Name: الأمثل السابقين البيضة التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: تعلم تقنية زراعة خارج البيضة المحسّنة لأجنة الدجاج لمتابعة التطور الجنيني من المرحلة 19 إلى 40. هذه الطريقة مفيدة للطلاب والباحثين في مختبرات علم الأحياء التنموي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ونود أن نشكر بول بوارييه، ومنتج وسائل الإعلام، في جبل جامعة سانت فنسنت لعمله في تصوير وتحرير جزء الفيديو من هذه المخطوطة. ونحن نعترف العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا للحصول على التمويل.

ملاحظة: يتم سرد كافة الإمدادات في الجدول 1. 1. تخزين الأجنة الدجاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان بيض الدجاج من سلالة جالوس جالوس أفقيا عند 37 درجة مئوية مع ما يقرب من 40٪ الرطوبة وتحويل البيض مرة أو مرتين يوميا. تحول البيض المهم لمنع الجنين من الانضمام إلى قشر البيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لا لتحويل البيض في ساعة 24 قبل إنشاء ثقافة وإلا سوف يكون موجودا الجنين بطني إلى كتلة صفار البيض وسوف يكون معطوبا على فتح البيض في الخطوة 3. وبالإضافة إلى ذلك، والحفاظ على البيض عند 4 درجة مئوية درجة لمدة لا تزيد على أسبوع قبل الحضانة في التنمية &quot;وقف&quot; ولكن هذه ليست مثالية. </li></ol> 2. التدريج الأجنة الدجاج <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استضافة أجنة الدجاج باستخدام همبرغر وهاميلتون 12 الجدول التدريج. مرحلة مثالية لإقامة زراعة-البيضة السابقين هي HH مرحلة 19-20 (حوالي 3- يوما من الحضانة) تيروause هذا بعد فترة وجيزة يتحول الرأس في 53 HPF. ملاحظة: يتميز صاحب السمو مرحلة 19-20 من الصفات المورفولوجية التالية: يتم تمديد somites في الغالبية العظمى من الذيل، ولكن النهاية من الذيل يبقى unsegmented، وكرة لولبية من المهد ذيل، والسقاء صغير والأوعية الدموية محدودة، المحطة براعم هي أكبر من الجناح البراعم والعيون unpigmented أو لديها هوى رمادي. </li></ol> 3. إزالة الأجنة من شل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل إزالة الجنين من قذيفة، رش قذيفة مع الايثانول 70٪ واتركه حتى يجف. لا تتحول البيضة بسرعة حيث سيؤدي ذلك إلى تلف الجنين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> والحرص على عدم تغيير اتجاه البيض، والكراك بعناية البيض على الجانب السفلي (أي الجانب الذي كان بطني أثناء الحضانة) والافراج عن الجنين في عقيمة تزن قارب (88 س 88 × 23 ملم). مسح أسفل تزن القوارب مع 70٪ من الإيثانول. تفقد الجنين للتأكد من أن الكيس المحي غير تالف. إذا صفار حكما مكسورة، وتجاهل الجنين، كما انها لن البقاء على قيد الحياة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الجنين للتأكد من أنها غير قابلة للتطبيق. كان القلب ينبض، يظهر الأوعية الدموية العادية، ولا تشوهات واضحة موجودة. تأكد من أن حواف تزن قارب جافة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ماصة، وانخفاض 40 ميكرولتر من البنسلين / الستربتومايسين (5،000 وحدة البنسلين، 5 ملغ الستربتومايسين لكل مل) على أعلى من الألبومين للمساعدة في منع العدوى. </li></ol> 4. إعداد غرفة الرطوبة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كومة صغيرة من كيم مناديل و / أو وسادة ماصة مصنوعة من القطن في الجزء السفلي من وعاء من البلاستيك معقمة (12 × 12 × 6 سم) تمحى مع 70٪ من الإيثانول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة الماء المعقم، المقطر لترطيب كيم مناديل و / أو القطن (حوالي 150 مل من الماء). </li></ol> 5. تجميع البيضة السابقين الثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع وزن القارب الذي يحتوي على الجنين في أعلى الحشو رطبة. ثم، ومكان النصف من مربع معقم بتري طبق (9.5 X 9.5 سم) على رأس ركان وزن القارب لتشكيل غطاء فضفاض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغطية حاوية بلاستيكية مع غطاء لها. اضغط لأسفل ركنين من الغطاء، وضمان وجود ختم الجزئي الذي لا يزال يسمح لتدفق الهواء جيدة داخل الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع بعناية الإعداد إلى C حاضنة 37 درجة حتى المرحلة المطلوبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع حاويات من المياه في الحاضنة للمساعدة في السيطرة على الرطوبة، وإذا حاضنة الرطوبة تسيطر عليها غير متوفرة. تعقيم جميع المياه في غرف الرطوبة والحاضنة وتجديد حسب الحاجة أثناء فترة الحضانة. 40٪ نسبة الرطوبة مثالية. </li></ol>

<ol><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 41, 391-394 (1974).</li>
<li>Gennaro, L. D., Packard, D. S., Stach, R. W., Wagner, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+differentiation+of+chicken+embryos+in+simplified+shell-less+cultures+under+ordinary+conditions+of+incubation%5BTitle%5D)+AND+%22Growth%22%5BJournal%5D)">Growth and differentiation of chicken embryos in simplified shell-less cultures under ordinary conditions of incubation.</a> Growth. 44, 343-354 (1980).</li>
<li>Tufan, C. A., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanat. 3, 8-11 (2004).</li>
<li>Duench, K., Franz-Odendaal, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+and+Hedgehog+signaling+during+the+development+of+scleral+ossicles%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">BMP and Hedgehog signaling during the development of scleral ossicles.</a> Dev. Biol. 365 (1), 251-258 (2012).</li>
<li>Datar, S., Bhonde, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+Chick+Embryo+Culture+as+an+Alternative+in+vitro+Model+to+Investigate+Glucose-Induced+Malformation+in+Mammalian+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Diabet+Stud%22%5BJournal%5D)">Shell-less Chick Embryo Culture as an Alternative in vitro Model to Investigate Glucose-Induced Malformation in Mammalian Embryos.</a> Rev Diabet Stud. 2 (4), 221-227 (2005).</li>
<li>Chick embryos in shell-less culture. Tested studies for laboratory teaching. Fisher, C. J. 5th Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE), , (1983).</li>
<li>Dunn, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+for+shell-less+culture+of+the+72-hour+avian+embryo%29%5BTitle%5D)+AND+%22Poultry+Science%22%5BJournal%5D)">Technique for shell-less culture of the 72-hour avian embryo).</a> Poultry Science. 53, 409-412 (1974).</li>
<li>Yalcin, H., Shekhar, A., Rane, A. A., Butcher, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex-ovo+chicken+embryo+culture+system+suitable+for+imaging+and+microsurgery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An ex-ovo chicken embryo culture system suitable for imaging and microsurgery applications.</a> J. Vis. Exp. (44), (2010).</li>
<li>Silver, P. H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Special+problems+of+experimenting+in+ovo+on+the+early+chick+embryo%2C+and+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morph%22%5BJournal%5D)">Special problems of experimenting in ovo on the early chick embryo, and a solution.</a> J Embryol Exp Morph. 8 (4), 369-375 (1960).</li>
<li>Spurlin, J., Lwigale, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+to+increase+accessibility+to+late-stage+chick+embryos+for+in+ovo+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">A technique to increase accessibility to late-stage chick embryos for in ovo manipulations.</a> Dev. Dyn. 242 (2), 148-154 (2012).</li>
<li>Dorrell, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+ovo+model+for+directly+visualizing+chicken+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Ex ovo model for directly visualizing chicken embryo development.</a> American Biology Teacher. 74 (9), (2012).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morph%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morph. 88, 49-92 (1951).</li>
<li>Drossopoulou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+anteroposterior+patterning+of+the+vertebrate+limb+based+on+sequential+long-and+short-range+Shh+signaling+and+Bmp+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A model for anteroposterior patterning of the vertebrate limb based on sequential long-and short-range Shh signaling and Bmp signaling.</a> Development. , 127-1337 (2000).</li>
<li>Sys, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+in+ovo+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The in ovo CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J. Vis. Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+understanding+the+development+of+scleral+ossicles+in+chicken%2C+Gallus+gallus%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Towards understanding the development of scleral ossicles in chicken, Gallus gallus.</a> Dev. Dyn. 237, 3240-3251 (2008).</li>
</ol>

الكتاب ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة في ما يخص المعلومات الواردة في هذه المخطوطة.

البيضة السابقين زراعة ووضع النوافذ على حد سواء لها مزايا وتحديات. نحن هنا مقارنة المزايا والتحديات من الكأس السابق الستايروفوم البيضة طريقة وأسلوب النوافذ لدينا سابقا الأمثل البيضة الطريقة هو موضح هنا. لدينا وسيلة تمكن التلاعب والمراقبة سهلة للجنين الفرخ في المراحل المتأخرة من التطوير والتحسينات جهدنا لالسابقين التقليدي البيضة طريقة 1، 2، 3 جعلها بالإضافة إلى ذلك من السهل جدا للاستخدام في الفصول مختبر التدري...

لعبت زراعة البيضا السابقة دورا مهما في دراسة تطور الدجاج1 ، 2. تم استخدام طريقة الاستزراع هذه لدراسة الأمراض العصبية ، وتطور الأطراف ، وتطور القحف الوجهي ، وكنموذج للتحقيق في التشوهات المرتبطة بمرض السكري 3 ، 4 ، 5.
هناك العديد من الاختلافات في تقنية ex ovo. الطريقة الأكثر شيوعا هي استخدام كوب الستايروفوم6،7،8 أو وعاء زجاجي5. في هذه الطرق ، يتم تبطين الكوب أو الوعاء بغلاف بلاستيكي لاحتضان الجنين ، ويتم وضع غطاء على الكوب ، ثم يتم وضع الجنين في حاضنة ذات رطوبة مناسبة6. ومع ذلك ، يمكن أن يكون هذا الإعداد صعبا من الناحية الفنية. التحدي الأول هو الغلاف البلاستيكي المستخدم في احتضان الجنين. يصعب التعامل مع هذا الغلاف وغالبا لا يلتصق بالكوب جيدا. لحل هذه المشكلة ، يتم وضع شريط مطاطي حول الكوب لتثبيت الغلاف في مكانه. على الرغم من ذلك ، لا يزال من الممكن أن ينزلق الغلاف ، وهو أمر قاتل للجنين. الغلاف البلاستيكي لديه القدرة على التمزق أو الثقب بواسطة الملقط أو الإبر التي يمكن استخدامها أثناء التلاعب بالجنين والملاحظات. أخيرا ، هذا الإعداد ليس مستقرا للغاية ويمكن للطلاب بسهولة ضرب الأكواب. كما أن ارتفاع الأكواب يجعل من الصعب جدا وضع الجنين تحت مجهر مجسم ، والذي له هدف محدود لارتفاع المسرح. تجعل هذه التحديات من الصعب على الطلاب الجامعيين العمل مع أجنة الكتاكيت الحية في مختبرات التدريس ، مثل دورات علم الأحياء التنموية المتقدمة. 
 تعني التحديات المذكورة أعلاه في طريقة ex ovo أن الباحثين يلجأون إلى طريقة النوافذ 9,10 لعرض تطور الكتاكيت الجنينية. في هذه التقنية ، يتم عمل ثقب أو "نافذة" في قشر البيض الذي يغطي الجنين. يمكن إعادة إغلاق الثقب بشريط لاصق أو شمع9 للسماح بمزيد من التطور الجنيني. على الرغم من أن طريقة النوافذ لها بعض المزايا ، مثل القدرة على عرض التطور الجنيني وسهولة الصيانة ، إلا أن هذه الطريقة لها أيضا العديد من القيود. الأول هو أن النافذة يجب أن تكون كبيرة إلى حد ما لعرض الجنين بأكمله (خاصة في المراحل المتأخرة). ثانيا ، يصعب إغلاق النوافذ الكبيرة. سيؤدي الختم غير السليم إلى مشاكل في العقم والبقاء على قيد الحياة. يضيف استخدام الشمع المنصهر كمادة مانعة للتسرب خطوة أخرى غير مريحة وفوضوية إلى البروتوكول. لذلك ، على الرغم من أن طريقة النوافذ قد تكون مثالية لأجنة الكتاكيت في المراحل المبكرة (HH 11 - HH 27) ، إلا أن مشاهدة الجنين بأكمله في المراحل المتأخرة ليس من السهل تحقيقه. 
هنا ، نصف تقنية زراعة ex ovo المحسنة والبسيطة11 التي تتجنب الحاجة إلى معدات عالية التقنية ، ويسهل التعامل معها تحت المجهر المجسم ، وتوفر الدعم الكافي للجنين لإجراء التلاعب المجهري ، وتمكن الباحثين من رؤية نمو الجنين بالكامل جيدا في المراحل اللاحقة من التطور (حتى HH 40-41). مع هذه التطورات في تقنية ex ovo ، يحصل الأفراد على فهم أكثر اكتمالا للتطور الجنيني. على سبيل المثال ، يسمح النمو في مراحل لاحقة للأفراد بمراقبة العمليات التنموية التي لا تحدث حتى هذه النقطة الزمنية ، مثل التعظم وتطور الريش ونمو الأطراف والعينين المتقدمة. الجنين بأكمله والأغشية خارج الجنين والأوعية الدموية مرئية بوضوح. يمكن أيضا إجراء أبحاث أكثر تقدما ، مثل التلاعب الجنيني (أي زرع الخرز المنقوع في مثبطات أو إدخال حواجز بين طبقات الأنسجة) ، ويمكن للباحثين بعد ذلك مراقبة تأثير التلاعب في أجنة المرحلة اللاحقة.

<table><tbody><tr><td>البنسلين / الستربتومايسين</td><td>سيجما</td><td>P4458</td><td>قم بعمل كميات صغيرة لتجنب أحداث التجميد / الذوبان</td></tr> طبق <tr><td>بتري</td><td></td><td></td> مربع <td>9.5 سم × 9.5 سم</td></tr><tr><td>وزن قارب</td><td>فيشر 8732113 العلمي</td><td></td><td>88 × 88 × 23 مم</td></tr><tr><td>حاوية زيبلوك</td><td>Ziplock N</td><td>/ A</td><td>12 سم × 12 سم × 6 سم</td></tr></tbody></table>

الأمثل السابقين البيضة التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

اعتمدت الأبحاث في علم التشريح وعلم الأجنة وعلم الأحياء التنموي إلى حد كبير على استخدام الكائنات الحية النموذجية. من أجل دراسة التطور في الأجنة الحية ، غالبا ما يتم استخدام الكائنات الحية النموذجية ، مثل الدجاج. يعتبر الدجاج كائنا نموذجيا ممتازا نظرا لتكلفته المنخفضة والحد الأدنى من صيانته ، ومع ذلك فهو يمثل تحديات في الملاحظة لأنه محاط بقشر بيضة غير شفاف. من أجل رؤية الجنين بشكل صحيح أثناء تطوره ، يجب إزالة القشرة أو إزالتها. تم تطوير كل من تقنيات النوافذ والبيضا السابق لمساعدة الباحثين في دراسة التطور الجنيني. ومع ذلك ، فإن كل طريقة لها قيود وتحديات. هنا ، نقدم تقنية بسيطة ومحسنة لزراعة التخميض خارج الأجنة للأجنة الدجاج والتي تتيح مراقبة التطور الجنيني من المرحلة HH 19 إلى المراحل المتأخرة من التطور (HH 40) ، عندما تتطور العديد من الأعضاء. من السهل اعتماد هذه التقنية في كل من الفصول الجامعية ومختبرات الأبحاث الأكثر تقدما حيث يتم إجراء التلاعب بالأجنة.

هذه البيضة السابقين الأسلوب يسمح لمراقبة الأجنة من المراحل الأولى من التنمية (HH 19/20) إلى المراحل المتأخرة للتنمية (HH 40-41) (الشكل 1A و 1B). وضع الثقافة في HH 19-20 يزيد بقاء الأجنة في الثقافة. وقبل رأسه تحول (قبل 53 HPF) البقاء على قيد الحياة ضئيلة جدا في الثقافة وبعد المرحلة 21، والجنين يميل إلى التمسك أكثر إلى قذيفة على إزالة حتى يتم الحصول على عدد أقل من الأجنة سليمة. بشكل عام، البقاء على قيد الحياة للجنين في البيضة السابقين</...

قد يكون عرض جنين الدجاج والوصول إليه أثناء التطور أمرا صعبا. لقد قمنا بتطوير طريقة ex ovo بسيطة وفعالة من حيث التكلفة ويمكن استخدامها بسهولة في الفصل الدراسي أو بيئة البحث. توفر هذه الطريقة الوصول إلى الجنين في المراحل المتأخرة من التطور الجنيني (HH 40).

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

الهدف العام من هذه الطريقة هو تقديم تقنية محسنة لزراعة X ovo لأجنة الدجاج ، والتي تتيح مراقبة التطور الجنيني من مرحلة الهامبرغر وهاميلتون 19 إلى المراحل المتأخرة من التطور حتى المرحلة 40. هذه الطريقة مفيدة للطلاب في بيئة مختبر علم الأحياء التنموي ، وكذلك الباحثين الذين يرغبون في استخدام جنين الدجاج ككائن حي نموذجي لإعداد طريقة زراعة X ovo هذه. أولا ، يتم تحضير البيض.تم تحضين البيض عند 37 درجة مئوية مع رطوبة 40٪ لمدة ثلاثة أيام ونصف تقريبا ، وهو ما يرتبط تقريبا بمرحلة الهامبرغر وهاميلتون 19. يتم تحضير البيض عن طريق رشه بنسبة 70٪ من الإيثانول بحيث لا يكون الجنين ملوثا عندما تتشقق القشرة. بعد رش البيض ، يترك للحظات حتى يجف.أثناء تحضير غرفة الرطوبة ، تتكون غرفة الرطوبة من حاوية Ziploc. تتمثل الخطوة الأولى في بناء غرفة الرطوبة في إضافة طبقة من سنتيمتر إلى سنتيمترين من الحشوة الماصة. في هذه الحالة ، مسح كيم ، على الرغم من أنه يمكن استخدام طبقات من حشوة القطن أيضا.تتناسب هذه الطبقة من الحشوة الماصة مع قاعدة حاوية Ziploc الموضحة هنا. بمجرد وضع الطبقة الماصة في مكانها ، يتم سكب ما يقرب من 150 مل من الماء المقطر في قاعدة الحاوية. يجب أن تمتص الحشوة غالبية هذه المياه.اكتملت غرفة الرطوبة الآن ويمكن وضعها على الجانب. يتم استخدام قارب صغير معقم لاحتضان الجنين عند إزالته من القشرة. يبلغ حجم القارب 8.8 سم مربع بسبب اتجاه البيض في الحاضنة ، ويقع الجنين على السطح العلوي للبويضة ، وبالتالي يجب تكسير القشرة على الجانب الآخر.ثم يتم تكسير القشرة برفق وتوضع البيضة بالقرب من قارب الطريق. في واحدة حركة سلسة, سحبت البويضة على حدة, يطلق الجنين بلطف داخل الطريق قارب. ثم يتم فحص الجنين للتأكد من أن النير لا يزال سليما وأن الجنين قابل للحياة ، كما هو موضح هنا بنبضات قلب مرئية وعدم وجود تشوهات واضحة.بعد ذلك ، نضيف مضادا حيويا إلى الجنين للمساعدة في مكافحة العدوى. يتم تخصيص بنسلين ستربتومايسين بتركيز 5،000 وحدة من البنسلين وخمسة ملليغرامات من الستربتومايسين لكل مل لتقليل تواتر ذوبان الجليد بالتجميد. احداث. يتم أخذ 40 ميكرولترا من Aliquot وتضاف إلى الألبومين المحيط باستخدام ماصة.الآن الجنين جاهز لوضعه بعناية في غرفة الرطوبة. بمجرد دخوله إلى غرفة الرطوبة ، يتم إعطاء الجنين غطاءا للمساعدة في منع التلوث. يتم وضع غطاء طبق بتري مربع بقياس تسعة سنتيمترات ونصف مربعة فوق القارب.من المهم التأكد من عدم وجود رطوبة على حافة قارب الطريق حتى لا يتشكل ختم بين طبق بتري وقارب الطريق ، مما يحد من الأكسجين على الجنين. ثم لإكمال غرفة الرطوبة ، يتم وضع غطاء على حاوية Ziploc. ومع ذلك ، يتم الضغط على زاويتين فقط من الغطاء في مكانهما ، مما يترك الزوايا الأخرى مفتوحة ويسمح لتدفق الهواء بالوصول إلى الجنين.بمجرد اكتمال غرفة الرطوبة ، يتم وضعها في حاضنة 37 درجة حتى يتمكن الجنين من الاستمرار في النمو بعد أربعة أيام ونصف. يمكن إزالة غرفة الرطوبة من الحاضنة ويمكن ملاحظة الجنين في المرحلة 34 تقريبا. في هذه المرحلة ، يمكن للطلاب بسهولة مراقبة الجنين ، بما في ذلك الأوعية الدموية والعين الكبيرة وبراعم الأطراف.يمكن ملاحظة الجنين بشكل أكبر تحت مجهر تشريح ، ويمكن إجراء المزيد من الأبحاث المتقدمة مثل التلاعب الجنيني. بعد مراقبة الجنين في هذه المرحلة ، يمكن إعادته إلى حاضنة 37 درجة وسيستمر في التطور حتى المرحلة 40 على الأقل ، أي 14 يوما من الحضانة. في الختام ، توضح هذه الطريقة تحسين زراعة أجنة الكتاكيت خارج قشر البيض.يوفر فرصة للطلاب لمراقبة تطور جنين الكتاكيت في بيئة معملية مزدحمة ، بالإضافة إلى ذلك ، يوفر للباحثين إمكانية الوصول إلى الأجنة إذا كانوا يقومون بالتلاعب.

optimized-ex-ovo-culturing-chick-embryos-to-advanced-stages

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

علم الأحياء النمائي

فرخ في electroporation البيضة هو الأسلوب الذي يسمح التلاعب الجيني للجنين الطيور. التطبيقات الشائعة لهذه التقنية تشمل تحليل وظيفي من الجينات وعناصر محسن المفترضة. هذا الفيديو يوضح العصبية electroporation أنبوب في الأجنة سمو الفرخ 10. وتناقش تقنية الحقن والتعامل السليم البيض.

Electroporations OVO في مرحلة الجنين سمو الدجاج 10

هذا الفيديو يوضح ثقافة جديدة ، وهي الطريقة التي يتم تربيتها افراخ الدجاج خارج البويضة لمدة تصل إلى 24 ساعة. هذه الطريقة تمكن واحد لدراسة التطور المبكر (مسحة البدائية إلى 14 سوم) ، وهي الفترة المقابلة ل9 - E7 في الماوس. تطبيقات هذه التقنية تشمل electroporation ، التهجين في الموضع والمناعية.

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

وفرخ مشيمائي غشاء (CAM) هي فريدة من نوعها ، العوز المناعي طبيعيا بيئة ثقافة داعمة لدراسة الأوعية الدموية وتكون الأورام. هذه المقالة الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في...

كتكوت البيضة السابقين الثقافة و البيضة السابقين CAM الفحص : كيف يعمل حقا

في هذه المقالة ، نقدم منهجية بسيطة لتمكين طويل...

و السابقين البيضة الثقافة الأجنة النظام الدجاج مناسبة للتطبيقات التصوير والجراحة المجهرية

الهدف العام من هذا الفيديو هو إظهار كيفية تنفيذ حقن الشبكية المستهدفة...

في Electroporation OVO في شبكية العين الفرخ الجنينية

وصفت وهناك طريقة لنقل الجينات إلى أجنة الدجاج في مراحل الحضانة في وقت لاحق (أقدم من هامبورغ وهاملتون مرحلة (سمو) 22). هذا الأسلوب يتغلب على...

نقل الجينات في أجنة الدجاج أقدم من قبل<em&gt; OVO السابقين</em&gt; Electroporation

هنا ، نقدم تقنية جديدة لزراعة أجنة الكتاكيت ex ovo للتصوير بفاصل زمني باستخدام الضوء المنقول والفحص المجهري الفلوري. شطيرة ورق الترشيح المغمورة هي نوع مختلف من تقنية حامل ورق الترشيحالراسخة 1 التي تسمح بزراعة أجنة الكتاكيت المغمورة بالكامل في وسط زراعة سائل.

والمغمورة ساندويتش ورقة مرشح للالمدى الطويل البيضة السابقين الوقت الفاصل بين التصوير من وقت مبكر الفرخ الأجنة

يصف هذا البروتوكول ثلاث طرق حول كيفية الحصول على أجنة الدجاج التي يبلغ عمرها من 5 إلى 8 أيام واستخدامها وغشاءها المشيمي (CAM) كنموذج في الجسم الحي لدراسة التصوير بالموجات فوق الصوتية المعزز بالتباين وتوصيل الأدوية بوساطة الفقاعات الدقيقة.

تحضير أجنة الدجاج ex ovo والأوعية الغشائية المشيمية كما هو الحال في نموذج الجسم الحي للتصوير بالموجات فوق الصوتية المعززة بالتباين ودراسات توصيل الأدوية بوساطة الفقاعات الدقيقة

تسمح المنصة المحسنة لزراعة الأجنة بأكملها بالتطور المستمر والقوي خارج الرحم لأجنة الفئران بعد الزرع لمدة تصل إلى ستة أيام ، من مراحل ما قبل المعدة حتى التكوين العضوي المتقدم. في هذا البروتوكول ، نقوم بتفصيل الإجراء القياسي لزراعة الأجنة الناجحة باستخدام لوحات ثابتة وأنظمة زجاجات دوارة.

خارج الرحم زراعة أجنة الفئران من ما قبل المعدة إلى التكوين العضوي المتقدم

الهدف العام من هذه الورقة هو وصف كيفية إجراء الحقن داخل الخلايا في البويضة للمواد الخارجية في أجنة الدجاج. هذا النهج مفيد جدا لدراسة البيولوجيا التنموية لأجنة الدجاج.

في أوفو الحقن داخل الأوعية الدموية في أجنة الدجاج

تعلم تقنية زراعة خارج البيضة المحسّنة لأجنة الدجاج لمتابعة التطور الجنيني من المرحلة 19 إلى 40. هذه الطريقة مفيدة للطلاب والباحثين في مختبرات علم الأحياء التنموي.

الأمثل السابقين البيضة التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير

استكشف المزيد من الفيديوهات