استخدام التآزر من الخلايا العصبية السلائف والببتيدات الذاتي تجميع في التجريبية عنق الرحم إصابة الحبل الشوكي

الهدف العام من هذا الإجراء هو تقديم نموذج مشبك ضغط كدمة لسرطان النخاع الشوكي العنقي في الفئران ، وبروتوكول للعلاج المشترك الذي يتضمن حقن SAP وزرع NPC. أولا ، يتم وضع مشبك تمدد الأوعية الدموية حول الحبل الشوكي والاحتفاظ به في مكانه لمدة دقيقة واحدة. ينتج عن هذا إصابة ضغط كدمة ثنائية.

بعد ذلك ، يتم حقن SAPs في مركز الإصابة ، ويتم حقن الشخصيات غير القابلة للعب مباشرة بعد حقن SAP. يتم إدخال مضخة تناضحية مع قسطرة تحت الجافية للتوصيل المستدام لعوامل النمو. ينتج عن هذا الإجراء توصيل الشخصيات غير القابلة للعب إلى الحبل الشوكي المصاب.

يتم دعم بقاء ونقش الشخصيات غير القابلة للعب من خلال العلاج الاندماجي مع SAP وعوامل النمو. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو علاج إصابة الحبل الشوكي الرضحية لأنها توفر نموذجا ذا صلة سريريا يمكن استخدامه لدراسة علاجات COMBINATOR القائمة على الخلايا التي تعزز تجديد الحبل الشوكي. تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي التالي من قبل لجنة رعاية التابعة لشبكة الصحة الجامعية ، تورنتو كندا ، وهو متوافق مع السياسات المحددة في دليل رعاية واستخدام التجارب التي أعدها المجلس الكندي لرعاية.

يجب إجراء جميع العمليات الجراحية في ظروف معقمة باستخدام معدات ومحاليل معقمة ، ووفقا لإرشادات المؤسسة والحكومة ، يستخدم هذا الإجراء فئران تزن 250 إلى 270 جراما قبل بدء الإجراء. تزويد بالمضادات الحيوية في مياه الشرب لمدة يومين في يوم الإجراء. بعد وضع الجرذ في غرفة التخدير وتحفيز التخدير باستخدام 5٪ فلور ISO في أكسجين واحد إلى واحد وأكسيد النيتروز لمدة دقيقة واحدة ، قلل فلور ISO إلى 1.8 إلى 2.2٪ ضع مرهم الضأن على العينين وتأكد من التخدير الجراحي عن طريق إجراء قرصة مخلب.

ثم ضع الجرذ على وسادة ساخنة وقم بتثبيت الرأس في إطار تجسيمي بمخروط أنف. بعد حلق الفراء حول العمود الفقري العنقي ، قم بتطهير الجلد عن طريق المسحة باليود بوفيدون ، متبوعا بنسبة 70٪ من الإيثانول بعد إجراء شق في خط الوسط من منطقة الفقرتين العنقيتين C إلى العملية البارزة للجسم الفقري الصدري T الثاني. استخدم مقصا جراحيا لقطع الطبقة الخارجية لعضلات العمود الفقري مباشرة على خط الوسط في اتجاه تدلل القحف ، واستخدم مقصا جراحيا لتشريح طبقات العضلات العميقة حتى يتم الوصول إلى العملية والداء والرقائق.

أدخل المنقلات واحتفظ بها. افتح طبقات العضلات ، ثم قم بتوجيه العملية البارزة لجسم الفقرتين T وحدد المستويات المستهدفة لاستئصال الصفيحة الفقرية. ثم استخدم مشرط رقم 15 لقطع رقائق الرباط لفك اللاميني ووضعية العملية.

بعد ذلك ، استخدم مقص العظام لقطع اللاميني الجانبي إلى الحبل الشوكي وإزالة اللاميني برفق دون ضغط الحبل الشوكي. الآن خذ لحظة لتحديد جذور الأعصاب الناشئة لتجنيبها من القص. ثم استخدم خطافا لفك الجافية البطنية من الجانب الظهري للأجسام الفقرية وإعداد ممر للمقطع.

تأكد من ضبط الزنبرك الحلقي للمشبك لتقديم القوة المطلوبة. تحدد قوة القصاصة مدى الصدمة والضغط. أدخل المشبك المفتوح حول الحبل الشوكي واتركه يغلق لإحداث إصابة كدمة.

غالبا ما تستخدم قوى القصاصة التي تتراوح بين 15 و 35 جراما مع مدة قص مدتها دقيقة واحدة بعد إجراء إصابة الحبل الشوكي. قم بإزالة المشبك وأغلق العضلات في طبقتين ، متبوعا بإغلاق الجلد. بمجرد إغلاق الجرح بشكل صحيح ، أوقف التخدير وراقب الفئران أثناء استيقاظها.

بعد أن يستعيد وعيا كافيا للقص ، راقد ، ضع الجرذ في قفص نظيف. نظرا لشدة هذا النوع من الإصابات ، من الضروري اتباع علاجات ما بعد الجراحة التالية. أولا ، تأكد من إعطاء مسكنات الألم مثل البوبرينورفين والميلوكسيكام لمدة ثلاثة إلى خمسة أيام حسب الأعراض.

أيضا منع الجفاف تحت الجلد. حقن خمسة إلى 10 ملليلتر من المحلول الملحي مرتين يوميا لمدة ثلاثة أيام ، والاستمرار في توفير المضادات الحيوية في مياه الشرب لمدة خمسة أيام. بعد الجراحة. اضغط على المثانة البولية مرتين إلى ثلاث مرات في اليوم حتى يظهر التعافي المستمر لوظيفة المثانة حتى بعد تعافي.

تأكد من مراقبة التي تم تشغيلها بحثا عن العجز العصبي والحالة الفسيولوجية. يتم إجراء الحقن بعد 14 يوما من إصابة الحبل الشوكي. قبل البدء في الجراحة ، قم بإعداد SAPs بتركيز 1٪ من الوزن لكل حجم في ماء معقم ، واملأ شعيرات شعرية زجاجية 100 ميكرومتر متصلة بحقنة هاميلتون.

باستخدام الحل ، قم بتوصيل حقنة هاميلتون بالإطار التجسيمي. بعد التخدير ، يقوم الجرذ بلصق الرأس في الإطار التجسيمي وتطهير موقع الجراحة باليود بوفيدون و 70٪ كحول. كما كان من قبل ، مرة أخرى ، بعد فتح الجلد ، قم بتشريح زوج عضلات العمود الفقري بعناية وإدخال الضاعات.

استخدم مشرط رقم 15 لإزالة النسيج الندبي من الجافية وإعادة تعريض موقع الآفة. ثم استخدم طرف إبرة حادة لفتح الجافية بعناية. أخيرا ، من الناحية التجسيمية ، أدخل الشعيرات الدموية الزجاجية على عمق ملليمترين في الحبل الشوكي المصاب بصدمة وحقن SAPs.

بعد حقن SAPs ، اسمح للشعيرات الدموية بالبقاء في موقع الحقن لمدة دقيقة واحدة قبل الإزالة للسماح لتمدد الأنسجة باستيعاب المحلول المحقون. ثم كرر الحقن في الموقع التالي. هنا ، تم عزل الشخصيات غير القابلة للعب من المنطقة المجاورة للبطينين للفأر الأحمر DS البالغ وزراعتها وفقا للإجراءات المنشورة سابقا.

قبل الحقن الدقيق مباشرة ، قم بتخفيف الشخصيات غير القابلة للعب في وسط النمو إلى تركيز 50 في 10 إلى الخلايا الحية الثالثة لكل ميكرولتر لزرع الخلايا وتحميلها في شعرية زجاجية على حقنة هاميلتون. يتم حقن الشخصيات غير القابلة للعب مباشرة بعد حقن SAPs. للقيام بذلك ، أدخل الشعيرات الدموية الزجاجية لحقنة هاميلتون عند 0.2 ملم منقاري لموقع الإصابة و 1.5 ملم تحت السطح الظهري للحبل الشوكي.

حقن ميكرولترين من تعليق الخلية بمعدل حوالي 0.5 ميكرولتر في الدقيقة. بعد اكتمال الحقن الأول ، اترك الشعيرات الدموية في الحبل الشوكي لمدة دقيقة واحدة كما كان من قبل ، ثم اسحب الشعيرات الدموية ، وانقلها إلى موقع مجاور وكرر إجراء الحقن. بعد الانتظار لمدة دقيقة ، كما كان من قبل ، قم بسحب الشعيرات الدموية وتحريكها ملليمترين إلى موقع الإصابة.

قم بإجراء حقنتين ميكرولتر في هذا الموقع. توضح هذه الصورة جميع مواقع الحقن المتعلقة بإصابة الحبل النخاعي. يتم إجراء زرع المضخات التناضحية المصغرة تحت الجافية لدعم عامل النمو مباشرة بعد حقن NPC.

اختر أولا موقع الزرع. المواقع المفضلة هي الأجنحة الجانبية لمنطقة الصدر البطني لتجنب الانزعاج الناجم عن المضخة نفسها. بعد تطهير المنطقة كما كان من قبل ، يتم إعداد استراحة تحت الجلد للمضخة.

بعد ذلك ، قم بإجراء استئصال الصفيحة الفقرية تخطي الفقرات العلوية أو السفلية المجاورة لإصابة الحبل الشوكي. هنا ، تم إجراء إصابة الحبل الشوكي في C سبعة T واحد ، وبالتالي يتم إجراء استئصال الصفيحة الفقرية في C خمسة. الآن ضع المضخة في التجويف تحت الجلد ، ثم قم بقص القسطرة بالطول اللازم ، وأخيرا استخدم 6.0 خيوط لتثبيتها على زوج من عضلات العمود الفقري.

تجنب أي خلع مرتبط بالحركة. استخدم طرف إبرة حادة لفتح الجافية أسفل استئصال الصفيحة الفقرية. ثم أدخل القسطرة في الفراغ تحت الجافية واتركها تنزلق في اتجاه التدليل دون مقاومة ودون إصابة الحبل.

الآن ، تأكد من أن القسطرة تعمل بسلاسة ولا تحتوي على أي مكامن الخلل أو الطيات كما هو موضح هنا. ثم أغلق العضلات طبقة تلو الأخرى باستخدام الغرز أو المشابك ، ثم أغلق الجلد. بمجرد إغلاق الجرح بشكل صحيح ، أوقف التخدير وراقب أثناء استيقاظه.

بعد أن يستعيد وعيا كافيا للاستلقاء القصي ، ضع الجرذ في قفص نظيف. تأكد من اتباع جميع إجراءات العلاج بعد الجراحة ، بما في ذلك مراقبة والمسكن بعد الجراحة. يجب إعطاء العلاج المثبط للمناعة قبل يومين من حقن NPC وحتى سبعة أيام بعد الزراعة وحتى التضحية على التوالي.

تظهر صورة المجهر الفلوري هذه قسما طوليا من الحبل الشوكي المصاب بصدمة لفأر. التلوين هو DPI fluorescence SAPs المسمى QL ستة. تظهر Fite باللون الأخضر وتجمعت في مركز الآفة.

انتشرت الشخصيات غير القابلة للعب الموجبة الحمراء المحقونة DS في الاتجاهين المنقاري والتدليل المشار إليه بواسطة التألق الأحمر. يمثل شريط المقياس خمسة ملليمترات. تظهر هنا صورة مجهر إلكتروني ماسح تشكيل سقالة من الألياف النانوية لأجهزة SAPs المجمعة.

شريط المقياس ميكرومترا واحدا. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد للإجراءات الجراحية التي ينطوي عليها ضغط المقطع ، اصابات النخاع الشوكي ، وكيف يمكن دراسة النهج الواعد للعلاج المشترك مع SAPs و NPCs في هذا النموذج.