Name: طرق للبشرة إصابة وفحوصات لالردود الجرح في C. ايليجانس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: تعلم طرق إصابة جلد C. elegans ودراسة استجابات الجرح في الأنسجة الظهارية. يوضح هذا البحث استخدام الإبر الدقيقة والليزر لتحليل إشارات الكالسيوم وديناميكيات الأكتين في التئام الجروح.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

طرق جرح الإبرة ل C. ايليجانس تم تطويرها لأول مرة بواسطة ناتالي بوجول وجوناثان إيوبانك ؛ نشكر ناتالي بوجول على التعليقات على المخطوطة. العمل في مختبرنا على C. ايليجانس إصلاح جروح البشرة مدعوم بمنحة من المعاهد الوطنية للصحة إلى A.D.C. (R01 GM054657).

<ol><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y., Longaker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
<li>Sonnemann, K. J., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair%3A+toward+understanding+and+integration+of+single-cell+and+multicellular+wound+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Wound repair: toward understanding and integration of single-cell and multicellular wound responses.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 27, 237-263 (2011).</li>
<li>Xu, S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+G%CE%B1q-Ca2%2B+signaling+pathway+promotes+actin-mediated+epidermal+wound+closure+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A Gαq-Ca2+ signaling pathway promotes actin-mediated epidermal wound closure in C. elegans.</a> Curr Biol. 21, 1960-1967 (2011).</li>
<li>Pujol, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+innate+immune+responses+to+infection+and+wounding+in+the+C.+elegans+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Distinct innate immune responses to infection and wounding in the C. elegans epidermis.</a> Curr Biol. 18, 481-489 (2008).</li>
<li>Chisholm, A. D., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Caenorhabditis+elegans+epidermis+as+a+model+skin.+II%3A+differentiation+and+physiological+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdiscip+Rev+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The Caenorhabditis elegans epidermis as a model skin. II: differentiation and physiological roles.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 1, 879-902 (2012).</li>
<li>Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStiernagle%2C+T+%22WormBook+%3A+the+online+review+of+C.+elegans+biology%22">WormBook : the online review of C. elegans biology</a>. , 1-11 Forthcoming.</li>
<li>Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+killing+of+cells+in+Caenorhabditis+elegans.+Methods+in+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans. Methods in cell biology.</a> 48, 225-250 Forthcoming.</li>
<li>Pujol, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-fungal+innate+immunity+in+C.+elegans+is+enhanced+by+evolutionary+diversification+of+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Anti-fungal innate immunity in C. elegans is enhanced by evolutionary diversification of antimicrobial peptides.</a> PLoS Pathog. 4, (2008).</li>
<li>Tong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+regulation+of+Caenorhabditis+elegans+epidermal+damage+responses+by+death-associated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Negative regulation of Caenorhabditis elegans epidermal damage responses by death-associated protein kinase.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 1457-1461 (2009).</li>
<li>Zugasti, O., Ewbank, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimmune+regulation+of+antimicrobial+peptide+expression+by+a+noncanonical+TGF-beta+signaling+pathway+in+Caenorhabditis+elegans+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neuroimmune regulation of antimicrobial peptide expression by a noncanonical TGF-beta signaling pathway in Caenorhabditis elegans epidermis.</a> Nat Immunol. 10, 249-256 (2009).</li>
<li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+chip-based+C.+elegans+microinjection+system+for+investigating+cell-cell+communication+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensor.%2C+%26+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Microfluidic chip-based C. elegans microinjection system for investigating cell-cell communication in vivo.</a> Biosensor., & Bioelectronics. 50, 28-34 (2013).</li>
<li>Jansson, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adhesion+of+Conidia+of+Drechmeria+coniospora+to+Caenorhabditis+elegans+Wild+Type+and+Mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nematol%22%5BJournal%5D)">Adhesion of Conidia of Drechmeria coniospora to Caenorhabditis elegans Wild Type and Mutants.</a> J Nematol. 26, 430-435 (1994).</li>
<li>Hodgkin, J., Kuwabara, P. E., Corneliussen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+bacterial+pathogen%2C+Microbacterium+nematophilum%2C+induces+morphological+change+in+the+nematode+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel bacterial pathogen, Microbacterium nematophilum, induces morphological change in the nematode C. elegans.</a> Curr Biol. 10, 1615-1618 (2000).</li>
<li>Hochbaum, D., Ferguson, A. A., Fisher, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+transgenic+C.+elegans+by+biolistic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of transgenic C. elegans by biolistic transformation.</a> J Vis Exp. (42), (2010).</li>
<li>Hashmi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+transformation+of+nematodes+using+arrays+of+micromechanical+piercing+structures%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Genetic transformation of nematodes using arrays of micromechanical piercing structures.</a> BioTechniques. 19, 766-770 (1995).</li>
</ol>

ولا يعلم المؤلفان بأي مصالح متنافسة.

الأساليب المقدمة هنا للإبرة وجرح الليزر توفر نهج تكميلية لتقييم قدرة ظهارة البشرة لإصلاح الضرر. جرح الليزر محلية نسبيا و(اعتمادا على تكوين ليزر) يمكن أن تقتصر على البشرة، في حين جرح إبرة يعطل البشرة، بشرة، والمرجح الأغشية الطابق السفلي الداخلية. إبرة جرح قد تشبه بشكل أكثر دقة الجراح التي مسببات الأمراض أو الأضرار الميكانيكية في البيئة الطبيعية التي لحقت. وكقاعدة عامة، تتطلب جرح إبرة مزيد من الممارسة لتحقيق الجروح الدقيقة التي تتوافق مع بقاء الحيوان. والاستجابات الخلوية إلى إبرة وا...

آليات الشفاء الجلد الجروح ذات أهمية بيولوجية أساسية وذات الصلة بصحة الإنسان. ويضم التئام الجروح في الفقاريات والثدييات سلسلة معقدة من استجابات منسقة من أنسجة متعددة ويشير 1. كثير من الكائنات نموذج الجيني بسيطة هي أيضا قادرة على شفاء الجروح الجلدية 2. ولذلك من مصلحة لتحليل نماذج الانقياد وراثيا من إصلاح الجرح الجلد. نحن وغيرنا قد بدأت في استخدام انواع معينة ايليجانس نموذجا جديدا للشفاء الجرح الجلد 3،4. والهدف من هذا البروتوكول هو تمكين مجموعة أوسع من الباحثين لاستخدام C. ايليجانس كأداة للتحقيق في الآليات الجزيئية والخلوية من البشرة التئام الجروح. وC. ويضم ايليجانس الجلد البشرة (المعروف أيضا باسم اللحمة) وبشرة خارج الخلية 5. يتم تشكيل البشرة الكبار من عدد صغير من syncytia متعدد النوى، والتي من أكبر هو مخلى كnown كما hyp7. البشرة هي ظهارة البسيطة التي تفرز بشرة على سطحه قمي. الجلد يمكن أن يدافع بنشاط ضد مسببات الأمراض اختراق الجلد وإصلاح الجروح الصغيرة (4). إصلاح الجرح من C. ايليجانس الجلد هو قوي، وتقريبا جميع الحيوانات البرية نوع البقاء على قيد الحياة يمكن البقاء على قيد الحياة الجروح الصغيرة الناجمة عن الإبر، أو تلف الجلد المحلية التي تسببها أشعة الليزر. C. ايليجانس جرح الجلد مشغلات مجموعة من الردود، بما في ذلك البشرة استجابة فطرية المناعة، وإغلاق الجروح، وتشكيل ندبة 4. البشرة البالغين في مرحلة ما بعد الإنقسامية، وينطوي على التئام الجروح الاستجابات الخلوية المحلية في مقابل انتشار البشرة أو الهجرة الخلية. لقد أثبتنا أن جرح الجلد يتسبب في زيادة كبيرة ومطردة في البشرة الكالسيوم 2+، الأمر الذي يتطلب قناة TRPM غشاء تحويل الغاز إلى سوائل-2 والداخلية الكالسيوم 2+ مخازن 3. مطلوب البشرة الكالسيوم 2+ إشارة لتشكيل وإغلاق حلقات F-أكتين في التعليم الجامعيالموقع اوند. كما يدفع جرح الاستجابات المناعية الفطرية التي تنشط النسخ من المكاتب الإقليمية للمرأة مثل البرمجة اللغوية العصبية-29. النسخ الناجم عن جرح المكاتب الإقليمية للمرأة يعتمد على TIR-1 / PMK-1 P38 MAP كيناز سلسلة يتصرف بشكل مستقل في البشرة 4. سوف العيوب سواء في إشارة مسار الكالسيوم 2+ أو في الاستجابة المناعية الفطرية يؤدي إلى انخفاض البقاء على قيد الحياة بعد إصابة. هيكل بسيط نسبيا من C. ايليجانس البشرة، قابلية الإستطراق الجيني والمزايا لفي الجسم الحي التصوير تجعل من نظام ممتاز لدراسة جوانب متعددة من إصلاح الجرح. هنا نقدم بروتوكولات الطرق الشائعة اثنين من جرح: جرح إبرة وجرح الليزر. جرح إبرة لا يتطلب أي معدات متخصصة (غير مجتذب إبرة)، ومع خبرة لا يمكن أن يؤديها على مئات من الديدان يوميا. يتم تنفيذ جرح إبرة على الحيوانات التي تنمو على لوحات أجار. في المقابل، يتم إجراء جرح الليزر على أنيسالحيوانات thetized التي شنت على أجار منصات تحت ساترة، ومناسب للتصوير المباشر لالاستجابات الخلوية للتلف.

<table><tbody><tr><td>Agarose</td><td>Denville Scientific</td><td>CA3510-8</td><td></td></tr><tr><td>لوحة بتري بلاستيكية</td><td>Tritech Research</td><td>T3308</td><td>60 مم</td></tr><tr><td>Levamisole</td><td>Sigma</td><td>L9756</td><td>12 ملي متر</td></tr><tr><td>زجاج البورسليكات الشعيرات الدموية</td><td>العالمية أدوات الدقة</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>مجتذب إبرة</td><td>أداة Sutter &nbsp ؛</td><td>P-2000</td><td></td></tr><tr><td>اختيار دودة (سلك بلاتيني)</td><td>Tritech Research</td><td>PT-9010</td><td></td></tr><tr><td>M9 حل</td><td>محلي الصنع</td><td></td><td>3 جم KH2PO4 ، 6 جم Na2HPO4 ، 5 جم كلوريد الصوديوم ، 1 مل 1 M MgSO4 ، H2O إلى 1 لتر. تعقيم عن طريق التعقيم بالتعقيم</td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td>استخدم 500 مل ل 50 دودة iQ</td></tr><tr><td>SYBR Green</td><td>Bio-Rad</td><td>1708882</td><td></td></tr><tr><td>SuperScript III</td><td>Invitrogen</td><td>18080-051</td><td></td></tr><tr><td>آلة PCR</td><td>Bio-Rad</td><td>C1000 / CFX96</td><td></td></tr><tr><td>96 جيدا أنابيب PCR</td><td>Bio-Rad</td><td>MLL9601</td><td></td></tr><tr><td>برنامج تحليل الصور</td><td>تحول</td><td></td> <td>الأجهزة الجزيئية</td></tr></tbody></table>

طرق للبشرة إصابة وفحوصات لالردود الجرح في c. ايليجانس

Methods for Skin Wounding and Assays for Wound Responses in C. elegans

وC. ايليجانس البشرة وبشرة تشكل طبقة الجلد بعد متطورة البسيطة التي يمكن إصلاح الأضرار المحلية الناجمة عن اصابة. لقد أضاءت الدراسات الردود الجرح وإصلاح في هذا النموذج فهمنا للهيكل الخلية وردود الجينومية إلى تلف الأنسجة. طريقتين الأكثر استخداما لالجرح C. ايليجانس الجلد البالغين من الغرزات مع الإبر حقن مكروي، وأشعة الليزر المحلي. إبرة اصابة محليا يعطل بشرة، البشرة، وما يرتبط بها من المصفوفة خارج الخلية، وأيضا قد تضر الأنسجة الداخلية. النتائج أشعة الليزر في الضرر أكثر محلية. جرح يتسبب في سلسلة من ردود يعاير بسهولة بما في ذلك البشرة مرتفعة الكالسيوم 2+ (ثواني دقيقة)، وتشكيل وإغلاق حلقة التي تحتوي على الأكتين في موقع الجرح (1-2 ساعة)، والنسخ مرتفعة من الببتيد الجينات المضادة للميكروبات (2-24 ساعة)، وتشكيل ندبة. أساسا كل نوع البرية الحيوانات الكبار البقاء على قيد الحياة جرح، حيثكما المسوخ المعيبة في إصلاح الجرح أو استجابات أخرى تظهر انخفاض البقاء على قيد الحياة. وتعرض بروتوكولات مفصلة لإبرة وجرح الليزر، وفحوصات لتحديد الكميات والتصور الردود الجروح والعمليات إصلاح (ديناميات الكالسيوم، وديناميات الأكتين، مضادات الميكروبات الببتيد الاستقراء، والبقاء على قيد الحياة).

سوف الليزر أو جرح إبرة يؤدي الارتفاع السريع والمستمر في البشرة مستويات الكالسيوم، كما تصور مع أجهزة استشعار الكالسيوم مثل GCaMPs (الشكل 1). يحدث ارتفاع الكالسيوم في غضون ثوان، ويبقى مرتفعا لعشرات من الدقائق. إبرة اصابة بتكاثر النتائج في تشكيل حلقات F-أكتين في مواقع الجرح (الشكل 2)؛ هذه تظهر في غضون دقائق، وتدريجيا على مقربة أكثر من 1-2 ساعة بعد اصابة. وكثير من الأحيان أقل شكلت حلقات الأكتين بعد إصابة الليزر أكثر دقة. كلا إبرة والليزر جرح تحفز التع...

البالغ C. ايليجانس الجلد هو نموذج قابل للتتبع لدراسات استجابات الجرح الظهاري ، بما في ذلك إغلاق الجرح وتكوين الندبات والمناعة الفطرية.

طرق للبشرة إصابة وفحوصات لالردود الجرح في C. ايليجانس

The C. elegans epidermis and cuticle form a simple yet sophisticated skin layer that can repair localized damage resulting from wounding. Studies of wound ...

الهدف العام من التجربة التالية هو إظهار الأساليب المستخدمة لرؤية الجرح والأناقة ، وتصور استجابات البشرة للجرح. يمكن تحقيق ذلك عن طريق جرح البشرة بثقوب صغيرة ناتجة عن وخز من إبرة الحقن المجهري. تستخدم طريقة الجرح الثانية تشعيع الليزر.يمكن إجراء ذلك على المثبتة للفحص المجهري ويسمح بالتصوير الفوري لاستجابة الجرح. أظهرت النتائج أن الجرح يؤدي إلى ارتفاع سريع في الكالسيوم في البشرة ، يليه تراكم حلقة الأكتين حول موقع الجرح الذي يغلق في غضون ساعات قليلة ، مما يسمح للجرح بالتئام الإبرة. وطرق الجرح بالليزر الموضحة هنا هي حاليا أكثر الطرق استخداما لجرح الجلد في الديدان الخيطية C Elgan.تستخدم هذه الطرق لمعالجة الأسئلة الرئيسية في مجال الكلى الجرح مثل كيفية اكتشاف خلايا الجلد للإصابة والاستجابة لها. ضع طبقا يحتوي على الديدان الصغيرة على الجليد لمدة نصف ساعة تقريبا لإبطاء. هذا السبات الناجم عن تقشعر له الأبدان مهم لجرح الإبرة بدقة.نظرا لأن الديدان تتحرك عادة بسرعة كبيرة جدا للجرح تحت المجهر المجسم ، اعرض الديدان واستخدم معول ، انقلها جميعا إلى وسط اللوحة. ثم أمسك إبرة مسحوبة مثل تلك المستخدمة في الحقن الدقيق بطرف ماصة سعة 100 ميكرولتر. كحامل إبرة ، أحضر نقطة الإبرة إلى أي من طرفي الدودة ، وتجنب الغدد التناسلية ، إما بين البلعوم الأس الهيدروجيني الخلفي والغدد التناسلية الداخلية ، أو بين الغدد التناسلية الخلفية والمستقيم.ثم أضف زاوية قائمة تقريبا إلى البشرة. قم بوخزة لطيفة قصيرة تخترق حوالي خمسة إلى 10 ميكرون في الدودة. قد تؤدي جروح الإبرة هذه أيضا إلى تلف الأعضاء الداخلية مثل الأمعاء.انتظر لحظة لملاحظة المحتويات الخلوية المتسربة من الجرح. لا بأس ببضع ثوان من التسرب ، لكن أكثر من ذلك يشير إلى أن الجرح سيكون مميتا. سيكون تصوير استجابات الجرح أسهل إذا تم إجراء الجرح في المخلوي الجانبي للبشرة أو التماس الجانبي.في الجرح بالإبرة ، من الأهمية بمكان إحداث ثقب صغير بدلا من وخز كبير. نظرا لأن السلم يمكن أن يقتل الديدان بسرعة ، فمن الضروري ممارسة التسبب في الحد الأدنى من الضرر اللازم للحث على استجابة الجرح بشكل متكرر: استمر في جرح كل باستخدام نفس الإبرة حتى ينكسر أو يتسخ. مع الخبرة ، جرح جميع ال 25 على اللوحة في خمس دقائق ممكن تماما على وجه التحديد على الديدان الخيطية.يستخدم هذا البروتوكول ليزر مقطع الفيمتو المتصل بخط مجهر بؤري لقرص دوار أو مسح نقطي باستخدام لتر فيمتو فيمتو ثانية مثل تلك الموجودة في مجهجين للصور. يجب أن يكون كافيا أيضا. ابدأ بجمع 10 شباب على وسادة اوجير.قم بشللهم في قطرة ميكرولتر من محلول 12 ملليمول. ثم قم بتغطيتها بقلة غطاء وانتظر بضع دقائق حتى تصاب بالشلل. من الضروري أن يكون مشلولا تماما.12 ملي أكثر لن تؤثر على الاستجابة فقط. ومع ذلك ، يمكن أيضا استخدام طرق أخرى للشلل. تأكد من ضبط طاقة ليزر الفيمتو ثانية على 140 مللي واط كما تم قياسها قبل الهدف وأن معدل تكرار الليزر عند 80 ميجاهرتز.الآن حدد موقع الديدان تحت مجهر متحد البؤر للقرص الدوار باستخدام هدف 100 × مع تركيز فتحة عددية عالية على البشرة المخلوية الجانبية أو الأمامية أو الخلفية للدودة المستهدفة ، مع التركيز على السطح القمي لخلية البشرة. قم بتلميع الليزر لنبضتين مدة كل منهما 200 مللي ثانية مفصولة ب 20 مللي ثانية. يجب أن يكون هذا كافيا لجرح البشرة.انتظر لحظة ولاحظ الاضطراب الموضعي للسيتوبلازم ، والذي سيظهر على شكل فقاعات. في حالة وجود علامة الفلورسنت ، يمكن ملاحظة التبييض الموضعي. يستخدم هذا البروتوكول أناقة C التي تعبر عن مستشعرات الكالسيوم في البشرة مثل G Camp three وتعبر أيضا عن بروتين فلوري أحمر مثل طماطم TD كعنصر تحكم داخلي لمستوى التعبير عن الجينات المعدلة وراثيا.على الرغم من أن كلتا طريقتي الجرح تؤدي إلى ارتفاعات الكالسيوم لتصوير ذلك عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر للقرص الدوار ، يجب استخدام الجرح بالليزر بعد أن يكتسب الجرح صورا بفاصل زمني يبلغ ثانيتين وإثارة وتعرض ليزر يبلغ 114 مللي ثانية. نفس التكبير المستخدم في الجرح بالليزر مناسب على مدار الدورات الزمنية الأطول ، مثل يمكن التقاط صور مدتها ساعتان كل 30 ثانية أو أكثر. يقترح بروتوكول النص إجراءات التحليل.يستخدم هذا البروتوكول الديدان التي تعبر عن علامة F actin موسين GFP تحت سيطرة محفز خاص بالبشرة ، مثل الاتصال 19 بعد ثقافة جرح الإبرة. الديدان المصابة عند حاضنة 20 درجة مئوية لمدة ساعة ثم تأخذ Zacks لتشكيل صورة حلقة الأكتين لفحص ديناميكيات الأكتين مباشرة بعد جرح الإبرة ، ونقل المصابة إلى وسادة مثقاب على شريحة وتخديرها بالليل. ثم قم بتصوير باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر التقليدي.احصل على Zacks بفاصل 0.5 ميكرومتر لمدة ساعة إلى ساعتين لقياس حلقة الأكتين لقياس قطر الحلقة. أولا ، قم بعمل إسقاط أقصى كثافة لمكدس Z وارسم أربعة عمليات مسح للخطوط عند 45 درجة من بعضها البعض عبر MOIs وحلقة GFP. ثم احسب قطر الحلقة كمتوسط مسافة قمة الذروة لعمليات المسح الأربعة للحلقات التي تم إغلاقها.يتم تعريف القطر على أنه ليزر O الصفري أو الجرح بالإبرة يؤدي إلى ارتفاع سريع ومستدام في مستويات الكالسيوم في البشرة كما يتصوره مستشعر الكالسيوم G camp. يظهر منظر جانبي للبشرة في الجسم الأمامي جرح الليزر المميز بنواة البشرة. ينتشر ارتفاع الكالسيوم بسرعة من موقع الجرح يساعد القياس الكمي لمستويات الكالسيوم عند 2040 و 60 ميكرون من موقع جرح واحد في توضيح حركية استجابة الكالسيوم المبكرة.يبقى ارتفاع الكالسيوم لعشرات الدقائق وجرح الإبرة بشكل موثوق. ينتج عنه تكوين حلقات الأكتين التي تغلق تدريجيا في مواقع الجرح في غضون ساعتين. تم تصور ذلك باستخدام P call 19 GFP MOIs في.غالبا ما يتم إنتاج هذه الحلقات عن طريق الجرح الدقيق بالليزر. تم قياس قطر حلقة الأكتون باستخدام مسح ضوئي بأربعة أسطر. يوضح القياس الكمي لعمليات المسح الخطي كيف أن حلقة الأكتين لها شدة مختلفة على مسافات مختلفة من الجرح. موقع.سمح تطوير طرق التئام الجروح هذه للباحثين باستغلال أناقة البحر كنموذج للعديد من جوانب إصلاح الجروح ، بما في ذلك الاستجابات المناعية الفطرية وإغلاق الجروح. لا تنس أن ليزر مقطع الفيمتو يمثل خطورة. يجب أن يكون أي شخص يعمل مع ليزر مقطع Femto قد أكمل تدريبا على سلامة الليزر.

methods-for-skin-wounding-and-assays-for-wound-responses-in-c-elegans

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

يقدم هذا الفيديو طريقة للجرح بالليزر ، والتي تستخدم لإحداث إصابات دقيقة للغاية في بشرة الدودة. بروتوكول العينة مأخوذ من دراسة استجابة الجرح وإصلاحه.

جرح البشرة بالليزر: إحداث ضرر موضعي لفحص عمليات الإصلاح في C. ايليجانس

البشرة الجنينية من الأجنة مرحلة متأخرة جدا ذبابة الفاكهة يوفر نظام في الجسم الحي لتحليل استجابة ثقب الجرح سريعا ويمكن دمجها مع التلاعب الجيني أو علاجات حقن مكروي الكيميائية للمضي قدما دراسات في التئام الجروح للترجمة في نماذج الثدييات.

حقن مكروي الجرح الفحص و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; توطين البشرة الجرح مراسلون الاستجابة في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الأجنة.

يوصف بروتوكول يستخدم نقص الأكسجين / المجاعة في C. ايليجانس لنموذج نقص التروية / ضخه. وتشمل النتائج الفنية زيادة معدل الوفيات، تشوهات واضحة في العمليات العصبية GFP المسمى، وضعف الاستجابات السلوكية التي تتطلب وظيفة الخلايا العصبية.

نموذج نقص الأكسجين المجاعة لنقص التروية / ضخه في<em&gt; C. ايليجانس</em

أدوات جديدة للبحوث ميتشانوبيولوجي هناك حاجة لفهم كيف الميكانيكية الإجهاد ينشط المسارات البيوكيميائية ويتسبب الاستجابات البيولوجية. هنا، نحن عرض طريقة جديدة لتحفيز الميكانيكية الانتقائي للحيوانات المعطل تداولها مع فخ موائع جزيئية السماح بتصوير عالي الدقة من الاستجابات الخلوية.

استخدام جهاز ميكروفلويديكس لتحفيز الميكانيكية وتصوير قرار عالية من C. ايليجانس

هذه المخطوطة يصف كيف شق مثل الآفات على الخلايا الظهارية مثقف مونولاييرس مريح نموذج الجرح الشفاء في المختبر، مما يسمح للتصوير بواسطة [كنفوكل] أو الفحص المجهري بالليزر، والتي يمكن أن توفر جودة عالية البيانات الكمية والنوعية لدراسة سلوك الخلية والآليات المعنية بالهجرة.

مجهرية على أساس أساليب التقييم للهجرة الخلية الظهارية أثناء التئام الجرح في المختبر

يصف لنا غير الغازية في فيفو التصوير البروتوكول تكون مبسطة وفعالة من حيث التكلفة، الاستفادة من L-012، تشيميلومينيسسينت لومينول النظير، تصور والتحديد الكمي للأنواع الأكسجين التفاعلية (روس) التي تم إنشاؤها في نموذج ماوس استئصالية الجرح.

في فيفو تصوير للأنواع الأكسجين التفاعلية في الفاري الجرح النموذجي

هنا، نقدم بروتوكول احتساء الصفر في المختبر باستخدام الخلايا الليفية الأولية ولإجراء اختبار التئام الجروح في الجلد في الجسم الحي في الفئران. كلا الاختبارين هما طريقتان مباشرتان لتقييم الجروح في المختبر وفي الجسم الحي.

فحص الهجرة الصفر وغرفة الجلد السمرة لتحليل في المختبر وفي الجسم الحي للشفاء الجروح

هنا، يتم وصف نموذجين التئام الجروح المورين، واحد يهدف إلى تقييم الاستجابات التئام الجروح الخلوية والسيتوكين والآخر لتحديد معدل إغلاق الجروح. ويمكن استخدام هذه الأساليب مع نماذج الأمراض المعقدة مثل مرض السكري لتحديد آليات جوانب مختلفة من الشفاء الجروح الفقراء.

تقييم التئام الجروح الحادة باستخدام دورسال تحت الجلد بوليفينيل الكحول الإسفنج زرع واستئصال الذيل نماذج الجرح الجلد.

الزرع المستحث بالجرح هو استراتيجية إصلاح الأنسجة المحفوظة حيث تنمو الخلايا في الحجم بدلاً من الانقسام للتعويض عن فقدان الخلايا. هنا هو بروتوكول مفصل حول كيفية استخدام ذبابة الفاكهة كنموذج لقياس ploidy وتنظيمها الجيني في إصلاح الجرح الظهارية.

نموذج دروسوفيليا لدراسة البوليسبليد الناجم عن الجروح

هنا نظهر تقنية محسنة لتقييم إصلاح الجروح باستخدام الجلد البشري السابق vivo جنبا إلى جنب مع نهج تلطيخ جبل كامل. توفر هذه المنهجية منصة ما قبل السريرية لتقييم علاجات الجروح المحتملة.

الإنسان السابق الجسم الحي الجرح نموذج ونهج تلطيخ جبل كامل لتقييم بدقة إصلاح الجلد

تصف هذه الورقة طريقة لإنشاء جروح في ظهارة Clytia hemisphaerica medusa الحية وصورة التئام الجروح بدقة عالية في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم تقنية لإدخال الأصباغ والأدوية لاضطراب عمليات الإشارات في الخلايا الظهارية والمصفوفة خارج الخلية أثناء التئام الجروح.

توصيف التئام الجروح الظهارية في الجسم الحي باستخدام الكائن الحي النموذجي Cnidarian Clytia hemisphaerica

تعلم طرق إصابة جلد C. elegans ودراسة استجابات الجرح في الأنسجة الظهارية. يوضح هذا البحث استخدام الإبر الدقيقة والليزر لتحليل إشارات الكالسيوم وديناميكيات الأكتين في التئام الجروح.

طرق للبشرة إصابة وفحوصات لالردود الجرح في C. ايليجانس

استكشف المزيد من الفيديوهات