عالية الدقة المجهر الإلكتروني ل هيليكوباكتر بيلوري CAG النوع الرابع إفراز نظام بيلي المنتجة في ظروف مختلفة من توافر الحديد

يصور الإجراء فرط الإنتاج لنظام إفراز CAG من النوع الرابع PII ، والذي يحدث في ظل ظروف الحد من الحديد ، والثقافة الأولى h pylori في ظل ظروف الحد من الحديد. الخطوة الثانية هي الزراعة المشتركة لبكتيريا h pylori مع الخلايا الظهارية المعدية. بعد ذلك ، قم بمعالجة عينات الزراعة المشتركة لمسح المجهر الإلكتروني.

في نهاية المطاف ، الفحص المجهري الإلكتروني الماسح عالي الدقة كما هو مستخدم لإظهار زيادة إنتاج نظام الإفراز من النوع الرابع CAG في ظل ظروف الحد من الحديد. هذه التقنية في هذه المخطوطة مهمة للأمراض المرتبطة ب h pylori مثل سرطان المعدة لأن نظام إفراز CAG من النوع الرابع يرتبط بزيادة خطر الإصابة بنتائج مرضية سلبية. وبالتالي ، فهم أفضل لتنظيم هذا السطح البكتيري المهم.

يمكن أن تكشف العضية عن أهداف جديدة للعلاج الكيميائي وميزة الفحص المجهري الإلكتروني الماسح عالي الدقة مقابل الطرق الحالية مثل الفحص المجهري الفلوري هي أنه يمكن تصور حبوب الإفراز الفردية من النوع الرابع الأول. يعاني الأفراد الجدد في هذه الطريقة من المجهر الإلكتروني من مشاكل في الإجراء ، وتحديدا الكيمياء الرطبة لأنها تتطلب توقيتا دقيقا ويدا حساسة على الدم. تنمو لوحات أجار.

H Pylori PMs ، S بكتيريا واحدة ، ومتحولة CAG e متساوية الجين ، والتي تفتقر إلى نظام إفراز من النوع الرابع الوظيفي. تلقيح الثقافات ومرق إيلا المعدل المكمل بالكوليسترول لينمو بين عشية وضحاها. البذرة التالية ، تنزلق الخلايا الظهارية المعدة البشرية GS على غطاء معالج بالبولي ليسين في 12 لوحة بئر لظروف مختلفة لتوافر الحديد.

خفف h pylori إلى كثافة بصرية 600 من 0.3 في مرق برو المعدل وحده. وسائط تحتوي على 100 ضرس صغير من كلوريد الحديد ، و 200 ميكرومولار من قحافة مخلب الحديد الاصطناعية أو 200 ميكرو من القحافة بالإضافة إلى 200 ضرس صغير من ثقافة كلوريد الحديد. تقوم العينات لمدة أربع ساعات الآن بالطرد المركزي للبكتيريا عند 1000 Gs وتعلق Resus الكريات في حجم متساو من مرق برو الطازج المعدل المكمل بالكوليسترول.

قياس الكثافة البكتيرية. بعد ذلك ، قم بإصابة الخلايا الظهارية ب h pylori في تعدد العدوى من 20 إلى واحد. قم بإجراء عمليات تخفيف متسلسلة وقم بوضع الخلايا البكتيرية على ألواح أجار الدم.

لتقييم صلاحية الخلايا البكتيرية ، ضع المزارع المشتركة في حاضنة زراعة الخلايا لمدة أربع ساعات. صب المادة الطافية من ثقافات h pylori I و GS co. اغسل الخلايا الملتصقة برفق ثلاث مرات باستخدام محلول 0.05 مولار من الصوديوم.

ثم قم بإصلاح العينات لمدة ساعتين إلى أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اغسل العينات ثلاث مرات باستخدام 0.05 مولار من طبقة الصوديوم ca. للتثبيت الثانوي ، أضف 0.1٪ رابع أكسيد الأوزميوم في 0.05 مولار من طبقة الصوديوم في خطوتين متتاليتين للتثبيت مدة كل منهما 10 دقائق.

ثم بعد ثلاث غسلات ، قم بتجفيف العينات بتركيزات متزايدة من الإيثانول. ضع العينات في آلة تجفيف النقاط الحرجة ، ثم املأ الغرفة بثاني أكسيد الكربون السائل. يتم تطهير الإيثانول من الغرفة وتملأ الغرفة مرة أخرى بثاني أكسيد الكربون السائل.

ثم يتم نقل العينة إلى النقطة الحرجة البالغة 31.1 درجة مئوية و 1073 رطل لكل بوصة مربعة الآن ، وقم بتركيب الغطاء على بذرة عينة SEM من الألومنيوم ورسم خط رفيع من الفضة الغروية عند حافة العينة للتأريض. أثناء تصوير SEM ، باستخدام آلة طلاء الرش ، قم بتغطية العينات بخمسة نانومتر من البلاديوم الذهبي لزيادة إشارة الإلكترون الثانوية وتأثير الحافة. افحص العينات باستخدام مسدس انبعاث ميداني صورة مجهر إلكتروني في وضع فراغ عالي على مسافة عمل من خمسة إلى 10 ملليمترات.

اضبط الجهد المتسارع على خمسة كيلو فولت. ثم اضبط حجم البقعة على اثنين إلى 2.5. الآن قم بإمالة العينة بين 15 إلى 25 درجة لتحقيق رؤية أفضل لواجهة العامل الممرض المضيف لعرض التكبير العالي.

الأولوية لتصوير البكتيريا التي تلتصق بحواف الخلايا الظهارية لبكتيريا احترار الحياة PI المخصبة في تفاعلات مسببات الأمراض المضيفة. افتح ملفات الميكروغراف في برنامج الصورة J. حدد pi li كهياكل تتشكل بين الخلية البكتيرية والخلية المضيفة بعرض موحد من 10 إلى 13 نانومتر وطول 60 إلى 150 نانومتر.

بمعايرة أداة القياس عن طريق رسم خط باستخدام أداة الخط المستقيم ثم النقر فوق علامة التبويب تحليل من القائمة المنسدلة. حدد مقياس التعيين وأدخل قيمة شريط التكبير تحت مسافة معروفة واضبط وحدة الطول على النانومتر. ثم انقر فوق موافق.

استخدم الآن أداة خط مستقيم للرسم على طول أو عرض الطيارين ثم اضغط على Control M لقياس كل طيار وتسجيل القيم المقاسة في برنامج جداول بيانات. استخدم معلمات الطول والعرض المحددة مسبقا لتجاهل الميزات التي لا تتناسب مع ملف تعريف نظام الإفراز من النوع الرابع CAG. ثم حدد عدد PI I بناء على القيم الموجودة ضمن النطاق ، وتحليل إحصائي لقياس PI LI باستخدام اختبار T للطالب ثنائي الذيل.

في هذه التجربة ، تمت زراعة h pylori في ظروف مستنفدة للحديد باستخدام الغمس البارياتالي الخلبي الاصطناعي بتركيزات لا تمنع النمو بشكل كبير. أنتجت البكتيريا العديد من CAG نوع أربعة نظام إفراز PII عند الزراعة المشتركة مع خلايا المعدة البشرية. على العكس من ذلك ، عند وجود مصدر خارجي للحديد المغذي ، يتم قمع تكوين نظام إفراز CAG من النوع الرابع PII.

يكشف القياس الكمي لمعلومات تحديد الهوية الشخصية في واجهة العامل الممرض المضيف أنه في ظروف تقييد الحديد ، تظهر h pylori زيادة مضاعفة في عين PI لنظام إفراز CAG من النوع الرابع ، وتزداد النسبة المئوية للخلايا المتراكمة بنسبة 11٪ مقارنة بالخلايا المزروعة في الوسط وحده. ومن المثير للاهتمام ، على الرغم من أن نشاط نظام الإفراز من النوع الرابع CAG كما تم قياسه بواسطة إفراز المضيف IL الثامن يتم تعزيزه في ظل ظروف تقييد الحديد وقمعه في ظل ظروف توافر الحديد الزائد ، إلا أن أبعاد PI LI تظل متسقة بين جميع شروط توافر الحديد. تمشيا مع مشاركة نظام إفراز CAG من النوع الرابع ، لا يغير توافر الحديد التكوين الحيوي ل PI LI على سطح CAG e متحولة بعد تطوره.

مهدت تقنية SEM هذه الطريق للباحثين في مجال نظام إفراز CAG من النوع الرابع لاستكشاف توطين البروتين. فيما يتعلق بالوسائد نظام الإفراز من النوع الرابع CAG. في الآونة الأخيرة ، تم اكتشاف أن البروتين المستجيب CAG A يترجم إلى طرف حبوب منع الحمل من النوع الرابع.