرهاق. في النهاية ، يكشف مقدار الوقت الذي يمر فيه الفأر إلى الإرهاق عن مقياس لتحمل التمرين دون الآثار المربكة للإجهاد الناتج عن استخدام شبكة الصدمات.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تحسين الأساليب الحالية لتحديد القدرة على التحمل والفئران ، ويرجع ذلك أساسا إلى أنها لا تستخدم شبكة تسديد لتشجيع الفئران على الجري ، وبالتالي تقليل الآثار المربكة للإجهاد ، سواء بالنسبة للحيوان أو للتجربة. اتخاذ قرار مسبق بشأن المجموعات التجريبية وإجراءات ما بعد التمرين للفئران. ضع جهاز المشي على عربة أو طاولة متينة في غرفة هادئة مخصصة لهذا الإجراء.

أثناء التجارب الجارية ، اضبط جهاز المشي للممرات بحجم الماوس وبميل مناسب للبروتوكول. يستخدم ميل الدرجات الخمس الإيجابية هنا لتجنب تلف العضلات بسبب التمرين غريب الأطوار الذي يحدث أثناء الجري على المنحدرات. ضع وسادة ماصة أسفل جرس جهاز المشي لالتقاط البراز.

اسمح للفأر بالتأقلم مع غرفة الإجراءات في قفصه المنزلي المنقول مع زملائه في القفص لمدة ساعة إلى ساعتين. حدد ماوس واحدا وسجل رقم علامته. قم أيضا بوزن الماوس وسجل وزنه.

ضع الماوس في جهاز المشي دون تشغيل المحرك للتأقلم لمدة خمس دقائق تقريبا. قم بتشغيل الطاقة دون تشغيل حزام جهاز المشي واترك الماوس يتأقلم مع ضوضاء الماكينة لمدة خمس دقائق أخرى. قم بإزالة الفئران في المجموعات المستقرة من جهاز المشي في هذه المرحلة وإعادتها إلى قفصها أو إجراء إجراءات ما بعد التمرين وفقا للتصميم التجريبي.

بعد التأقلم ، أدر الحزام إلى سرعة منخفضة. عندما يستكشف الحزام وليس على المنصة ، اضغط برفق أو ارفع مؤخرة الفأر باستخدام خافض اللسان مرة إلى ثلاث مرات لتشجيع المترددة على البقاء على جهاز المشي والركض. ابدأ مؤقت المختبر بمجرد تشغيل الماوس بسرعة أولية تبلغ 10 أمتار في الدقيقة ، ارفع السرعة ببطء.

عندما يكون الماوس في الجزء العلوي من الحزام بزيادات مترا واحدا في الدقيقة كل دقيقتين تقريبا ، قم بخفض السرعة إلى الإعداد السابق. إذا كان الماوس يعمل بشكل متكرر في رشقات نارية قصيرة وليس بوتيرة ثابتة ، فإن معظم الفئران ستعمل بسهولة ، لكنها تتوقف أحيانا لفترات قصيرة. استخدم خافض اللسان للضغط برفق على الجزء الخلفي من أو رفعه لتشجيع استئناف الجري.

غالبا ما يؤدي مجرد ملاحظة اليد مع خافض اللسان الذي يأتي نحوهم إلى تشغيل الفئران أكثر. لا تقم بإيقاف المؤقت للانقطاعات المؤقتة في التشغيل. حدد الحد الأقصى لسرعة التشغيل المستمرة لكل ماوس عن طريق ضبط السرعة ومشاهدة الماوس وهو يسجل هذه السرعة.

بعض الفئران ترفض الجري تماما. سوف تعمل هذه الفئران في رشقات نارية قصيرة. ثم توقف عن العناية أو الدواسة التي تجلس على المنصة واستخدم أرجلها الأمامية على الحزام.

الموقف الكلاسيكي للفأر الرافض منحني مع زرع جميع الأقدام الأربعة تحت لمنعه من دفعه مرة أخرى إلى جهاز المشي بواسطة خافض اللسان. في بعض الأحيان يصبح الفأر عدوانيا تجاه خافض اللسان عندما لا يرغب في الجري أو يعض اللسان أو الخافض أو يتسلقه كوسيلة للهروب. من الواضح خلال الدقائق الخمس الأولى من التجربة ما إذا كان الماوس سيعمل أم لا.

قم بإزالة وتحديد الفئران التي ترفض الهروب من التحليل ، لكن لا تحسبها على أنها فئران مستقرة. اعتمادا على تصميمك التجريبي ، يمكن إعادة اختبار الفئران التي ترفض في يوم مختلف. يتم تحديد الإرهاق من خلال ثلاث توقفات متتالية ورفض استئناف الجري على الرغم من التشجيع اللطيف.

بالإضافة إلى العلامات الجسدية للإرهاق مثل صعوبة التنفس والوضعية المفلطحة. حدد الفئران المنهكة وأوقف المؤقت. سجل إجمالي الوقت الذي تقضيه في الجري بجميع السرعات.

اعتمادا على التصميم التجريبي ، إما إعادة الفأر إلى قفصه أو إجراء إجراءات فورية بعد التمرين مثل جمع الدم أو الأنسجة. وفقا للإرشادات المؤسسية ، امسح الحزام بمنشفة مبيد للجراثيم بعد اختبار كل فأر على حدة حتى لا تؤثر رائحة الفأر السابقة على سلوك الفئران اللاحقة التي تم اختبارها لاختبار الماوس التالي. استخدم خافض لسان جديد لكل فأر.

يمكن اختبار الفئران التي تعيش في نفس القفص بالتتابع في نفس اليوم دون التأقلم الإضافي مع غرفة الإجراءات. تعكس القدرة على التحمل بدقة المظهر الجزيئي والتمثيلي لسلالات مختلفة من C 57 الفئران السوداء الستة التي تختلف في التعبير عن السيتوكين المشتق من العضلات IL 15 الفئران المعدلة وراثيا التي تفرط في التعبير عن IL 15 تظهر زيادة كبيرة في أوقات الجري إلى أوقات الإرهاق مقارنة بأدوات التحكم في تناول الطعام بينما تظهر الفئران التي تفتقر إلى IL 15 أوقات تشغيل منخفضة بشكل كبير قبل الوصول إلى عناصر التحكم في النوع البري للإرهاق. انظر 57 فأرة سوداء ستة فئران من مصدرين مختلفين لا تظهر أوقات تشغيل مختلفة بشكل كبير.

اختلفت سرعة الجري القصوى المستمرة فقط في الفئران بالضربة القاضية IL 15. أحد القيود التي لا مفر منها لهذه التقنية هو أن بعض الفئران ترفض الركض طواعية. تبلغ النسبة المئوية للفئران الصغيرة التي ترفض الجري حوالي 10٪ في عمر أربعة أشهر ، ترتفع نسبة الرفض إلى 20٪ في عمر ثمانية أشهر وتزداد إلى أكثر من 60٪ بحلول عمر 16 شهرا.

ومع ذلك ، فإن النسبة المئوية للرفض في الفئة العمرية الأكبر سنا أقل بكثير في الفئران المعدلة وراثيا IL 15. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أن تظل هادئا ومسترخيا وأن تنتبه إلى سلوك الفأر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام جهاز المشي لتحديد القدرة على التحمل والفئران دون استخدام شقرا الإلكترونية.