العصبية زرع الخلايا الجذعية في التجريبية Contusive نموذج من إصابة الحبل الشوكي

الهدف العام من هذا الإجراء هو وصف نموذج كدمة لإصابة الحبل الشوكي في الفئران بالتفصيل ، متبوعا بزرع الخلايا الجذعية العصبية. يتم تحقيق ذلك عن طريق وضع العلامات الأولى على خلايا ما بعد الوفاة أو السلائف العصبية أو NPCs التالية باستخدام المتتبع الحيوي PKH 26. بعد ذلك ، يتم إجراء شق ظهري على الفأر ويتعرض الحبل الشوكي.

ثم يتم استخدام جهاز تأثير الأفق اللانهائي أو IH لإنشاء آفة على النخاع الشوكي. أخيرا ، يتم حقن PKH 26 المسمى PM وأجهزة الكمبيوتر في الوريد الذيل للماوس. في النهاية ، يتم اتباع مصير PKH المطعمة 20 الساعة 6:00 مساء وأجهزة الكمبيوتر في موقع الآفة.

يكرر نموذج الإصابة رجل إصابة الحبل الشوكي. يتبع الإصابة الميكانيكية الأولية تنكس ثانوي تدريجي حيث تتم دراسة العلاج الخلوي والدوائي قد توفر التطبيقات الموصوفة أساسا منهجيا للحصول على مزيد من الأفكار حول الإيمان.

تحريض الخلايا الجذعية المزروعة في النخاع الشوكي أثناء حدوث التنكس والأحداث الالتهابية. سيظهر الآفة الدكتور توني لاجا لونغو طالب دكتوراه في المختبر. بينما سيتم إجراء حقن الذيل من قبل الدكتور آتشي ، وهو زميل ما بعد الدكتوراه في المختبر ، بدءا من الخلايا الجذعية العصبية التي تفي بالمعايير كما هو موضح في بروتوكول النص.

يعلق Resus الخلايا بتركيز واحد في 10 إلى الخلايا الست لكل 150 ميكرولترا. قم بإعداد ما لا يقل عن 1.2 مرة 10 إلى الخلايا الست لكل فأر للحصول على خلايا كافية لتحميل الماصة. باستخدام وسط الخلايا الجذعية العصبية ، اغسل الخلايا ثلاث مرات في قارورة مخروطية سعة 10 مليلتر ، وتدور عند 500 مرة جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة لحبيبات الخلايا.

بعد كل غسلة ، قبل العد النهائي للدوران ، تقوم الخلايا بعد الدوران بسحب المادة الطافية ، تاركة حوالي 25 ميكرولترا من السائل لمنع شفط أي خلايا. بعد ذلك ، قم بإعداد معلق اثنين X عن طريق إضافة مليلتر واحد من المخفف C إلى حنك الخلية واستخدام ماصة لطيفة لإعادة تعليقها على الفور. قبل التلوين ، قم بإعداد محلول صبغة اثنين من X في المخفف C عن طريق إضافة أربعة ميكرولترات من محلول الإيثانول D PKH 26 إلى مليلتر واحد من المخفف C في أنبوب واخلطه جيدا.

للتفريق بسرعة ، أضف ملليلتر واحد من تعليق خليتين x إلى مليلتر واحد من محلول XD وقم بخلط العينة على الفور عن طريق سحب العينات. بعد احتضان تعليق قالب الخلية لمدة دقيقة إلى خمس دقائق ، أوقف التلوين عن طريق إضافة حجم متساو من محلول BSA بنسبة 1٪ في HBSS واحتضانه لمدة دقيقة واحدة. ثم قم بالطرد المركزي للخلايا عند 500 مرة G لمدة 10 دقائق وقم بإزالة المادة الطافية بعناية.

استخدم 10 ملليلتر من الوسط الكامل لإعادة تعليق حبيبات الخلية لتقييم استعادة الخلية, بقاء الخلية وشدة التألق. الطرد المركزي الخلايا تخلص من المادة الطافية وأضف 10 ملليلتر من HBSS إلى حبيبات الخلية. يغسل مرتين باستخدام HBSS ويعيد تعليق الخلايا في محلول فسيولوجي معقم.

بعد تحضير المنطقة الجراحية والفأر وفقا لبروتوكول النص ، ضع الجانب الظهري للحيوان لأعلى على جهاز تسخين منزلق لتجنب انخفاض حرارة الجسم أثناء الجراحة بمشرط ، وقم بعمل شق رأسي فوق المنطقة ذات الاهتمام من T سبعة إلى T 12 باستخدام الملقط. امسك الجلد ووسادة الدهون السطحية الموجودة بين المسافة بين عمليتي الصدر الخامسة والسادسة تحت مجهر استريو. احسب العملية تحت الأوعية الدموية على أنها T ستة ، ثم انتقل إلى T سبعة.

ثم ضع القليل من المحمل تحت الجانب البطني للفأر لزيادة انحناء العمود الفقري واستخدام ملقط الجرف لسد العمود الفقري لشل حركته. بعد ذلك ، استخدم مشرطا لقطع فقرة عضلات العمود الفقري بشكل ثنائي من T سبعة إلى T 10 على مستوى العمود الفقري حتى يلامس السطح الظهري للصفيحة طرف المشرط. ثم استخدم مشرطا لوضع علامة على التقاطع من T سبعة إلى T 10 على مستوى العمود الفقري حتى يلامس السطح الظهري للصفيحة توقف طرف المشرط في الفراغ بين T ثمانية و T تسعة نتوءات صغيرة.

ثم استخدم مقصا صغيرا لقطع الأنسجة بين T ثمانية و T تسعة و T تسعة و T 10. الآن استخدم rongeur لإزالة عملية T تسعة. قم بتعريض الوصلة باستخدام مقص صغير لكشط طبقة العضلات بعناية.

استمر حتى ينكشف العظم. استخدم الملقط لإزالة العضلات من الصفيحة وفتح مسافة صغيرة بين الفقرات. ثم أدخل المقص الصغير برفق تحت العظم.

قطع الصفيحة على كلا الجانبين واستخدام الملقط لإزالتها ، وتعريض الحبل. استخدم رون جور لإزالة أي شظايا عظام حرة أو خشنة تركت وراءها. ثم قم بإزالة النصف العلوي من العملية الظهرية T التاسعة.

بعد اتباع بروتوكول جهاز الاصطدام IH ، وفقا للإرشادات الواردة في النص ، استخدم خياطة أربعة أوه قابلة للامتصاص لإغلاق الشق عن طريق تغطية الحبل الشوكي المكشوف أولا في موقع الصفيحة التي تمت إزالتها. الحرص على عدم الضغط على العضلات الأساسية. استخدم مشابك أو ثلاثة مشابك انعكاسية لإغلاق الجلد.

حقن ملليلترين من المحلول الملحي في أسفل الظهر تحت الجلد وضع الماوس في قفص دافئ على وسادة تدفئة للتعافي. لإجراء حقن الوريد الذيل للخلايا. أعد تعليق الخلايا في أنبوب الاختبار وقم بتحميل 75 ميكرولتر في حقنة سعة 0.3 ملليلتر ، مع ضمان عدم وجود فقاعات في تعليق الخلية.

لتجنب ترسيب الخلايا ، احتفظ بالمحقنة في وضع أفقي. ضع الماوس أسفل المصباح الحراري لتوسيع أوردة الذيل. ثم اسحب الماوس برفق إلى المقيدة لتصور وريد الذيل الجانبي ، والذي يظهر كخط أزرق ضيق.

استخدم مسحة كحولية لتنظيف الذيل ، وبمجرد تصور الوريد ، أمسك وريد الذيل بين الإصبع الأوسط وإبهام اليد اليسرى. تسببت كدمة T التسعة الموضحة في هذا الفيديو في فقدان عابر لوظيفة الطرف الخلفي ثلاث مرات 10 إلى الخلايا الخامسة أو تم حقن PBS في وريد الذيل في ثلاث حقن تم إجراؤها بعد 30 دقيقة وست ساعات و 18 ساعة من الإصابة. كما هو موضح هنا ، في غضون أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع ، عالجت PBS مصابة ، وتحسنت الفئران ووصلت وظيفة الأطراف الخلفية إلى ثلاث نقاط من مقياس الفأر القاعدي أو فئران BMS التي عولجت ب PM.NPCs ، ومع ذلك ، أظهرت انتعاشا أعلى ووصلت إلى 4.5 نقطة من BMS كما هو موضح هنا ، معظم NPCs pm المطعمة المسماة ب PKH 26 ، المتراكمة عند حواف مجموعات تشكيل الآفة.

بعد فترة وجيزة من الإعطاء ، هاجرت الخلايا المزروعة على طول حواف الآفة وبطريقة أكثر انتشارا حيث تمايزت إلى خلايا عصبية. في 30 يوما بعد الآفة والزرع ، زاد حجم جسم الخلية من الخلايا غير القابلة للعب في الدقيقة وفي معظم الخلايا ، كانت العمليات الشبيهة بالتغصنات واضحة وصبغة مناعية بالكامل من قبل الأجسام المضادة المحددة للتعيين إليها أثناء الحصول على هذا الإجراء الاحترافي ، من المهم أن تتذكر أن القوى الأعلى قد تزيد من معدل الوفيات في بسبب إصابات أكثر خطورة. وبالتالي ، نقترح استخدام نموذجنا لنموذج الآفة الذي تتبعه عملية تعافي أكثر قابلية للتكرار.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية الحصول على نموذج تجريبي قابل للتكرار لإصابة الحبل الشوكي الرضحية في الفأر باستخدام مصطدم الأفق اللانهائي.