الكشف عن خلايا الدم البيضاء الإنسان مستضد المؤشرات الحيوية في سرطان الثدي الاستفادة تسمية خالية جهاز الاستشعار البيولوجي تقنية

الهدف العام من هذا الإجراء هو قياس مستضد الكريات البيض البشرية أو مستضدات الورم المرتبطة ب HLA في سوائل المريض لتقسيم المرضى إلى العلاج المناعي ذي الصلة. يتم تحقيق ذلك عن طريق شل حركة مستقبلات الخلايا التائية التي تحاكي الأجسام المضادة ، والمعروفة باسم TCRM على سطح الصفيحة الدقيقة. تتمثل الخطوة الثانية في إضافة عينة المريض جنبا إلى جنب مع التخفيف التسلسلي لمونومرات الببتيد المستهدفة HLA لإنشاء منحنى قياسي ، مما يسمح بالقياس الكمي للمستضد المستهدف في عينات المرضى.

بعد ذلك ، تتم مراقبة ارتباط المستضد المستهدف بالجسم المضاد على نظام المقايسة الحيوية للتسمية الحرة حتى يتم الوصول إلى التوازن. الخطوة الأخيرة هي تحليل البيانات الناتجة باستخدام المنحنى القياسي لتحديد كمية المستضد المستهدف في عينات المرضى. في النهاية ، يتم استخدام تقنية الاستشعار الحيوي الخالية من الملصقات للكشف عن المؤشرات الحيوية للسرطان في عينات المرضى.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على التقنيات الحالية مثل lc MSS ، هي الكشف السريع عن الإنتاجية العالية للمستضدات المرتبطة ب HLA. يسمح ذلك بالتقسيم الطبقي السريع لمرضى السرطان إلى طرق العلاج لأنه يعمل كمنصة للكشف عن المؤشرات الحيوية. في حين أن هذه الطريقة مرتبطة بفحص المؤشرات الحيوية للسرطان ، فإن النظام ينطبق في الواقع على العديد من التطبيقات بما في ذلك المقايسات القائمة على الخلايا ، أو الفحص الهجين للتنميط المناعي ، أو فحص مكتبات الجزيئات الصغيرة.

خطرت لنا فكرة هذه الطريقة لأول مرة عندما كنا نطور جسما مضادا علاجيا لمستقبلات الخلايا التائية. سألنا أنفسنا ، كيف يمكننا تحديد المرضى الذين سيستفيدون أكثر من هذا النوع من العلاج؟ ستظهر هذا الإجراء كريستين دال ، طالبة دراسات عليا في التكنولوجيا الحيوية تعمل في مختبري.

ابدأ باحتضان المحلول الملحي المخزن بالفوسفات مسبقا أو PBS عند 28 درجة مئوية لتقليل تحولات الرنين المرتبطة بدرجة الحرارة. أضف 50 ميكرولترا من محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS pH 7.2 إلى آبار الألواح المطلية بمشتق أفادون. بعد ذلك ، افتح برنامج الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية.

اتبع معالج الإعداد لتحديد الإجراء التجريبي، والذي يتضمن اختيار الفراغات والمعايير والعينات في تخطيط اللوحة وإعداد درجة الحرارة وعدد عمليات المسح في الدقيقة وطول التجربة. ثم أدخل لوحة الفحص المعدة في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية الخالية من الملصقات وابدأ الفحص الأول. خط الأساس هو المجموعة الأولية من عمليات الفحص التي تم جمعها في بداية التجربة.

إذا كانت هذه هي القراءة الأولى التي يتم إجراؤها على هذه اللوحة المحددة ، فاسمح للماسح الضوئي بالعمل لفترة كافية لموازنة درجة الحرارة والقضاء على الانجراف في خط الأساس. بعد استقرار خط الأساس أو بعد خمس عمليات مسح على الأقل، أوقف القراءة مؤقتا وأخرج اللوحة. تخلص من PBS وأضف 50 ميكرولترا من RL 21 ، وهو جسم مضاد بيوتينيل إلى جميع الآبار باستثناء التحكم على اللوحة.

ثم أضف 50 ميكرولترا من PBS إلى آبار التحكم. بعد ذلك ، أدخل اللوحة مرة أخرى في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية واستأنف القراءة حتى الوصول إلى التشبع. بعد حوالي 1.5 ساعة ، أوقف القراءة مؤقتا وأخرج اللوحة.

ثم اغسل الطبق ثلاث مرات ب 200 ميكرولتر لكل بئر من PBS بالإضافة إلى 0.05٪ Tween 20 أو PBST. اتبع الغسيل بثلاث شطفات سعة 200 ميكرولتر لكل بئر من PBS pH 7.2 بدون منظف. اضغط على PBS الزائد من اللوحة على المناشف الورقية قبل الانتقال إلى الخطوة التالية.

بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من PBS إلى جميع الآبار النشطة. ثم أدخل اللوحة مرة أخرى في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية واستأنف القراءة لمراقبة رنين ما بعد الغسيل. بعد القراءة ، أوقف القراءة وأخرج اللوحة.

لإضافة المادة التحليلية. قم بإزالة PBS وأضف 50 ميكرولترا لكل بئر من المخزن المؤقت المناسب للفحص لهذا الفحص. تم تخفيف المصل البشري الطبيعي المتاح تجاريا من واحد إلى 20 في PBS.

بعد ذلك ، افتح برنامج الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية واتبع معالج الإعداد. لتحديد الإجراء التجريبي ، أدخل اللوحة في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية وابدأ قراءة خط الأساس بعد استقرار خط الأساس أو بعد خمس عمليات مسح على الأقل ، أوقف القراءة مؤقتا وأخرج اللوحة. ثم قم بإزالة المخزن المؤقت للفحص من الآبار.

ثم قم برفع عناصر التحكم باستخدام HLAA oh 2 0 1 مونومر يحمل الببتيدات ذات الصلة أو غير ذات الصلة بتركيزات تتراوح من 0.625 إلى 10 ميكروغرام لكل مليلتر في المخزن المؤقت للفحص. ثم أضف 50 ميكرولترا من المعايير إلى آبار التحكم في اللوحة. بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من المادة المراد تحليلها في المخزن المؤقت للفحص إلى آبار عينة اللوحة.

لهذا الاختبار ، تم استخدام المصل البشري المسننة المتاح تجاريا. أدخل اللوحة مرة أخرى في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية واستأنف القراءة حتى يصل التشبع إلى حوالي 30 إلى 60 دقيقة بعد التشبع ، وأوقف القراءة مؤقتا وأخرج اللوحة. استمر في غسل اللوحة ثلاث مرات ب 200 ميكرولتر لكل بئر من PBST ، متبوعا بثلاث عمليات شطف ب 200 ميكرولتر لكل بئر من PBS كما كان من قبل ثم أضف 50 ميكرولترا من مخزن الفحص إلى جميع الآبار النشطة.

الآن أدخل اللوحة مرة أخرى في الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية واستأنف القراءة لمراقبة رنين ما بعد الغسيل قبل إيقاف القراءة وإخراج اللوحة. أخيرا ، قم بتحليل البيانات باستخدام برنامج الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية أو تصدير ملفات البيانات الأولية إلى برنامج التحليل الإحصائي المفضل. يقوم برنامج الماسح الضوئي للمقايسة الحيوية تلقائيا بإنشاء منحنى الربط بناء على تخطيط اللوحة المقدم أثناء الإعداد التجريبي.

تم تثبيت RL 21 A-T-C-R-M أو IgG two A على لوحة فحص AVID AVID: تظهر النتائج التمثيلية اكتشاف مستضد الورم المستهدف F-L-S-L-H-L-A في عينة بلازما المريض عند التوازن وعند ما بعد الغسيل. يستخدم IgG two A كعنصر تحكم لأقسام الأنسجة الملزمة غير المحددة التي تم تلطيخها بتحكم إيجابي وعناصر تحكم سلبية. وبالنسبة ل RL 21 ، يؤكد تلطيخ أنسجة الورم بواسطة RL 21 A عرض مجمعات F-L-S-L-H-L-A.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية قياس المؤشرات الحيوية المرتبطة ب HLA في سوائل المريض باستخدام مستقبلات الخلايا التائية التي تحاكي الأجسام المضادة ، ومراقبة ارتباط المستضد المستهدف بالجسم المضاد على نظام الفحص الحيوي الخالي من الملصقات. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر احتضان جميع المخازن المؤقتة للعينات قبل الاستخدام لتجنب ارتفاع درجات الحرارة واستخدام المخزن المؤقت الصحيح للعينة لكل خطوة.