الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إثبات تحديد واستئصال الترسيب الدهني لتحليل التأثيرات العوامل المختلفة على الدهون وبواسطة الدهون. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض الأعضاء الداخلية ومستودعات الدهون للفأر البالغ أولا. في الخطوة الثانية ، تتم إزالة الأعضاء والأنسجة الزائدة عن الحاجة لكشف المستودعات بشكل أفضل ، مما يسمح بتحديد المستودعات في مواقعها المقابلة.

في الخطوة الأخيرة ، يتم بعد ذلك استخراج الأنسجة الدهنية بعناية خاصة لتجنب التلوث. في النهاية ، يوفر عزل واستئصال هذه الأجزاء نسيجا للتحليل النسيجي ، والتعبير البروتيني ، ونشاط الإنزيم ، وتحليل التعبير الجيني ، وكذلك للدراسات المختبرية. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول المعين على المنهجيات الحالية هي أنه يسمح بعزل المستودعات المتعددة مع الحد الأدنى من التشريح ، فضلا عن الحد الأدنى من التلوث.

لذلك يمكن أن يساعد هذا الإجراء في الإجابة على أسئلة حول مجال السمنة. على سبيل المثال ، الآثار الضارة أو حتى المفيدة للأنسجة الدهنية على الأمراض البشرية. لعزل الأنسجة الدهنية البنية ، ابدأ بوضع فأر بالغ من الإيثانول ، مطهر ، قتل رحيم في وضع ضعيف مع ظهره على الطاولة.

ثم استخدم الملقط لرفع الجلد أسفل الحجاب الحاجز مباشرة وشق الجلد بالمقص. قطع بشكل عرضي حول محيط الفأر لفضح الصفاق. ثم أمسك الزوائد السفلية والبطن بيد واحدة ، واسحب الجلد لأعلى نحو الرأس باليد الأخرى لإزالة القفاز من النصف العلوي من الفأر للكشف عن مستودع الدهون البني على شكل فراشة أو الخفافيش.

بعد ذلك ، حدد موقع سكيب ومستودع الخفافيش المقابل. ثم استخدم مجهر تشريح لإزالة أي دهون بيضاء سطحية فوق الفراشة بعناية وتشريح الدهون البنية بين الكتف ، مع الحرص على تجنب أي عضلات مرتبطة. لعزل الأنسجة الدهنية تحت الجلد أو تحت الجلد ، أمسك الزوائد العلوية والصدر بيد واحدة ، واسحب الجلد لأسفل نحو القدمين باليد الأخرى لإزالة القفاز من النصف السفلي من الفأر والكشف عن رواسب subq الأربية المثلثة.

ثم ضع الفأر مرة أخرى في وضع ضعيف وقم بتشريح مثلثات الدهون الفرعية بعناية لعزل دهون الغدد التناسلية من تجويف البطن. استخدم المقص لقطع الصفاق بشكل عرضي أسفل الحجاب الحاجز مباشرة. ثم قطع الصفاق من الحجاب الحاجز إلى المستقيم ، في منتصف الإكليل لفضح أعضاء البطن وتشريح كل من مستودعات دهون البشرة بعناية من الخصيتين epi و vasa deia.

لعزل الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية ، حافظ على في وضع ضعيف ، وقم بتمديد الزوائد العلوية والسفلية إلى الخارج. بعد ذلك ، ارفع عملية الخنجري باستخدام ملقط لخلق توتر عبر الجزء العلوي من الجسم وقطع أفقيا من خلال الحجاب الحاجز ، مما يؤدي إلى تعريض الجزء السفلي من التجويف الصدري. اقطع القفص الصدري بشكل متفوق باتجاه الرأس مباشرة إلى جانب القص ، ثم التقط القفص الصدري الأدنى من الترقوة.

القطع على طول الطول السفلي للترقوة باتجاه الإبط في كلا الاتجاهين. يجب أن يكون التجويف الصدري ومحتوياته مرئية بوضوح الآن. بمجرد تنظيف المنطقة من السوائل ، قم بقطع القصبات الهوائية وربط الأوعية لإزالة الرئتين وفضح القلب.

بعد تحديد المعدة والمريء ، قم بقطع المريء عند تقاطع المعدة المريئي لتحرير المعدة. بعد ذلك ، حدد الأمعاء والمساريق المحيط بها. اقطع المساريق بشكل سطحي ثم اقطع القولون بالقرب من المستقيم قدر الإمكان لتحرير المعدة والأمعاء والقولون والبنكرياس والطحال.

عندما تتم إزالة الأعضاء ، قم بقطع الأوردة الكبدية وربط المساريق وإزالة جميع فصوص الكبد. اقطع الطبقة الحشوية والدهون المحيطة بالكلى ، وترك الكلى متصلة بالشريان الأورطي في الجسم الحي لتكون بمثابة علامات جغرافية لأجزاء مختلفة من الشريان الأورطي. ثم عندما تكون المنطقة المحيطة بالكلى خالية ، استخدم مقصا دقيقا وملقطا دقيقا لفصل الشريان الأورطي عن ارتباطه الظهري بالعمود الفقري ، وارتباطه البطني بالمريء.

في الصدر ، اتبع وافصل الشريان الأورطي من أصله في القلب إلى التشعب في المنطقة الحرقفية. لعزل الأنسجة الدهنية الأبهري ، في هذه المرحلة ، يمكن تحديد الأوعية تحت الترقوة. اعزل هذه الأوعية من الرقبة إلى جذر الأبهر لكشف الوصلة الأبهرية والجذر في القلب بشكل أفضل.

ثم قم بإزالة الغدة الصعترية وقطع الشرايين العضدية والسباتية المشتركة اليسرى والشرايين تحت الترقوة اليسرى للسماح بحركة القلب. أخيرا ، استخدم مجهر تشريح لعرض الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية أو طبقة P VVA T المحيطة بالشريان الأورطي. ثم استخدم ملقطا دقيقا لسحب الأنسجة برفق بعيدا عن الشريان الأورطي والمقص الدقيق لقطع ارتباط PVAT بالشريان الأورطي برفق بدءا من منطقة الصدر ، متفوقة تماما على مكان وجود الحجاب الحاجز.

ثم استخدم ملقطا دقيقا لسحب الأنسجة برفق بعيدا عن الشريان الأورطي والمقص الدقيق لقطع ملحق PVAT بالشريان الأورطي برفق بدءا من منطقة الصدر المتفوقة تماما على مكان وجود الحجاب الحاجز. كرر هذه العملية بطول الشريان الأورطي بالكامل في منطقة الأبهر تحت الكلوي ، وتقع أعلى من التشعب الحرقفي للوعاء الأبهري وأدنى من الخفافيش ذات الفروع الكلوية. ويمكن تمييز عينات وات عن طريق التحليل النسيجي باستخدام تلطيخ خطوط الخلايا الأولية من الخلايا الشحمية تحت الجلد ، والأوعية الدموية المحيطة.

يمكن بعد ذلك استزراع الخلايا الشحمية وتمييزها من الخلايا الشحمية إلى الخلايا الشحمية لتحليل المصفوفات الدقيقة. في هذه الصور التمثيلية ، على سبيل المثال ، تم تأكيد تحويل الخلايا الشحمية المستنبتة إلى خلايا شحمية مع الخلايا الشحمية الملونة باللون الأحمر الزيتي ، المعزولة ، المستزرعة ، والتمييز بهذه الطريقة يمكن استخدامها لمزيد من التحليلات في المختبر. في هذه التجربة التمثيلية ، لوحظ أن النشاط الأنزيمي ل MM P two ينخفض في الخلايا الشحمية المعزولة حول الأوعية الدموية استجابة لعلاج تجريبي مقارنة بالضوابط غير المعالجة.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تغيير القفازات وكذلك تنظيف أدواتك بشكل متكرر لتقليل التلوث. لذلك بعد جمع هذه الأنسجة ، يمكن إجراء مجموعة متنوعة من الإجراءات عليها. على سبيل المثال ، زراعة الخلايا ، والتحليل النسيجي ، وقياس البروتين ، وحتى التعبير الجيني.

ومن ثم يمكن استخدام هذه النتائج للمساعدة في فهم العلاقة وأوجه التشابه والاختلاف بين المستودعات المختلفة.