عزل وعن طريق أقسام الأبقار الشريان والوريد المساريقي باعتباره الأحيائي لاختبار لVasoactivity في الأمعاء الدقيقة

الهدف العام من هذا الإجراء هو عزل المقاطع العرضية للشرايين والأوردة المساريقية البقرية في رسم بياني متعدد الأبعاد للسماح بفحص المركبات التجريبية لنشاطها الوعري. يتم تحقيق ذلك عن طريق جمع عينة من أنسجة المساريقية من أولا. في الخطوة الثانية ، يتم تنظيف العينة وتقسيم الأوعية.

بعد ذلك ، يتم تثبيت الأقسام وموازنتها على الكسب غير المشروع myo. في الخطوة الأخيرة ، تتعرض الأوعية المعزولة للمركبات ذات الأهمية. في نهاية المطاف ، يمكن استخدام هذا الاختبار الحيوي للشريان والوريد لتقييم نشاط الأوعية الدموية للمركبات وآثارها على تدفق الدم داخل الأوعية الدموية المساريقية البقرية.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية مثل قياس تدفق الدم في الجسم الحي ، هي أنه باستخدام هذه التقنية ، يمكن أن تتعرض أنسجة واحد لمركبات متعددة في وقت واحد. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في متلازمات حيوانية محددة جدا يمكن أن تسبب تضيق الأوعية مثل العكرش أو التسمم أو الإرغوت ، إلا أنه يمكن تطبيقها أيضا على سيناريوهات أخرى قد تهم الباحثين ، مثل المستحضرات الصيدلانية التي يتم تطويرها أو المنتجات الطبيعية. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تطبيقه أيضا ليس فقط على الأوعية الدموية للماشية ، ولكن أيضا على الأوعية الدموية من أي أنواع أخرى من الثدييات.

بعد إزالة الأوعية الدموية من الأنسجة المساريقية ، استخدم زوجا من الملقط لوضع عينة الأنسجة على سطح القطع وغمرها جزئيا في كريبس مثلج بارد دجاج هينزل عازل. ثم باستخدام المجوهرات رقم خمسة والملقط والضوضاء ، يقوم مقص القزحية بتشريح الدهون والأنسجة الضامة المحيطة بالأوعية بعناية. بعد فصل الشريان والوريد ، حدد فتحة الوعاء الدموي في أحد طرفي القسم وامسك اللفافة المحيطة بالوعاء بعناية بالملقط.

ثم حرك طرف المقص أسفل اللفافة المرتفعة لعمل قطع بالمقص الموازي للوعاء. بعد الشق الأولي ، قم بقطع جانبي الوعاء الدموي لفصل الدهون والأنسجة الضامة وتنظيف الوعاء. ضع الأوعية الدموية التي تم تنظيفها في أنبوب جديد من المخزن المؤقت الخفيف Krebs Henzel ، وقم بتخزين الأنبوب عند أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى 24 ساعة.

عندما تكون جاهزا ، استخدم قطاعة الأنسجة للحصول على مقاطع عرضية متسقة للوعاء ذي الأهمية في العدد المطلوب من مقطعين ملليمتريين ، ثم افحص كل قسم بتكبير 12.5 × للتأكد من أن كل عينة لا تحتوي على تشوهات أو فروع أو صمامات أو تلف سطحي تم الحصول عليه أثناء عملية التشريح والتنظيف. قم بتخزين أقسام الأوعية المقطعة المقبولة المغمورة في مخزن Krebs Henzel الخفيف عند أربع درجات مئوية لمدة تصل إلى 30 دقيقة. ثم أدخل الدعامات برفق من خلال تجويف كل عينة ، واستخدم محدد الموضع الصغير على الكسب غير المشروع myo لزيادة التوتر تدريجيا لتركيب الوعاء على الكسب غير المشروع myo.

مع الحرص على عدم تمديد الأوعية فوق قراءة من جرامين إلى ثلاثة جرام. بمجرد تغطية جميع الغرف ، قم بتفريغ المخزن المؤقت من كل غرفة وأعد تعبئتها بخمسة ملليلتر من العازلة الطازجة. بعد أن تتوازن جميع أقسام الأوعية الدموية لمدة 1.5 ساعة لتحقيق توتر راحة مستقر يبلغ غرام واحد عند 500 ميكرولتر من 1.32 مولار كلوريد البوتاسيوم إلى تركيز نهائي 0.12 مولار إلى محلول 5.5 مليلتر ، ويستحم الوعاء.

لا تقم بضبط التوتر يدويا ، حيث سيتم استخدام الاستجابة القصوى لكلوريد البوتاسيوم لتطبيع بيانات المعالجة ، واستبدل المحلول بمخزن مؤقت خفيف جديد من Krebs Henzel على فترات 15 دقيقة حتى يعود التوتر إلى القيمة الأساسية البالغة جرام واحد. بمجرد عودة التوتر إلى خط الأساس ، أضف المعايير في 25 ميكرولتر إلى كل غرفة وفقا للبروتوكول التجريبي. عند إضافة المعيار الأخير ، ابدأ مؤقتا لمدة تسع دقائق.

في نهاية الحضانة ، قم بإزالة المعالجة التي تحتوي على عازلة من الغرف وأضف خمسة ملليلتر من العازلة الطازجة إلى كل غرفة. ثم ابدأ مؤقتا لمدة 2.5 دقيقة بعد الانتهاء ، كرر هذا الشطف لمدة 2.5 دقيقة. مرة ثانية في نهاية الشطف الثاني ، استنشق الغرف.

ثم بعد إضافة مخزن مؤقت جديد مرة أخرى ، ابدأ مؤقتا لمدة دقيقة واحدة للعد التنازلي لبدء الإصدار القياسي الثاني. كما لوحظ في فترات الحضانة التي تبلغ تسع دقائق موضحة هنا ، هناك زيادات تدريجية في الاستجابة للمعايير التي تشير إلى أنه مع زيادة تركيزات العلاج ، فإن إضافة كلوريد البوتاسيوم في ختام التجربة ضرورية لأنها تؤكد صلاحية الأنسجة. يمكن استخدام هذا المقايسة الحيوية لتقييم نشاط الأوعية الدموية للمركبات التجريبية على الأوعية الدموية التي تزود الأمعاء الدقيقة بالعناصر الغذائية ، وكذلك على الأوعية الدموية التي تحمل العناصر الغذائية الممتصة بعيدا.

على سبيل المثال ، في هذه التجربة ، لم يلاحظ أي فرق في الاستجابات الانقباضية الشريانية أو الوريدية بعد خمسة علاجات بالهيدروكسي تريبتامين. على العكس من ذلك ، كانت الاستجابة الانقباضية للوريد المساريقي للتركيزات المتزايدة من النورادرينالين أكبر من استجابة الشريان المساريقي. باتباع هذا الإجراء ، يمكن تعديل الطريقة بشكل أكبر لتشمل ناهضات أو مضادات في المخزن المؤقت التي كانت ذات أهمية خاصة للباحث.

سيسمح ذلك للباحث بفهم مشاركة مستقبلات محددة للغاية والآليات الكامنة وراء الاستجابات الوعائية التي لوحظت أثناء تجربة myo. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية جمع الأوعية الدموية ومعالجتها وعزلها. لتجربتي.