نظام Swimmeret من جراد البحر: دليل عملي للتشريح من الحبل العصب وخارج الخلية تسجيلات من نمط للسيارات

الهدف العام من هذا الإجراء هو تشريح الحبل العصبي البطني من جراد البحر من أجل استخدامه في الدراسات الفيزيولوجية الكهربية. يتم تحقيق ذلك عن طريق تخدير جراد البحر أولا. بعد ذلك ، يتم إجراء تشريح إجمالي لعزل الصفيحة البطنية لجراد البحر.

ثم يتم إجراء تشريح دقيق لعزل الجهاز العصبي المركزي تماما من العقد الرايك إلى العقد البطنية. ستة. أخيرا ، تتم إزالة غمد العقدة من جميع العقد لتسهيل التجارب الفيزيولوجية الكهربية.

في النهاية ، يتم استخدام سلسلة العقد البطنية للتسجيلات الإضافية أو داخل الخلايا. لدراسة تنسيق مولدات الأنماط المركزية أو للتحقيق في التشكل والسياق المشبكي للخلايا العصبية المحددة. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال علم الأعصاب ، مثل توفير خبرة عملية في وظيفة الشبكة العصبية لتكون قادرة على تسجيل ضجة fic FLA في الجهاز العصبي المعزول ، أو لتوصيف مورفولوجيا العقد البطنية أو خلايا عصبية معينة.

على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة لنظام معدل السباحة لجراد البحر. يمكن تطبيقه أيضا على أنظمة أخرى مثل الشبكة العصبية التي تقود سلوك قلب الذيل في جراد البحر العمل مع جراد البحر Pacific Stacia Linea Guus. بعد تخدير وفقا لبروتوكول النص ، أمسك الجانب البطني لأعلى واستخدم مقصا قويا لقطع كلا المخالبين في قاعدتهما بالقرب من الصدر.

ثم قم بإزالة قرون اليورو اليمنى واليسرى. ضع الجانب البطني للحيوان لأعلى في طبق تشريح مبطن بالحميض الأسود قبل استخدام المحلول الملحي البارد للتغلغل من خلال فتحة المخلب. بعد ذلك ، استخدم مقصا قويا لعمل قطع عرضي واحد خلف عيون جراد البحر لقطع رأسه.

ثم قم بإزالة جميع أرجل المشي بالقرب من المفاصل الأساسية لعزل البطن مع آخر أجزاء الصدر من بقية الصدر. أدخل طرف المقص في فتحة ساق المشي الثانية واقطعها إلى الجانب الآخر. بعد تمديد الجرح إلى كلا الجانبين من خلال الصدر وتعريض بعض الأعضاء الداخلية كما هو موضح في بروتوكول النص ، قم بإزالة الجزء الأمامي من الصدر.

الآن قم بإزالة الأعضاء الداخلية وشطف بمحلول ملحي بارد. استمر في التشريح بقطع في أقصى وضع جانبي بين الجوف والجرذان السباح من خلال طول الصفيحة القصية بالكامل. قم بعمل نفس القطع على الجانب الآخر.

ضع الجانب البطني لبطن جراد البحر لأعلى في طبق التشريح. استخدم دبابيس الحشرات لتثبيت العينة للخلف عند التيلسون وللأمام عند بقايا الكاراباز. املأ الطبق بمحلول ملحي جراد البحر بحيث يغطي العينة.

استخدم ملقطا خشنا في اليد اليسرى للإمساك بفتحة ساق المشي وسحب العينة لفتحها. حدد خيوط العضلات المثنية الظهرية الكبيرة. قم بإصلاحها وقطع قواعدها البطنية وكذلك الشريان القصي.

كشف العقد البطنية الأولى A واحد والأعصاب المرتبطة بها N واحد N اثنين. ننتقل الآن إلى الجزء الثاني من البطن. قم بإزالة أساس خيوط العضلات بالقرب من الأساس البطني.

العقدة البطنية A two مرئية الآن مع الأعصاب المرتبطة N واحد و N اثنين و N ثلاثة. قم بعبور الأعصاب N ثلاثة في أبعد موضع من الحبل العصبي. كرر هذه الخطوات لأجزاء البطن الثلاثة التالية مع العقد البطنية.

ثلاثة إلى خمسة. عند الوصول إلى العقدة البطنية ، ستة. قطع الصفيحة القصية الخلفية إلى أعصاب ستة.

احتفظ بالجزء البطني وقم بتثبيته. الجانب الظهري لأعلى في الطبق المليء بالمحلول الملحي تحت المجهر. استخدم الملقط لإزالة الأجزاء الأمامية من المؤخرة الصدرية الرأسية.

ثم قطع العضلات بين الهياكل الهيكلية الخارجية المتبقية. بعد رفع الطرف الأمامي للحبل العصبي البطني بعناية ، قم بقطع الأعصاب الصدرية بشكل جانبي. ركز على واحد وقم بقص الأعصاب N واحد و N اثنين من واحد بحد أقصى سنتيمتر واحد في الطول لتثبيتها.

بعد ذلك ، انتقل إلى A اثنين وحدد الأعصاب الثلاثة N واحد و N اثنين و N في هذا الجزء. الأعصاب ن واحدة من العقد البطنية, اثنان إلى خمسة. تقيم بين اثنين من الجدية القصية في تتكشف في كل جزء وتغطيها العضلات.

ثم بدءا من الحافة الجانبية للبطن ، قم بعمل قطع واحد على طول الطي الجلدي القصي الخلفي ، والمضي قدما نحو خط الوسط بعد الكشف عن N واحد وفقا لبروتوكول النص. إذا لزم الأمر ، قم بقطع العصب بعيدا قدر الإمكان. انتقل إلى الجانب المقابل وابدأ في عزل العصب N واحد من خط الوسط بالقرب من العقدة متقدما نحو الحافة الجانبية عن طريق القطع على طول الطوى الجدية القصية الخلفية.

الآن قم بقص الأعصاب N اثنين من هذه العقدة بطول مناسب للتثبيت. ثم كرر الخطوات الموضحة للعقد البطنية. اثنان مقابل ثلاثة إلى خمسة في أقصى مكان ممكن.

قطع أعصاب العقدة ستة. استخدم الملقط للاستيلاء على أعصاب متعددة من ستة لرفع العقدة والبدء في عزل سلسلة العقد من الصفيحة القصية. بعد عزل الحبل العصبي تماما ، انقل سلسلة العقد إلى طبق بتري مبطن بواقي عتبة شفاف ومملوء بالمحلول الملحي باستخدام دبابيس صغيرة مقطوعة من سلك الفولاذ المقاوم للصدأ أثناء تطبيق لمسة مطاطية لطيفة.

قم بتثبيت سلسلة العقد في خط مستقيم مع ترتيب الحبل العصبي على الجانب الظهري لأعلى. احتفظ فقط بالعقد الصدرية الأخيرة وقم بتثبيت الأعصاب الصدرية على الجانب. قم بتثبيت أعصاب واحد بزاوية 90 درجة بالنسبة للحبل العصبي.

ثم انتقل إلى اثنين وقم بتثبيت الأعصاب N اثنين بزاوية 35 إلى 45 درجة بالنسبة للحبل العصبي. بمجرد فصل الأعصاب N واحد وتثبيتها وفقا لبروتوكول النص ، قم بتثبيت الفرع الأمامي للعصب N واحد بزاوية 90 درجة على الحبل العصبي. ثم قم بتثبيت الفرع الخلفي للعصب N واحد بين فرع N الأمامي والعصب N اثنين.

نظرا لأن جميع العقد البطنية يجب أن تكون مغلفة ، استخدم مقصا زنبركيا ناعما لعمل قطع جانبي صغير من خلال غمد العقدة الخلفي للعقدة وبين الأعصاب N اثنين و N ثلاثة. قطع عرضيا عبر الغمد فوق الضامة. ثم استمر في قصه على طول الحدود الجانبية للعقدة قبل إزالة الغمد.

إذا لزم الأمر ، استخدم ملقطا دقيقا لرفع الغلاف لإجراء تسجيلات خارج الخلية. بعد إعداد الأدوات والكواشف المدرجة في بروتوكول النص ، ضع سلسلة العقد على طاولة المجهر وتضيء من الأسفل. أدخل قطب التسجيل في واقي الylyl بالقرب من العصب المستهدف والقطب المرجعي في موضع قريب ولكن جانبي للعقد.

ثم ثني العصب المستهدف حول التسجيل. بعد شد العصب وتثبيته ، استخدم حقنة مملوءة بالفازلين وإبرة قياس 20 طرفا مستديرة لعزل العصب المستهدف عن محلول الاستحمام. كرر هذا لجميع الأعصاب التي يحتاج نشاطها إلى تسجيل النشاط.

أخيرا ، ابدأ التسجيل كما هو موضح هنا ، يبدأ نشاط PS خارج الخلية ل PS المماثل اثنين إلى PS خمسة خلايا عصبية حركية بانفجار PS في خمسة وتنتشر موجة الإثارة في الاتجاه الأمامي. بالإضافة إلى ذلك ، يظل الوقت المقاس من بداية انفجار واحد إلى بداية الانفجار التالي في كل جزء ثابتا ويتم تعريفه على أنه فترة فترات الإيقاع والانفجار. يمكن أن تختلف الفترات بين الاستعدادات المختلفة ، لكن تأخر الطور بين الأجزاء يظل ثابتا عند ربع الدورة تقريبا بغض النظر عن تكرار الإيقاع.

يمكن رؤية أنماط التنسيق هذه بشكل أفضل في الرسوم البيانية للطور المبين هنا. هنا باستخدام أقطاب كهربائية دقيقة حادة ، تظهر التسجيلات داخل الخلايا من تشعبات الخلايا العصبية Ps.Motor تذبذبات الخلايا العصبية الفردية مع النشاط المسجل خارج الخلية لجميع الخلايا العصبية الحركية PS من نفس العقدة النصفية. لتحديد الخلايا العصبية المسجلة داخل الخلايا ، يمكن ملء الخلايا باستخدام أقطاب كهربائية دقيقة حادة ورحلان الأيونات.

في هذا الشكل ، تقع الصودا البطنية لاثنين من الخلايا العصبية الحركية المملوءة ب PS خلف قاعدة العصب N واحد. المشاريع العصبية الأولية من الأمام وفروع داخل حبوب منع الحمل العصبية الجانبية. يتدفق المحور العصبي عبر الفرع الخلفي للعصب N واحد إلى العضلات.

بمجرد إتقانها ، يمكن إجراء هذه التقنية في غضون 45 دقيقة إلى ساعة إذا تم إجراؤها بشكل صحيح. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تغيير المحلول الملحي على فترات منتظمة للحفاظ على صحة الأنسجة العصبية. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل التسجيل داخل الخلايا للخلايا العصبية الحركية أو الخلايا العصبية من أجل الإجابة على أسئلة إضافية مثل تحليل الآلية الخلوية للتنسيق أو قياس التيارات الأيونية أو دراسة تأثير المعدلات العصبية على النشاط الإيقاعي لخلايا معينة.