Name: الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: تعلم تحديد واستئصال مستودعات الأنسجة الدهنية في الفئران البالغة بأقل تلوث ممكن. تتيح هذه الطريقة إجراء تحليلات نسيجية وجزيئية متنوعة لدراسة السمنة والأيض.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلفون ليس لديهم أي اعترافات.

ملاحظة: تم تنفيذ كافة الإجراءات الحيوانية بموافقة اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) من جامعة سينسيناتي وفقا لدليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية من المعاهد الوطنية للصحة (NIH النشر لا . 85-23، منقحة 1996). 1. الموت ببطء وتعقيم ماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في المربع المنسدل تحتوي على جرعة supratheraputic من الأيزوفلورين والسماح ليستنشق إلى تأثير. بمجرد الموت الرحيم الماوس، وإزالة من مربع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلخل Cervically كوسيلة الثانية من القتل الرحيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم السطح الخارجي للالماوس عن طريق تطهير الحيوان مع الايثانول 70٪. </li></ol> 2. تحديد وعزل ثلاثة مستودعات الدهنية مختلفة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> براون الدهنية الأنسجة (BAT) العزلة: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من الفراء هو الرطب من التطهير الكحول للمساعدة في قطع طريق البشرة والجلد لايروبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف مع ظهرها على الطاولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستيلاء على الجلد مباشرة تحت الحجاب الحاجز مع ملقط، ورفع وشق مع مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع مستعرض حول محيط من الماوس لفضح الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كشف على شكل فراشة BAT مستودع كتبها لحب النصف العلوي من الفأرة. عقد أقل الزوائد والبطن في يد واحدة وسحب الجلد حتى نحو الرأس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه الماوس، بحيث يتم وضعه عرضة على الطاولة. يجب الحرص على عدم تلوث مستودع يتعرض مع الشعر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأدوات الجراحية النظيفة وتغير إلى زوج جديد من القفازات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع كتف والمناظر مستودع. إزالة بعناية أي الدهنية بيضاء سطحية فوق فراشة ثم تشريح فراشة من الدهون البني بين الكتفين. كن حذرا لتجنب العضلات المرتبطة بشكل وثيق مع الدهون البني. ملاحظة: إن استخدام المجهر تشريح يوصى به لإزالة ثهايت الدهنية، وكذلك في فصل الدهنية البني من كتف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الدهون مستودع ونقل إلى أنبوب microcentrifuge 2 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا RNA أو البروتين هو ليكون استخراجه، وتجميد الأنسجة عن طريق الغمر في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 ° C. تجميد العينة في وقت واحد لمنع تدهور. إذا زراعة، وتغطي الأنسجة في DMEF-12 وتعيين على الجليد حتى يتم جمع جميع العينات للثقافة (معلومات إضافية). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل تحت الجلد الدهنية الأنسجة (SQ)، والأبيض الدهنية الأنسجة مستودع (WAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع على زوج جديد من القفازات حتى لا عبر تلويث بين مستودعات الدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الكشف عن الأربية، ومستودعات SQ الثلاثي من قبل دي تغطية بقفاز النصف السفلي من الماوس. عقد الزوائد العليا والصدر في يد واحدة وسحب الجلد إلى أسفل نحو القدمين مع جهة أخرى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه الماوس في موقف ضعيف مع الحرص على عدم تلوث مستودع يتعرض مع الشعر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> surgica نظيفةأدوات لتر والتغيير إلى زوج جديد من القفازات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية المثلثات من الدهون SQ. يجب الحرص على عدم تلويث العينة مع العضلات، والدهون والغدد الثديية المجاورة أو عن طريق قطع أي السفن وتلوث العينة مع الدم. ويوصى باستخدام المجهر تشريح إذا لم يتم تعريف الحدود بشكل واضح: ملاحظة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مخازن الدهون ونقل إلى 2 مل أنابيب microcentrifuge. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا RNA أو البروتين هو ليكون استخراجه، وتجميد الأنسجة عن طريق الغمر في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 ° C. تجميد العينة في وقت واحد لمنع تدهور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتلطيخ، إصلاح أو تضمين في أكتوبر إذا زراعة، وتغطي الأنسجة في DMEF-12 وتعيين على الجليد حتى يتم جمع جميع العينات للثقافة (معلومات إضافية). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل نوعين من الدهون الحشوية الدهنية الأنسجة (VAT) والأبيض الدهنية الأنسجة (WAT) مستودع: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع على زوج جديد من القفازات حتى لا عبر تلويث بين مستودعات الدهون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الخيال العلميssors، وقطع الصفاق بشكل مستعرض، مباشرة تحت الحجاب الحاجز. قطع الصفاق من الحجاب الحاجز إلى منتصف المستقيم coronally لفضح أعضاء البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع الخصية أو المبيض وتحديد المرفقة الأنسجة الدهنية البيضاء، والمعروفة باسم الدهنية بربخي في الذكور أو الدهنية الغدد التناسلية عند الإناث. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأدوات الجراحية النظيفة وتغير إلى زوج جديد من القفازات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح بعناية على حد سواء مستودعات الدهون بربخي من الخصيتين، epididymides، والأوعية الناقلة. أو إذا كان أنثى، تشريح بعناية كل من منصات الدهون الغدد التناسلية من المبيض. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مخازن الدهون وتحويلها إلى 2 مل أنابيب ميكروسنتريفوج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا RNA أو البروتين هو ليكون استخراجه، وتجميد الأنسجة عن طريق الغمر في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 ° C. تجميد العينة في وقت واحد لمنع تدهور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتلطيخ، إصلاح أو تضمين في أكتوبر إذا زراعة، وتغطي الأنسجة في DMEF-12 وتعيين على الجليد حتى يتم جمع جميع العينات للثقافة (معلومات إضافية). </لى&gt; </ol></li></ol> 3. عزل المحيطة بالأوعية الدهنية الأنسجة (PVAT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> العزلة من القلب: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الماوس في موقف ضعيف مع الزوائد العلوية والسفلية الممتدة إلى الخارج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الزوائد آمنة باستخدام الشريط الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تحديد المواقع الماوس كما المذكورة أعلاه، وخلق التوتر من خلال رفع حتى على عملية الخنجري مع ملقط. قطع أفقيا من خلال الحجاب الحاجز، ويعرض الجزء السفلي من التجويف الصدري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الحفاظ على التوتر، من خلال رفع حتى على عملية الخنجري، قطع طريق القفص الصدري متفوق نحو الرأس، فقط لجانب من عظمة القص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التقاط القفص الصدري فقط أقل شأنا من الترقوة، وقطع على طول أدنى من الترقوة من نحو الإبطين في كلا الاتجاهين. وينبغي أن يكون التجويف الصدري ومحتوياته (القلب، الرئتين، الخ) الآن واضحة للعيان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنظيف التجويف الصدري من الدم دخيلة والسوائل باستخدام الجا معقمuze لامتصاص السوائل. إذا جمع الأجهزة أو الأوعية يجب التأكد من وافر (معلومات إضافية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مرة واحدة يتم مسح المنطقة من السوائل، وقطع الأوعية القصبات الهوائية وربط لإزالة الرئتين، مما يسمح التعرض أفضل للقلب. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعريب واستئصال الأبهر المحيطة بالأوعية الدهنية الأنسجة (PVAT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الأجهزة التالية من أجل تحديد أفضل الأجزاء السفلية من الشريان الأورطي: الكبد والمعدة والطحال والبنكرياس والأمعاء والقولون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أولا نبدأ مع تحديد المعدة والمريء. قطع المريء عند تقاطع المعدي المريئي لتحرير المعدة من الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبعد ذلك، التعرف على الأمعاء ومساريق المحيطة بها. قطع سطحي من خلال مساريق، كما أنها تقع بشكل وثيق جدا إلى الجزء الكلوي من الشريان الأبهر، ثم &quot;تشغيل الامعاء.&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع القولون تحرير أقرب إلى المستقيم ممكن. وهكذا، وتحرير المعدة والأمعاء والقولون من الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادةتحريك المعدة والأمعاء والقولون والبنكرياس والطحال من خلال قطع مساريق إرفاق والسفن. البنكرياس والطحال يجب أن تأتي مجانا مع المعدة والأمعاء والقولون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكبد من خلال قطع الأوردة الكبدية وربط مساريق، وإزالة كل الفصوص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع بعيدا الطبقة الحشوية والدهون تحيط الكلى. ترك الكلى تعلق على الشريان الأورطي في الجسم الحي لتكون بمثابة علامات الجغرافية لشرائح مختلفة من الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف المنطقة مع معقم برنامج تلفزيوني 1X وإزالة جميع السوائل عن طريق امتصاص مع شاش معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام مقص الصغرى وملقط الدقيقة، فصل الشريان الأورطي من التعلق الظهري للعمود الفقري والتعلق بطني لالمريء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عزل الشريان الأورطي عن طريق اتباع وفصل الشريان الأورطي طول الشريان الأورطي النازل من الأصل في القلب إلى التشعب في المنطقة الحرقفي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وعزل السفن تحت الترقوة. عزل هذه السفنمن الرقبة إلى جذر الأبهر لفضح أفضل تقاطع الأبهر والجذور في القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الغدة الصعترية ثم قطع الشريان العضدي الرأسي، والشريان السباتي المشترك اليسار، والشريان تحت الترقوة الأيسر، مما يسمح للحركة القلب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمساعدة المجهر تشريح، عرض الأنسجة الدهنية المحيطة بالأوعية (PVAT) طبقة المحيطة الشريان الأورطي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع الحرص الشديد على عدم قرصة أو الضغط على PVAT، بلطف سحب الطريق PVAT من الشريان الأورطي مع ملقط الدقيقة. خفض بلطف المرفق من PVAT إلى الشريان الأورطي مع مقص الصغرى بدءا من منطقة الصدر فقط متفوقة إلى حيث يقع الحجاب الحاجز. ملاحظة: ينصح المجهر تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذه العملية على طول الشريان الأورطي، والانتهاء في المنطقة الأبهر infrarenal، التي تقع على بعد متفوقة على التشعب الحرقفي السفينة الأبهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المطلوب قوس الأبهر PVAT، وتستخدم نفس الأسلوب لإزالة PVAT من أقل جurvature من القوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع عينات PVAT إلى 2 مل أنبوب microcentrifuge (ق). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا RNA أو البروتين هو ليكون استخراجه، وتجميد الأنسجة عن طريق الغمر في النيتروجين السائل وتخزينها في -80 ° C. تجميد العينة في وقت واحد لمنع تدهور. إذا زراعة، وتغطي الأنسجة في DMEF-12 وتعيين على الجليد حتى يتم جمع جميع العينات للثقافة (معلومات إضافية). ملاحظة: مستودعات الدهنية إضافية للنظر اذا كانت مهتمة في تحليل شامل مستودع الدهنية وتشمل: خلف الصفاق، المساريقي، ثربي، التامور والمأبضية. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+in+the+United+States%2C+2009-2010%5BTitle%5D)+AND+%22NCHS+Data+Brief%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li>
<li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+obesity+and+trends+in+the+distribution+of+body+mass+index+among+US+adults%2C+1999-2010%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010.</a> 307 (5), 491-497 (2012).</li>
<li>Cawley, J., Meyerhoefer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+medical+care+costs+of+obesity%3A+an+instrumental+variables+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Health+Economics%22%5BJournal%5D)">The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach.</a> Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).</li>
<li>Obesity accounts for 21 percent of U.S. health care costs, study finds. , Cornell University. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm">http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm</a> (2012).</li>
<li>Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarder%2C+W+%22Thomson+Medstat+Research+Brief%22">Thomson Medstat Research Brief</a>. , (2006).</li>
<li>Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-fat+diet+increases+IL-1%2C+IL-6%2C+and+TNF-%CE%B1+production+by+increasing+NF-%CE%BAB+and+attenuating+PPAR-%CE%B3+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li>
<li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTEN+loss+in+the+Myf5+lineage+redistributes+body+fat+and+reveals+subsets+of+white+adipocytes+that+arise+from+Myf5+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors.</a> Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).</li>
<li>Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+adipocyte+biology.+Adipose+tissue+function+and+plasticity+orchestrate+nutritional+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation.</a> J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).</li>
<li>Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li>
<li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+of+white%2C+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li>
<li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li>
<li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((White%2C+brown%2C+beige%2Fbrite%3A+different+adipose+cells+for+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li>
<li>Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling%3A+factors+in+selection+and+depot+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li>
<li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li>
</ol>

يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة أو تضارب مصالح آخر.

السمنة يمكن أن يؤدي إلى مجموعة واسعة من الحالات المرضية وفهم كامل للدور الذي الدهنية ليست مفهومة تماما يلعب. وبالتالي مواصلة البحث في مجال الدهنية أمر ضروري. النماذج الحيوانية، وتحديدا نماذج الفئران هي مثالية للبحث الأولي في تطور الأمراض واختبار العلاجات الدوائية المحتملة. في استخدام هذه النماذج، والعزلة دقيقة واستئصال مستودعات الدهنية هي أداة هامة للغاية وضرورية في دراسة علم الأمراض من الأمراض الدهنية المتضررة. ...

جعلت الدهنية وظهور ملحوظ في أضواء وسائل الإعلام، وذلك بسبب الزيادة الهائلة السمنة خلال العقود القليلة الأخيرة من القرن ال20. يؤثر السمنة حاليا أكثر من ثلث البالغين و 17٪ من الأطفال والمراهقين في الولايات المتحدة (US) 1. تغطي جميع المجموعات العرقية، وقد أظهرت البحوث الإحصائية المحيطة وباء السمنة أن السود غير اللاتينيين لديها أعلى معدل تعديل سن السمنة (49.5٪) مقارنة مع المكسيكي الاميركيين (40.4٪)، وجميع اللاتينيين (39.1٪)، وغير البيض من أصل اسباني (34.3٪) 2. تأثير الاقتصادي للسمنة هو أيضا مصدر قلق متزايد لنظام الرعاية الصحية. في عام 2012، أشارت التقديرات إلى أن التكلفة السنوية للرعاية الطبية للسمنة في الولايات المتحدة في عام 2005 وكانت 190200000000 $، ما يقرب من 21٪ من ميزانية الإنفاق الطبي بشكل عام. للأسف، قدرت السمنة في مرحلة الطفولة ليكون مسؤولا عن 14 مليار دولار في التكاليف الطبية المباشرة وحدها. إحصائيا، تقرر أن متوسط ​​تكلفة الطبية للكان الأفراد يعانون من السمنة 2741 $ أعلى في السنة من تلك التي من دون هذا الاعتلال 3-5. السمنة هي عامل خطر رئيسي لمجموعة متنوعة من الظروف مثل: مرض السكري من النوع 2، دسليبيدميا، وأمراض القلب والأوعية الدموية، والسرطان، واضطرابات الهيكل العظمي العضلات والتهاب مزمن. ويرتبط السمنة بعمق إلى التسبب في متلازمة التمثيل الغذائي والأمراض المزمنة الأخرى 6-8. مع مثل هذه الاتصالات جذرية والسلبية بين السمنة وأمراض المصاحبة الأخرى، والبحث العلمي وركزت الانتباه إلى فهم أفضل للالوباء الحالي والأدوار المتنوعة والمحوري الذي يلعبه الدهنية. تاريخيا، كان يعتبر النسيج الشحمي غير منطقي وكان ينظر كمجرد الأنسجة ملء بسيطة. حاليا، وقد تبين الدهنية للعب العديد من الأدوار الأساسية في وظيفة الجسم في: التمثيل الغذائي، وتنظيم الهرمونات، والتهاب والحماية والعزل 9. وتتكون الأنسجة الدهنية في المقام الأول منالخلايا الشحمية، إلا أنه يحتوي أيضا pericytes، والخلايا البطانية، وحيدات، الضامة والخلايا الجذعية المحفزة 8. يتم توزيع الأنسجة الدهنية في جميع أنحاء الجسم في مستودعات متميزة. مستودعات رئيسية يمكن العثور subdermally، تحت الجلد، العضل، وجدانية 10. وقد ثبت مستودعات الدهنية لمحات المحددة للتمثيل الغذائي مستودع، التي أظهرت قابلية مستودع محددة لالسمنة والاضطرابات ذات الصلة 8. تقليديا، تم تصنيف الأنسجة الدهنية إلى نوعين رئيسيين: الأنسجة الدهنية البيضاء (WAT) والأنسجة الدهنية البنية (BAT)؛ على الرغم من أن الأدب الحديث يدل على الوجود من مجموعة ثالثة معمد برايت أو البيج الدهنية 11. وقد تبين الأنسجة الدهنية لدينا ألوان مختلفة، الأشكال التضاريسية، وظائف التمثيل الغذائي، وميزات البيوكيميائية وأنماط وراثية التعبير 10. الخلايا الشحمية في WAT لديها واحدة، كبيرة قطرات الدهون وكميات مختلفة من الميتوكوندريا. WATوجدت يغلب في المحليات تحت الجلد والحشوية من الجسم. وظائف WAT في المقام الأول كموقع لتخزين الطاقة وحماية الجهاز. الخلايا الشحمية في BAT لها التشكل متعددة المساكن والميتوكوندريا وفيرة. يقع BAT في المقام الأول في الرقبة والأوعية الدموية الكبيرة في الصدر، وكذلك كتف 12. BAT وظائف في المقام الأول في السلوكيات إنفاق الطاقة التي تنظم توليد الحرارة 7. وقد تبين الدهنية برايت أو البيج لمشاركة التشكل مماثلة والتعبير إلى BAT ولكن تم العثور أن نشأت من الخلايا الشحمية البيضاء 11. طريقة جراحية وصفها في هذه المخطوطة يوفر الباحثين مع القدرة على تحليل تأثيرات مختلفة أن عوامل مثل: البيئة، والمستحضرات الصيدلانية، وعلم الوراثة، ويكون على الدهنية. وكذلك يلعب مفيد أو ضار دور الدهنية في المرض والصحة العامة. أيضا، وتوفير وسيلة لتحديد وعزل أنواع مختلفة من الأنسجة الدهنية لالسماح لفهم أفضل للعلاقات البيوكيميائية والاختلاف بين مستودعات. هذا يمكن أن تساعد في تحديد العلاقة بين المكان، وظيفة، وأنواع من الدهون داخل الجسم. هذا الأسلوب هو موضح يحقق ذلك عن طريق توفير وسائل التصور الإجمالي، وتحليل التعبير الجيني، وتحليل البروتين التعبير، والفحص النسيجي، والعزلة من خطوط الخلايا الأولية للدراسات في المختبر. حاليا هناك العديد من المقالات التي توفر نظرة ثاقبة سلوك الأيضي للمستودعات الدهنية المختلفة، وكذلك مواقعها التشريحية. ولكنها لا توفر وسيلة متعمقة حول كيفية ترجمة على وجه التحديد، وتحديد، وعزل هذه المستودعات. يوفر هذا الأسلوب الجراحي تقنية دقيقة التي تسمح لعزل مستودعات متعددة مع كمية ضئيلة من تشريح والتلوث مقارنة مع أساليب أخرى مصممة لعزل واحد أو اثنين من مستودعات 13-14. والهدف من هذا البروتوكول هو توفيرطريقة دقيقة لتحديد وعزل أنواع مختلفة من مستودعات الدهون من مواقع التشريحية متعددة.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>Med-Vet International</td> <td>#RXISO-250</td><td></td></tr><tr><td>70٪ إيثانول</td><td>فيشر</td><td>07-678-001</td><td></td></tr><tr><td>DMEF-12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D-6421</td><td>دافئ في حمام مائي قبل وضع الأنسجة.</td></tr><tr><td>2 مل أنابيب الطرد المركزي الدقيقة</td><td>Midsci</td><td>MCT-200-C-S</td><td></td></tr><tr><td>محلول ملحي مخزن الفوسفات</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5368-10PAK</td><td></td></tr></tbody></table>

الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

زادت السمنة بشكل كبير في العقود القليلة الماضية وتؤثر على أكثر من ثلث سكان الولايات المتحدة البالغين. بلغ التأثير الاقتصادي للسمنة في عام 2005 مبلغا مذهلا قدره 190.2 مليار دولار من التكاليف الطبية المباشرة وحدها. السمنة هي عامل خطر رئيسي لمجموعة واسعة من الأمراض. تاريخيا ، لم يكن معروفا سوى القليل عن الدهون ووظائفها الرئيسية والأساسية في الجسم. الدهون البنية والبيضاء هما النوعان الرئيسيان من الدهون ، لكن الأدبيات الحالية حددت نوعا جديدا من الدهون يسمى الدهون النارية أو البيج. أظهرت الأبحاث أن مستودعات الدهون لها ملامح أيضية محددة وأن بعض المستودعات تسمح بالميل إلى السمنة والاضطرابات الأخرى ذات الصلة. الهدف من هذا البروتوكول هو تزويد الباحثين بالقدرة على تحديد وإزالة مستودعات الدهون التي ستسمح بتحليل التأثيرات العاملية المختلفة على الدهون. بالإضافة إلى الدور المفيد أو الضار الذي تلعبه الدهون في المرض والصحة العامة. يسمح عزل واستئصال المستودعات الدهنية للمحققين بالنظر في التغيرات المورفولوجية الإجمالية بالإضافة إلى التغيرات النسيجية. يمكن أيضا استخدام الدهون المعزولة للدراسات الجزيئية لتقييم التغيير النسخي والانتقالي أو للتجارب في المختبر لاكتشاف أهداف الاهتمام وآليات العمل. تتفوق هذه التقنية على التقنيات المنشورة الأخرى نظرا للتصميم الذي يسمح بعزل مستودعات متعددة مع البساطة والحد الأدنى من التلوث.

وقد تحقق تحديد الهوية، وتوطين الدهنية تحت الجلد الإربي، الدهنية البني بين الكتفين، الحشوية الدهنية بربخي (الشكل 1)، وكذلك الدهنية قوس الأبهر ماحول الأوعية، الدهنية الأبهر الصدري، الدهنية الأبهري الكظري والدهنية الأبهر infrarenal (الشكل 2) بنجاح باستخدام طريقة جراحية وصفها. تم تقييم الفحص النسيجي والتمايز بين العينات BAT وWAT إيجابيا باستخدام الهيماتوكسيلين ويوزين (H &amp; E) تلطيخ (الشكل 3). تحليل مستويات RNA من اديبونيكتين (Adipo...

نظرا لاتصال جذري والسلبية بين السمنة وأمراض المصاحبة الأخرى، يلعب البحوث حول دور الدهنية في المرض وهناك ما يبرر الصحة العامة. نقدم بروتوكول لعزل واستئصال مستودعات الدهنية مما يسمح لدراسة الدهنية باستخدام في الموقع وطرق المختبر.

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إثبات تحديد واستئصال الترسيب الدهني لتحليل التأثيرات العوامل المختلفة على الدهون وبواسطة الدهون. يتم تحقيق ذلك عن طريق تعريض الأعضاء الداخلية ومستودعات الدهون للفأر البالغ أولا. في الخطوة الثانية ، تتم إزالة الأعضاء والأنسجة الزائدة عن الحاجة لكشف المستودعات بشكل أفضل ، مما يسمح بتحديد المستودعات في مواقعها المقابلة.في الخطوة الأخيرة ، يتم بعد ذلك استخراج الأنسجة الدهنية بعناية خاصة لتجنب التلوث. في النهاية ، يوفر عزل واستئصال هذه الأجزاء نسيجا للتحليل النسيجي ، والتعبير البروتيني ، ونشاط الإنزيم ، وتحليل التعبير الجيني ، وكذلك للدراسات المختبرية. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول المعين على المنهجيات الحالية هي أنه يسمح بعزل المستودعات المتعددة مع الحد الأدنى من التشريح ، فضلا عن الحد الأدنى من التلوث.لذلك يمكن أن يساعد هذا الإجراء في الإجابة على أسئلة حول مجال السمنة. على سبيل المثال ، الآثار الضارة أو حتى المفيدة للأنسجة الدهنية على الأمراض البشرية. لعزل الأنسجة الدهنية البنية ، ابدأ بوضع فأر بالغ من الإيثانول ، مطهر ، قتل رحيم في وضع ضعيف مع ظهره على الطاولة.ثم استخدم الملقط لرفع الجلد أسفل الحجاب الحاجز مباشرة وشق الجلد بالمقص. قطع بشكل عرضي حول محيط الفأر لفضح الصفاق. ثم أمسك الزوائد السفلية والبطن بيد واحدة ، واسحب الجلد لأعلى نحو الرأس باليد الأخرى لإزالة القفاز من النصف العلوي من الفأر للكشف عن مستودع الدهون البني على شكل فراشة أو الخفافيش.بعد ذلك ، حدد موقع سكيب ومستودع الخفافيش المقابل. ثم استخدم مجهر تشريح لإزالة أي دهون بيضاء سطحية فوق الفراشة بعناية وتشريح الدهون البنية بين الكتف ، مع الحرص على تجنب أي عضلات مرتبطة. لعزل الأنسجة الدهنية تحت الجلد أو تحت الجلد ، أمسك الزوائد العلوية والصدر بيد واحدة ، واسحب الجلد لأسفل نحو القدمين باليد الأخرى لإزالة القفاز من النصف السفلي من الفأر والكشف عن رواسب subq الأربية المثلثة.ثم ضع الفأر مرة أخرى في وضع ضعيف وقم بتشريح مثلثات الدهون الفرعية بعناية لعزل دهون الغدد التناسلية من تجويف البطن. استخدم المقص لقطع الصفاق بشكل عرضي أسفل الحجاب الحاجز مباشرة. ثم قطع الصفاق من الحجاب الحاجز إلى المستقيم ، في منتصف الإكليل لفضح أعضاء البطن وتشريح كل من مستودعات دهون البشرة بعناية من الخصيتين epi و vasa deia.لعزل الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية ، حافظ على في وضع ضعيف ، وقم بتمديد الزوائد العلوية والسفلية إلى الخارج. بعد ذلك ، ارفع عملية الخنجري باستخدام ملقط لخلق توتر عبر الجزء العلوي من الجسم وقطع أفقيا من خلال الحجاب الحاجز ، مما يؤدي إلى تعريض الجزء السفلي من التجويف الصدري. اقطع القفص الصدري بشكل متفوق باتجاه الرأس مباشرة إلى جانب القص ، ثم التقط القفص الصدري الأدنى من الترقوة.القطع على طول الطول السفلي للترقوة باتجاه الإبط في كلا الاتجاهين. يجب أن يكون التجويف الصدري ومحتوياته مرئية بوضوح الآن. بمجرد تنظيف المنطقة من السوائل ، قم بقطع القصبات الهوائية وربط الأوعية لإزالة الرئتين وفضح القلب.بعد تحديد المعدة والمريء ، قم بقطع المريء عند تقاطع المعدة المريئي لتحرير المعدة. بعد ذلك ، حدد الأمعاء والمساريق المحيط بها. اقطع المساريق بشكل سطحي ثم اقطع القولون بالقرب من المستقيم قدر الإمكان لتحرير المعدة والأمعاء والقولون والبنكرياس والطحال.عندما تتم إزالة الأعضاء ، قم بقطع الأوردة الكبدية وربط المساريق وإزالة جميع فصوص الكبد. اقطع الطبقة الحشوية والدهون المحيطة بالكلى ، وترك الكلى متصلة بالشريان الأورطي في الجسم الحي لتكون بمثابة علامات جغرافية لأجزاء مختلفة من الشريان الأورطي. ثم عندما تكون المنطقة المحيطة بالكلى خالية ، استخدم مقصا دقيقا وملقطا دقيقا لفصل الشريان الأورطي عن ارتباطه الظهري بالعمود الفقري ، وارتباطه البطني بالمريء.في الصدر ، اتبع وافصل الشريان الأورطي من أصله في القلب إلى التشعب في المنطقة الحرقفية. لعزل الأنسجة الدهنية الأبهري ، في هذه المرحلة ، يمكن تحديد الأوعية تحت الترقوة. اعزل هذه الأوعية من الرقبة إلى جذر الأبهر لكشف الوصلة الأبهرية والجذر في القلب بشكل أفضل.ثم قم بإزالة الغدة الصعترية وقطع الشرايين العضدية والسباتية المشتركة اليسرى والشرايين تحت الترقوة اليسرى للسماح بحركة القلب. أخيرا ، استخدم مجهر تشريح لعرض الأنسجة الدهنية حول الأوعية الدموية أو طبقة P VVA T المحيطة بالشريان الأورطي. ثم استخدم ملقطا دقيقا لسحب الأنسجة برفق بعيدا عن الشريان الأورطي والمقص الدقيق لقطع ارتباط PVAT بالشريان الأورطي برفق بدءا من منطقة الصدر ، متفوقة تماما على مكان وجود الحجاب الحاجز.ثم استخدم ملقطا دقيقا لسحب الأنسجة برفق بعيدا عن الشريان الأورطي والمقص الدقيق لقطع ملحق PVAT بالشريان الأورطي برفق بدءا من منطقة الصدر المتفوقة تماما على مكان وجود الحجاب الحاجز. كرر هذه العملية بطول الشريان الأورطي بالكامل في منطقة الأبهر تحت الكلوي ، وتقع أعلى من التشعب الحرقفي للوعاء الأبهري وأدنى من الخفافيش ذات الفروع الكلوية. ويمكن تمييز عينات وات عن طريق التحليل النسيجي باستخدام تلطيخ خطوط الخلايا الأولية من الخلايا الشحمية تحت الجلد ، والأوعية الدموية المحيطة.يمكن بعد ذلك استزراع الخلايا الشحمية وتمييزها من الخلايا الشحمية إلى الخلايا الشحمية لتحليل المصفوفات الدقيقة. في هذه الصور التمثيلية ، على سبيل المثال ، تم تأكيد تحويل الخلايا الشحمية المستنبتة إلى خلايا شحمية مع الخلايا الشحمية الملونة باللون الأحمر الزيتي ، المعزولة ، المستزرعة ، والتمييز بهذه الطريقة يمكن استخدامها لمزيد من التحليلات في المختبر. في هذه التجربة التمثيلية ، لوحظ أن النشاط الأنزيمي ل MM P two ينخفض في الخلايا الشحمية المعزولة حول الأوعية الدموية استجابة لعلاج تجريبي مقارنة بالضوابط غير المعالجة.أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر تغيير القفازات وكذلك تنظيف أدواتك بشكل متكرر لتقليل التلوث. لذلك بعد جمع هذه الأنسجة ، يمكن إجراء مجموعة متنوعة من الإجراءات عليها. على سبيل المثال ، زراعة الخلايا ، والتحليل النسيجي ، وقياس البروتين ، وحتى التعبير الجيني.ومن ثم يمكن استخدام هذه النتائج للمساعدة في فهم العلاقة وأوجه التشابه والاختلاف بين المستودعات المختلفة.

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

في هذا الفيديو ، نوضح الإجراء الجراحي لعزل الأنسجة الدهنية البيضاء تحت الجلد والأنسجة الدهنية البنية بين الكتفين من فأر حديث الولادة.

مجموعة مستودعات الدهون البيضاء والبنية من جرو الفأر: إجراء جراحي لحصاد الأنسجة الدهنية البيضاء والأنسجة الدهنية البنية من جرو الفأر

يمكن أن تؤثر الأنسجة الدهنية (AT) &lt; p class = 'jove_content'&gt; على توازن الجسم بالكامل ، وبالتالي فإن فهم الآليات الجزيئية لتمايز الخلايا الشحمية ووظيفتها أمر مهم. نحن نقدم بروتوكولا لاكتساب رؤى جديدة في هذه العمليات من خلال تحليل توازن الخلايا الشحمية والتمايز والتعرض لنقص الأكسجة كنموذج لموت الخلايا المبرمج المستحث في الخلايا الشحمية.

آلية تنظيم أرقام خلية شحمية في الكائنات الكبار من خلال التمايز وموت الخلايا المبرمج التوازن

نقدم التقنيات المطلوبة لعزل الجزء الوعائي اللحمي (SVF) من مستودعات الأنسجة الدهنية الأربية (تحت الجلد) وحول الغدد التناسلية (الحشوية) لتقييم تعبيرها الجيني ونشاطها الكولاجيني. تتضمن هذه الطريقة إثراء الخلايا الجذعيةالمشتقة من الدهون العالية Sca1 (ASCs) باستخدام فصل الخلايا المغناطيسية المناعية.

الفصل Immunomagnetic من Sca1 الدهون مستودع محددة<sup&gt; عالية</sup&gt; الدهنية المشتقة من الخلايا الجذعية (مخولا لصيانة طائرات)

توجد الخلايا الأديبية في مستودعات منفصلة ولها أدوار متنوعة داخل بيئاتها الدقيقة الفريدة. ومع الكشف عن الاختلافات الإقليمية في طابع ووظيفة الخلايا الأديبية، فإن تحديد المستودعات وعزلها بشكل موحد أمر حاسم للنهوض بالميدان. هنا، نقدم بروتوكول مفصل للختان من مختلف مستودعات الماوس الدهنية.

تحديد وتشريح مستودعات الماوس المتنوعة

الهدف من هذا البروتوكول هو توليف الجسيمات الشحمية ذات العلامات الفلورية واستخدام قياس التدفق الخلوي لتحديد توطين الجسيمات الشحمية في الجسم الحي على المستوى الخلوي.

تحضير وإدارة وتقييم الامتصاص الخلوي الخاص بالأنسجة الحية للجسيمات الشحمية الفلورية ذات العلامات الصبغية

يصف هذا البروتوكول النهج التقني لعزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الدهنية والالتهابية الليفية من مستودعات الأنسجة الدهنية البيضاء داخل البطن (WAT) عن طريق فرز الخلايا المنشطة بالفلورة أو فصل الخرزة المغناطيسية المناعية.

عزل المجموعات الفرعية للخلايا اللحمية الأديبوجينية والليفية الالتهابية من مستودعات الفئران الدهنية داخل البطن

يفصل هذا البروتوكول طريقة لتشريح مستودعات الفئران الدهنية وعزل وهضم الشرايين المعنية لتحرير ومن ثم تحديد مجموعة الخلايا البطانية. الخلايا المعزولة حديثا المستخدمة في تطبيقات المصب ستعزز فهم بيولوجيا الخلايا الوعائية وآليات خلل الأوعية الدموية.

عزل وتحديد الخلايا البطانية الوعائية من المستودعات الدهنية المتميزة للتطبيقات النهائية

يصف هذا البروتوكول العزل شبه الآلي للجزء الوعائي اللحمي (SVF) من الأنسجة الدهنية للفئران للحصول على الخلايا الدهنية وتحقيق تمايز الخلايا الشحمية في المختبر. استخدام مفكك الأنسجة لهضم كولاجيناز يقلل من التباين التجريبي ويزيد من التكاثر.

عزل شبه آلي للجزء الوعائي اللحمي من الأنسجة الدهنية البيضاء باستخدام مفكك الأنسجة

هنا ، نقدم إجراء عمليا لتشريح وإجراء تحليلات التعبير النسيجي والجيني للأنسجة الدهنية البنية فوق الترقوة.

تشريح ، المعالجة النسيجية ، وتحليل التعبير الجيني للأنسجة الدهنية البنية فوق الترقوة

أدى حجم وهشاشة الخلايا الشحمية الناضجة إلى الحد من التقنيات والأدوات المتاحة لدراستها وعزلها. هنا ، يتم وصف بروتوكول لعزل الخلايا الشحمية الناضجة من الفئران ، والتي يمكن تكييفها بسهولة مع مستودعات الدهون المختلفة ووجبات الفئران.

عزل واستزراع الخلايا الشحمية الأولية في الفئران من الفئران الخالية من الدهون والسمنة

تعلم تحديد واستئصال مستودعات الأنسجة الدهنية في الفئران البالغة بأقل تلوث ممكن. تتيح هذه الطريقة إجراء تحليلات نسيجية وجزيئية متنوعة لدراسة السمنة والأيض.

الأقلمة، تحديد الهوية، واستئصال مستودعات الفئران الدهنية

استكشف المزيد من الفيديوهات