إعداد ميكا المدعومة الدهون طبقات ثنائية لارتفاع القرار المجهر الضوئي التصوير

يوضح الإجراء المقدم هنا طريقة سهلة لإعداد الدهون المدعومة من MICA بطبقات مناسبة للتصوير عالي الدقة ، مثل دراسات تتبع الجزيء الفردي Tur. يتم تحضير سطح MICA عن طريق تقسيم شطيرة من ورقة واحدة من MICA ملصقة بين شريحة المجهر الزجاجي وانزلاق الغطاء باستخدام مادة لاصقة بصرية كشفت سطح الميكا الطازج المسطح والرقيق للغاية. من خلال تركيب غرفة بلاستيكية صغيرة مصنوعة من كوب قارورة سعة واحد ونصف مليلتر ، يمكن أن يصل حجم الحويصلات الدهنية المطلوبة لتكوين الطبقة الثنائية إلى 30 ميكرولترا.

كخطوة أولى ، خذ ورقة MICA متعددة الطبقات لأنها تأتي من المورد وقم بتقطيعها بالمقص إلى قطع أصغر. نشرة إلى منشورين أو ثلاثة منشورات أرق باستخدام شفرة سكين جديدة. الآن قم بتنظيف الغطاء ينام جيدا.

يتضمن ذلك وضع غطاء 0.17 ملم. ينام في وعاء تدريب زجاجي لكل غطاء. نم في فتحة منفصلة وصوتنة في المنظفات لمدة 30 دقيقة عند 60 درجة مئوية.

اغسل الغطاء. ينام من 10 إلى 20 مرة بالماء الصغير ويجفف بتيار من الهواء أو النيتروجين. خذ شريحة زجاجية مجهرية ونظفها في مكانها.

قطرة صغيرة تبلغ حوالي 15 ميكرولترا من اللزوجة البصرية منخفضة اللزوجة على انفجار المجهر والكرة الأرضية سابقا. قص النشرة على صندوق ضوء الأشعة فوق البنفسجية لبضع دقائق. استخدم شريط لاصق لتقشير طبقات قليلة من الميكا.

سيتم تجزئة الطبقات القليلة الأولى ، لذا افعل ذلك حتى ترى تلك الطبقات متصلة بالسكوتش. الشريط موحد وكامل. قم بتغطية الشريط.

ضع قطرة من المادة اللاصقة البصرية عالية اللزوجة على سطح ميكا. تأكد من عدم وجود فقاعات هواء هناك. ضع غطاء النوم النظيف برفق على القطرة الهجومية.

استخدم الملقط للنقر على الزجاج برفق لنشر الآهي. مرة أخرى ، عالج المادة اللاصقة بضوء الأشعة فوق البنفسجية لبضع دقائق. استخدم السكين لتقسيم الساندويتش المكون من الزجاج.

حرك MICA وقم بتغطية السكون. في معظم الحالات ، ستبقى طبقة رقيقة جدا فقط من MICA ملتصقة بغطاء السكون. استخدم مجهر تشريح لفحص سطح MICA عن طريق عمل خدش صغير بطرف إبرة أو ملاقط.

يمكنك بسهولة أن تقول ما إذا كان السطح هو الميكا بالفعل ، حيث يتم خدش السطح بشكل موحد ، مثل هنا أو على المادة اللاصقة البصرية ، كما هو الحال هنا حيث يكون السطح متوهجا. خذ كوبا من قارورة زجاجية سعة مليلتر ونصف ، وقم بإزالة علبة الغاز ، وألصق الغطاء على سطح MICA باستخدام طلاء الأظافر. اتركه يجف لبضع دقائق.

يمكنك الآن تحضير طبقة ثنائية الدهون لإصلاح الدهون بطبقة باستخدام بروتوكول قياسي هنا. يتم وضع قطرة 30 ميكرولتر من الحويصلات الدهنية في حجرة غطاء القارورة وسيتم تحضينها لمدة 60 دقيقة قبل غسل المخزن المؤقت. بعد الغسيل ، تكون العينة جاهزة للتصوير.

في هذه الحالة ، يتم تثبيته في حامل عينة مخصص. يمكن ملاحظة الجزيئات المفردة بسهولة على سطح MICA المحضر. هنا نقارن A-D-O-P-C حسب الطبقة المدعومة على الزجاج والميكا.

لاحظ أن نوع الحركة يختلف اختلافا كبيرا بين هذين السطحين. يظهر مسار الجزيئات المفردة التي تم تتبعها بالألوان في الألواح اليمنى بوضوح أن سلوك الانتشار على MICA يختلف عن سلوك الزجاج. ومع ذلك ، لا يوجد فرق كبير في جودة التصوير.

متوسط نسج الدالة المستقيمة بنصف الكثافة القصوى ل 20 بقعة هو نفسه تقريبا لكلتا الركيزتين ، مما يشير إلى أن سطح MICA قابل للاختراق بالكامل بواسطة الضوء دون إدخال انحرافات بصرية ملحوظة. بشكل عام ، يظهر MSDS اختلافا واضحا في سلوك الانتشار. ومع ذلك ، لكل حالة ، يمكن ملاحظة مجموعتين من الجسيمات تنتشر بمعدلات مختلفة.

تم استخراج معاملين مختلفين للانتشار سريع وبطيء من التغذية الأسية المزدوجة إلى الاحتمال التراكمي للإزاحة المربعة. بالنسبة لهذه الطبقة الثنائية DOPC ، يكون كلا مكوني الانتشار أسرع على سطح MICA ، والجسيمات البطيئة الحركة على MICA أبطأ بحوالي 10 إلى 20 مرة من الجسيمات السريعة. ومع ذلك ، فإن السكان البطيئين على الزجاج يقترب من أن يكونوا غير متحركين هنا.

أظهرنا أن نوع السطح قد يحدث فرقا في سلوك انتشار الطبقات الدهنية الثنائية. وبالتالي ، يجب على المرء توخي الحذر عند مقارنة النتائج بين الدراسات التي أجريت على الطبقات الثنائية المدعومة على ركيزة مختلفة مثل MICA وعادة ما يكون الطبقات الثنائية للتصوير الزجاجي على MICA صعبا للغاية بسبب التحضير المعقد الذي أظهرناه ، ومع ذلك ، بطريقة بسيطة ولكنها فعالة لإعداد مثل هذه الأسطح عالية الجودة.